IJMICRO 国际微生物学杂志 1687 - 9198 1687 - 918 x Hindawi 10.1155 / 2020/2131535 2131535 研究文章 合理设计的抗菌肽的抗菌活性 https://orcid.org/0000 - 0002 - 1293 - 5933 Tincho 马吕斯B。 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 8687 - 1963 莫里斯 Thureyah 2 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8296 - 4860 迈耶 默文 3 普里托里厄斯 阿什利 1 Chaves-Lopez Clemencia 1 生物信息学研究小组(BRG) DST Mintek纳米技术创新Centre-Biolabels /节点 生物技术部门 自然科学学院 西开普大学 Bellville 7535 南非 uwc.ac.za 2 食品毒理学实验室 医学生物科学学系 自然科学学院 西开普大学 Bellville 7535 南非 uwc.ac.za 3 DST Mintek纳米技术创新Centre-Biolabels /节点 生物技术部门 自然科学学院 西开普大学 Bellville 7535 南非 uwc.ac.za 2020年 8 4 2020年 2020年 21 10 2019年 10 03 2020年 8 4 2020年 2020年 版权©2020马吕斯Tincho et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

世界上许多传染病仍普遍人口因为没有有效的治疗方法可以消除它们。抗生素耐药性的原因可能是对可用的治疗性分子或缓慢的速度生产足够的治疗方案来应对快速增长的新传染病,以及现有的治疗药物的毒性。由于这些原因,有必要寻求和开发新的治疗方案以减少细菌感染的快速规模。抗菌肽(安培)组件的第一道防线的原核生物和真核生物和有一个广泛的活动对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌,真菌,癌症细胞、原生动物以及病毒。在这项研究中,肽的最初确认的艾滋病毒抑制活动进一步筛选抗菌活性通过测定动力学以及细胞毒性。结果,两个安培的麦克风(分子3和7)是12.5 μ克/毫升 k .肺炎(写明ATCC 700603)和6.25 μ克/毫升 P。 绿脓杆菌(写明ATCC 22108)。这两个安培迅速杀死这些细菌 在体外在几个小时的治疗,防止细菌生长。此外,这两个肽的细胞毒性活动明显低,即使在一个AMP 100的浓度 μ克/毫升。这些结果表明,分子3和7有很大的潜力作为抗菌药物或可以作为铅化合物的设计治疗方案治疗耐药的细菌。

 国家研究基金会 科学和技术 DST / MINTEK-Nanotechnology创新中心(NIC) TM部门研究基金会 美联社和MM DST / MINTEK-Nanotechnology创新中心(NIC)研究基金 1。介绍

人体是配备了一个防御机制,这使它能够消除异物和/或致病菌( 1, 2]。然而,人类的防御系统来保护自己的无能后微生物入侵的免疫系统将最终导致免疫彻底崩溃,因此让位于其他致病菌进入身体的入口。

虽然大多数细菌与人类细胞同居没有造成任何伤害和破坏,一些常见的传染性病原体会导致疾病可能包括耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株, 白色念珠菌单纯疱疹, 鸟型结核菌(MAC), 结核分枝杆菌,肺炎克雷伯菌, 铜绿假单胞菌,这里只列出了其中的一些 3]。 金黄色葡萄球菌, k .肺炎,大肠杆菌, 铜绿假单胞菌是细菌的例子有严重的临床和医学影响个人,和这些细菌占全世界院内感染的主要原因( 4, 5]。此外,这些致病微生物的主要病原体被认为是许多感染等皮肤感染、呼吸道感染、和其他主要疾病。在某些情况下,这些感染可能导致危及生命的疾病,如肺炎、脑膜炎、中毒性休克综合征,菌血症( 5- - - - - - 7]。

除了这样一个事实,有些人的免疫系统不能承受任何细菌感染,主要问题是当前可用抗生素用于根除这些病原微生物是无效的。这样无能的新抗生素是微生物耐药性的结果。此外,免疫活性的人感染 金黄色葡萄球菌, 铜绿假单胞菌和/或 K。 肺炎也证明了低敏感性这些药物由于抗生素抗性基因 8- - - - - - 11]。

缺乏有效的抗菌抗生素抑制传染性病原体和停止这些微生物复制的能力鼓励微生物学家和临床病理学家踏上一段旅程寻找替代疗法治疗微生物感染等。一些抗菌肽已被证明是好的来源的抗菌活性( 12- - - - - - 17]。

许多这些肽已经商业化开发和市场上是可用的。一些例子包括美国fda批准多粘菌素B-Collistin-Colomycin(前药)和Daptomycin(克必信)用于治疗皮肤感染( 18, 19]。同样,安培的实现取得了实质性的结果证明他们的活动对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌、原生动物、真菌、病毒,特别是艾滋病毒( 20.- - - - - - 26]。

