IJD 国际牙科杂志 1687 - 8736 1687 - 8728 Hindawi出版公司 824976年 10.1155 / 2010/824976 824976年 临床研究 基因型的多样性 变形链球菌在Caries-Free Caries-Active学龄前儿童 Pieralisi f·j·S。 1 罗德里格斯 m·R。 1 塞古拉 诉G。 1 马舍尔 s M。 1 费雷拉 f·b·A。 1 加西亚 j·E。 2 Poli-Frederico r . C。 1 维埃拉 亚历山大·R。 1 牙科学院 巴拉那河北部大学 Londrina, 86041 - 100巴拉那河 巴西 unopar.br 2 学院的生物学 联邦大学伯南布哥 55608 - 680年维多利亚·德·圣安 巴西 ufpe.br 2010年 29日 10 2009年 2010年 02 06 2009年 08年 09年 2009年 2010年 版权©2010 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

目的。本文的目的是评估的基因型多样性 变异链球菌在巴西,caries-free caries-active学龄前儿童。 设计。28学龄前儿童被dmft指数对龋齿检查经验。从280年分离的DNA 变异链球菌提取。 变异链球菌评估使用的PCR方法,葡糖基转移酶基因的引物。的遗传多样性 变异链球菌分析了隔离任意primed-PCR (AP-PCR)反应。基因型多样性之间的差异和dmft /龋齿经验进行评估 χ 2 测试和枪兵的相关性。 结果。斯皮尔曼相关测试显示一个强大的协会之间基因型多样性和龋齿的经验( r = 0.72 ; P < 措施 )。有更多的 变异链球菌基因型与龋齿的学龄前儿童,而caries-free组。儿童中超过1基因型,13有龋齿(2至5基因型)和4 caries-free(只有2基因型)。 结论。我们的研究结果支持先前发现的遗传多样性 变异链球菌在学龄前儿童龋齿。调查的人群可能是重要的指导项目的发展在世界范围内预防龋齿。

 1。介绍

变形链球菌通常被认为是主要的病原学的代理龋齿( 1, 2),具有多种机制在牙齿表面。临床分离株 变异链球菌表现出相当大的变化在他们的基因或基因 3]。 变异链球菌物种,在一定条件下,数值明显在生龋齿的生物膜和形式与其他生物在口腔生物膜 4乳牙的喷发和殖民(后) 5]。此外,流行病学调查证实,更高水平的 变异链球菌生物体在儿童与腐朽的发病率更高,失踪,填充(dmf)牙齿 2, 6]。相反,它可以在人群中找到,没有龋齿或低龋齿经验( 7, 8]。一个可能的解释为他们与低龋齿的经验是,在主题 变异链球菌毒力因子可以不同种群之间对比龋齿患病率( 9]。

鲍登( 10]指出理解的单克隆模式的必要性 变异链球菌caries-free主题的确定是很重要的 变异链球菌人口主体自由的龋齿展览同一克隆多样性caries-active组( 10]。

几项研究已经显示,基因之间的异质性 变形链球菌压力( 11- - - - - - 16];然而,龋齿活动和遗传多样性之间的关系 变异链球菌仍然是有争议的。Alaluusua et al。 17)建议caries-active儿童高蔗糖摄入量进行ribotype多样性的年代。 变形链球菌相比之下,caries-free孩子。Napimoga et al。 18)发现caries-active基因型比caries-free科目。另一方面,Kreulen et al。 19龋齿活动之间呈负相关,基因型多样性。

本文的目的是评估的基因型多样性 变异链球菌在巴西,caries-free caries-active学龄前儿童。

 2。材料和方法 2.1。主题

研究参与者包括28个学龄前儿童4岁至5岁从社会经济水平低的家庭。他们有相似的生活方式,饮食,和口腔卫生习惯。受试者选择从一群孩子参加幼儿园位于从巴西南部一个中型城市。所有人都从日间托儿所,在托儿所每周5天,每天8小时。在样本选择、受试者有任何慢性疾病和使用抗生素在过去3个月被排除在外。实验的目的和细节解释说,和父母和监护人的知情同意了之前研究过程的开始。实验过程是大学的伦理委员会批准北巴拉那河牙科学院的。

