的根茎和根 n incisum草药是来自中国四川的购买。这个物种被识别和验证Lin-Ma博士(天津中医药大学、天津、中国)。凭证标本都需要在天津中医药大学。

成都必须生物科技有限公司(中国)成都提供参考标准,即bergapten, imperatorin, notopterol isoimperatorin和内部标准(是)osthole。HPLC-grade乙腈和甲醇、乙酸乙酯、甲酸是获得天津市康科德科技有限公司(天津)。Milli-Q学术系统(美国微孔,米尔福德,MA)是用于净化去离子水用于高效液相色谱流动相。

高效液相色谱法分析了安捷伦1100液相色谱(美国安捷伦科技)配备了四元泵、脱气器,一个autosampler,列恒温器室和二极管阵列检测器(爸爸)。一个安捷伦荧光探测器耦合到安捷伦系统。常春藤ODS柱进行分离(4.6毫米×250毫米,5 μ米),在40°C的温度梯度洗脱。激发和发射的荧光检测器被设置为300 nm和490 nm,分别。分析涉及到一个恒定的流速为1.0毫升分钟⁻¹和注射量30 μl (A)的流动相组成水甲酸(0.1%,v / v)和(B)乙腈脱气后通过声波降解法使用梯度洗脱的15 - 30% B在0到10分钟,30 - 42% B在10到20分钟,42% B在20到65分钟,42 - 80% B 65 - 70分钟,和80 - 90%,70 - 75分钟。梯度洗脱的reequilibration时间是10分钟。由于相似的极性imperatorin notopterol,这是基本保持42%的乙腈45分钟,确保两个化合物分离。

1公斤的干草药的 n incisum制备和提取8 L 2 h使用的90%的乙醇回流提取方法。乙醇部分被收集和残渣进一步根据与8 L(60%乙醇回流提取2 h。然后解决方案相结合,允许冷却,过滤,提取集中。提取收益率是20.16%。

在股票的解决方案,准备适量bergapten, imperatorin, notopterol, isoimperatorin分别和每个被溶解在甲醇达到1.0毫克毫升的浓度⁻¹。四个香豆素类的化学结构如图所示 1。股票的解决方案的四个分析物被混合,然后工作解决方案的混合标准由适当的连续稀释原液与甲醇混合使用40 - 10000 ng毫升的浓度⁻¹ng bergapten, 400 - 100000毫升⁻¹ng imperatorin, 40 - 10000毫升⁻¹ng notopterol, 20 - 5000毫升⁻¹isoimperatorin。股票的解决方案也被溶解在甲醇和甲醇稀释的最终浓度1 µ克毫升⁻¹和所有的解决方案都储存在4°C到分析时被带到室温使用前。

10微升整除的混合标准bergapten, imperatorin notopterol, isoimperatorin工作解决方案添加到100人 μL无毒鼠血浆获得最终的浓度有一系列4 ng - 1000毫升⁻¹ng bergapten, 40 - 10000毫升⁻¹ng imperatorin, 4 - 1000毫升⁻¹ng notopterol, 2 - 500毫升⁻¹isoimperatorin准备混合校准标准。

100年的一项 μL整除的血浆样本,10 μ我的解决方案是添加。提取的样本vortex-mixed 2分钟,1000年 μL乙酸乙酯,然后在18000×g离心10分钟。上层清液被转移到另一个离心管和蒸发干燥使用氮气。干残留于100年重组通过添加 μL甲醇。的解决方案是动摇和ultrasonicated 2分钟。当时在18000×g离心10分钟。30 μL解决方案的运行和高效液相色谱法进行分析。

混合质量控制(QC)样品在高、中、低、激增和LLOQ浓度是由适当的混合标准溶液为空白的大鼠血浆,给等离子体浓度范围,600年60岁,12日和4 ng毫升⁻¹bergapten, 6000、600、120年,ng 40毫升⁻¹imperatorin, 600年,60岁,12日和4 ng毫升⁻¹6 notopterol,到300年,30日,ng和2毫升⁻¹分别为isoimperatorin,紧随其后的是上述相同的样品制备和提取方法。

PK的研究按照指南进行护理和使用实验动物和动物伦理委员会批准天津中医药大学。八公Sprague-Dawley老鼠重180 - 220克都保存在天津中医药大学动物中心(天津)与控制条件(温度25±2°C和相对湿度55±5%)。他们被允许免费获取食物、水和环境适应实验之前7天到12 h。根据临床剂量每天用于人类,老鼠服用口服剂量的4.2 g公斤⁻¹ n incisum提取悬浮在0.5%羧甲基纤维素钠盐溶液(CMC-Na)和一个血液样本(200 μL)收集在时刻0,0.083,0.167,0.25,0.5,0.75,1、1.5、2、3、4、6、8、12、24小时到heparin-pretreated管从窝orbitalis每个老鼠口服后提取。血浆立即通过离心法收集的血液在3300 g×10分钟和储存−20°C到分析。

