IJE 国际内分泌学杂志 1687 - 8345 1687 - 8337 Hindawi出版公司 903918年 10.1155 / 2011/903918 903918年 研究文章 ZEB1雄激素受体调节转录的转录因子 Anose Bynthia M。 1、2 桑德斯 米歇尔·M。 1 巴赫 梁ydF4y2Ba 1 生物化学、分子生物学和生物物理学 明尼苏达大学 明尼阿波利斯,MN 55455 美国 umn.edu 2 化学系 伯特利大学 圣保罗,MN 55112 美国 bethel.edu 2011年 10 12 2011年 2011年 01 08年 2011年 15 09年 2011年 2011年 版权©2011 Bynthia m . Anose和米歇尔·m·桑德斯。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

锌指E-box结合蛋白1 (ZEB1)转录因子属于带两家族的锌指homeodomain蛋白质参与生理和病理活动主要涉及细胞迁移和上皮间充质转变(救护车)。ZEB1(也称为 δEF1、zfhx1a TCF8和Zfhep)起着关键的作用在调节t细胞发育等多元化的进程,骨骼图案,繁殖,癌细胞转移。然而,调控其表达的因素,因此ZEB1参与的信号通路是定义糟糕的。因为它是由雌激素和孕激素,前列腺癌,我们调查是否 tcf8编码ZEB1,受雄激素。这里的数据证明, tcf8是由二氢睾酮(DHT)在人类曲泽/ AR前列腺癌症细胞系和感应是由两个雄激素反应元素(战神)。这些结果说明ZEB1是雄激素信号通路的中介。

 1。介绍

ZEB1(也称在脊椎动物 δEF1、zfhx1a AREB6、TCF8 Zfhep)和ZEB2 (SIP1)密切相关的人类形式的带两家庭E-box绑定转录因子是守恒的从蠕虫到人(审查,请参阅[ 1]。蛋白质都含有七个锌指,四个n端和三个糖基附近,附近都可以激活( 2- - - - - - 4和压制 5, 6目标基因。ZEB1编码的 tcf8(有时也称为 zfhx1a或 zeb1)基因。虽然 tcf8在1991年克隆( 7)和基因,编码ZEB2于1999年被克隆 8),我们理解角色的合成蛋白质在正常和异常的生理还是新兴。都出现在开发过程中促进细胞迁移和在癌症恶化 9- - - - - - 14),主要是通过抑制钙粘蛋白基因的表达在上皮细胞( 1, 9, 10, 15, 16]。然而,ZEB1作为肿瘤抑制在成人t细胞白血病/淋巴瘤( 17]。有趣的是,ZEB1是一个关键的阻遏 p73和 p63基因的成员 p53基因家族,其绑定到这些基因促进细胞增殖,防止分化( 18]。ZEB1表达式是有限的增殖细胞在某些情况下Rb-E2F1复杂( 19]。ZEB1也反对脂肪堆积在雌性老鼠 20.和防止怀孕期间子宫收缩 21),其行为与复杂的生理活动,细胞迁移或EMT并不相关。

尽管ZEB1调节发展的重要性,细胞增殖,繁殖和新陈代谢,相对很少有人知道的规定 tcf8。实际的启动子只在鸡(被定义 22]虽然promoter-reporter化验表明,类似的基底36英国石油公司上游的启动子区域存在于人类翻译开始网站( 23]。第二个更多的远端启动子功能在某些组织或上下文( 24]。基因也是调制的信号转导途径虽然机制仍未定义(审查,请参阅[ 24]。当生长因子如TGF - β家庭( 25和igf - 1 26)规范 tcf8类固醇激素是主要的诱导物。值得注意的是,表达ZEB1是在一小时内雌激素在女性输卵管引起的 2]。也受雌激素在小鼠垂体( 27, 28),在人类子宫肌层的细胞( 12),在小鼠脂肪组织(Saykally Sandri,桑德斯在修订手稿),和人类阴茎组织和包皮 29日]。这被证明是在转录水平( 2),这表明 tcf8雌激素受体的直接目标,尽管没有雌激素反应元件(s)已被确定。有趣的是,雌激素在L压制ZEB1 mRNA的表达 βT2 gonadotrope细胞( 28]。ZEB1 mRNA也是孕酮诱导的人类乳腺癌细胞系T47D [ 30.),在人类子宫肌层的细胞( 12),和在小鼠子宫 21),这表明表达ZEB1 steroid-regulated在各种各样的组织。

