IJMICRO 国际微生物学杂志 1687 - 9198 1687 - 918 x Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/4950743 4950743 研究文章 优化的培养基生产的胞外淀粉酶 假单胞菌stutzeriISL B5隔绝市政固体废物 杜塔 Prajesh 1 黛比 阿卡什 1 http://orcid.org/0000 - 0002 - 8590 - 9517 Majumdar Sukanta 1 卡拉威 托德·R。 微生物学和微生物生物技术实验室 部门的植物学 在大学Banga Malda 西孟加拉732103 印度 ugb.ac.in 2016年 20. 12 2016年 2016年 29日 07年 2016年 21 11 2016年 28 11 2016年 2016年 版权©2016 Prajesh杜塔等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

都市固体废物的管理是当今世界的主要问题之一。微生物酶的使用固体废物的可持续管理的需要。在目前的研究中,我们已经分离出一种强有力的淀粉酶产生菌株(ISL B5)市政固体废物。被确认为 假单胞菌stutzeri (p . stutzeri)生化反应和16 s rDNA测序。优化的研究显示,压力ISL B5液体媒体包含2%淀粉表现出最大活动(2.77 U /毫升),0.8%蛋白胨(2.77 U /毫升),和0.001%的Ca2 +离子(2.49 U /毫升)在pH值7.5 (2.59 U /毫升),温度40°C (2.63 U /毫升),和25 h(潜伏期(2.49 U /毫升)。最高的粗酶活动也被优化的pH值8 (2.49 U /毫升)。 1。介绍<gydF4y2Ba/title> <p>微生物酶产量的最重要来源,可用于各种目的的人类。微生物酶有几个优点,包括较低的生产成本,大规模生产中工业发酵的可能性,各种各样的物理和化学特性,基因操作的范围,和文化的快速发展<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 1<gydF4y2Ba/xref>]。微生物产生的酶也更加积极和稳定比植物和动物(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B2"> 2<gydF4y2Ba/xref>]。上述特点使微生物酶适用于各种工业应用(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B3"> 3<gydF4y2Ba/xref>]。此外,由于微生物可以在短时间内大量培养发酵,它们代表另一来源的酶。目前,微生物酶被认为是越来越重要的可持续技术和绿色化学(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B2"> 2<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B4"> 4<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>淀粉酶是一种重要的酶,在生物技术领域的使用。它执行的淀粉水解生成葡萄糖(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B5"> 5<gydF4y2Ba/xref>]。近年来,微生物生产使其优势由于其广泛使用于食品、烘焙、洗涤剂和纺织工业<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 6<gydF4y2Ba/xref>]。有很多优点,使用微生物量产淀粉酶的能力,也为他们很容易操纵所需的产品(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B7"> 7<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Baitalic> α<gydF4y2Ba/italic>淀粉酶已经衍生出许多真菌、酵母、细菌和放线菌;然而,真菌和细菌来源的酶被认为是最适合应用在工业领域<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B8"> 8<gydF4y2Ba/xref>]。一些微生物能使淀粉酶等<gydF4y2Baitalic> 芽孢杆菌<gydF4y2Ba/italic>spp。<gydF4y2Baitalic> 乳酸菌<gydF4y2Ba/italic>,<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌<gydF4y2Ba/italic>sp。<gydF4y2Baitalic> 普罗透斯<gydF4y2Ba/italic>,<gydF4y2Baitalic> 埃希氏杆菌属<gydF4y2Ba/italic>,<gydF4y2Baitalic> 链霉菌属<gydF4y2Ba/italic>sp。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>城市固体废物管理是当前世界面前的巨大问题。固体废物的可持续管理之一是消化它产生最终产品可以用作资源。几个产品,包括生物肥料,已报告从都市固体废物产生。一些报告表明,城市固体垃圾可以转化为生物肥料多功能效率。都市固体废物产生生物肥料富含微生物的各种功能,因为这些产品都是来自微生物作用,使用各种基质如淀粉、纤维素、蛋白质。堆肥是一种将有机废物转化为生物肥料的方法,减少无机化合物的使用,可能会导致环境污染。这种转换是由于微生物的作用,将复杂的碳源转化为合成能量。生产酶的微生物环境使这一过程(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 10<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>目前的研究侧重于搜索的淀粉类物质转化淀粉分解的细菌存在于城市垃圾的能力。为实现这一目标的隔离、表征和鉴定淀粉分解的细菌和部分描述淀粉酶酶对底物的影响,温度和pH值。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2"> <title>2。材料和方法<gydF4y2Ba/title> <sec id="sec2.1"> <title>2.1。样品收集<gydF4y2Ba/title> <p>在这项研究的目的是隔离淀粉酶生产商,从都市固体废物收集的土壤样本沉积面积Malda镇,西孟加拉、印度。土壤样本中收集消毒聚乙烯袋,冰袋的实验室。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.2"> <title>2.2。隔离淀粉酶产生菌<gydF4y2Ba/title> <p>一克(1 g)土样的称重和添加到9毫升无菌蒸馏水。连续稀释到10就做好了准备<gydF4y2Basup>−4<gydF4y2Ba/sup>稀释,然后添加0.1毫升的稀释,使用扩散板方法,强化的营养琼脂1%淀粉。琼脂板是在37°C孵化24 - 48 h,然后充斥着Lugol的碘。殖民地产生光环区域被指定为淀粉酶生产商,采摘,和维护在NA偏补充淀粉为1%。