IJMB 国际微生物学杂志 1687 - 9198 1687 - 918 x Hindawi出版公司 150612年 10.1155 / 2012/150612 150612年 研究文章 嗜热的患病率和抗菌素耐药性 弯曲杆菌与鸡在科特迪瓦 Gblossi伯纳黛特 Goualie 1、2 Eric Essoh Akpa 1 伊莉斯抹胸 Kakou-N 'Gazoa 2 娜塔莉 Guessennd 2 Souleymane Bakayoko 2 乙胺Sebastien Niamke 1 麦勒 尼日尔 2 摩根 休·W。 1 Laboratoire德生物技术Filiere Biochimie-Microbiologie,团结起来形成et de矫揉造作的生物科学,大学de Cocody-Abidjan 582年01 BP,阿比让 科特迪瓦 2 巴斯德研究所de科特迪瓦、490年01 BP,阿比让 科特迪瓦 2012年 23 10 2012年 2012年 12 04 2012年 24 09年 2012年 2012年 版权©2012 Goualie Gblossi伯纳黛特的et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

嗜热 弯曲杆菌在人类胃肠炎的主要原因。感染的主要危险因素是消费的污染或交叉污染禽肉。在科特迪瓦,肠胃炎通常观察到但没有正式报道例人弯曲杆菌病。本研究的目的是确定的患病率和抗菌素耐药性 空肠弯曲杆菌和 弯曲杆菌杆菌隔绝在阿比让ceaca商业屠宰的鸡。在一百一十九年5月和2009年11月,(119)鸡盲样本收集和分析了被动的过滤方法分子识别(PCR)紧随其后。从这119个样本中,76(63.8%)是积极的 弯曲杆菌测试。在积极的殖民地,51.3% c .空肠而48.7%的人 c .杆菌。39岁的 c .空肠隔离,79.5%,38.5%,17.9%,10.3%,和7.7%,分别、萘啶酸、环丙沙星、阿莫西林、红霉素、庆大霉素。在37的隔离 c .杆菌、78.4%、43.2%、13.5%、8.1%、和0%耐药,分别相同的抗生素。总之,我们在这项研究中报道的高 弯曲杆菌研究了鸡的污染。分子识别的细菌和决心执行高阻氟喹诺酮类抗菌素的家庭了。

 1。介绍

弯曲杆菌细菌革兰氏阴性、弯曲、高机动性和微量需氧的。嗜热 弯曲杆菌物种,特别是 空肠弯曲杆菌和 弯曲杆菌杆菌,被认为是急性细菌性胃肠炎的主要原因在人类自1970年以来,据估计 弯曲杆菌种虫害负责400 - 500例腹泻每年在世界范围内( 1- - - - - - 4]。在发展中国家,5岁以下儿童发病率估计为每年100 000人(40 000例 5, 6),根据世界卫生组织(世卫组织)发病率是低估了。

未经高温消毒的牛奶、水和食物的动物起源是潜在的污染来源 7- - - - - - 9),但弯曲杆菌病的主要危险因素为人类食用未煮熟的家禽和处理的生禽( 9- - - - - - 16]。

大多数 弯曲杆菌感染不需要用抗菌药物治疗。然而,在病人的一个子集 弯曲杆菌可能会导致严重的并发症和死亡的风险增加,因此需要治疗 17- - - - - - 19]。