这些研究的目的是评估是否直接调节雄激素受体(AR) tcf8。这个问题尤其相关ZEB1表达高侵略性前列腺癌(PCa)细胞系和组织和促进表型变化符合上皮间充质转变(EMT)在这些行 26, 31日]。这就提出了一个可能性,ZEB1介导至少部分基于“增大化现实”技术在促进PCa过程的影响。我们的初步结果表明ZEB1 mRNA水平增加22 rv1针对雄激素治疗前列腺癌和生物/ AR细胞系已发表( 32, 33]。本研究扩展了这些观察结果表明,雄激素影响的转录活动 tcf8这个基因通过绑定或拘束的基于“增大化现实”技术。前列腺癌治疗的曲泽/ AR细胞系,这过表达AR ( 34),二氢睾酮(DHT)诱导内源性ZEB1信使rna和蛋白质,确认我们的观察雄激素增加ZEB1 mRNA和首次展示,这是反映在ZEB1蛋白质水平。检查近端~ 1000 bp的5′侧翼DNA显示两个潜在的雄激素反应元素(战神)。描述这些网站显示,都需要给予雄激素反应 tcf8,基于“增大化现实”技术的结合。这就提出了一个可能性,ZEB1作为直接中介至少在某些雄性激素信号转导通路。

 2。材料和方法 2.1。细胞培养、瞬态DNA转染和<斜体>β< /斜体>牛乳糖化验

曲泽/ AR前列腺癌细胞系被k·伯恩斯坦博士请提供(迈阿密大学)和维护(如前所述)( 34]。LNCaP, C4、C4-2 C4-2B细胞系买来ViroMed实验室(Minnetonka、锰),维护在T-medium(美国表达载体,加州卡尔斯巴德)和10%的边后卫。二氢睾酮(DHT, d - 7149从西格玛化工有限公司)溶解在95%乙醇添加表示。瞬时转染化验进行曲泽/ AR细胞使用Lipofectamine Lipofectamine 2000协议(表达载体)。转染是LNCaP线使用ExpressFect(美国新泽西州Denville科学、Metuchen)。 β牛乳糖化验根据制造商的说明进行使用Galacto - 明星系统(美国应用生物系统公司,加州福斯特城),与化学发光测量标准光度计在1.0秒/管。

 2.2。实时PCR (qPCR)

总RNA从培养细胞系是孤立使用试剂盒试剂(英杰公司)根据制造商的协议。两个 μg整除mRNA的反向转录MMLV逆转录酶(英杰公司)来创建cDNA模板实时逆转录酶聚合酶链反应(qPCR)。对图 1同时,ZEB1 RPL32 mRNA测量使用TaqMan qPCR 96 -孔板上 iCycler美国加州(BioRad大力神)使用探针和引物指定的表 1。每个引物是双标记荧光染料5′末端和荧光冷却器分子在其3′末端。每个染料的发射光谱是不同的,它允许两个探测器的歧视在相同的反应。6-carboxy-4 ZEB1的荧光团,7,2′,7′-tetrachlorofluorescein(春节)和冷却器是6-carboxy - N , N , N ′ , N ′ -tetramethylrhodamine (TAMRA)。为 RPL32,荧光团6-carboxyfluorescein (6-FAM)和冷却器是TAMRA。探针和引物组每个反应中使用了以下优化复合PCR协议:12.5 μ2.5 L智商Supermix (BioRad) μL 10毫米核苷酸,2 μL 50 mM MgCl2,0.5 μL iTaq (BioRad)和0.5 μL cDNA模板。循环参数如下:1在95°C周期3分钟,其次是60周期在95°C 10秒55°C 1分钟。

