IJE 国际内分泌学杂志 1687 - 8345 1687 - 8337 Hindawi 10.1155 / 2018/8263136 8263136 研究文章 临床诊断x连锁Spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良和Sedlin小说错义突变基因(SEDL) 香港 Lei 1 2 3 http://orcid.org/0000 - 0001 - 9813 - 563 x 王 Dongxu 4 李 姗姗 5 6 张 Chengsheng 4 江 Xiuyun 1 2 3 关 Qingbo 1 2 3 张 Zhenlin 5 6 http://orcid.org/0000 - 0002 - 2039 - 2684 京 范 1 2 3 http://orcid.org/0000 - 0003 - 2867 - 4616 徐 京ydF4y2Ba 1 2 3 de Biase 达里奥 1 内分泌系 山东省医院隶属于山东大学 中国 sph.com.cn 2 山东临床医学中心内分泌和代谢 中国 3 内分泌和代谢 山东学院临床医学 中国 sdu.edu.cn 4 山东省肿瘤医院 中国 5 代谢性骨病和遗传学研究单位 骨质疏松和骨疾病 上海交通大学附属第六人民医院 中国 sjtu.edu.cn 6 上海代谢性疾病的关键临床中心 中国 2018年 10 12 2018年 2018年 03 06 2018年 04 10 2018年 25 10 2018年 10 12 2018年 2018年 版权©2018 Lei香港et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

客观的。Spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良(SEDT)是一种罕见的遗传性骨病脊髓和骺异常的特征。我们确定了疾病的基因测序与SEDT中国血统。 方法。我们从五名成员中提取基因组DNA的四代中国SEDT家族有三个男性,然后分析了影响聚合酶链反应和DNA测序基因突变。 结果。DNA测序表明基因错义突变发生的英国石油公司上游的外显子6 SEDL基因在两个家庭,和一个杂合的突变被发现在一个女性的载体。此外,没有发现突变的家庭的其他成员。 结论。SEDT在这个家庭是由G / C错义突变的外显子6 SEDL基因,以前没有显示与x连锁SEDT有关。

 中国国家自然科学基金 81370892 山东省的重要研究项目 2016年gsf201025 泰山学者专家的特别计划 1。介绍

术语spondyloepiphyseal发育不良(SED)包含一组遗传性骨疾病特点是脊椎和骨骼异常。的基础上,临床特征,成像特点和差异的分子遗传学SED,遗传性骨病的国际分类》(2010年版)这种遗传性骨病分为九个类型( 1]。其中x连锁spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良(SEDT)的发病率大约17:100万 2]。导致基因 SEDL位于Xp22、地区2 x染色体的短臂,和编码运输车颗粒complex-2(运输蛋白质粒子complex-2 (TRAPPC2)) ( 3]。比其他形式的SED SEDT进展后;然而,侏儒症与腰椎病变特点,和关节异常是相对温和的。SEDT病变发生在童年,主要包括腰椎和近端关节负重导致短短的躯干类型的身材矮小和早期关节退行性改变( 4]。成像显示椎平面度和骨骺发育不良。

SEDT的传统诊断方法依赖于典型的临床表现和影像学变化后的病人疾病的发作( 5]。在受影响的家庭,可以由遗传筛查诊断无症状的年轻的人( 6]。

 2。患者和方法

男性患者是一个14岁的学生去了医院在过去两年内生长迟缓。父母不是近亲,母亲并没有怀孕期间暴露于辐射或有毒的化学物质。根据父母的描述,患者在出生时是正常的长度和重量,在身材比例没有明显的慢性有机疾病的历史。两年前,发现病人的身高增长速度低于同龄的孩子,和年增长率不到5厘米。然后,病人去了当地医院的胸carinatum,开始补充钙和锌治疗,尽管效果并不明显。体检显示病人的身高是151厘米,2 SD低于正常参考价值的均值相同性别的人,年龄、区域和种族。病人的体重46公斤,上半身测量73厘米,78厘米的身体测量较低,手指间距为156厘米。在面部外观没有明显的异常,没有发际线低,并没有明显的扩大双目距离,和病人的情报是平均水平。性特征而言,病人已经少量的胡子,腋窝的头发,和阴毛,这反映了男性分布。阴囊是正常的在体积和色素沉着,阴茎的长度大约10厘米。 In addition, cardiopulmonary examination was within the normal limit, spinal flexion was within the normal physiological range, the limb joints were not deformed, limb muscle strength was normal, the hands did not have intersecting palms, and the fourth metacarpal bones were not short.