当临床治疗是必要的,氟喹诺酮类原料药(环丙沙星,例如)或大环内酯类(红霉素)目前使用的,因为他们大光谱活动肠病原体( 20., 21]。

然而,抗菌素耐药性 弯曲杆菌感染已大大增加了许多国家在1990年代。这个的出现 菌株抵抗抗菌素引起争议的使用抗菌素在动物食品生产( 22, 23]。

因为公众担忧的增加对于接触导致抗药性细菌的风险通过食物,监控项目抗菌素抗性指标细菌隔绝食用动物已经在许多发达国家( 24- - - - - - 27]。

在科特迪瓦,尽管禽肉尤其是肉用仔鸡的人口是一个主要的蛋白质来源,任何情况下人类的弯曲杆菌病已经发表。然而,我们的研究在2005年( 28)显示高患病率(67%) 弯曲杆菌仕达屋优先计划 。在鸡。这种情况可以用这一事实来解释 霍乱弧菌, 沙门氏菌,和许多其他微生物, 弯曲杆菌,是科特迪瓦的卫生当局的优先级。因此,患病率的调查数据 弯曲杆菌仕达屋优先计划 。主要是 c .空肠和 c .杆菌(他们是负责任的弯曲杆菌病病例98%以上)( 29日)是必要的。此外,决心的抗菌素耐药性 弯曲杆菌从鸡隔离是很重要的。

本研究的目的,一方面,估计患病率高温C ampylobacters在屠宰鸡在阿比让的生化和分子技术,另一方面,评估他们的抗菌素耐药性。

 2。材料和方法 2.1。研究区和样品制备

本研究是在Adjame进行的,在北市阿比让的一部分。Adjame是阿比让的主要市场每天有超过300万人次( 30.]。

从119年5月到2009年11月,鸡盲样品收集在一个商业家禽加工厂。这种植物是本市的主要家禽处理游客的多样化的起源特别餐馆老板。

期间收集的每一个随机选择的样本取出内脏,放入兜包袋,然后迅速运送到实验室的冷却器。

 2.2。分离和生化鉴定

隔离 弯曲杆菌执行与被动之前过滤方法浓缩Federighi提出( 31日]。

简单,1 g的盲内容被转移到9毫升的普雷斯顿浓缩肉汤基础(厘米0067 Oxoid Oxoid有限公司贝辛斯托克,汉普郡,英国)包含 弯曲杆菌生长因子(SR 0232 e Oxoid Oxoid有限公司贝辛斯托克,汉普郡,英国)和7% (v / v)去纤维蛋白的羊血。孵化是在厌氧罐包含包生成器微量需氧的气氛(5%的氧气,10%的二氧化碳、85%氮)类型CAMPYGen (CN0025A Oxoid,贝辛斯托克,汉普郡,英国)在24小时37°C。浓缩后,300 μL肉汤的醋酸纤维素过滤过滤(0.45 μ米)在哥伦比亚琼脂(Sharlau;西班牙巴塞罗那)含有5% (v / v)新鲜羊血在有氧条件下一个小时。

过滤器被撤琼脂 弯曲杆菌被隔离在48小时42°C下微量需氧的气氛。

一个假定的 弯曲杆菌殖民地从每个琼脂板是亚文化,被革兰氏染色反应,生化模式氧化酶、过氧化氢酶、吲哚酚乙酸酯水解,hippurate水解( 32]。所有隔离都存储在25% (v / v) glycerol-peptone肉汤−70°C。

 2.3。DNA提取、PCR条件

基因组dna从孤立的殖民地都是通过治疗得到十二烷基硫酸酯钠和蛋白酶K随后提取phenol-chloroform和降水与乙醇( 33]。PCR程序用于这项研究已经被林惇et al。(前面描述的 34]。两个基因的识别 空肠弯曲杆菌和 弯曲杆菌杆菌使用: 大有希望的人基因(编码 c .空肠hippurase)和 asp基因(编码 c .杆菌天冬氨酸激酶)。使用的两套引物序列基因扩增 asp(F 5′ggt ATG ATT TCT ACA亚美大陆煤层气有限公司注册会计师三大R′, 5′ata答CGT公司治理文化GTG AAAGAC-3′) 大有希望的人(F 5′棉酚GAG GGT TTG GGT GGT三大R′, 5′agc公司治理文化ATA ATA行动TAGCTTTG-3′)。

PCR进行最终的50 μL混合包含2.5 μ每个deoxynucleoside L三磷酸(10毫米),2.5 μL (MgCl2(25毫米),10 μL缓冲5 x的DNA聚合酶,0.4 μ1.5 L的Taq, μL的底漆 asp(10 μ米),5 μL的底漆 大有希望的人(10 μ米)。放大反应是使用热循环(9700年基因Amp PCR系统类型,应用生物系统公司,Villebon-sur-yvette,法国)以下程序:一个初始变性在94°C 15分钟紧随其后30变性周期为1分钟94°C,退火在49°C 1分钟和聚合为1分钟72°C。最后一个在72°C扩展了7分钟。