低聚物序列用于qPCR、诱变和GMSA。

低聚物 低聚物序列 使用
ZEB1 (F) 5′-TCCTGAGGCACCTGAAGAGG-3′ 聚合酶链反应
ZEB1(右) 5′-CAGAGAGGTAAAGCGTTTATAGCC-3′ 聚合酶链反应
RPL32 (F) 5′-CCATCTCCTTCTCGGCATCAT三大′ 聚合酶链反应
RPL32(右) 5′ggt TTCCGCCAGTTACGCTTA-3′ 聚合酶链反应
GAPDH (F) 5′- GACCCCTTCATTGACCTCAACTACATG-3′ 聚合酶链反应
GAPDH(右) 5′-CTCCTGGAAGATGGTGATGGG-3′ 聚合酶链反应
太(944−−930) 5′GAGCCTCTAGGTGTgAattcGGTGAgaaCGcAAAGCCGGGAGTGT3” 突变
太(140−−126) 5′GAGCCTCTAGGTGTgAattcGGTGAgaaCGcAAAGCCGGGAGTGT3” 突变
WT (944−−930) 5′-agcttCCTA GGATCCCAC GGTTCTACGCGAGGAAGAGa-3′ GMSA
太(944−−930) 5′-agcttCCTA GtcTCCCAC GtaTCTACGCGAGtcAGAGa-3′ GMSA
WT (140−−126) 5′-agcttTGTAA GGAAGG矫正性大动脉转位 TGTCGTAAAGCCa-3′ GMSA
太(140−−126) 5′-agcttTGTgA attcGG矫正性大动脉转位 gaaCGcAAAGCCa-3′ GMSA
WT共识是 5′-agcttCTAGAAGTCT GGTACAGGG TGTTCTTTTTGCAa-3′ GMSA
太的共识是 5′-agcttCTAGAAGTCT GcaACAGGG TcaTCTTTTTGCAa-3′ GMSA

定点诱变和GMSA寡聚物,只显示前链。小写字母表示突变或限制性内切酶的网站。

双氢睾酮引起的内源性ZEB1 mRNA表达。曲泽/ AR细胞处理车辆(0海里)或双氢睾酮的越来越多。24小时后,RNA是收获,受到qPCR使用ZEB1和RPL32引物列在表中 1。ZEB1 mRNA水平正常化RPL32然后绘制相对于没有DHT控制。这个实验重复了6次一式三份。禁止代表标准差的错误意味着平均的实验。 P * < 0.05 双氢睾酮相比,没有。

在图 7(一)SYBR绿色qPCR完成量化ZEB1和GAPDH mRNA使用引物在表 1在反应如下:12.5 μL智商SYBR绿色Supermix (BioRad,猫# 1708885),2 μ(10 L引物组合 μ每米),2 μ(100 ng / L模板 μL)和8.5 μL H2o .这个反应制备3 x鸡尾酒和分布在96孔板一式三份。qPCR都使用了BioRad iCycler退火温度为61°C的互补。

 2.3。西方墨点法

蛋白质提取物是从曲泽/ AR细胞使用ReadyPrep蛋白质提取工具包(BioRad)根据制造商的协议。蛋白质浓度测定布拉德福德化验(BioRad),和100毫克的核提取每口井的加载在4 - 20% ReadyGel Tris-HCl (BioRad)。蛋白质在60 mAmp运行45分钟,转移到polyvinyldifluoride (PVDF)膜吸水ZEB1抗体和控制 α微管蛋白抗体(圣克鲁斯生物技术、圣克鲁斯,CA, E-20和h - 300, resp)。其次是辣根peroxidase-conjugated二级抗体(Sigma-Aldrich,圣路易斯,密苏里州,美国)。墨迹是电视台/ BCIP开发解决方案(皮尔斯,罗克福德,生病,美国)。

 2.4。克隆的5′侧翼Tcf8地区和近端启动子

974 bp的DNA区域跨越982−−9相对于翻译的网站开始 tcf8被从人类基因组DNA PCR克隆(Clontech,帕洛阿尔托,CA)使用正向引物5′-TGGCCTGTGGATACCTTAGC-3′(982−963−)和反向引物5′-CGCTTGTGTCTAAATGCTCG-3′(9−−28) pBlueTOPO β牛乳糖记者向量(表达载体),插入测序。这 tcf8启动子构建名叫pBlueZEB974。

 2.5。质粒诱变

进行定点诱变pBlueZEB974使用QuikChange诱变工具包(Stratagene),按照制造商的建议方案表中列出的低聚物 1及其对应的免费寡聚物。要创建double-mutation,下游是最初突变,并使用这种构造作为新一轮的突变的模板使用上游引物。质粒测序。

