IJCB 国际细胞生物学杂志》上 1687 - 8884 1687 - 8876 Hindawi 10.1155 / 2018/7836869 7836869 研究文章 Grammatophyllum speciosumEthanolic提取物促进伤口愈合在人类主要的成纤维细胞 http://orcid.org/0000 - 0002 - 1793 - 5908 Harikarnpakdee Saraporn 1 2 http://orcid.org/0000 - 0003 - 0943 - 6102 Chowjarean Verisa 1 3 希金斯 保罗·J。 1 药妆品的研究 开发和测试中心 药学院 兰实大学 市郊12000 泰国 rsu.ac.th 2 工业部门药房 药学院 兰实大学 市郊12000 泰国 rsu.ac.th 3 药品技术 药学院 兰实大学 市郊12000 泰国 rsu.ac.th 2018年 21 10 2018年 2018年 24 07年 2018年 05年 10 2018年 09年 10 2018年 21 10 2018年 2018年 版权©2018 Saraporn Harikarnpakdee和Verisa Chowjarean。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

Grammatophyllum speciosum是兰科植物家族含有多种药用植物化学的化合物可能是有益的。本研究旨在评估假鳞茎的活动 g . speciosum提取(GSE)在人类主要的成纤维细胞在伤口愈合过程 在体外抗氧化活性和GSE的总酚含量。抓伤口愈合试验表明,GSE后能够增加迁移率6和9小时的治疗。此外,提取能够清除DPPH、abt和超氧化物阴离子自由基指示GSE的抗氧化特性。本研究提出了一个新颖的假鳞茎提取物的作用 g . speciosum伤口愈合剂。这项研究的结果可能是有益的发展进一步的皮肤伤口愈合的新活性化合物。

 药用化妆品研究、开发和测试中心,教员的药店 cdrt - 1600 - 01 - 2017 兰实大学的研究所 24/2560 1。介绍

伤口愈合过程分为四个阶段分为血管收缩和凝固、急性炎症、细胞增殖和伤口改造( 1]。短暂,凝固导致血小板血栓形成和纤维蛋白凝块的发展导致招募中性粒细胞和巨噬细胞导致炎症反应。然后释放生长因子和促炎细胞因子激活细胞包括抗菌过程如角化细胞、内皮细胞和成纤维细胞。在炎症反应过程中,活性氧(ROS)生成保卫细胞对细菌和微生物入侵。组胺和其他因素导致血管舒张的增加也释放了。细胞增殖阶段是由细胞外基质(ECM)的积累,包括来自成纤维细胞的胶原蛋白、纤连蛋白产生。内皮细胞的增殖刺激vascular-promoting生长因子导致越来越多的血管。最后,reepithelializing机制和组织重构然后开始。在这个过程中,成纤维细胞被激活的角化细胞合成生长因子来调节他们的扩散。无细胞的疤痕,和交联胶原蛋白矩阵将替代fibroblast-rich肉芽组织和提供疤痕抗拉强度或完整的皮肤。 During the tissue remodeling phase, a decrease in cellularity from the apoptosis of myofibroblasts, endothelial cells, and inflammatory cells will lead to the process of impaired wound healing. This impairment may be caused by uncontrolled inflammatory, infection, and overproduction of ROS. Excessive ROS production could damage ECM protein and cellular function of fibroblasts and keratinocytes, resulting in slow wound healing process [ 1- - - - - - 4]。皮肤的植物提取物与潜在的抗氧化剂产权保护可能有助于加速伤口愈合的组织( 5]。

Grammatophyllum speciosum布卢姆是兰科植物的家庭主要是在东南亚。的假鳞茎提取物 g . speciosum用于缓解疼痛从蝎毒( Heterometrus laoticus)。此外, g . speciosumethanolic提取(GSE)据报道,有潜力增加人类角质细胞的干细胞表型( 6]。此外,提取也有能力保护细胞免受过氧化anion-induced细胞死亡( 6]。 g . speciosum包含各种植物化学的化合物如glucosyloxybenzyl衍生品,grammatophyllosides, cronupapine, vandateroside II, gastodin, vanilloloside,地衣酚葡萄糖苷,isovitexin [ 7]。由于他们的好处,这些植物化学物质在这种植物可能被用作医学;然而,的影响 g . speciosum在伤口愈合组织从来没有被调查。