在先前的研究中,我们能够识别和验证安培强有力的抗艾滋病活动( 27]。这些安培也用作诊断艾滋病的配体( 28, 29日]。后续研究描述 in-silico定点诱变的父母抗艾滋病安培增加亲和力,这些突变和抗艾滋病活动表明,安培增加了抗艾滋病活动比他们父母安培。此外,广泛的中和能力,这些抗艾滋病病毒的作用机理安培也证明(未发表的数据,手稿在准备)。然而,在当前的研究中,我们筛选这些肽对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌数量调查如果这些抗菌肽抗菌活性除了他们的抗艾滋病活动。抗菌实验也证实疗效的生物信息学方法用于识别多肽与不同微生物的活动。结果表明,一些安培温和的活动对革兰氏阳性细菌。然而,肽对革兰氏阴性细菌,如表现出强大的活动 肺炎克雷伯菌(写明ATCC 700603)和 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)临床耐药菌株。此外,一些与抗菌活性肽被证明有一个快速杀死动能在一个合理的时间内对这些细菌。他们对人类细胞株的细胞毒性活性也显著低。

 2。材料和方法 2.1。菌株

假定的抗菌肽的抗菌活性进行了 金黄色葡萄球菌spp。一种革兰氏阳性细菌从美国获得文化集合(写明ATCC)的 金黄色葡萄球菌种虫害methicillin-sensitive组成 金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25923)和耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌(写明ATCC 33591)压力。其他菌株进行测试 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)革兰氏阴性细菌。

 2.2。抗菌肽化合物

五个公认的抗艾滋病安培用于抗菌试验(表 1),他们的物理化学性质特征(表 2)。先前描述的安培被确定为工作Tincho [ 27]。选中的安培GL获得生物化学有限公司(上海200241,中国),和他们使用固相化学合成方法和被反相高压液相色谱纯化> 98%。

抗菌肽序列的测试。

肽序列
分子1 CLRYKKPECQSDWQCPGKKRCCPDTCGIKCLDPVDTPNPTRRKPGKCPVTYGQCLMLNPPNFCEMDGQCKRDLKCCMGM
分子3 RWKLFKKIEKVGRNVRDGLIKAGPAIAVIGQAKSLGK
分子7 RWKIFKKIEKMGRNIRDGIVKAGPAIEVLGSAKAIGK
分子8 CLKSGAICHPVFCPRRYKQIGTCGLPGTKCCKKP
分子10 WNPFKELEKAGQRVRDAIISAKPAVDVVGQATAIIK

物理化学特性的假定的抗菌肽。

质量(Da) 赖氨酸% Arg % 半胱氨酸% 等电点 净电荷 总疏水率(%) 此种潜在(鲍曼指数)
分子1 8903.716 11.39 6.33 16 8.37 + 6 34 2.17千卡/摩尔
分子3 4040.889 18.92 8.11 0.00 11.86 + 8 43 1.37千卡/摩尔
分子7 4073.940 18.92 8.11 0.00 11.46 + 7 43 1.45千卡/摩尔
分子8 3670.552 14.71 5.88 17.65 9.60 + 8 38 1.07千卡/摩尔
分子10 3908.564 11.11 5.56 0.00 10.33 + 2 47 1.33千卡/摩尔
2.3。抗菌肽的制备和积极控制浓度

股票的解决方案是由溶解的安培在无菌蒸馏水(dH2O)和各种安保工作浓度用于微量滴定肉汤稀释法测定准备在双重的连续稀释浓度的500年开始 μ1.5625 g / ml μ克/毫升。氨苄青霉素是利用积极的控制在这个试验和100年股票的解决方案工作 μg / ml蒸馏水制备。

 2.4。抗菌药物在体外实验中 2.4.1。抗菌活性和最低抑制浓度(MIC)

微量滴定肉汤稀释法测量放大器的抗菌活性。执行的分析是根据规定的标准和指导方针的临床和实验室标准协会(CLSI) [ 30.]。简而言之,测试微生物(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(写明ATCC 33591), MSSA(写明ATCC 25923), k .肺炎(写明ATCC 700603) P。 绿脓杆菌(写明ATCC 22108))种植大豆胰蛋白酶的肉汤midlogarithmic阶段(TSB)一套瓶37°C和震动150 rpm。浊度调整到0.5麦克法兰标准10毫升的最后一卷。股票的安保方案,准备各种肽浓度(500工作 μ1.5625 g / ml μg / ml)准备,孕育了细菌的肽的混合物在一个96平底板为24小时37°C。24小时孵化后,40 μ(l (2) - 4-iodophenyl 3 - (4-nitrophenyl) 5-phenyl-2 H四唑(INT)被添加到每个又孵化3 h。吸光度读数被在620纳米微量滴定板阅读器(ω®POLARstar BMG Labtech,美国)。