 2.6。凝胶迁移转变化验(GMSAs)

核蛋白质提取物是从曲泽/ AR细胞治疗5 nM DHT使用ReadyPrep蛋白质提取工具包(BioRad)根据制造商的协议。蛋白质浓度测定布拉德福德化验(BioRad)。GMSAs进行描述( 2使用10 μ克核蛋白质和cpm 8000032P-end-labeled低聚物每车道表示。序列的链表中列出 1half-sites下划线。

抗体supershift反应是使用0.1毫克/毫升执行最终的浓度 αar (A2281x,美国生物、Swampscott质量,美国)。免疫原的合成肽对应人类AR的残留299 - 315。GMSAs被放置与电影48 h−autoradiographic发展之前80°C。

 3所示。结果 3.1。雄激素诱导ZEB1 MRNA的表达

核上运行( 2和记者化验 21)表明, tcf8诱导的转录水平的雌激素和孕激素,分别。因为孕激素受体和AR认识许多相同的结合位点(最近更新,请参阅 35),似乎 tcf8目标基因可能是一个基于“增大化现实”技术,特别是雄激素诱导ZEB1 mRNA的表达( 32, 33]。扩展这些观察,内生的反应 tcf8二氢睾酮(DHT)雄激素雌激素不能加香,是检查。人类曲泽/ AR细胞治疗剂量的DHT从1到100纳米(图24小时 1)。总RNA提取并进行实时TaqMan PCR (qPCR) ZEB1 mRNA的表达使用60年代核糖体蛋白L32 (RPL32)看家基因( 36作为一个控制)。正如所料,ZEB1信使rna诱导约4倍的低剂量的DHT但没有回应剂量超过7海里和双氢睾酮明显压抑了100海里。尽管如此,这些数据证实我们的数据在22个rv1前列腺癌细胞( 32]内生ZEB1 mRNA水平增加了雄激素。

 3.2。ZEB1蛋白质也会增加雄性激素治疗的反应

确定是否ZEB1 mRNA的增加反映了蛋白质的增加,西方的屁股进行(图 2)。这些墨迹图显示,ZEB1水平确实从本质上增加察觉DHT治疗的反应。因此,不仅是ZEB1 mRNA水平增加了雌激素和孕激素,但他们也受雄性激素,这是反映在ZEB1的增加。这表明ZEB1扮演着一个重要的角色在雄激素信号虽然没有androgen-responsive ZEB1目标基因已经被鉴定。

双氢睾酮表达ZEB1蛋白质引起的。蛋白质分离曲泽/ AR细胞治疗表示大量的DHT 24小时。一百毫克的蛋白质用于ZEB1抗体或免疫印迹分析 α微管蛋白抗体作为加载控制。~ 150 kDa塔尔·蛋白质和45 kDa α微管蛋白蛋白质表示。

 3.3。雄激素诱导Tcf8通过两个战神在转录水平

确定是否 tcf8包含任何明显的阿瑞斯,发现其序列检查和两个假定的阿瑞斯从944−930和140−−−126相对于网站的翻译开始。转录的开始网站才实验确定鸡( 22]虽然预测人类的36个核苷酸上游翻译开始网站( 23]。调查是否这些潜在阿瑞斯是功能性的,974个基点基因组片段(982−−9相对于翻译开始网站)subcloned成 β牛乳糖记者向量(称为pBlueZEB974),该质粒进行转染化验与越来越多的DHT(图 3(一个))。该启动子构建应对低剂量的DHT而不是更高的剂量,确认结果与内源性基因(图 1)。相比之下,MMTV启动子是由所有剂量的DHT(图 3 (b)),包括剂量100海里(数据未显示),表明缺乏诱导浓度高于5 nM是选择性的 tcf8启动子。由于折叠的感应 tcf8启动子构建由DHT等于或超过的内源性基因,雄激素的影响都可能在转录水平。这些结果也表明,这974个基点区域的感应就足够了 tcf8雄激素。