 2.2。临床检查

孩子们在自然光下检查而坐在椅子上。诊断是视觉,使用口镜和棉花卷协助可见性和牙周探针在必要时移除任何斑块或碎片。

龋齿经验是衡量dmft(牙齿腐烂、失踪和填充)指数,根据世界卫生组织( 20.]。龋齿的经验是一分为二分成两组:caries-free ( dmft = 0 )和龋齿的孩子( dmft > 0 )。临床检查是由相同的考官(F.J.S.P.)。intraexaminer协议高( κ = 0.92 )。

 2.3。菌株和DNA提取

变形链球菌临床分离株来自Mitis-Salivarius琼脂杆菌肽和钾telurite [ 21]。大约10殖民地类似 变异链球菌从每个孩子都被转移到脑心浸液broth-BHI(美国底特律Difco)和孵化 37 ° C 在厌氧罐48小时。DNA从280年分离提取通过使用一个简单的DNA制备的细胞被洗煮10分钟和TE缓冲(10毫米三羟甲基氨基甲烷/盐酸,液1毫米EDTA, pH值8.0)修改从Saarela et al。 13和威尔士和麦克勒兰德 22]。碎片是颗粒状和上层清液储存在冰箱里 - - - - - - 20. ° C 直到使用。

 2.4。PCR分析

隔离被证实对于物种的身份与引物PCR反应特定gtfB,编码葡糖基转移酶 5 ′ TCG ACA CTT GGT GGC TTGG行动 3 ′ 和 5 ′ CAG答亚美大陆煤层气有限公司公司治理文化CAG TTT CATC 3 ′ ——(英杰公司)( 23),产生517 pb的扩增子 变异链球菌gtfB基因。每个反应包括5 μ L模板DNA, 1 μ 米 每个引物,200年 μ 米 每个核苷酸,5 μ L 1 x PCR缓冲,1.5毫米MgCl2, 1 U Taq DNA聚合酶(表达载体,圣保罗,巴西)的总量25 μ l .放大反应了在30个周期如下:变性 95年 ° C 30秒,退火 59 ° C 30秒,和扩展 72年 ° C 1分钟。一个参考菌株(写明ATCC 25175)是作为一个积极的控制 变异链球菌和蒸馏水作为消极的控制。放大产品分析electrophoretically在1%琼脂糖凝胶使用此种缓冲(89更易 l - - - - - - 1 三羟甲基氨基甲烷硼酸液89更易 l - - - - - - 1 硼酸,2更易 l - - - - - - 1 EDTA;pH值8),用溴化乙锭染色的,是观察到的紫外线照射下。100个基点DNA梯担任奈标记在每一个凝胶。所有反应都至少重复两次。

 2.5。AP-PCR打字

菌株鉴定为 变异链球菌基因分型。的遗传多样性 变异链球菌分析了隔离AP-PCR反应。引物的序列OPA 02 ( 5 ′ TGCCGAGCTG 3 ′ )和OPA 13 ( 5 ′ CAGCACCCAC 3 ′ )使用。PCR反应进行如下:1 x PCR缓冲(200更易 l - - - - - - 1 Tris-HCl pH值8.4;500年更易 l - - - - - - 1 氯化钾)与3.5毫米 MgCl 2 每个核苷酸的0.2毫米,0.4毫米的引物,2.5 U的Taq DNA聚合酶,和2.5 μ l 的DNA样本。PCR条件包括35周期的变性 94年 ° C 1分钟,退火 36 ° C 2分钟,扩展 72年 ° C 2分钟,与最初的变性 94年 ° C 5分钟,最终扩展 72年 ° C 5分钟。eletrophoresis是如前所述;然而放大产品在2%琼脂糖凝胶进行了分析。

个人AP-PCR扩增子都,个人乐队进行了分析通过使用骰子系数( > 95%)之后,米切尔et al。 24]。构建系统树图用UPGMA聚类分析借助数值分类法和多元分析系统(NTSYS)项目(埃克塞特软件、Setauket纽约)。

 2.6。统计分析

之间的差异基因型多样性和dmft /龋齿经验进行评估 χ 2 测试和斯皮尔曼相关系数。被认为是在统计意义 α < 0.05 。软件为社会科学统计软件包,v . 11.5(美国SSPS、芝加哥、IL)是用于数据分析。