的垂体、甲状腺、性别、和皮质醇激素以及节奏测量在一般实验室检查是正常的。超声检查肝、胆囊、胰腺、脾脏、肾脏显示没有明显的异常;显示甲状腺滤泡囊肿;和心脏的结构一般都是正常的。生长激素刺激试验的峰值43.67 ng / ml, igf - 1水平并没有例外。染色体的数目是46,XY。病人的增长和发展的评价表明,病人的骨龄为15.5岁,比他的实际年龄年轻。左侧膝关节干骨后端并不是完全封闭的。家族史是如下:父亲是175厘米高,和母亲是158.5厘米;他们不相关,都是健康的。 The patient’s brother, who is 9 years old, is 139 cm. The patient’s uncle presented with a short trunk (height is 145 cm), short neck, chest deformity, and degenerative joint disease. Moreover, according to the narration of the patient’s family member, the patient’s uncle’s grandfather is also of similar stature. The pedigree was drawn (Figure 1),x射线辅助检查(图完成 2)。

这是中国SEDT家族的血统。I, II, III和IV显示第一个四代的家庭,和箭头表示渊源者(IV1)。所有打开的盒子代表健康的男性,和开放的圆圈表示健康的女性。填满盒子代表男性的影响。盒子或圆圈交叉线表明,这个人已经死了。各界与一个点在中间显示承运人的状态。

射线照片的病人的家族成员。渊源者的x射线结果如下。(a, b)胸腰椎前后的位置;箭头表示前优越伪劣边缘抑郁症,后峰突起,和牛奶瓶的迹象。(c)口正面位置,关节肿大如箭头所示,腕融合。(d, e) x射线结果渊源者的叔叔。(d)总脊椎位置,脊柱侧凸。(e)颈椎侧位置;箭头表示上级伪劣椎体边缘抑郁,奶瓶的迹象。

 2.1。基因组测序 2.1.1。DNA提取和质量检查

外周血样本获得知情同意的五个人(的渊源者IV1,渊源者的弟弟IV2,渊源者的父母III3 III4,和叔叔的渊源者III1),然后存储在EDTA抗凝管。基因组DNA提取血液样本使用基因组DNA净化设备根据制造商的指示,并储存在−80°C。共有1 μl的DNA样本被1%的琼脂糖电泳,可视化和浓度估计。然后,样本稀释浓度的工作5 - 10 ng / l根据估计的浓度,并没有明显的DNA样本乐队没有稀释。

 2.1.2。聚合酶链反应扩增和测序

以下用于PCR反应条件:条件,应用于六除了碎片 SEDL2 f / R。反应混合物(20 μl)包括1 x GC缓冲区(豆类),2.5毫米Mg2+核苷酸,0.2毫米,0.2 μ每个引物M, 1 U HotStarTaq聚合酶(豆类),1 μl模板DNA。自行车项目包括95°C 2分钟;11个周期94°C的20年代,64°C - 0.5°C /周期40年代,72°C, 1分钟;24个周期94°C的20年代,58°C 30年代,72°C, 1分钟;为2分钟72°C;和一个4°C。两个条件,一个片段 SEDL2 f / R。上面提到的材料一样。自行车项目包括95°C 2分钟;35 96°C的周期为1分钟10年代和68°C;和一个4°C。

(1)PCR净化使用SAP和精彩。净化PCR产品,0.5 U SAP和4 U挂式我添加到8 μl PCR产品。的混合是在37°C的环境60分钟,其次是孵化15分钟在75°C (PCR引物,表 1)。