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.3"> <title>2.3。描述和识别<gydF4y2Ba/title> <p>细菌分离是基于下面的形态和生化特征测试如革兰氏染色法、扫描电子显微镜(SEM)使用日立扫描电子显微镜(模型s - 530)、过氧化氢酶试验,从碳水化合物的酸和天然气产量,硝酸盐减少,蛋白质水解明胶液化,Voges-Proskauer (VP)测试<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B11"> 11<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>压力是通过生化和分子识别的方法。生化反应,污渍被确认使用BiomerieusVitek 2系统。<gydF4y2Ba/p> <p>分子识别、基因组DNA提取方法后从24-hour-old文化斯塔福德et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B13"> 13<gydF4y2Ba/xref>]。DNA从水相沉淀冷冻离心法乙醇(100%)和颗粒状的12000 rpm 15分钟,随后在70%乙醇洗涤,离心分离。球被风干,悬浮在TE缓冲pH值8。<gydF4y2Ba/p> <p>PCR扩增、DNA被混合模板放大DNA (50 ng)与聚合酶反应缓冲区,核苷酸,引物,聚合酶。聚合酶链反应进行了100年的总量<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>l,包含78<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>去离子水,10<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>l 10 x Taq缓冲区,1<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>l 1 u Taq 6<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>l 2毫米核苷酸,1.5<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>l(100毫米反向和正向引物,和3.5<gydF4y2Baitalic> μ<gydF4y2Ba/italic>50 l ng模板DNA。16 s rRNA基因的扩增是由PCR使用远期(704 f 5′GTAGCGGTGAAATGCGTAGA 3′)和反向<gydF4y2Babold> (<gydF4y2Ba/bold>907 r 5′CCGTCAATTCMTTTGAGTTTAG 3′)底漆。PCR在94°C程序,最初变性5分钟,紧随其后的是30个周期为30秒94°C的变性,退火30秒的61°C,在70°C和扩展2分钟和最后一个扩展在72°C 7分钟thermocycler(应用生物系统公司,2720)。放大产品解决在0.8%琼脂糖凝胶电泳纯化PCR扩增子。从Xcelris实验室纯化的DNA测序,阿默达巴德,印度和16 s rDNA序列从PCR获得产品受到爆炸分析。DNA序列是通过BankIt NCBI基因库沉积过程和批准序列完成后加入注释和给定的数字。进化的历史被neighbor-joining推断方法(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14<gydF4y2Ba/xref>]。大型4.0中进行了系统发育分析软件(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 15<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.4"> <title>2.4。测定淀粉酶的<gydF4y2Ba/title> <p>化验,先前接种淀粉营养肉汤离心机在8000年<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M1"> <mml:mrow> <mml:mi> g<gydF4y2Ba/mml:mi> </mml:mrow> </mml:math> </inline-formula>12分钟,上层清液作为粗酶的来源。淀粉酶的检测进行了方法后Jamieson et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16<gydF4y2Ba/xref>]。总之,一毫升的稀释酶溶液加入1毫升的衬底,然后孵化三分钟37°C;两毫升的颜色添加试剂是为了阻止酶反应;管是在沸水浴中加热5分钟效果的颜色变化,然后用自来水和冷却吸光度是阅读在470 nm的分光光度计(分光光度计<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B17"> 17<gydF4y2Ba/xref>]。单位的淀粉酶活性被表示为微摩尔每分钟麦芽糖解放。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.5"> <title>2.5。淀粉酶生产优化<gydF4y2Ba/title> <p>不同参数对淀粉酶的影响生产的隔离是标准化的孵化时间、温度、pH值、碳源、氮源和金属离子。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.6"> <title>2.6。潜伏期的影响<gydF4y2Ba/title> <p>接种后,烧瓶孵化在35°C不同时期从5小时到30小时。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.7"> <title>2.7。温度的影响<gydF4y2Ba/title> <p>研究了温度对淀粉酶的影响生产淀粉的营养肉汤在不同温度(28°C至48°C)。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.8"> <title>2.8。pH值的影响<gydF4y2Ba/title> <p>淀粉酶的生产与初步研究了培养基接种细菌在营养肉汤淀粉,通过调整pH值从5.0到8.0不等。<gydF4y2Ba/p> <p>反应混合物的pH值对淀粉酶的影响生产测试通过使用缓冲区(0.1米)的博士利用磷酸钠(pH值6),磷酸钾(pH值7),tris-HCl (pH值8),和glycine-NaOH (pH值10)缓冲区,反应混合物的不同pH值保持在酶测定(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 18<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B19"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.9"> <title>2.9。碳源的影响<gydF4y2Ba/title> <p>不同碳源的影响如淀粉、蔗糖、葡萄糖和甘露醇对淀粉酶生产2%的浓度检查。淀粉浓度对淀粉酶生产的影响是由补充营养肉汤与不同浓度的淀粉从0.2%到4%不等。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.10"> <title>2.10。