DHT诱发tcf8在转录水平。曲泽/ AR暂时细胞转染 β牛乳糖记者质粒(pBlueZEB974)包含序列982−−9从tcf8 MMTV启动子(左面板)或(右面板)和增加双氢睾酮的浓度表示。 β牛乳糖活动确定,结果绘制双氢睾酮的相对价值没有。 n = 3 , P * < 0.5 双氢睾酮相比,没有。

为了确定这两个假定的阿瑞斯在944年和140−−调解雄激素的影响,点突变的临界分别介绍了基于“增大化现实”技术的结合残留和在一起(图 4(一))。瞬时转染质粒的曲泽/ AR细胞进行治疗或没有DHT(图 4 (b))。数据显示,突变的假定是完全废除的响应性 tcf8雄激素,确认这些实际上是真正的战神。

两个功能中阿瑞斯 tcf85′侧翼地区。(一)两个守恒的阿瑞斯被确定在944年和140−−tcf8(白色盒子)相对于翻译开始。质粒构建在每一个假定的阿瑞斯被突变单独或都突变(黑盒)。−36是公认的转录起始站点和相对于翻译网站开始编号。(b)。(a)中描述的质粒转染到曲泽/ AR细胞与双氢睾酮的浓度增加。这些细胞被24小时和后收获 β牛乳糖溶解产物的活动。 P * < 0.05 相对于没有二氢睾酮。 n = 6 2 - 3 /复制实验。

 3.4。雄激素受体结合的战神

确定,预测,基于“增大化现实”技术的结合在944年和140−−战神,GMSAs进行使用曲泽/ AR细胞核蛋白质从细胞中提取处理5 nM DHT(图 5)。原油是典型GMSAs使用核蛋白质提取与阿瑞斯( 37, 38),多个乐队观察,所有这些都与野生型(WT) self-oligomers(巷3位数 5(一个)和 5 (b)低聚物)和一个共识(巷5)而不是突变(MT)自我(巷4)或共识(巷6)低聚物。添加一个基于“增大化现实”技术的抗体(巷7)引起了重大supershift,而preimmune血清没有(没有显示),验证绑定复杂为每个包含基于“增大化现实”技术。

战神在tcf8绑定AR。曲泽/ AR细胞治疗5 nM DHT 24小时,和核蛋白质提取做好准备。寡聚物对应区域的DNA含有(a) 944, (b)−−140放射性标记的,用作探针。GMSAs都是并行运行,只是调查不同。十 μ克核蛋白质用于每个车道除了巷1,它只包含放射性低聚物。巷2:+核提取。巷3:野生型(WT) self-competitor + 50 x冷。巷4:+ 50 x冷self-competitor突变(MT)。巷5:+ 50 x冷WT共识。巷6:+ 50 x冷太共识。巷7:加上一个基于“增大化现实”技术的抗体。箭头指示乐队代表AR / DNA复合物supershifted抗体。

 3.5。不诱导内源性ZEB1表达雄激素LNCaP细胞系

的示范 tcf8是由雄激素,激进的PCa的高ZEB1 mRNA的表达细胞系,ZEB1在PCa细胞迁移的作用[ 26, 31日],ZEB1格里森评分的相关性在人类PCa样品( 26],ZEB1表达的增加在初级PCa和骨转移相关 39]提出的异常表达的可能性 tcf8可能促进PCa转移。支持这个概念表达的观察ZEB1成为雌激素独立在激进的子宫内膜癌和卵巢癌 40]。检查是否ZEB1表达式成为独立于雄激素的PCa过程期间,LNCaP PCa过程模型( 41(使用数据 6和 7)。LNCaP细胞系是androgen-responsive,前列腺特异性抗原(PSA)分泌,nonmetastatic人类前列腺癌细胞系建立从淋巴结转移( 42]。的LNCaP C4-2和C4-2B线是两个衍生品转移的潜力。雄激素阉割主机独立增长但仍有androgen-responsive AR。我们假设ZEB1表达增加独立的雄激素在这些转移性线和有助于androgen-independent PCa细胞增殖,与发生什么ZEB1表达式在先进的卵巢和子宫内膜癌 40]。如果这是真的,这个不恰当的表达ZEB1可能导致雄激素不敏感观察到先进的PCa。