SEDL基因的PCR引物序列。

PCR引物 正向/反向 引物(5 ′ 3 ′ )
SEDLP1 F AGGGAACGTGAACGTCTGAAA
R TCTTCAGCTCGGGAAGGCTAT
SEDLP2 F CCGAGGGTTCGGGAGGAACAAAG
R CAGCGGAGGGCTGGCAGGTC
SEDLP3 F CGGATGTTGGTCCTGTACCTC
R ATCAAGGCCCCGATAAAGACA
SEDLP4 F CATGAGAATGTTGTCTTTGTGATTTC
R CGGCAATCCACTACAGGTGA
SEDLP5 F TCGGTAACTTCCTTCTTGAAACATGA
R AAATCACCCTTGATAGGGTCCA
SEDLP6 F TCTGGACCCTATCAAGGGTGA
R CCCTAATAAAATCAGCTATGAGGACA
SEDLP7 F AATGTGGTCTTTAGACTTTGGAATG
R CAAAAGTTTTCCAGGCTATTTAATCA

(2)测序反应。反应混合物包括3 μl BigDye 3.1, 2 μl的测序引物(1 μ米),1 - 2 μl(纯化PCR产物。自行车计划使用如下:1分钟96°C;28 96°C的周期10年代,50°C 5 s, 4分钟和60°C;和一个4°C(测序引物,表 2)。ABI 3730 xl音序器的产品序列,测序文件被PolyPhred分析软件,结果被他们结合澄清记录已经手动校对。

测序引物序列。

PCR引物 正向/反向 引物(5 ′ 3 ′ )
SEDLP1 F AGGGAACGTGAACGTCTGAAA
SEDLP2 F CCGAGGGTTCGGGAGGAACAAAG
SEDLP3 R ATCAAGGCCCCGATAAAGACA
SEDLP4 F CATGAGAATGTTGTCTTTGTGATTTC
SEDLP5 F TCGGTAACTTCCTTCTTGAAACATGA
SEDLP6 F TCTGGACCCTATCAAGGGTGA
SEDLP7 F AATGTGGTCTTTAGACTTTGGAATG
3所示。结果 3.1。案例分析

这种情况下是一个大型的血统组成的四代中国SEDT家族有三个影响雄性(第一代病人被诊断为描述但没有证实)。病人都是男性,这是按照x连锁隐性遗传的遗传特点,和成像特性与SEDT的典型特征是一致的。x光检查病人的研究表明,椎骨被夷为平地在中间位置(图 2(一个));前和低利润率的椎骨沉没在横向位置,中部和后部渐渐凸起,椎骨了一瓶牛奶(图的外观 2 (b));手掌掌骨和趾骨的松果体被放大。掌指的和指间关节肿大,腕骨融合(图 2 (c))。的成像数据渊源者的叔叔(III1)表明,脊椎容易脊柱侧凸。颈椎形态改变,一瓶牛奶类似迹象的病人(数字 2 (d)和 2 (e))。

 3.2。分析基因的检测

所有外显子的 SEDL基因测序的5个样品渊源者和他的家人。结果表明, SEDL基因的渊源者(IV1)突变与正常相比 SEDL序列(图 3 (b))。突变的网站被渊源者,这是位于外显子1英国石油公司上游6。错义突变(纯合突变)改变了G到C,导致拼接站点(图的可能的变化 3(一个))。 SEDL基因突变在两个样本中找到渊源者的亲属。母亲(III3)的渊源者是一个载体,和错义突变(杂合的突变)发生1外显子6日英国石油公司上游可能导致突变的拼接网站(NM_001128835.2)(图 3 (c))。母亲的基因型改变,尽管表型没有。的测序结果符合渊源者:叔叔的错义突变(纯合突变)改变了G C 1外显子6日英国石油公司上游可能导致突变的拼接网站(NM_001128835.2)。的测序结果渊源者的父亲(III4)和弟弟(IV2)正常(图 3 (b))。