安培的抗菌化验都准备一式三份,和实验重复三次,以确保测试的重现性。吸光度结果导出到Excel文件,他们变成了一个百分比,在一个正常化的过程。每个肽的麦克风被定义为导致约90%浓度初始接种体的死亡。

 2.4.2。生长抑制试验

的生长曲线 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 P。 绿脓杆菌(写明ATCC 22108)处理分子3和分子7基于测量随着时间的推移,确定在每个集合时间在620海里。不同浓度的肽被添加到测试菌株( k .肺炎和 铜绿假单胞菌在96孔板的),这是培养使用相同的方法用于测定抗菌活性的安培和麦克风。

 2.5。细胞毒性

安培的细胞毒性活性测定采用3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2、5 -溴化diphenyltetrazolium (MTT)分析描述Freimoser [ 31日]。总之,HEK293T trypsinisation后和HepG2细胞,1×104细胞/被播种在96 -无菌盘和发展融合在杜尔贝科修改鹰中含10%胎牛血清。分子3和7都添加到井在不同浓度(10 μg / ml, 25岁 μ50 g / ml, μ克/毫升和100 μg / ml)。细胞治疗6% DMSO作为积极的控制。与肽治疗后48 h后,20 μl (MTT的解决方案是添加到每个好,和盘子在湿润孵化器孵化3 h有限公司5%2在37°C。孵化后,媒体被和二甲亚砜(DMSO) (100 μl /)添加到每个好和板再次孵化瓶在37°C, 5%的公司210分钟的孵化器。10分钟的盘子轻轻传言在室温下沉淀溶解。吸光度是决定使用一个多平台的读者(ω®POLARstar BMG Labtech,美国)的波长570 nm、600 nm和630 nm。

实验重复了三次确认实验的重现性。最后吸光度的细胞治疗是通过减去背景吸收的多井盘在630纳米和570纳米测量。细胞生存能力的百分比计算使用以下公式: (1) 细胞 生存能力 % = OD 570年 − OD 630年 处理样品 OD 570年 − OD 630年 未经处理的控制 × One hundred.

吸光度结果导出到Excel文件,他们变成了一个百分比,在这一过程被称为正常化。

 2.6。统计分析

数据呈现意味着±SD从至少三个独立的实验。统计分析和细胞毒性值使用GraphPad棱镜软件执行的每个假定的AMP (GraphPad软件、圣地亚哥、钙、美国)。意味着之间的差异被认为是重要的如果 p < 0.05 根据棱镜的双向方差分析测试。平均数标准误差表示美国南达科他州(±)和 ∗ p < 0.05 表示之间的显著差异的治疗和治疗细胞。

 3所示。结果 3.1。体外抗菌活性的抗菌肽

确定了安培的抗菌活性进行了研究使用微量滴定法规定的CLSI标准。初步筛选这些肽显示两个安培分子(分子3和7)对革兰氏阴性细菌有更有效的抗菌活性,比革兰氏阳性细菌(表 3)。进一步的实验来确定麦克风测试安培的抗菌活性表明,分子3是12.5的中等收入国家 μ克/毫升 k .肺炎(写明ATCC 700603)和6.25 μ克/毫升 P。 绿脓杆菌(写明ATCC 22108)。相同的麦克风值观察分子7 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 P。 绿脓杆菌(写明ATCC 22108)。

安培的麦克风使用微量滴定在筛选过程中。

肽 麦克风( μg / ml)
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MSSA k .肺炎 铜绿假单胞菌
分子1 > 500 > 500 500年 > 500
分子3 > 500 > 500 12.5 6.25
分子7 > 500 > 500 12.5 6.25
分子8 > 500 > 500 > 500 > 500
分子10 > 500 > 500 500年 > 500
氨苄青霉素 > 100 > 100 > 100 One hundred.

数据表明,革兰氏阴性细菌更敏感分子3和7,与更有效的抑制活动向耐抗生素病原体比传统的抗生素药物。然而,革兰氏阳性细菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(写明ATCC 33591)和MSSA(写明ATCC 25923))都对这些肽(分子3和7)。

 3.2。生长抑制活性分子3和7的细菌

除了确定麦克风,我们调查的速率肽影响细菌生长随时间(数字 1和 2)。的OD620年测量从3到8 h与标,治疗后与氨苄青霉素积极控制。发现两个肽分子(分子3和7)可以抑制 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)的浓度增长25 μg / ml和较低,在很短的时间内治疗后(数字 1和 2)。注意到,即使一个AMP浓度低于确定麦克风,分子3和7仍然可以完全抑制 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)增长(图3 - 8 h后治疗 1(一)和 2(一个))。然而,分子3能够抑制 铜绿假单胞菌在所有的浓度和持续时间的实验,而分子7无法抑制 铜绿假单胞菌增长浓度低于麦克风(6.25 μg / ml)(图 2(一个))。同样,分子7无法抑制的增长 k .肺炎(写明ATCC 700603)浓度低于各自的MIC值获得分子在这些生物(图7 2 (b))。分子3能够抑制的增长 k .肺炎(写明ATCC 700603)浓度等于麦克风(12.5 μg / ml)和2 x麦克风高于麦克风。在浓度为6.25 μ3 g / ml,分子能够抑制增长一段4 h(图 1 (b))。此外,积极控制,氨苄青霉素,可能抑制经济增长 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)在100的浓度 μ克/毫升。然而,相同浓度的氨苄青霉素(100 μg / ml)未能抑制的增长 k .肺炎(写明ATCC 700603)。可能抑制的增长 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)在不同浓度的抑制作用表明,这些安培是剂量依赖性。