DHT诱发tcf8启动子质粒在LNCaP细胞系衍生品剂量依赖性的方式。LNCaP (a)、C4 (b), C4-2 (c)和C4-2B (d)细胞系转染pBlueZEB974启动子的质粒,然后培养与提高DHT表示。这些细胞被24小时和后收获 β牛乳糖溶解产物的活动。(e)与野生型pBlueZEB974 C4-2细胞转染质粒或包含一个或两个战神突变质粒。数据没有DHT绘制相对于平均水平。 P * < 0.0001 , P * * < 0.01 , P * * * < 0.05 。

内源性tcf8不是LNCaP细胞系的诱导。四个LNCaP-derived细胞系均分为两组,有或没有5 nM DHT孵化24小时。(a)为一组,RNA是孤立和受到qPCR ZEB1和GAPDH信使RNA。GAPDH ZEB1 mRNA水平正常化。第二组(b),细胞转染pBlueZEB974在T = O,和 β牛乳糖活动确定了24小时。 P * < 0.0001 双氢睾酮相比,没有。

为了检查的相对雄激素反应细胞系,pBlueZEB974质粒转染到LNCaP(图 6(一)),C4(图 6 (b)),C4-2(图 6 (c)),或C4-2B(图 6 (d)双氢睾酮)与越来越多的细胞系。在所有情况下,表达的 tcf8子被DHT强烈诱导剂量依赖性的方式,表达水平并没有与转移的潜力。然而,与所观察到的曲泽/ AR细胞(图 1),高浓度也诱导表达。被认为与曲泽/ AR,阿瑞斯都是诱导所需 tcf8(图 6 (e))。因此, tcf8启动子是受雄激素LNCaP细胞系,监管是依赖于两个战神。

为了确定内生 tcf8由DHT在这些细胞系诱导,是否影响细胞的转移潜力,四行是孵化有或没有5 nM DHT, RNA是孤立的,并受qPCR(图 7(一))。令人惊讶的是, tcf8在任何不是由DHT诱导即使行吗 tcf8子从相同的构造是在细胞实验(图 7 (b))。这些结果被证实与其他剂量的DHT(数据没有显示)。这些数据表明,内生 tcf8是曲泽不同受雄激素和LNCaP细胞株尽管孤立子诱导两种。

 4所示。讨论

证据积累了从细胞系和人类样本表明ZEB1在主成分分析的发展过程中发挥作用( 14, 26, 31日, 39]。ZEB1信使rna是由雌激素诱导( 2)和孕酮( 30.),似乎它也可能受雄性激素,特别是在AR和公关可以绑定到相同的监管元素(审查,请参阅[ 35])。我们的初步研究表明,它确实是由雄激素生物/ AR和前列腺癌22 rv1细胞系( 32, 33]。这些扩展这些观察和研究表明,双氢睾酮诱导内源性ZEB1 mRNA,但在一个相当小的范围的浓度在生物/ AR细胞(图 1)。也出现了类似的剂量反应的 tcf8启动子构建而不是MMTV启动子(图 3)。相比之下,同样的启动子记者向量响应是一个广泛的雄激素浓度LNCaP细胞系(图 6)表明这一限制特定细胞类型,选择性的 tcf8启动子,转录后的调控的结果。限制剂量反应的原因 tcf8雄激素在生物/ AR细胞仍有待阐明。尽管如此,我们的数据表明,雄激素诱导的转录 tcf84 - 9倍的曲泽细胞,效果更少的蛋白质水平基底表达式可以检测到(图 2)。第一次我们的数据也显示,雄性激素诱发ZEB1蛋白mRNA(图 2)。

瞬时转染分析与 tcf8启动子构造显示,假定的阿瑞斯(944年和140−−相对于翻译开始网站)功能和感应(图所需 4)。这两个是完美的阿瑞斯,他们相距约800个基点,这可能是一个循环机制带来了两个战神被雄激素诱导提供足够的亲和力。一个类似的机制发生在PSA启动子,一个上游增强器包含一个循环与两个promoter-proximal阿瑞斯在400年和170−− 43]。