测序的结果 SEDL基因。如图表所示,面板(a)、(b)和(c)代表病人序列,正常序列,分别和承运人序列。箭头的位置是网站报道的突变研究。(a)病人序列(半合子),一个错义突变发生在病人的基因,G c (b)正常序列,正常的基地在基因测序站点c (c)载体序列(杂合子)。突变的女性携带者(G + C)。

 4所示。讨论

Spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良(SEDT)是一种x连锁隐性遗传性疾病,由Gedeon首次报道于1999年( 7]。基因是高度保守的在进化的过程中,总长度为20 kb,包含六个外显子和编码蛋白质Sedlin,含有140个氨基酸残基( 8, 9]。目前的研究表明 SEDL蛋白质影响交通从内质网到高尔基体,导致妨碍蛋白质运输细胞(尤其是软骨细胞),这使得它不可能分泌胶原蛋白形成一个正常的细胞外基质结构,最终导致软骨细胞发展的缺陷和疾病症状( 8, 10]。目前,48 SEDL基因突变已报告(数据来自HGMD和PubMed搜索),其中包括25个缺失突变,13个错义/无意义突变,6剪接变异,2插入突变,1插入/删除突变( 11, 12]。在这项研究中,鸟嘌呤,G, 1英国石油公司上游的外显子6更改一个胞嘧啶,C,这是一个错义突变。到目前为止,没有其他报道的突变。疾病的严重程度并不完全统一的患者 SEDL,因为不同基因型的 SEDL有不同的表型( 13]。人们普遍认为,突变的临床表现在3附近 ′ 结束 SEDL基因相对较轻,而附近的5 ′ 结束更严重,和突变患者3 ′ 外显子4月底可能有严重的髋关节疼痛,脊椎弯曲在早期阶段( 10]。

SEDT的典型临床表现是脊椎和骨骼异常。成像结果表明,脊椎了牛奶瓶的外观( 9, 14]。随着年龄的增加,进步的骨骼的变化是显而易见的,大关节变形,发现包括脊柱侧凸的脊椎和向后突起。

侏儒症往往伴随着内分泌激素不平衡在童年,所以临床医生将咨询内分泌激素测试的结果。当患者的内分泌激素正常,临床医生将关注病人的身体状况,以及成像考试将进行。在这种情况下,两个病人在这个研究显示成像特征变化,但是没有迹象表明系统性生物化学、激素代谢异常,或非特定的表型变化的预先检查。因此,为了减少骨代谢疾病的误诊,家族病史应该详细调查,体检应该完成,同时,x光检查的头骨,骨盆,椎骨,四肢和其他部分应该实现。即便如此,很难区分SEDT黏多醣存储IV型特发性侏儒症,先天性脊椎骨骺发育不良、多发性骨骺发育不良,等等,因为疾病的临床特征不明显的在幼儿期 15, 16]。

SEDT是一种进步的疾病,严重影响患者的生活质量,也没有有效的治疗方法;症状缓解主要根据病人的症状和临床表现,和病人被告知避免损伤脊髓和涉及大关节的活动;关节置换可能考虑严重[ 17]。因此,预防和早期诊断疾病的控制要点。基因诊断可用于诊断疾病尽早和改善晚期患者的症状。与此同时,它可以识别多个 SEDL基因突变,避免误诊。然而,医生有时不能确定疾病的可能范围根据其临床症状、和目标序列的特定基因往往导致负面的结果。因此,特别需要做全外显子组测序(韦斯)罕见疾病。之前的研究表明,韦斯确诊疾病的诊断率高于经典遗传学诊断,并呼吁韦斯作为诊断疾病的一线诊断工具( 18]。基因组的presymptom诊断筛查可以帮助确定病人,这样他或她可以为他或她的生活方式,获得合理的建议和产前诊断可以识别女性运营商提供遗传咨询和优生然后鼓励轴承和饲养更好的孩子( 19]。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