Growth-inhibitory分子3对的影响 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603)。(一)分子的时间曲线3票反对 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)。(b)分子3的时间曲线 k .肺炎(写明ATCC 700603)。测试压力在96孔板培养,和OD620年在每个时间点测量。误差线指示的标准差的意思。

Growth-inhibitory分子7对的影响 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603)。(一)分子7的时间曲线 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)。(b)分子7的时间曲线 k .肺炎(写明ATCC 700603)。测试压力在96孔板培养,和OD620年在每个时间点测量。误差线指示的标准差的意思。

 3.3。在HEK293T细胞毒性分子3和7的分子活动和HepG2细胞线

的细胞毒性分子3对哺乳动物细胞和分子7 HEK293T和HepG2 MTT法(数据进行测试 3(一个)和 3 (b)),使用剂量反应分析(浓度的25、50、75和100 μ使用g / ml)。分子3和7诱导剂量依赖性降低研究中的两个线路测试的可行性。只有适度降低观察细胞生存能力对肽分子(分子3和7),即使在100年肽的浓度最高 μg / ml,细胞HepG2细胞的生存能力为79.5%。然而,相当大的( p < 0.0001 )细胞毒性比未经处理的细胞系(负控制)观察当HEK 293 t细胞系是处理分子3和分子7细胞生存能力的只有59.29%。然而,当使用肽浓度是25 μg / ml,细胞株抑制都是超过90%(数据 3(一个)和 3 (b))。但是,在这个浓度,分子3和7有效地抑制革兰氏阴性细菌的生长,包括 k .肺炎(写明ATCC 700603)和 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108),表明这些肽将更少的有毒正常的人类细胞。

细胞毒性分子3和7的哺乳动物细胞。(a)的细胞毒性分子3 - HepG2 HEK293T细胞线。(b)的细胞毒性分子7 HepG2 HEK293T细胞线。细胞毒性测定MTT试验。分子3和7的浓度范围从0到100 μ克/毫升。积极的控制是6.0% DMSO溶液。误差线指示的标准差的意思。 ∗ ∗ ∗ ∗ 统计学意义( p < 0.001 负控制相比)。

 4所示。讨论

医疗和制药行业在比赛中发现和开发新药物将成为有效的抗菌素几种疾病作斗争。这次旅行是一个耗时的过程,需要很多资金,有时最终被拒绝在临床试验阶段由于许多副作用。新的抗生素开发的另一个主要的问题在过去的十年里可用抗生素细菌耐药性的增加,这是由于滥用抗生素。强有力的抗菌肽链型药物可能柜台间。

为了寻找新的肽链型抗生素,我们筛选的安培数使用微量滴定法抗菌活性。从结果,它表明,只有两个抗菌肽能够完全抑制的增长 铜绿假单胞菌和 k .肺炎在各自的AMP浓度为6.5 μ和12.5克/毫升 μ克/毫升(表 3)。甚至AMP浓度最高的500.0 μg / ml无法抑制50%的治疗 葡萄球菌种虫害methicillin-sensitive甚至 金黄色葡萄球菌(MSSA)。耐甲氧西林的也是如此 金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)。只有温和的细菌抑制葡萄球菌的观察治疗后24 h 仕达屋优先计划。500.0 μg / ml AMP含量(数据没有显示)。

从结果中,我们观察到分子3和7有类似的赖氨酸和参数组成百分比,这两种氨基酸是最常见的残留在这两个肽的抗菌肽(表进行测试 1和表 2);和记录这些氨基酸是重要的阳离子安培的函数( 32- - - - - - 34]。此外,这两个都有类似的等电点潜力和安培的电流有最好的带正电的参数比其他肽(表进行测试 2)。此外,带正电的残留物的存在和43%的疏水性是优秀的元素,使这些肽有更好的抗菌活性与其他三肽( 35- - - - - - 37]。