这项研究检查了伤口愈合的潜在影响GSE在人类原发性皮肤成纤维细胞。同时,GSE的体外抗氧化活性评价的能力清除DPPH, abt和超氧化物阴离子自由基。这项研究的结果可能是有益的发展进一步组织伤口愈合治疗的新活性化合物。

 2。材料和方法 2.1。植物材料收集和提取

新鲜的假鳞茎 g . speciosum布卢姆收集区域的和尚欣食客皇家发展研究中心,北柳府,泰国。干假鳞茎 g . speciosum被碾碎,浸渍在乙醇为3天(1:9 w / v) 25°C总共3次。提取被过滤和真空压力下蒸发温度低于40°C。

 2.2。质量控制<斜体> g . speciosum < /斜体>灯泡提取

再现性数据的提取、测定天麻种内容的主要化合物 g . speciosum从三个不同的批次进行使用快速高效液相色谱方法条件下使用的流动相梯度洗脱acetonitrile-water,正如先前所描述的我们组( 8]。

 2.3。总酚含量测定

总酚含量是决定使用Folin-Ciocalteu试验[ 9]。在96孔板中,试剂与样品混合Na2有限公司3因此补充道。混合培养1小时,吸光度测量使用UV-spectrophotometer 765海里。总酚含量与儿茶素(EGCG)和表达为g EGCG等价物(gEGCG)每100 g的GSE提取。实验重复了一式三份。

 2.4。抗氧化活性评价 2.4.1。DPPH实验

2,2-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH)自由基清除活性GSE决心利用DPPH自由基。样本添加到0.15毫米DPPH解决方案在乙醇在96孔板。混合物是孵化30分钟在室温下在黑暗中。吸光度测量使用UV-spectrophotometer 517海里。结果表示为%抑制DPPH。DPPH解决方案与车辆作为负控制而车辆没有DPPH解决方案作为一个空白的背景减法。

 2.4.2。abt自由基清除活性

20微米的样本添加到96孔板前添加abt•+解决方案180 μl。解决方案是混合使用振动器和孵化在黑暗中在室温下5分钟。的吸光度abt•+测量使用UV-spectrophotometer 750海里。结果表示为% abt•抑制+GSE abt•相比+解决方案与车辆作为消极的控制。减少了50%的abt•+计算并显示在一个IC50值。

 2.4.3。超氧化物阴离子自由基清除(索萨)的决心

20微米的样本添加到96孔板前增加20倍 μl磷酸盐缓冲剂,80 μl NADH, 80 μl电视台,20 μl PMS的解决方案。解决方案是在黑暗中孵化在室温下15分钟。混合物的吸光度测量使用UV-spectrophotometer 560海里。结果表示为%抑制由GSE abt相比•索萨+解决方案与车辆作为消极的控制。减少了50%的超氧化物阴离子自由基在IC50值计算并提出了。

 2.5。细胞生存能力分析

人类主要的皮肤成纤维细胞(写明ATCC 2097®CRL,美国)在96孔培养板大约5×103细胞/密度使用10% FBS-supplemented DMEM培养基和孵化在37°C和5%湿度和有限公司2一夜之间条件。在孵化后,DMEM取代10%的边后卫DMEM包含5 - 100 μ克/毫升的GSE,除了控制。细胞被孵化的37°C,湿润5%,有限公司2分别大气24 h。100年之后, μ5-dimethylthiazol-2-yl L (3 - (4) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化(MTT)解决方案在PBS(5毫克/毫升)被用来替代培养基在每一个,然后板是孵化在37°C,黑暗,在5%湿度和有限公司2条件3 h。在100年肝癌和删除解决方案 μL的DMSO溶液添加到每个好,而不是标被用来读取吸光度的波长540 nm。细胞生存能力被计算成比例,而控制样本。

 2.6。抓伤口愈合试验

GSE的刺激效果迁移的人类成纤维细胞主要是由伤口愈合试验。细胞被播种在3×10的密度4/细胞在DMEM培养基补充10%的边后卫在一夜之间在96孔板和孵化。孵化后,DMEM完全移除和粘附细胞层挠了无菌黄色吸管小费。细胞碎片被PBS清洗去除。GSE的完全培养基或没有GSE随后补充道,和细胞培养9 h。在0、6和9 h,划痕区域的图像记录下亮视场显微镜(10×)。伤口面积测量使用奥林巴斯DP控制软件。结果表示为相对细胞迁移的空间百分比变化除以GSE-treated细胞在6和9 h比0 h在每个实验。