 的利益冲突

所有的作者没有任何可能的利益冲突。

 确认

这项工作是支持和由中国国家自然科学基金(81370892),山东的主要研究项目(2016 gsf201025),和泰山学者专家的特别计划。

 Warman m . L。 Cormierdaire V。 大厅 C。 克拉科夫 D。 拉克曼 R。 怎样的影响 M。 这部 G。 Mundlos 年代。 西村 G。 Rimoin d . L。 疾病分类和遗传骨骼疾病分类:2010年修订 美国医学遗传学杂志》的一部分 2015年 167年 12 2869年 Ryu H。 公园 J。 得知崔 H。 金 M。 金 Y。 好吧 i . Y。 x连锁spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良:在韩国血统TRAPPC2突变的识别 实验室医学年鉴 2012年 32 3 234年 237年 10.3343 / alm.2012.32.3.234 2 - s2.0 - 84861374308 22563562 Venditti R。 Scanu T。 澳网 M。 迪图里奥 G。 Spaar 一个。 Gaibisso R。 Beznoussenko g . V。 米罗诺夫 答:一个。 米罗诺夫 一个。 Zelante l 脚下 m·R。 Notarangelo 一个。 Malhotra V。 Vertel b . M。 威尔逊 C。 德•加尼姆 m·A。 Sedlin控制原骨胶原的ER出口通过调节Sar1周期 科学 2012年 337年 6102年 1668年 1672年 10.1126 / science.1224947 2 - s2.0 - 84866759304 夏 x Y。 余 J。 李 W·W。 李 N。 吴 问:Y。 周 X。 崔 y . X。 李 x J。 小说sedlin无义突变的基因(SEDL)导致严重spondyloepiphyseal中国家族血统获得性迟发性发育不良 遗传学和分子研究 2014年 13 2 3362年 3370年 10.4238/2014. april.29.15 2 - s2.0 - 84899765175 24841781 哦 i . H。 首歌 j·S。 Rim d . H。 崔 j·W。 李 年代。 李 j . H。 金 t·H。 获得性迟发性的spondyloepiphyseal发育不良(SEDT)误诊为强直性脊柱炎 风湿性疾病杂志 2011年 18 4 311年 10.4078 / jrd.2011.18.4.311 太阳 J。 夏 w·B。 梅 l . I。 江 Y。 王 O。 聂 M。 张 Z。 兴 x P。 周 x Y。 孟 x W。 临床诊断和SEDL基因突变分析spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良 中国骨质疏松与骨矿物质研究杂志》上 2012年 5 1 7 11 Gedeon 答:K。 考利 一个。 杰米逊 R。 汤普森 e . M。 罗杰斯 J。 Sillence D。 舵柄 g . E。 无角的 j . C。 Gecz J。 识别的基因(SEDL)造成x连锁spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良 自然遗传学 1999年 22 4 400年 404年 10.1038/11976 2 - s2.0 - 0032769695 10431248 Jeyabalan J。 Nesbit m·A。 Galvanovskis J。 卡拉汉 R。 Rorsman P。 Thakker r . V。 SEDLIN形式为:描述SEDLIN突变与转录因子及其交互MBP1, PITX1 SF1 《公共科学图书馆•综合》 2010年 5 1 10 10.1371 / journal.pone.0010646 2 - s2.0 - 77956286311 bar yosef U。 Ohana E。 Hershkovitz E。 Perlmuter 年代。 的方法 R。 比尔克 o年代。 x连锁spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良:一部小说 SEDL德系犹太人家庭的突变和临床干预因素 美国医学遗传学杂志》的一部分 2010年 125年,一个 1 45 48 10.1002 / ajmg.a.20435 14755465 Gecz J。 肖 m·A。 Bellon j . R。 de Barros洛佩斯 M。 