在抗菌活性的差异对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌细胞壁上的差异可以解释的化学。革兰氏阴性细菌有一个额外的外膜,这使得其抗常规抗生素( 38, 39]。因此,对革兰氏阴性细菌的安培的大活动是一种很有前途的结果。使用新颖的分子如安培抗药性细菌,因此,作为一个额外的模板对这些抗生素耐药细菌药物设计。这一研究获得的结果也可以解释为一个沉重的肽聚糖层的存在卷膜的革兰氏阳性细菌,可以防止的毁灭 葡萄球菌种虫害的安培。相比之下,革兰氏阴性细菌的肽聚糖层光有一个额外的外膜;因此,检测细菌( 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603))敏感安培。因此,可以说,糖的作用(N-linked糖、肽聚糖和脂多糖)半个微生物膜的保护他们免受中和抗体和抗生素在某些情况下( 40- - - - - - 42]。

虽然结果指出,100年 μg / ml氨苄青霉素不能抑制的增长 k .肺炎,此外,观察到这种细菌似乎比未经处理的细菌生长在处理100年 μ克/毫升氨苄青霉素。林等人报道2013年同样的观察,当 k .肺炎处理5毫克/毫升的吗 果实却已似乎比未经处理的增长 k .肺炎实验后第二个小时后;后,比未经处理的细菌停止生长和治疗后超过24小时的未经处理的细菌( 43]。未经处理的模式 k .肺炎和治疗 k .肺炎5毫克/毫升 果实却已在本研究报告类似于未经处理的曲线记录 k .肺炎和 k .肺炎处理100 μ氨苄青霉素g /毫升(数字 1 (b)和 2 (b))。

这两种抗菌肽的抑制革兰氏阴性细菌 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603)也表明抗菌肽的模型是考虑到未来的工具的设计和识别有效的肽与广泛的微生物活动。虽然最初的生物信息学模型被开发来识别安培与艾滋病毒活动,它限制这些安培到艾滋病毒活动因为它曾被显示,单一抗菌肽抗菌活动可能产生多个( 44- - - - - - 50]。

许多安培被证明是对选定的致病性微生物抗菌活性( 12- - - - - - 17, 49),即使这些安培没有经过临床试验的最后阶段,只有少数使用( 50- - - - - - 52),目前的抗菌活性表现出由两个安培看好自比已知的抗生素肽更活跃,氨苄青霉素 k .肺炎(写明ATCC 700603)(数据 1 (b)和 2 (b))。此外,分子3和分子7杀死 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603)速度快,治疗后仍然保持长期活动。这种能力,因此,分子3和7是杀菌的。此外,安培分子(分子3和7)有减少毒性HEK293T细胞与细胞毒性较轻的安培观察HepG2细胞线(一种人类肝癌细胞株)。安培的选择性毒性可能是由于不同的膜在哺乳动物细胞和细菌。

尽管3分子的作用机理和分子7发挥他们的抗菌活性尚未建立,这些安培的杀菌能力可能是由于使用Barrel-stave机制地毯机制( 53),或环形孔机制 24]。barrel-stave机制更有可能因为我们大部分的肽 α螺旋, β单肽、扩展 α螺旋结构,和扩展 β表结构;它已被发现,大多数 α螺旋形或 β表安培病原体(使用该机制来发挥他们的活动 54]。所显示的抗菌活性分子3和7票反对 铜绿假单胞菌(写明ATCC 22108)和 k .肺炎(写明ATCC 700603)和低毒性HEK293T HepG2细胞行表明,这两个安培也许好铅化合物肽的设计有效的抗菌药物。

 5。结论

额外的探索和新的药物来对抗许多传染病是大多数研究机构的最终目标和/或世界各地的制药公司。它已成为我们必须找到小说铅分子可以利用的发展这些新病原体的药物敏感。在这里,一组多肽,以前有艾滋病毒活动,展示了针对致病革兰氏阴性细菌快速杀菌活性。此外,安培与抗菌活性HEK293T和HepG2细胞株的毒性更小,即使在浓度4 x高细菌麦克风。这些结果说明这些多肽是临床上重要的,一个优秀的模板设计一种抗感染药物。进一步的工作将是测试肽活动临床菌株,建立抗菌肽的作用机制,肽的体内并执行测试来确认他们的抗生素的潜力。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 作者的贡献

美联社,MBT,毫米,TM的构思和设计实验。MBT进行了实验。美联社,MBT,毫米,TM数据分析。MBT,毫米,TM试剂/材料/分析工具。美联社,MBT,毫米,TM写道。

 确认

这项研究的作者要感谢所有资金贡献者:国家研究基金会,科技部和DST / MINTEK-Nanotechnology创新中心(NIC)。还,他们特别感谢凡妮莎女士Joosta医学微生物学的单位,医学生物科学、南非西开普大学的细菌培养和Tiza博士Nguni的医学生物科学;南非西开普大学为指导食品毒理学实验室的初始步骤。本研究的实验是由TM部门研究基金和由美联社和MM DST / MINTEK-Nanotechnology创新中心(NIC)研究基金。

