微波辐照组织处理期间显著减少所需的时间固定,脱钙作用,与化学试剂染色,孵化与抗体。

自1980年代中期以来,微波辐射已越来越多地应用于组织学准备。微波辐照诱发快速振荡的水分子(2.45 GHz),从而增加组织的温度。传统的微波设备照射组织快速和均匀,和微波辐照协议根据具体不同微波设备使用。

微波辐照是经常申请特殊染色( 1- - - - - - 12]。微波辐照也被应用在固定( 13和后续的染色过程,如enzyme-based染色和免疫荧光染色。

immunohistological研究组织的准备期间,许多构件破坏原始信号可能发生,其中大部分通常与后期固定或低固定的体积。后期准备组织引起蛋白质的分解,导致缺乏特定的抗原表位。破坏蛋白质的固定不利影响epitope-antibody在免疫组织化学反应。此外,形态变化也发生在固定cryosections和/或电子显微镜的样品。传统固定也可能导致收缩的组织,如骨骼或平滑肌细胞,培养细胞的或由于固定剂的渗透不足(如福尔马林溶液)完全修复组织,和需要长时间固定。

微波辐射可以用来实现更快速的固定,解决处理和疣状( 13- - - - - - 38]。微波辐照也申请了荧光原位杂交(FISH)石蜡包埋组织的分析 39- - - - - - 41]。最近,作者描述microwave-irradiated血管固定和免疫荧光显微镜 42]。在这种情况下,微波辐照用于增加固定液的渗透。微波辐射的使用也减少非特异性结合的荧光标记抗体固定样本应用时。快速固定组织和培养细胞的免疫荧光染色也描述了使用微波辐射( 43]。微波辐照证明显著减少所需的孵化时间与中小学抗体在免疫荧光显微镜。我们使用一种技术涉及的培养细胞在固定间歇微波辐射,导致好保护组织免疫反应性与传统固定相比,除了减少固定时间 43]。

影响组织学分析的另一个问题是初加工硬组织的影响,如骨,这需要脱钙作用固定后软化组织,允许使用切片机切。很长一段时间也需要去除一些脂肪组织。传统脱钙作用需要一段时间约1 - 2周,从而防止早期诊断在组织学研究[ 44, 45]。组织准备电子显微镜,包括固定和后续解决方案治疗,也是有问题的。固定使用formalin-based固定液使组织收缩。解决方案治疗,通过酒精脱水等系列,需要一个相对较长的时间在传统协议。

传统抗原检索通常被使用在高温高压蒸汽室执行(~ 121°)和高压,总是引起组织破坏和清除的幻灯片。微波辐照也非常适用于抗原检索在石蜡包埋组织切片 46- - - - - - 49]。

微波组织处理显著降低了酶反应所需的处理时间,过氧化物酶处理,和阻止程序。微波辐射降低了1/3-1/10的处理时间比常规程序。此外,微波辐照收益率低背景,高对比度图像由于染色溶液或减少非特异性结合的抗体免疫荧光染色。

几个允许游览器控制的微波辐照功率从150年到400年W是可用的。还可以精确控制温度使用两个独立的系统,例如,红外线和热电偶温度测量系统。

本文描述了一个微波组织协议准备组织固定、脱钙的骨骼组织,脂肪组织(脂肪),固定的抗原检索石蜡包埋组织,和其他技术的微波辐照是适用的。此外,应用微波辐射对血管细胞的电镜原位也进行了讨论。

微波辐照适用于培养细胞的固定。传统的培养细胞固定至少需要30 - 60分钟1%多聚甲醛。微波辐射在固定可以显著减少所需的时间固定和染色免疫荧光显微镜。所有程序,包括固定和抗体染色,完成30 - 45分钟内没有任何损失的细胞形态和非特异性结合的染料。