氮源的影响<gydF4y2Ba/title> <p>氮源对淀粉酶生产的影响是由使用不同的有机和无机氮源(0.6%)如牛肉膏、氯化铵、蛋白胨、胰蛋白胨。蛋白胨的影响在不同浓度淀粉酶生产检查补充淀粉汤与不同浓度的蛋白胨,从2.0%至0.3不等。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.11"> <title>2.11。金属离子的影响<gydF4y2Ba/title> <p>金属离子对淀粉酶的影响生产检查用不同的金属离子,亚铁离子、锌、锰、钙,在0.001%浓度的淀粉营养肉汤(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B20"> 20.<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec id="sec2.12"> <title>2.12。统计分析<gydF4y2Ba/title> <p>所有优化研究进行了一式三份和数据分析使用单向方差分析(方差分析)。所有的数据以图形方式呈现的平均数±标准差一式三份(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M2"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。使用SPSS软件进行方差分析。<gydF4y2Baitalic> P<gydF4y2Ba/italic>值< 0.05被认为是重要的,95%的置信界限。<gydF4y2Ba/p> </sec> </sec> <sec id="sec3"> <title>3所示。结果<gydF4y2Ba/title> <p>总共有25株孤立与淀粉酶活性。其中,隔离ISL B5显示最高的间隙区在殖民地Lugol淹了碘溶液。隔离ISL B5的形态学和生物化学特征。光显微观察表明,隔离是杆状的革兰氏阴性细菌。孤立的形态也证实了扫描电镜。<gydF4y2Ba/p> <p>孤立的身份证实了生化和分子技术。生化反应,压力被确认使用BiomerieusVitek 2系统<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌stutzeri<gydF4y2Ba/italic>概率为99%。分子分析基于16 s rDNA基因同源性确定ISL B5<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌stutzeri<gydF4y2Ba/italic>有99%的相似度与各自的菌株在NCBI基因库数据库查询覆盖率为95%。获得的序列与ex-type分离序列从NCBI基因库进行识别以及系统发育关系的研究与其他ex-type序列(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1<gydF4y2Ba/xref>)。进化距离计算使用的最大可能性复合方法(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B21"> 21<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B22"> 22<gydF4y2Ba/xref>]。核苷酸序列沉积在NCBI数据库基因库加入KT748761数量。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig1"> <label>图1<gydF4y2Ba/label> <p>16 s rDNA序列的系统发育分析<gydF4y2Baitalic> p . Stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5 (KT748761)与其他ex-type neighbor-joining菌株的方法。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.001"></graphic> </fig> <p>淀粉酶的生产,<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5进行优化潜伏期、温度、pH值、碳和氮源和金属铁。接种后,烧瓶在30°C和孵化酶活性在不同的时间间隔(图测量<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig2"> 2<gydF4y2Ba/xref>)。隔离显示最高的生产淀粉酶25小时后孵化(2.49 U /毫升)。酶的产量下降了25小时后可能由于减少增长的隔离。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig2"> <label>图2<gydF4y2Ba/label> <p>潜伏期对淀粉酶的影响生产<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M3"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.002"></graphic> </fig> <p>温度对酶产量的影响评估通过维持烧瓶在不同温度下从28°C到48°C h(图25<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig3"> 3<gydF4y2Ba/xref>)。发现的最大酶生产40°C (2.63 U /毫升)。下面的酶产量下降,40°C以上的温度。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig3"> <label>图3<gydF4y2Ba/label> <p>温度对淀粉酶的影响生产<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M4"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>);<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M5"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.003"></graphic> </fig> <p>媒体pH值调整评估从5.0到8.0的淀粉酶生产(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig4a"> 4(一)<gydF4y2Ba/xref>)。25 h的孵化后,观察到,在pH值7.5中,酶是最大限度ISL B5 (2.59 U /毫升)的压力。反应混合物的pH值对淀粉酶产量的影响还测试了通过使用磷酸钠(pH值6),磷酸钾(pH值7),tris-HCl (pH值8),和glycine-NaOH (pH值10)缓冲区在酶测定(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig4b"> 4 (b)<gydF4y2Ba/xref>)[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 18<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B19"> 19<gydF4y2Ba/xref>]。