 杜Pasquier l Flajnik M。 保罗 w·E。 脊椎动物免疫系统的起源和演化 基础免疫学 1999年 4日 美国费城,宾夕法尼亚州 Lippincott Goldsby r。 Goldsby r。 Kuby免疫学 免疫学 2003年 5日 纽约,纽约,美国 弗里曼,w . h和公司 卡普兰 j·E。 汉森 D。 德沃金 m . S。 人类免疫缺陷病毒相关机会性感染的流行病学在美国的高活性抗逆转录病毒疗法的时代 临床感染疾病 2000年 30. 5 14 10.1086/313843 古尔德 i M。 医院成本耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)及其控制 国际期刊的抗菌药物 2006年 28 5 379年 384年 10.1016 / j.ijantimicag.2006.09.001 2 - s2.0 - 33750332137 Ferroni 一个。 阮 l 吃 B。 Quesne G。 Brusset m . C。 Berche P。 医院内尿路感染由于爆发 铜绿假单胞菌在儿科外科单位与自来水污染有关 《医院感染 1998年 39 4 301年 307年 10.1016 / s0195 - 6701 (98) 90295 - x 2 - s2.0 - 0031850166 Balcht 一个。 史密斯 R。 铜绿假单胞菌:感染和治疗 医疗保健信息 1994年 2 83年 84年 伦 j . P。 Al-Salihi f . L。 新生儿葡萄球菌烫伤皮肤综合症:大规模的爆发由于一个不寻常的噬菌体类型 儿科 1980年 66年 2 285年 290年 杰文斯 m P。 防“Celbenin”葡萄球菌 BMJ 1961年 1 5219年 124年 125年 10.1136 / bmj.1.5219.124-a 2 - s2.0 - 84965362242 普尔 K。 Efflux-mediated multiresistance革兰氏阴性细菌 临床微生物学和传染病 2004年 10 1 12 26 10.1111 / j.1469-0691.2004.00763.x 2 - s2.0 - 1642422948 约翰逊 答:P。 Aucken h . M。 卡文迪什 年代。 EMRSA-15和-16年的统治中耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在英国引起医院内菌血症:分析隔离从欧洲抗菌素耐药性监测系统(EARSS) 抗菌化疗杂志》 2001年 48 1 143年 144年 10.1093 /江淮/ 48.1.143 一品” K。 Hanaki H。 伊诺 T。 耐甲氧西林 金黄色葡萄球菌临床应变与万古霉素敏感性降低 抗菌化疗杂志》 1997年 40 1 135年 136年 10.1093 /江淮/ 40.1.135 2 - s2.0 - 0030841073 Ngai p·h·K。 赵 Z。 Ng t . B。 从可食用的蘑菇Agrocybin,抗真菌肽 茶薪菇 肽 2005年 26 2 191年 196年 10.1016 / j.peptides.2004.09.011 2 - s2.0 - 11144231393 安德森 M。 鲍曼 一个。 鲍曼 h·G。 蛔虫线虫从猪和人类三种抗菌肽:隔离cecropin P1和两个ASABF肽 细胞和分子生命科学(cml) 2003年 60 3 599年 606年 10.1007 / s000180300051 2 - s2.0 - 0037362455 施泰纳 H。 安德鲁 D。 ·梅里菲尔德 r B。 绑定和行动cecropin和cecropin类似物:从昆虫抗菌肽 Biochimica et Biophysica Acta -Biomembranes (BBA) 1998年 939年 260年 266年 10.1016 / 0005 - 2736 (88)90069 - 7 2 - s2.0 - 0023864293 Niyonsaba F。 逐渐繁盛 K。 Someya 一个。 人类抗菌肽的抗菌肽家族LL-37诱导肥大细胞趋化作用 免疫学 2002年 106年 1 20. 26 10.1046 / j.1365-2567.2002.01398.x 2 - s2.0 - 0036240209 Putsep K。 Branden C。 鲍曼 h·G。 Normark 年代。 抗菌肽的 幽门螺旋杆菌 自然 1999年 398年 671年 672年 10.1038/19439 2 - s2.0 - 0033594420 久保 一个。 Lunde c·S。 久保 我。 吲哚(E) 2-hexenal,植物化学的电位器多粘菌素的反对 铜绿假单胞菌和 大肠杆菌 抗菌药物和化疗 1996年 40 6 1438年 1441年 10.1128 / aac.40.6.1438 古普塔 年代。 高 D。 卡卡尔 p . N。 粘菌素和多粘菌素B:重新崛起 印度危重病医学杂志》上 2009年 13 2 49 53 10.4103 / 0972 - 5229.56048 2 - s2.0 - 70349913637 鞋匠 d . M。 Simou J。 罗兰 w·E。 回顾daptomycin注射(克必信)治疗复杂的皮肤和皮肤结构感染 治疗和临床风险管理 2006年 2 2 169年 174年 10.2147 / tcrm.2006.2.2.169 2 - s2.0 - 33745434049 安德鲁 D。 