 3所示。结果

共有140个隔离的学龄前儿童龋齿和140隔离caries-free AP-PCR学龄前儿童进行了分析,和62年不同amplitypes确认。图 1说明了AP-PCR OPA-02和OPA-13执行模式,与每一个引物产生不同的扩增子谱,表明遗传多态性。

AP-PCR模式 变异链球菌隔绝caries-free龋齿学龄前儿童和发现OPA-02(通道2 - 14)和OPA-13引物(第16 - 25道)。通道1和15 =大小标记100个基点梯(表达载体)。

殖民的孩子的特征 变异链球菌展示在表 1。没有显著的相关性 变异链球菌基因型的多样性之间被发现 变异链球菌和性别。斯皮尔曼相关测试显示一个强大的协会之间基因型多样性和龋齿的经验( r = 0.72 ; P < 。 001年 )。有更多的 变异链球菌基因型与龋齿的学龄前儿童,而caries-free组。儿童中超过1基因型,13有龋齿(2至5基因型)和4 caries-free(只有2基因型)。

学龄前儿童的分布与一个或多个 变异链球菌amplitypes性别和龋齿的经验( N = 28 )。

学龄前儿童的数量
1 amplitype > 1 amplitype
性别
男孩( n = 10 ) 5 (50.0%) 5 (50.0%)
女孩( n = 18 ) 6 (33.3%) 12 (66.7%)
龋齿experienc e *
Caries-free学龄前儿童 10 (71.4%) 4 (28.6%)
学前儿童龋齿 1 (7.1%) 13 (92.9%)

年代 * pearman相关性

考虑整个人口,一些学龄前儿童的存在只有一个基因型而另一些展出直到5个基因型(图 2)。

系统树图说明基因型多样性之间 变异链球菌菌株分离caries-free和龋齿的孩子。骰子系数由UPGMA聚类分析是基于相似性的比较矩阵 变异链球菌菌株类型。学龄前儿童没有箭头表示。2 c,显示五个不同基因型。

 4所示。讨论

口腔生物膜由一个复杂的细菌群落,和特定的压力的能力 变形链球菌与其他菌株可能竞争必不可少的殖民( 25]。的研究 变异链球菌毒性因素及其相关性与其他物种的基本理解殖民所扮演的角色不同基因型相同的个体( 26]。

基因型的多样性的知识 变异链球菌可能有助于开发新的龋齿的治疗策略,以预防疾病和促进健康除了标准预防治疗( 26]。

虽然结果Kreulen et al。 19)演示了一个负面的龋齿活动和基因型多样性之间的关系和结果Lembo et al。 27)并没有表现出显著差异的基因型中发现caries-free和caries-active孩子,本研究的结果显示积极的龋齿活动和遗传多样性之间的关系 变异链球菌。龋齿的学龄前儿童比caries-free儿童有更多的基因型,这与先前的报告相一致( 17, 18, 28, 29日]。生物膜中的几个基因型的存在仅仅可以有利环境的结果 变异链球菌。此外 ,可能同时行动不同的基因型,有明显毒性的潜力,进一步增加龋齿的风险( 17]。

在研究年轻人,Emanuelsson et al 。( 29日]发现最多7个基因型在受试者曾经历了龋齿。Napimoga等 。( 18]还发现最多8个基因型使用AP-PCR caries-active学科。然而,它已被观察到孩子港只有一个五个不同基因型的 变异链球菌( 3, 11, 15- - - - - - 17, 19, 30.]。这项研究的结果与先前的研究报道相一致的孩子。caries-free组中观察到,10学龄前儿童只有一个基因型。另一方面,龋齿组13个孩子有一个以上的基因型。这些13日只有2拥有五个不同基因型。这可能归因于大量殖民和增长中的多个基因型相同的口腔经常消费的可能后果的可发酵碳水化合物( 31日]。不同无性系的类型的 变异链球菌口腔内检测到一个主题可能表现出不同的表型和遗传特性( 31日]。此外,克隆多样性高 变异链球菌可以通过克隆不同的毒性导致殖民属性( 32]。

我们的研究结果支持先前发现的遗传多样性 变异链球菌在学龄前儿童龋齿。调查的人群可能是重要的指导项目的发展在世界范围内预防龋齿。

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