观察到,25小时孵化后,反应混合物tris-HCl缓冲区(pH值8)显示最大淀粉酶生产(2.49 U /毫升)。<gydF4y2Ba/p> <fig-group id="fig4"> <label>图4<gydF4y2Ba/label> <p>pH值对淀粉酶的影响生产<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>在反应混合物ISL B5和酶活性。(一)淀粉酶生产在不同媒体博士(b)酶活性在不同pH值的反应混合物。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M6"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>);<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M7"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig4a"> <label>(一)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.004a"></graphic> </fig> <fig id="fig4b"> <label>(b)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.004b"></graphic> </fig> </fig-group> <p>细菌隔离ISL B5在营养肉汤接种,含有淀粉、蔗糖、葡萄糖和甘露醇,显示碳源生产淀粉酶的影响(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig5a"> 5(一个)<gydF4y2Ba/xref>)。淀粉显示最高的酶生产2%浓度(2.77 U /毫升)(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig5b"> 5 (b)<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <fig-group id="fig5"> <label>图5<gydF4y2Ba/label> <p>影响不同的碳源和不同的淀粉浓度对淀粉酶生产<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。(一)淀粉酶生产的影响下不同的碳源。(b)淀粉酶产量的影响下不同淀粉含量百分比。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M8"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>);<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M9"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig5a"> <label>(一)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.005a"></graphic> </fig> <fig id="fig5b"> <label>(b)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.005b"></graphic> </fig> </fig-group> <p>不同氮源对淀粉酶产量的影响评估通过使用牛肉膏,氯化铵,蛋白胨,胰蛋白胨。最大的酶生产蛋白胨浓度在0.8% (2.77 U /毫升),而氯化铵酶生产能力(最低的数字<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig6a"> 6(一)<gydF4y2Ba/xref>和<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig6b"> 6 (b)<gydF4y2Ba/xref>)。<gydF4y2Ba/p> <fig-group id="fig6"> <label>图6<gydF4y2Ba/label> <p>影响不同氮源和蛋白胨浓度对淀粉酶生产<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。(一)淀粉酶生产的影响下不同的氮源。(b)淀粉酶产量的影响下不同蛋白胨浓度百分比。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M10"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>);<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M11"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig6a"> <label>(一)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.006a"></graphic> </fig> <fig id="fig6b"> <label>(b)<gydF4y2Ba/label> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.006b"></graphic> </fig> </fig-group> <p>铁、锌、锰、钙离子在非常低的浓度是用来确定金属离子对淀粉酶的影响生产(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig7"> 7<gydF4y2Ba/xref>)。25小时后,汤含有钙离子显示最高的酶生产能力(2.49 U /毫升),而亚铁离子的酶生产能力最低。<gydF4y2Ba/p> <fig id="fig7"> <label>图7<gydF4y2Ba/label> <p>不同金属离子对淀粉酶产量的影响<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。数据表示平均数±标准差(<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M12"> <mml:mi> n<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> =<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 3<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>);<在line-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M13"> <mml:mi> P<gydF4y2Ba/mml:mi> <mml:mo> <<gydF4y2Ba/mml:mo> <mml:mn> 0.05<gydF4y2Ba/mml:mn> </mml:math> </inline-formula>。