人类野生型SEDL蛋白质功能补充酵母Trs20p但有些天然SEDL突变体不 基因 2003年 320年 3 137年 144年 10.1016 / s0378 - 1119 (03) 00819 - 9 2 - s2.0 - 0242298582 14597397 兴ydF4y2Ba W。 Heilig J。 Paulsson M。 Zaucke F。 胶原蛋白II调节chondroycte整合素表达谱和分化 结缔组织的研究 2015年 56 4 307年 314年 10.3109 / 03008207.2015.1026965 2 - s2.0 - 84937151382 25803621 高木涉 M。 八木天线 H。 中村 Y。 筱原 H。 武田 R。 什 一个。 西村 G。 长谷川 Y。 的spondyloepiphyseal intragenicdeletion的获得性迟发性发育不良引起的小说 TRAPPC2 临床儿科内分泌学 2015年 24 3 139年 141年 10.1297 / cpe.24.139 2 - s2.0 - 84937936356 26594095 Gedeon 答:K。 舵柄 g . E。 勒梅尔 M。 Heuertz 年代。 Tranebjaerg l Chitayat D。 罗伯逊 年代。 玻璃 我一个。 Savarirayan R。 科尔 w·G。 Rimoin d . L。 Kousseff b G。 大桥 H。 查贝尔 B。 Munnich 一个。 Gecz J。 无角的 j . C。 x连锁的分子基础spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良 美国人类遗传学杂志》上 2001年 68年 6 1386年 1397年 10.1086/320592 2 - s2.0 - 0034991758 11349230 王 H。 吴 W。 徐 Z。 谢 J。 小说拼接SEDL基因突变导致获得性迟发性spondyloepiphyseal异生在一个大的中国血统 我们共同Chimica学报 2013年 425年 30. 33 10.1016 / j.cca.2013.07.002 2 - s2.0 - 84881229357 菲德勒 J。 海洋博物馆 m . L。 这部 G。 Heuertz 年代。 费佛副检察官 l 布伦纳 r·E。 x连锁spondyloepiphyseal获得性迟发性发育不良:小说在13个欧洲家庭和复发性突变 人类基因突变 2004年 24 1 103年 10.1002 / humu.9254 2 - s2.0 - 7244234298 15221797 Batmaz İ。 Sariyildiz m·A。 Dilek B。 Ulu m·A。 Verim 年代。 Budulgan M。 Cevik R。 获得性迟发性的spondyloepiphyseal发育不良与骨质疏松和模仿spondyloarthropathy共存 土耳其物理医学与康复杂志》上 2013年 59 3 260年 263年 三好 K。 中村 K。 哈加 N。 劳斯 Y。 外科治疗atlantoaxial半脱位spondyloepiphyseal发育不良congenita脊髓病 脊柱 2004年 29日 21 E488 E491 10.1097/01. brs.0000143621.37688.f3 15507788 Trujillano D。 Bertoli-Avella a . M。 Kumar Kandaswamy K。 维斯 m·e·R。 科斯特 J。 上著名 一个。 Paknia O。 施罗德 R。 Garcia-Aznar j . M。 Werber M。 Brandau O。 卡尔沃德尔卡斯蒂略 M。 Baldi C。 韦塞尔 K。 基肖尔 年代。 Nahavandi N。 Eyaid W。 艾尔Rifai m . T。 al-Rumayyan 一个。 al-Twaijri W。 Alothaim 一个。 Alhashem 一个。 al-Sannaa N。 al-Balwi M。 Alfadhel M。 罗尔文 一个。 阿布Jamra R。 临床外显子组测序:2819个样本的结果反映出1000个家庭 欧洲人类遗传学杂志》上 2017年 25 2 176年 182年 10.1038 / ejhg.2016.146 2 - s2.0 - 84995550657 27848944 墨菲 C。 林肯 年代。 梅雷迪思 年代。 交叉 e . M。 Rintell D。 性教育和智力障碍:从儿科遗传辅导员实践和洞察力 《遗传咨询 2016年 25 3 552年 560年 10.1007 / s10897 - 015 - 9909 - 6 2 - s2.0 - 84947433463 26581379