Rivas l 动物抗菌肽:概述 生物聚合物 1998年 47 6 415年 433年 10.1002 / (sici) 1097 - 0282 (1998) 47:6 < 415:: aid-bip2 > 3.0.co;二维 芒克 C。 魏 G。 杨 O . O。 的 θ-defensin retrocyclin,抑制hiv - 1项 艾滋病研究和人类逆转录病毒 2003年 19 10 875年 881年 10.1089 / 088922203322493049 2 - s2.0 - 17444436038 Lalezari j . P。 埃朗 J·J。 卡尔森 M。 二期临床研究的长期安全性和抗病毒活性enfuvirtide-based抗逆转录病毒治疗 艾滋病 2003年 17 5 691年 698年 10.1097 / 00002030-200303280-00007 2 - s2.0 - 0037471311 王 W。 欧文 s M。 鲁道夫 d . L。 的活动 α- - - θ-defensins对hiv - 1的主要隔离 《免疫学 2004年 173年 1 515年 520年 10.4049 / jimmunol.173.1.515 Brogden k。 抗菌肽:孔隙成型机或细菌代谢抑制剂? 自然评论微生物学 2005年 3 3 238年 250年 10.1038 / nrmicro1098 2 - s2.0 - 14544282377 德怀尔 J·J。 威尔逊 k . L。 戴维森 d·K。 螺旋形的设计,低聚物的hiv - 1融合抑制剂对enfuvirtide-resistant病毒多肽与有效的活动 美国国家科学院院刊》上 2007年 104年 31日 12772年 12777年 10.1073 / pnas.0701478104 2 - s2.0 - 34547854349 王 G。 沃森 k . M。 Peterkofsky 一个。 Buckheit r·W。 Jr。 小说中人类免疫缺陷病毒类型的识别1-Inhibitory肽基于抗菌肽数据库 抗菌药物和化疗 2010年 54 3 1343年 1346年 10.1128 / aac.01448-09 2 - s2.0 - 77149155289 Tincho m B。 Gabere m . N。 普里托里厄斯 一个。 在计算机识别和假定的抗菌肽的分子验证艾滋病毒治疗 艾滋病与临床研究》杂志上 2016年 7 9 606年 10.4172 / 2155 - 6113.1000606 威廉姆斯 m E。 Tincho m B。 Gabere m . N。 假定的抗菌肽的分子验证提高人类免疫缺陷病毒诊断通过p24艾滋病毒蛋白质 艾滋病与临床研究》杂志上 2016年 7 5 571年 10.4172 / 2155 - 6113.1000571 普里托里厄斯 一个。 Gabere m . N。 Tincho m B。 威廉姆斯 m E。 肽对HIV检测PCT专利我们201 2016年 6/079716 A1, 2016/05 临床实验室标准协会 稀释方法为细菌药敏测试长耗氧;批准Standard-Ninth版 取代M07-A8 2012年 29日 2 Freimoser f·M。 雅克布 c。 Aebi M。 图奥 U。 5-Dimethylthiazol-2-yl MTT[3 -(4日)2,5-Diphenyltetrazolium溴)分析是一种快速和可靠的真菌细胞密度的比色测定方法 应用与环境微生物学 1999年 65年 8 3727年 3729年 10.1128 / aem.65.8.3727 - 3729.1999 汉考克 r·e·W。 两家 d S。 肽抗生素 抗菌药物和化疗 1999年 43 6 1317年 1323年 10.1128 / aac.43.6.1317 汉考克 r·e·W。 钻石 G。 阳离子抗菌肽的作用的宿主防御 微生物学的趋势 2000年 8 9 402年 410年 10.1016 / s0966 - 842 x (00) 01823 - 0 2 - s2.0 - 0034283216 汉考克 r·e·W。 Sahl H.-G。 抗菌素和宿主防御肽作为新的抗感染的治疗策略 自然生物技术 2006年 24 12 1551年 1557年 10.1038 / nbt1267 2 - s2.0 - 33845699790 罗森菲尔德 Y。 列弗 N。 Shai Y。 疏水性的影响净正电荷比抗内毒素活性的抗菌肽结构相似 生物化学 2010年 49 5 853年 861年 10.1021 / bi900724x 2 - s2.0 - 75749122220 阴 l . M。 爱德华兹 m·A。 李 J。 叫喊声 c . M。 想必 c . M。 角色阳离子抗菌肽的疏水性和电荷分布peptide-membrane交互 生物化学杂志 2012年 287年 10 7738年 7745年 10.1074 / jbc.m111.303602 2 - s2.0 - 84863230302 金达尔 m . H。 勒 c F。 Mohd-Yusof m . Y。 塞卡让 s D。 净电荷,疏水性和特定的氨基酸为抗菌肽的活性 卫生和转化医学》杂志上 2014年 17 1 1 7 10.22452 / jummec.vol17no1.1 古普塔 r S。 