<gydF4y2Ba/p> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/ijmicro/2016/4950743.fig.007"></graphic> </fig> </sec> <sec id="sec4"> <title>4所示。讨论<gydF4y2Ba/title> <p>25菌株被分离从城市倾倒垃圾;从这些,隔离ISL B5,被确认为<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌stutzeri,<gydF4y2Ba/italic>显示最高的淀粉酶活性。一些报告表明,许多细菌从固体废物分离淀粉酶活性与明显的效率(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B23"> 23<gydF4y2Ba/xref>]。在细菌隔离,<gydF4y2Baitalic> 芽孢杆菌<gydF4y2Ba/italic>sp。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B24"> 24<gydF4y2Ba/xref>),<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌<gydF4y2Ba/italic>sp。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B25"> 25<gydF4y2Ba/xref>频繁的淀粉酶生产商。<gydF4y2Ba/p> <p> <italic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5显示最高的淀粉酶生产25小时的潜伏期。上面这个潜伏期,淀粉酶酶活性开始下降。这可能是由于减少增长的隔离。大多数的研究报道最高的酶生产35小时和48小时之间<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B26"> 26<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B27"> 27<gydF4y2Ba/xref>];相反,ISL B5显示最佳生产25小时后,从而证明早期收获时间供工业使用。<gydF4y2Ba/p> <p>的压力<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>低淀粉降解活性低于和高于40°C。这可能是由于降低增长率和失活的基因,负责淀粉降解酶(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B28"> 28<gydF4y2Ba/xref>]。大部分的淀粉酶产生菌株表现出pH值介于6.0和7.5之间为正常生长和酶生产(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B29"> 29日<gydF4y2Ba/xref>]。目前的最大酶生产菌株显示pH值7.5。反应混合物已经达到最高的酶活性在pH值8。Samanta et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B30"> 30.<gydF4y2Ba/xref>)也报道了淀粉酶的活性最高<gydF4y2Baitalic> Cronobacter坂乔<gydF4y2Ba/italic>52在pH值8。<gydF4y2Ba/p> <p>碳源的补充单糖或多糖可能产生淀粉酶的生产形式。在我们目前的研究中,淀粉的影响超过其他碳源测试。甘露醇是第二个最好的补充碳源。葡萄糖淀粉酶活性最低。据报道,不同的碳源各种各样地影响淀粉酶的生产(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B31"> 31日<gydF4y2Ba/xref>]。类似的结果表明,葡萄糖压制淀粉酶生产的hyperthermophilic古生菌<gydF4y2Baitalic> 硫化叶菌solfataricus<gydF4y2Ba/italic>(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B32"> 32<gydF4y2Ba/xref>]。他们还报道,葡萄糖抑制淀粉酶基因的表达。<gydF4y2Ba/p> <p>氮源是次要的生物能源,和发挥重要作用的增长和生产有价值的酶的生物。化合物的性质和浓度可能会影响使用或下调酶生产(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B27"> 27<gydF4y2Ba/xref>]。在这个实验中,氮源对淀粉酶生产的影响表明,蛋白胨被发现是一个更好的氮源<gydF4y2Baitalic> p . stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5。<gydF4y2Ba/p> <p>金属离子的影响已经被充分研究过几个淀粉酶的细菌和真菌。大家都知道,大多数这些离子金属ion-dependent淀粉酶的酶和二价阳离子如锰<gydF4y2Basup>2 +<gydF4y2Ba/sup>、锌<gydF4y2Basup>2 +<gydF4y2Ba/sup>、镁<gydF4y2Basup>2 +<gydF4y2Ba/sup>、钙<gydF4y2Basup>2 +<gydF4y2Ba/sup>,菲<gydF4y2Basup>2 +<gydF4y2Ba/sup>(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B17"> 17<gydF4y2Ba/xref>]。增强淀粉酶活性离子的存在可以根据其能力与带负电荷的氨基酸残基,如天门冬氨酸和谷氨酸<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B33"> 33<gydF4y2Ba/xref>]。研究显示最高的酶活性在钙离子的存在。根据Burhan et al。<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B34"> 34<gydF4y2Ba/xref>),的<gydF4y2Baitalic> 芽孢杆菌<gydF4y2Ba/italic>sp<gydF4y2Baitalic> 。<gydF4y2Ba/italic>,钙离子增加了淀粉酶的生产。拉梅什和Lonsane<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B35"> 35<gydF4y2Ba/xref>)也报道了不同浓度的钙影响淀粉酶生产及其活动。淀粉酶的晶体结构表明,钙离子在离子相互作用发挥的作用还是100年和201年的残留的域和Asp的159年和167年Asp残留域B在淀粉酶酶。它也被报道,淀粉酶的活性部位是位于域和域B和钙之间促进酶的稳定性和催化活性连接这两个领域(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B36"> 36<gydF4y2Ba/xref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B37"> 37<gydF4y2Ba/xref>]。