都市固体废物的管理是当今世界的主要问题之一。微生物酶的使用固体废物的可持续管理的需要。在目前的研究中,我们已经分离出一种强有力的淀粉酶产生菌株(ISL B5)市政固体废物。被确认为
微生物酶产量的最重要来源,可用于各种目的的人类。微生物酶有几个优点,包括较低的生产成本,大规模生产中工业发酵的可能性,各种各样的物理和化学特性,基因操作的范围,和文化的快速发展 淀粉酶是一种重要的酶,在生物技术领域的使用。它执行的淀粉水解生成葡萄糖( 城市固体废物管理是当前世界面前的巨大问题。固体废物的可持续管理之一是消化它产生最终产品可以用作资源。几个产品,包括生物肥料,已报告从都市固体废物产生。一些报告表明,城市固体垃圾可以转化为生物肥料多功能效率。都市固体废物产生生物肥料富含微生物的各种功能,因为这些产品都是来自微生物作用,使用各种基质如淀粉、纤维素、蛋白质。堆肥是一种将有机废物转化为生物肥料的方法,减少无机化合物的使用,可能会导致环境污染。这种转换是由于微生物的作用,将复杂的碳源转化为合成能量。生产酶的微生物环境使这一过程( 目前的研究侧重于搜索的淀粉类物质转化淀粉分解的细菌存在于城市垃圾的能力。为实现这一目标的隔离、表征和鉴定淀粉分解的细菌和部分描述淀粉酶酶对底物的影响,温度和pH值。
在这项研究的目的是隔离淀粉酶生产商,从都市固体废物收集的土壤样本沉积面积Malda镇,西孟加拉、印度。土壤样本中收集消毒聚乙烯袋,冰袋的实验室。
一克(1 g)土样的称重和添加到9毫升无菌蒸馏水。连续稀释到10就做好了准备
细菌分离是基于下面的形态和生化特征测试如革兰氏染色法、扫描电子显微镜(SEM)使用日立扫描电子显微镜(模型s - 530)、过氧化氢酶试验,从碳水化合物的酸和天然气产量,硝酸盐减少,蛋白质水解明胶液化,Voges-Proskauer (VP)测试 压力是通过生化和分子识别的方法。生化反应,污渍被确认使用BiomerieusVitek 2系统。 分子识别、基因组DNA提取方法后从24-hour-old文化斯塔福德et al。 PCR扩增、DNA被混合模板放大DNA (50 ng)与聚合酶反应缓冲区,核苷酸,引物,聚合酶。聚合酶链反应进行了100年的总量
化验,先前接种淀粉营养肉汤离心机在8000年<在line-formula>
不同参数对淀粉酶的影响生产的隔离是标准化的孵化时间、温度、pH值、碳源、氮源和金属离子。
接种后,烧瓶孵化在35°C不同时期从5小时到30小时。
研究了温度对淀粉酶的影响生产淀粉的营养肉汤在不同温度(28°C至48°C)。
淀粉酶的生产与初步研究了培养基接种细菌在营养肉汤淀粉,通过调整pH值从5.0到8.0不等。 反应混合物的pH值对淀粉酶的影响生产测试通过使用缓冲区(0.1米)的博士利用磷酸钠(pH值6),磷酸钾(pH值7),tris-HCl (pH值8),和glycine-NaOH (pH值10)缓冲区,反应混合物的不同pH值保持在酶测定(
不同碳源的影响如淀粉、蔗糖、葡萄糖和甘露醇对淀粉酶生产2%的浓度检查。淀粉浓度对淀粉酶生产的影响是由补充营养肉汤与不同浓度的淀粉从0.2%到4%不等。
氮源对淀粉酶生产的影响是由使用不同的有机和无机氮源(0.6%)如牛肉膏、氯化铵、蛋白胨、胰蛋白胨。蛋白胨的影响在不同浓度淀粉酶生产检查补充淀粉汤与不同浓度的蛋白胨,从2.0%至0.3不等。
金属离子对淀粉酶的影响生产检查用不同的金属离子,亚铁离子、锌、锰、钙,在0.001%浓度的淀粉营养肉汤(
所有优化研究进行了一式三份和数据分析使用单向方差分析(方差分析)。所有的数据以图形方式呈现的平均数±标准差一式三份(<在line-formula>
总共有25株孤立与淀粉酶活性。其中,隔离ISL B5显示最高的间隙区在殖民地Lugol淹了碘溶液。隔离ISL B5的形态学和生物化学特征。光显微观察表明,隔离是杆状的革兰氏阴性细菌。孤立的形态也证实了扫描电镜。 孤立的身份证实了生化和分子技术。生化反应,压力被确认使用BiomerieusVitek 2系统 淀粉酶的生产, 温度对酶产量的影响评估通过维持烧瓶在不同温度下从28°C到48°C h(图25 媒体pH值调整评估从5.0到8.0的淀粉酶生产(图 细菌隔离ISL B5在营养肉汤接种,含有淀粉、蔗糖、葡萄糖和甘露醇,显示碳源生产淀粉酶的影响(图 影响不同的碳源和不同的淀粉浓度对淀粉酶生产 不同氮源对淀粉酶产量的影响评估通过使用牛肉膏,氯化铵,蛋白胨,胰蛋白胨。最大的酶生产蛋白胨浓度在0.8% (2.77 U /毫升),而氯化铵酶生产能力(最低的数字 影响不同氮源和蛋白胨浓度对淀粉酶生产 铁、锌、锰、钙离子在非常低的浓度是用来确定金属离子对淀粉酶的影响生产(图 不同金属离子对淀粉酶产量的影响
25菌株被分离从城市倾倒垃圾;从这些,隔离ISL B5,被确认为
的压力 碳源的补充单糖或多糖可能产生淀粉酶的生产形式。在我们目前的研究中,淀粉的影响超过其他碳源测试。甘露醇是第二个最好的补充碳源。葡萄糖淀粉酶活性最低。据报道,不同的碳源各种各样地影响淀粉酶的生产( 氮源是次要的生物能源,和发挥重要作用的增长和生产有价值的酶的生物。化合物的性质和浓度可能会影响使用或下调酶生产( 金属离子的影响已经被充分研究过几个淀粉酶的细菌和真菌。大家都知道,大多数这些离子金属ion-dependent淀粉酶的酶和二价阳离子如锰 在目前的研究中,我们对此已进行了隔离和确定淀粉酶产生菌的市政固体废物。我们的研究表明,城市固体废物可以用作生产有益微生物的来源;这些可以成功地用于大型市政淀粉类废料管理出现在城市垃圾。的隔离
作者宣称没有利益冲突。
Prajesh杜塔和阿卡什Deb执行实验室工作像隔离,标识,优化和写的手稿。Sukanta Majumdar参加了统计分析和监督整个工作。
作者感谢Xcelris实验室,阿默达巴德,印度为他们的帮助在16 s rDNA测序。