生成的放大对应735个基点和500个基点的DNA片段,分别 空肠弯曲杆菌和 弯曲杆菌杆菌。PCR产品沾0.6%的溴化乙锭,可视化解决方案在紫外线下后在1.5%琼脂糖凝胶电泳。

 2.4。抗菌药物敏感性试验

抗菌药物敏感性试验是由盘使用Mueller-Hinton琼脂扩散法(Oxoid)补充5%去纤维蛋白的羊血,根据临床实验室标准协会(CLSI)指南 35]。磁盘浸渍用抗生素(Biomerieux Marcy-l 'Etoile,法国)和相应的浓度是:环丙沙星(CIP: 5 μg);萘啶酸(钠:30 μg);红霉素(E: 15 μg);庆大霉素(GM: 10 UI);阿莫西林(AMX: 25 μg)。

短暂,well-isolated殖民地相同形态类型被选中的琼脂板文化和转移到10毫升无菌生理盐水缓冲(氯化钠0.9%)。均质化后,2毫升的混合物被淹没在Mueller-Hinton琼脂表面(Oxoid)含5%去纤维蛋白的羊血。剂被允许干了5分钟和抗生素光盘放在盘子里。后48 h microaerobic孵化在37°C,直径的抑制区用游标卡尺测量。 大肠杆菌写明ATCC 25922和 金黄色葡萄球菌写明ATCC 25923菌株被用作参考。隔离被列为敏感,中间,和耐药根据指导方针由CLSI [ 35]。

 3所示。结果 3.1。患病率

总的来说,119只鸡ceaca购买从一个商业屠杀和高温厌氧培养 弯曲杆菌。从这119个样本,76(63年,8%)阳性和43(36.2%)是阴性 弯曲杆菌测试。在 弯曲杆菌阳性,51.3%是 空肠弯曲杆菌而48.7%的人 弯曲杆菌杆菌。

 3.2。抗菌药物敏感性

药敏测试的结果 弯曲杆菌种虫害隔绝鸡萘啶酸、环丙沙星、阿莫西林、红霉素、庆大霉素展示在表 1。

抗菌药物敏感性的 空肠弯曲杆菌和 弯曲杆菌杆菌孤立的从2009年的鸡在阿比让(科特迪瓦)。

弯曲杆菌菌株 抗生素的磁盘
NA CIP AMX E 通用汽车
弯曲杆菌仕达屋优先计划 。( n = 76年 )
R 60 (78.9%) 38 (50%) 9 (11.8) 10 (13.5%) 3 (3.9%)
我 7 (9.2%) 10 (13.2%) 14 (18.4%) 12 (15.8%) 0 (0%)
年代 9 (11.9%) 28 (36.8%) 53 (69.8%) 54 (70.7%) 73例(96.1%)
c .空肠( n = 39 )
R 31 (79.5%) 15 (38.5%) 4 (10.2%) 7 (17.9%) 3 (7.7%)
我 2 (12.8%) 6 (15.4%) 9 (23.1%) 8 (20.5%) 0 (0%)
年代 6 (7.7%) 18 (46.1%) 26 (66.7%) 24 (61.6%) 36 (92.3%)
c .杆菌( n = 37 )
R 29 (78.4%) 16 (43.2%) 5 (13.5%) 3 (8.1%) 0 (0%)
我 2 (5.4%) 4 (10.8%) 5 (13.5%) 4 (10.8%) 0 (0%)
年代 6 (16.2%) 17 (46%) 27 (73%) 30 (81.1%) 37 (100%)