这些数据支持这一概念,雄激素抒发转录级联的感应 tcf8。这也是由最近的一篇论文显示,基于“增大化现实”技术的诱导表达ZEB1三阴性乳腺癌细胞( 44]。此外,这些细胞治疗与抗雄激素bicalutamide减少ZEB1蛋白表达虽然没有提供机制。然而,这有点奇怪,不诱导内源性雄激素 tcf8在androgen-responsive LNCaP细胞系衍生品(图 7),即使启动子构建响应(图 6)。一个类似的难题是观察到的感应 tcf8通过雌激素( 40]。一些过量细胞系显示estrogen-dependent ZEB1的表情。一种解释可能是表观遗传沉默的 tcf8轨迹发生在一些细胞类型。这被证明是在成人t细胞白血病和淋巴瘤细胞的表观遗传沉默 tcf8似乎有助于恶性肿瘤( 17]。另一个可能性是, tcf8基因实际上是由雄激素诱导LNCaP细胞系,但信使rna是由小分子核糖核酸(microrna)迅速退化。大量证据表明,有一个ZEB1和几个microrna互惠关系,尤其是那些mir - 200家庭(审查,请参阅[ 45]。ZEB1 3′utr包含八种子序列mir - 200家庭,和ZEB1 mRNA的表达与mir - 200的表达呈负相关的家庭( 45]。这些种子序列是不存在的 tcf8启动子构建。此外,LNCaP细胞有极高mir - 200 c的水平,约1420倍,正常前列腺的成纤维细胞( 46]。额外的支持这一假设来自和mir - 200之间的反向关系见过ZEB1在不同生物细胞系导数( 47]。因此,雄性激素可能诱导ZEB1 mRNA在LNCaP细胞,但它正迅速退化,mir - 200 c。

尽管ZEB1受雌激素、孕激素和雄激素( 2, 12, 21, 27, 28),只有两个出版物正常解决其在哺乳动物生殖作用[ 12, 21]。斯波尔斯特拉et al。 12)表明,ZEB1表达在正常处女怀孕小鼠子宫肌层和基质,但不是在上皮细胞,尽管这些细胞也含有雌激素和孕激素受体。这支持了我们的观察,类固醇受体的存在并不足以诱导 tcf8在所有类型的细胞(这手稿和[ 40])。在怀孕的子宫,ZEB1孕激素诱导表达,抑制与子宫收缩(相关的基因 21]。有趣的是,mir - 200家庭是诱导到期,压抑ZEB1表达和允许分娩。不知道ZEB1在男性生殖系统的作用。可以推测,ZEB1介导的雄激素在前列腺癌形成的信号。泌尿生殖的AR-dependent信号间质在前列腺癌发展需要(审查,请参阅[ 48])。在正常细胞主要是间充质(ZEB1表达式 12, 40),这可能是因为ZEB1调节雄激素的行动在开发的前列腺癌和正常男性生殖功能的某些方面。的贡献ZEB1对生理和病理信号通路引发的雄激素还有待建立。

除了证明 tcf8由雄激素调控在转录水平,此数据显示,这是一个基于“增大化现实”技术的直接目标,确定其具体的结合位点。这是一个重要的贡献很少监管元素一直在为特征 tcf8,虽然提出了一个数字(审查,请参阅[ 24])包括两个孕激素响应元素,不符合我们提出的阿瑞斯( 21]。事实上,即使是转录启动网站已经定义在哺乳动物实验。描述的正常的监管 tcf8ZEB1和表达是必不可少的理解它的异常表达在不同的癌,包括主成分分析。这些数据定义一个以前无特征的监管机制 tcf8并提供额外的基础研究在男性中定义其功能。

 5。结论

的 tcf8AR基因是一个直接的目标,结合两个阿瑞斯在1000年的英国石油(bp)近端翻译网站开始。这种基因的表达增加是反映在增加ZEB1蛋白质。然而,的表达 tcf8沉默在一些生殖细胞系包括LNCaP PCa细胞系的机制仍有待阐明,但可能涉及到表观遗传沉默或mir - 200小分子核糖核酸的家庭。

 确认

作者要感谢克里伯恩斯坦博士(迈阿密大学)请提供曲泽/ AR细胞和迈克尔·林恩和梅根·兰德里的技术援助。这项工作是由美国国防部支持部分乳腺癌倡议博士前的奖学金BC011163 BMA, NIH R01 DK61913 MMS。手稿的作者都有直接金融与商业身份这手稿中提到可能会导致利益冲突。

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