 2.7。统计分析

独立的实验数据提出了平均数±标准差。统计分析了多个组差异使用方差分析方差分析),和个人比较被矫正人员事后测试执行。统计学意义是接受 p< 0.05。

 3所示。结果 3.1。产量和百分比的<斜体> g . speciosum < /斜体>提取

的粗提物 g . speciosum布鲁姆假鳞茎为194.6 g占6.49% w / w收益率相对于最初的干重。原油的草 g . speciosum地面,根据提取工艺提取得到herb-to-extract比率(她)1:9。的 g . speciosum提取获得高度粘性与深棕色的颜色。的外观 g . speciosum提取如图 1。

ethanolic提取的 g . speciosum假鳞茎。

 3.2。通过高效液相色谱法测定天麻种内容

天麻的确定内容的主要化合物 g . speciosum使用快速提取进行高性能液相色谱方法条件下使用的流动相梯度洗脱acetonitrile-water。的保留时间 g . speciosum提取样品和标准的解决方案被发现在6.483和6.494分钟洗提,分别(图 2)。

典型的高效液相色谱的色谱图 g . speciosum提取(上)和天麻种标准(底部)。

天麻的数量在3个不同批次的GSE进行了分析。结果表明,天麻种从第一批,批2,和批处理3包含63.62±0.2,54.96±0.2,56.65±0.3毫克/克,分别(表 1),这被认为是不显著不同( p> 0.05)。结果因此建议天麻水平没有显著不同的批次中,指示统一批次收集和提取不同收获时期。

在不同批次天麻GSE的内容。

批处理 1号 2号 3号
天麻(毫克/克) 63.62±0.2 54.96±0.2 56.65±0.3
3.3。GSE的总酚含量和抗氧化活性

酚类化合物可以直接发挥作用的抗氧化效果。总酚含量的GSE决心使用Folin-Ciocalteu试验相比,复合EGCG的标准。GSE的总酚含量为48.2±0.4毫克EGCG / g。

本研究证明了GSE的抗氧化能力对DPPH自由基、DPPH自由基的化合物通常用于筛查自由基清除效果。表 2GSE的清除活动层所占的比例从55.7%至24.8与IC50 0.1 mg / mL。抗坏血酸的清除活动的比例,标准的化合物,与IC50 21.7 - 76.3% 2.3毫克/毫升。GSE的IC50低于抗坏血酸,表明GSE比抗坏血酸具有较高的抗氧化能力。

GSE的抗氧化活性和抗坏血酸由DPPH实验决定。

GSE 抗坏血酸
毫克/毫升 % DPPH自由基的抑制作用 毫克/毫升 % DPPH自由基的抑制作用
0.030 24.8±0.5 1.0 21.70±2.3
0.045 32.2±2.2 1.5 32.50±5.6
0.060 38.8±2.1 2。0 45.52±5.6
0.075 45.2±1.2 2。5 56.52±5.1
0.090 50.6±2.0 3所示。0 67.59±5.3
0.105 55.7±1.1 3所示。5 76.28±3.9

值在±SD (n = 3)。

总抗氧化活性的计算进行了基于abt•的脱色+。Trolox被用作标准化合物。结果表示为% abt•抑制+激进。GSE(图 3(一个))或trolox(图 3 (b))抑制abt•的吸光度+激进的以剂量依赖的方式。%的IC50抑制abt•+GSE和trolox分别为0.12±0.01,0.06±0.01毫克/毫升,分别。此外,进一步的调查发现了GSE的抗氧化能力与超氧化物阴离子通过确定索萨。索萨的IC50抑制GSE是1.37毫克/毫升(图 3 (c))。然而,GSE的IC50高于抗坏血酸(IC50抗坏血酸为0.36毫克/毫升)呈现在图 3 (d)。

总抗氧化活性。总抗氧化活性的GSE和trolox。GSE (a)和(b)参考化合物trolox脱色的abt激进的阳离子。的影响(c) GSE和索萨(d)抗坏血酸抑制。抑制百分比是策划对样品的浓度。数据表示为均值±SD (n = 3)。

 3.4。GSE在人类主要的成纤维细胞细胞的生存能力的影响

GSE的作用在人类细胞生存能力评估主要成纤维细胞细胞在不同浓度24小时后,用MTT试验。GSE 5 - 100的浓度 μg / mL被证明是noncytotoxic主要成纤维细胞和细胞生存能力高于80%(图 4)。无毒浓度选择研究挠伤口愈合试验。