<gydF4y2Ba/p> <p>在目前的研究中,我们对此已进行了隔离和确定淀粉酶产生菌的市政固体废物。我们的研究表明,城市固体废物可以用作生产有益微生物的来源;这些可以成功地用于大型市政淀粉类废料管理出现在城市垃圾。的隔离<gydF4y2Baitalic> 假单胞菌stutzeri<gydF4y2Ba/italic>ISL B5显示能够容忍不利条件下广泛的pH值和温度和有毒金属离子具有显著的宽容,这使得它有前途的接种体酶行业以及固体废物管理。<gydF4y2Ba/p> </sec> <back> <sec> <title>相互竞争的利益<gydF4y2Ba/title> <p>作者宣称没有利益冲突。<gydF4y2Ba/p> </sec> <sec> <title>作者的贡献<gydF4y2Ba/title> <p>Prajesh杜塔和阿卡什Deb执行实验室工作像隔离,标识,优化和写的手稿。Sukanta Majumdar参加了统计分析和监督整个工作。<gydF4y2Ba/p> </sec> <ack> <title>确认<gydF4y2Ba/title> <p>作者感谢Xcelris实验室,阿默达巴德,印度为他们的帮助在16 s rDNA测序。<gydF4y2Ba/p> </ack> <ref-list> <ref id="B1" content-type="article"> <label>1<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Duza<gydF4y2Ba/surname> <given-names> B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Mastan<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 美国一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 微生物酶及其应用审查<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 印度美国药物研究杂志》上<gydF4y2Ba/italic> <year> 2013年<gydF4y2Ba/year> <volume> 3<gydF4y2Ba/volume> <issue> 8<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 6208年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 6219年<gydF4y2Ba/lpage> </element-citation> </ref> <ref id="B2" content-type="article"> <label>2<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Anbu<gydF4y2Ba/surname> <given-names> P。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Gopinath<gydF4y2Ba/surname> <given-names> s . c, B。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Cihan<gydF4y2Ba/surname> <given-names> a . C。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Chaulagain<gydF4y2Ba/surname> <given-names> b P。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 在工业和医学微生物酶和他们的应用程序<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 生物医学研究的国际<gydF4y2Ba/italic> <year> 2013年<gydF4y2Ba/year> <volume> 2013年<gydF4y2Ba/volume> <lpage> 2<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="publisher-id"> 204014年<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1155 / 2013/204014<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 84893805254<gydF4y2Ba/pub-id> </element-citation> </ref> <ref id="B3" content-type="article"> <label>3<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 哈桑<gydF4y2Ba/surname> <given-names> F。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 沙阿<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 答:一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Hameed<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 微生物脂酶的工业应用<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 酶和微生物技术<gydF4y2Ba/italic> <year> 2006年<gydF4y2Ba/year> <volume> 39<gydF4y2Ba/volume> <issue> 2<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 235年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 251年<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1016 / j.enzmictec.2005.10.016<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 33747518326<gydF4y2Ba/pub-id> </element-citation> </ref> <ref id="B4" content-type="article"> <label>4<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Kiro<gydF4y2Ba/surname> <given-names> M。