diderm起源(革兰氏阴性)细菌:抗生素选择压力而不是内共生可能导致细菌细胞的进化有两个膜 安东尼·范·列文虎克 2011年 One hundred. 2 171年 182年 10.1007 / s10482 - 011 - 9616 - 8 2 - s2.0 - 79960739830 古普塔 r S。 自然进化的原核生物之间的关系 关键评价微生物学 2000年 26 2 111年 131年 10.1080 / 10408410091154219 2 - s2.0 - 0033935581 魏 X。 德克尔 j . M。 王 年代。 hiv - 1抗体中和和逃避 自然 2003年 422年 6929年 307年 312年 10.1038 / nature01470 2 - s2.0 - 0037456827 戴维斯 k . M。 Weiser j . N。 修改肽聚糖骨干帮助建立细菌感染 感染和免疫 2011年 79年 2 562年 570年 10.1128 / iai.00651-10 2 - s2.0 - 79251528841 Nikolaidis 我。 Favini-Stabile 年代。 在全世界 一个。 耐抗生素针对细菌的细胞壁 蛋白质科学 2014年 23 3 243年 259年 10.1002 / pro.2414 2 - s2.0 - 84900400716 林 t·H。 黄 s . H。 吴 C . C。 肺炎克雷伯菌生长和荚膜多糖生物合成的抑制作用 果实却已 以证据为基础的补充和替代医学 2013年 2013年 621701年 锅 彭译葶。 曹国伟 T.-T。 陈 J.-C。 虾( 中国对虾学名:)anti-lipopolysaccharide因素减少的杀伤力 铜绿假单胞菌脓毒症小鼠 国际免疫药理学 2007年 7 5 687年 700年 10.1016 / j.intimp.2007.01.006 2 - s2.0 - 33947539072 锅 彭译葶。 陈 J.-Y。 林 T.-L。 林 学术界。 体外的活动三个合成肽来源于epinecidin-1和一个anti-lipopolysaccharide因素对丙酸菌属曼秀雷敦,白色念珠菌,阴道毛滴虫 肽 2009年 30. 6 1058年 1068年 10.1016 / j.peptides.2009.02.006 2 - s2.0 - 67349280950 Tharntada 年代。 Ponprateep 年代。 Somboonwiwat K。 从黑虎虾anti-lipopolysaccharide因素的作用, 中国对虾学名:,在防止白斑综合症病毒感染 普通病毒学杂志 2009年 90年 6 1491年 1498年 10.1099 / vir.0.009621-0 2 - s2.0 - 67649197704 商 D。 余 F。 李 J。 郑 J。 张 l 李 Y。 分子克隆的互补编码抗菌肽前体中国林蛙皮肤的中国林蛙 动物科学 2009年 26 3 220年 226年 10.2108 / zsj.26.220 2 - s2.0 - 65949110363 陈 Y。 曹 l 钟 M。 Anti-HIV-1活动新的蝎毒肽kn2-7导数 《公共科学图书馆•综合》 2012年 7 4 e34947 10.1371 / journal.pone.0034947 2 - s2.0 - 84859856700 曹 l 戴 C。 李 Z。 蝎毒肽衍生物的抗菌活性和机制 体外和 已 《公共科学图书馆•综合》 2012年 7 7 e40135 10.1371 / journal.pone.0040135 2 - s2.0 - 84863624497 王 G。 Buckheit k W。 Mishra B。 Lushnikova T。 Buckheit R。 新创 R。 抗病毒和抗菌肽的设计不同的循环结构 艾滋病与临床研究》杂志上 2011年 52 36 41 Chalekson c·P。 Neumeister m·W。 我们 J。 治疗与抗菌肽D2A21感染伤口 杂志上的创伤:损伤,感染,和急救护理 2003年 54 4 770年 774年 10.1097/01. ta.0000047047.79701.6d 2 - s2.0 - 0038070520 Trotti 一个。 花园 一个。 督导员 P。 跨国公司,随机III期试验iseganan HCl口头解决方案减少口腔粘膜炎的严重程度对头颈部恶性肿瘤患者接受放疗 国际放射肿瘤学杂志》上∗生物学∗物理 2004年 58 3 674年 681年 10.1016 / s0360 - 3016 (03) 01627 - 4 2 - s2.0 - 10744229987 朱利亚尼 一个。 Pirri G。 Nicoletto 年代。 抗菌肽:一个有前途的一类疗法的概述 打开生命科学 2007年 2 1 1 33 10.2478 / s11535 - 007 - 0010 - 5 2 - s2.0 - 33947393032 Breukink E。 de Kruijff B。 lantibiotic尼克素,一个特例吗? Biochimica et Biophysica Acta -Biomembranes (BBA) 1999年 1462年 1 - 2 223年 234年 10.1016 / s0005 - 2736 (99) 00208 - 4 2 - s2.0 - 0032693081