GSE人类初级纤维母细胞生存能力的影响。人类主要的成纤维细胞治疗与GSE (0 - 100 μ24 h和g / mL)测试使用MTT测定的可行性。细胞生存能力(%)计算的未经处理的控制。数据以均值±SD (n = 3)。 ∗ p< 0.05和未经处理的控制。

 3.5。GSE的增强伤口愈合在人类主要的成纤维细胞的细胞

人类主要通过伤口愈合成纤维细胞细胞系进行了测试试验来确定这些细胞迁移的能力后GSE治疗。细胞迁移是决定在6和9 h后GSE的风险敞口。GSE的浓度做些 μg / mL增加了细胞迁移率在6和9 h相比0 h(图 5(一个))。人类主要的成纤维细胞细胞的相对迁移水平呈现在图 5 (b)支持,GSE显著增强迁移率6和9 h (GSE)治疗后。

GSE人类初级纤维母细胞细胞迁移的影响。人类主要的成纤维细胞治疗与GSE (0-25 μ9 h和g / mL)随后通过抓伤口愈合实验来检测他们的迁徙的能力。(一)相差0,捕捉到的图像(10×)6和9 h和(b)的相对细胞迁移而未经处理的控制。数据以均值±SD (n = 3)。 ∗ p< 0.05和未经处理的控制。

 4所示。讨论

天然植物提取物可以有利于伤口愈合,如果他们的植物化学成分的抗氧化活性和自由基拾荒者,据以前的许多研究[ 5]。 石莲子mimosoides提取物中含有酚类内容,具有显著的抗氧化活性的增强导致伤口愈合属性( 10]。符合,这一现象研究了治疗GSE人类主要成纤维细胞分析其潜在的伤口愈合。

细胞迁移是一个重要的过程在伤口愈合的组织形成阶段( 1- - - - - - 3]。伤口愈合模仿伤口体外测定方法和调查细胞迁移速度。细胞单层被抓后,信息交互发生的损失,导致的起始细胞迁移和增殖。在这项研究中,GSE能够提高细胞迁移率,表明提高伤口愈合。

形成的活性氧(ROS),包括过氧化氢(H2O2),超氧化物阴离子(·O2−)、羟基自由基(·OH)、脂质过氧化物(LOOH),和他们的激进分子(厕所·)发生和累积暴露的皮肤细胞UVA和UVB(290 - 320和320 - 400 nm)。这些活性氧可能打破细胞膜,引起皮肤炎症、衰老、光毒性。过量的活性氧可能损害皮肤伤口愈合的过程。从这个意义上说,植物提取物的抗氧化活性可能有利于提高伤口愈合过程的( 11, 12]。本研究发现,GSE有抗氧化活性,清除DPPH取决于其能力,abt和超氧化物阴离子自由基。

天麻,酚糖苷(p-hydroxymethylphenyl - β-D-glucopyranoside),发现的主要活性成分 g . Speciosum。本研究选择天麻作为一个活跃的标志来控制质量的GSE由于其大量存在,从而促进检测和分析。也用作分析标记的定量评价 天麻(天马)提取使用高效液相色谱法( 13, 14]。天麻是一种强有力的抗氧化剂,对骨质疏松症的链接显示保护效应减少ROS ( 15]。GSE的抗氧化作用可能施加于天麻种活性氧的清除的能力。

Bhat等人的增强和建立等人发现伤口愈合的影响 石莲子mimosoides分别提取和Jaboticaba果皮提取物,可能造成其酚醛含量( 10, 16]。同样,GSE的伤口愈合财产可能的酚类化合物。

 5。结论

GSE有潜力提高人类的伤口愈合过程主要的成纤维细胞。此外,与伤口愈合的增加财产,提取能够清除DPPH, abt和超氧化物阴离子自由基。因此,本研究首次提供了有趣的效果的GSE伤口愈合组织增强,需要进一步调查和进一步治疗应用程序可能提供有用的信息。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

 的利益冲突

作者声明没有竞争和利益冲突的有关文章出版。

 确认

这项研究受到了药用化妆品研究、开发和测试中心,学院制药(批准号cdrt - 1600 - 01 - 2017)和兰实大学的研究所(批准号24/2560),兰实大学。

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