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 微生物<gydF4y2Baitalic> α<gydF4y2Ba/italic>-amylases及其工业应用:一个回顾<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 国际期刊的管理和工程<gydF4y2Ba/italic> <year> 2012年<gydF4y2Ba/year> <volume> 2<gydF4y2Ba/volume> <issue> 10<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 583年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 609年<gydF4y2Ba/lpage> </element-citation> </ref> <ref id="B5" content-type="article"> <label>5<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Omemu<gydF4y2Ba/surname> <given-names> a . M。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 潘<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 我。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Bankole<gydF4y2Ba/surname> <given-names> m . O。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Teniola<gydF4y2Ba/surname> <given-names> o . D。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 淀粉酶水解生块茎淀粉的黑曲霉AM07从土壤中分离<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 非洲生物技术杂志<gydF4y2Ba/italic> <year> 2005年<gydF4y2Ba/year> <volume> 4<gydF4y2Ba/volume> <issue> 1<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 19<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 25<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 18244377658<gydF4y2Ba/pub-id> </element-citation> </ref> <ref id="B6" content-type="article"> <label>6<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> 时<gydF4y2Ba/surname> <given-names> V。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Avasthi<gydF4y2Ba/surname> <given-names> m . S。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 古普塔<gydF4y2Ba/surname> <given-names> a。R。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 辛格<gydF4y2Ba/surname> <given-names> M。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Kushwaha<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 一个。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 淀粉酶生产和净化分离到的细菌浪费马铃薯废物堆场区Farrukhabad U。P国家印度<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 欧洲实验生物学杂志》上<gydF4y2Ba/italic> <year> 2012年<gydF4y2Ba/year> <volume> 1<gydF4y2Ba/volume> <issue> 3<gydF4y2Ba/issue> <fpage> 107年<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 113年<gydF4y2Ba/lpage> </element-citation> </ref> <ref id="B7" content-type="article"> <label>7<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Lonsane<gydF4y2Ba/surname> <given-names> b K。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> 拉梅什<gydF4y2Ba/surname> <given-names> m V。<gydF4y2Ba/given-names> </name> </person-group> <article-title> 生产的细菌耐热性的<gydF4y2Baitalic> α<gydF4y2Ba/italic>淀粉酶的固态发酵:一个潜在的工具实现经济生产和淀粉水解酶<gydF4y2Ba/article-title> <source> <italic> 应用微生物学的发展<gydF4y2Ba/italic> <year> 1990年<gydF4y2Ba/year> <volume> 35<gydF4y2Ba/volume> <fpage> 1<gydF4y2Ba/fpage> <lpage> 56<gydF4y2Ba/lpage> <pub-id pub-id-type="doi"> 10.1016 / s0065 - 2164 (08) 70242 - 9<gydF4y2Ba/pub-id> <pub-id pub-id-type="other"> 2 - s2.0 - 0025090709<gydF4y2Ba/pub-id> </element-citation> </ref> <ref id="B8" content-type="article"> <label>8<gydF4y2Ba/label> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Manonmani<gydF4y2Ba/surname> <given-names> h·K。<gydF4y2Ba/given-names> </name> <name> <surname> Kunhi<gydF4y2Ba/surname> <given-names> 答:a . 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