敏感,我:中间,R:耐药,NA:萘啶酸、CIP:环丙沙星、AMX:阿莫西林,E:红霉素,通用汽车:庆大霉素。

隔离,抗菌素耐药性萘啶酸和环丙沙星在78.9%和50%,分别。

在39的隔离 c .空肠79.5%;38.5%;17.9%;7.7%的人对萘啶酸、环丙沙星、阿莫西林、红霉素、庆大霉素,分别。

在37隔离,78.4%;43.2%;13.5%;8.1%的人对萘啶酸、环丙沙星阿莫西林、红霉素,分别。在这项研究中所有的隔离 c .杆菌对庆大霉素敏感。

 4所示。讨论

病例对照研究食源性感染率估计,50 - 70%的 弯曲杆菌疾病是由于食用受污染的家禽及其产品( 9, 17, 36]。一些研究调查了嗜热 弯曲杆菌在家禽中,研究结果表明流行范围从3%到98%的细菌 c .空肠或 c .杆菌作为主要的隔离 36, 37]。

通常消费家禽及其产品在现代Ivoirians饮食,但弯曲杆菌病不是报道在科特迪瓦。因此,本研究的主要目的是确定高温厌氧物种包括患病率 c .空肠和 c .杆菌在家禽在阿比让。

这项工作表明嗜热的流行率很高 弯曲杆菌在研究了鸡(63.8%)。这个比例是类似于之前的研究获得的结果(66.6%)( 28]。在 弯曲杆菌隔离51.3%的人 c .空肠而48.7%的人 c .杆菌。

如此高的隔离高温 弯曲杆菌在鸡也被报道 37- - - - - - 42]。然而,普遍存在的 c .杆菌在鸡比其他人更高在这项研究中发现( 39, 42]。

恶劣的卫生条件和卫生在科特迪瓦的家禽农场可以解释这高水平的患病率 c .杆菌。事实上,大多数农场没有安全围栏,防止渗透的其他动物,包括猪、良好的运营商 c .杆菌。在某些情况下,成群的牛羊和家禽在同一地点发生的污染贡献这样的鸡群 c .杆菌。

抗菌谱试验表明高阻力环丙沙星、萘啶酸的微生物。最近的研究报道,fluoroquinolone-resistant 弯曲杆菌种虫害迅速出现在家禽( 19, 24, 43, 44]。

阿尔弗莱德森和Korolik 45先进的一个假说来解释这个观察。他们建议使用enrofloxacin(更接近人类医学)中使用的氟喹诺酮类原料药在动物的羊群在动物水库可能施加选择压力( 22]。缺乏耐氟喹诺酮类的 弯曲杆菌在澳大利亚,enrofloxacin从未使用的国家,是一个强有力的理由支持这一假说。

两种抗生素的耐红霉素、阿莫西林,广泛用于治疗疾病在科特迪瓦,不是可以忽略不计。然而,低电阻率与氟喹诺酮类原料药相比获得。

这些结果与以前的观测(类似 19, 20., 45- - - - - - 48]。大多数抗菌药物耐药性的比例相对较高测试在我们的研究可能是由于高的使用这些代理作为动物生长促进剂或治疗。事实上,在科特迪瓦,在大多数发展中国家( 49),抗生素的使用对人类和动物相对不受限制的。

此外,没有卫生措施中观察到农场和屠宰过程中可能造成的污染家禽的尸体。因为弯曲杆菌病是通过食用被污染的食物,最好是家禽,抗生素耐药菌株的出现 弯曲杆菌鸡肉可以真正的在科特迪瓦的公共卫生问题。事实上,情况可能会更迅速地恶化在研究区,那里是一个扩张的家禽农场广泛和不受控制的使用抗生素。因此,监测的耐药模式是必要的指导合理使用抗菌药物在家禽农场。

总之,我们报告禽类中存在高污染由嗜热科特迪瓦 弯曲杆菌和高耐氟喹诺酮类家族的抗菌素。这些结果显示,需要加强特定的控制程序的实现减少污染的禽肉 弯曲杆菌和必要性在家禽中减少抗生素的使用部门。这项研究还显示了需要建立一个有效的控制系统 弯曲杆菌在鸡。

 确认

作者承认先生Fofana Kouakou先生Tiekoura Kouakou的“监测微生物对抗生素的耐药性和自然物质”的巴斯德研究所的科特迪瓦单位的帮助在这个研究中,特别是关于抗生素敏感性试验。

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