十六岁男性Sprague-Dawley (SD)大鼠(200±20 g)分为两组(组1在代谢笼收集尿液和粪便样本,而第二组从胆管收集胆汁样品使用聚乙烯管)。组1,老鼠口服 n incisum提取溶解在0.5%的剂量CMC-Na 4.2 g公斤⁻¹和置于代谢笼单独启用收集的尿液和粪便样本。收集的尿液和粪便样本的时间间隔0 - 4,4 - 8人,8 - 12,12 - 24,24-36 36-48,48-60,60 - 72 h。组2,老鼠与水合氯醛麻醉剂量的0.3 g公斤⁻¹管理的腹腔内。用聚乙烯管在胆管插管确保连续流的胆汁。老鼠被管理的提取剂4.2 g公斤⁻¹和胆汁样品被收集在不同的时间间隔(0 - 1、1 - 2、2 - 3、3 - 4、4 - 5、5 - 6、6 - 7、7 - 8,和8 - 9 h)。后获得的尿液和胆汁的量测量,这些样本在−储存20°C到分析。尿液和胆汁样品的制备与上述等离子体样品制备。另一方面,粪便样本收集后在烘箱干40°C。测量粪便样本的权重后,他们被迫击炮实现统一的粉;0.1克粪便测量粉和1毫升甲醇添加在1.5毫升聚乙烯管,3分钟充分混合,超声提取30分钟。他们然后在18000×g离心10分钟。上层清液转移到使用HPLC-FLD瓶进行分析。

DAS软件(药物和统计1.0,皖南医学院,中国),一个计算机程序,用于计算管理后的药代动力学参数 n incisum提取。Bergapten, imperatorin, isoimperatorin分析使用单舱分析notopterol加工时使用两舱制分析基于Akaike (AIC)估计的信息标准。

激发和发射波长的四个香豆素类检查获得优化的山峰有更好的信号/噪音(S / N)。经过测试,维护不同激发波长和发射波长,反之亦然,300海里的激发波长和发射波长490 nm的被选择为优化荧光检测波长的同时测定四种香豆素类。完成调查的适用性osthole内部标准。这是一个furocoumarin和香豆素类结构相关研究。此外,osthole有合适的保留时间和没有干扰内源性矩阵。此外,香豆素类和osthole很容易通过高效液相色谱分离。尽管osthole组件之一 n incisum在先前发表的文献,提取osthole中没有检测到老鼠后等离子体口服剂量的4.2 g公斤⁻¹ n incisum提取。因此,osthole被选为内部标准来确定四个香豆素类 n incisum。

盛名的方法也被应用于确定比例四个香豆素类的内容 n incisum提取和,随后,每个香豆素的老鼠。bergapten的内容,imperatorin、notopterol isoimperatorin是0.04%,1.10%,0.14%,和0.57%,分别。每日剂量的 n incisum准备在诊所10 g用于一个成年人,而真正的剂量鼠4.2 g公斤⁻¹。因此,每个香豆素在老鼠的数量剂量为1.68毫克公斤⁻¹bergapten, 46.2毫克公斤⁻¹imperatorin, 5.88毫克公斤⁻¹notopterol, 23.9毫克公斤⁻¹isoimperatorin。

方法被验证是反过来应用于药代动力学研究的四个香豆素类管理后的4.2 g公斤⁻¹大鼠口服。计算药代动力学参数的四个香豆素类1.0借助DAS药代动力学软件单舱模型提供了一个最佳适合的浓度时间曲线获得的数据除了notopterol香豆素类口服后表现为两舱制模型 n incisum提取。平均浓度时间曲线如图 3和药代动力学参数在表表示 5。口服后 n incisum提取、吸收( T 米 一个 x )notopterol, imperatorin, isoimperatorin从鼠胃肠道被发现与所有化合物快速峰值低于2 h除了bergapten也达到了 T 米 一个 x 在大约3 h。平均最大浓度( C 米 一个 x )bergapten, imperatorin、notopterol isoimperatorin在大鼠血浆分别为183.5±171.4,1667±1504,23.31±6.87,145.1±75.9 ng毫升⁻¹,分别。香豆素是重要的植物成分已知各种药理作用。从结果,大部分的香豆素类表现出迅速吸收进入血液的老鼠notopterol有最快的时间完全被吸收到血液根据 T 米 一个 x 。Bergapten展出的消除半衰期长12 h这意味着需要更长的时间Bergapten在大鼠组织被清除。Bergapten可以强烈蛋白结合的血液占这一观点。需要做进一步的调查说明原因。另一方面,imperatorin、notopterol isoimperatorin表现出较短的半衰期6 h内;因此这些化合物是消除血液中的速度与bergapten相比。imperatorin的半衰期为4.99±3.02 h是类似于观察以前的报告( 26]。总药物在老鼠暴露在超过24小时, 一个 U C 0 - - - - - - 24 11955年,10975年是1638±2490±101.6±34.8,830.5±762.4 ng毫升⁻¹bergapten h, imperatorin、notopterol isoimperatorin,分别。

bergapten累积排泄,imperatorin、notopterol isoimperatorin尿液,粪便,胆汁决心如图 4。后口服 n incisum提取一个剂量的4.2 g公斤⁻¹老鼠,香豆素类可能在大鼠尿液中发现直到72 h。四个香豆素胆汁的量逐渐增加,直到大约6 h和保持稳定的时间除了imperatorin和isoimperatorin让整个时间逐渐增加胆汁的排泄。

在尿液,bergapten水平被观察到的快速增加从12至48 h。bergapten累积排泄的尿液是9.5724 + 1.6891%。那些imperatorin、notopterol isoimperatorin 0.2759 + 0.0493%, 0.1171 + 0.0096%,分别和0.0084 + 0.0016%。Imperatorin和notopterol水平迅速增长从36到48 h,然后趋于稳定72 h。在粪便样本,bergapten表现出最高的累积与约80%的原型排泄bergapten排泄粪便样本。所有化合物的含量迅速增加从12 h 48 h,然后锥形72 h。累计排泄物23.4595 + 2.2545%,54.1083 + 4.4359%,和7.7284 + 2.2114% imperatorin, notopterol和isoimperatorin分别。结果表明,这些化合物通过粪便排泄大大路线。