脱钙骨固定后获得良好的石蜡是至关重要的部分。脱钙骨的组织学研究组织需要很长时间,也就是说,有10%甲酸2 - 4天或1 - 2周有10% EDTA。

与微波辐射,可以减少处理时间1/5-1/10最初的准备时间。

免疫组织化学实验,avidin-biotin复杂交互(ABC法)通常用于检测特定类型的蛋白质主要使用特定抗体(Vectastain ABC设备;向量的实验室,伯林盖姆,CA)。尽管这是一个完善的组织化学过程的调查,传统的协议为ABC方法需要2 - 3小时。微波辐射减少手术时间和背景噪音( 51]。

根据标准方法Deparaffinization应该执行。deparaffinization后,微波辐射可以被应用。一个协议使用ABC免疫组织化学下面是复杂的。

免疫荧光显微镜,微波辐照降低孵化时间的1/5-1/10原始时间。我们实验室协议染色的下面是几内亚猪主动脉和下腔静脉。这是血管免疫荧光染色的一个例子。下面的协议应该适用于其他组织,虽然微波治疗的确切辐照功率和时间应该由每个研究员。详细的培养细胞协议之前被报道( 43]。

固定使用微波辐射(参阅申请组织固定),aortae冲洗几次PBS和切成小块,和在面临做好了准备。

一般来说,已与多聚甲醛固定石蜡包埋标本不适合免疫组织化学染色或原位杂交的掩蔽抗原位点的蛋白质与多聚甲醛交联。在一些formalin-fixed样本,某些蛋白质抗原蒙面根据甲醛蛋白质交联。因此,formalin-fixed样品需要抗原检索使用特殊治疗。燥热引起抗原检索通常用于检索蛋白质抗原表位的高压灭菌法或使用商用高压锅。燥热引起抗原固定样本检索有时造成损害。

传统程序涉及使用高压灭菌器与压力(121°C)。在某些情况下,一个家庭厨房微波炉使用(近100°C)。在许多情况下,组织在滑动眼镜变得独立,和高水平的背景噪音是由于高温的组织损伤。

使用专用微波辐照装置可以产生稳定的实验结果为研究[ 46, 49]。

胸腺、乳房和淋巴结标本是典型的脂肪组织(脂肪)。脂肪组织是困难的,因为固定的多聚甲醛的普及率低的解决方案。可怜的组织固定导致石蜡包埋组织破坏和“泡沫”部分。由于穷人多聚甲醛溶液的渗透,脂肪组织需要治疗二甲苯的混合物和甲醇后固定。一般来说,脂肪组织的治疗需要大约10 ~ 30小时。微波辐射,然而,固定时间可以显著减少对1/20-1/30固定好。

冻结部分用于病理诊断、酶检测和immunofluorescent显微镜使用抗体。快速冻结期间,水结晶破坏组织。微波辐射降低了地层水的晶体在组织和维持精细结构。微波辐射混合与常用Tissue-Tek 10月化合物(樱花Finetek、东京、日本),可以很容易切。与未照射的标本相比,microwave-irradiated样本少泡沫在组织和结构保存完好。

指申请组织固定的组织固定协议。

等特殊染色,使用周期(PAM) acid-methenamine-silver污点,祈祷的召唤染色,Grimelius”方法,Fontana-Masson污点,六亚甲基四胺硝酸银Gomori-Grocott的变异和刚果红染色,微波辐照允许好的结果,而背景染色在很短的时间内。一般来说,上面的染色过程需要1 - 2小时,而微波辐射允许在5 - 10分钟内完成染色( 1, 3, 5, 7, 8, 59]。

微波辐射可以应用在多聚甲醛固定和几种类型的染色过程。也大大减少了染色过程所需的时间,如免疫组织化学、免疫荧光显微镜和特殊染色的组织。此外,它降低了骨脱钙作用所需的时间。传统的微波炉不适合实验室使用,因为辐照功率过高或他们不允许权力和样品温度的精确控制。传统的微波炉的使用需要校准( 60]。现代微波设备建立专门为实验室使用允许精确控制微波辐射和样品温度的力量。微波辐射应该是高度适用于许多组织学和细胞生物技术没有任何损失的形态学和免疫反应性的组织。