GRP 胃肠病学研究和实践 1687 - 630 x 1687 - 6121 Hindawi出版公司 951034年 10.1155 / 2013/951034 951034年 临床研究 pcr检测和基因分型的 幽门螺杆菌在巴西患者内镜活检样本 Menoni 西尔维亚·m·费雷拉 1、2 Bonon 桑德拉·海伦娜阿尔维斯 1 Zeitune 何塞的职位Robilota 3 科斯塔 桑德拉·塞西莉亚Botelho 1 凯特 Vikram 1 内科 医学科学学院 坎皮纳斯州立大学(由) 13081 - 970年坎皮纳斯 SP 巴西 unicamp.br 2 护理课程,马托格罗索州联邦大学的(UFMS) 79620 - 080非常小湖,女士 巴西 3 Gastrocentro坎皮纳斯州立大学(由 13083 - 878年坎皮纳斯 SP 巴西 unicamp.br 2013年 16 1 2013年 2013年 23 08年 2012年 16 12 2012年 23 12 2012年 2013年 版权©2013西尔维亚·m·费雷拉Menoni et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

幽门螺杆菌( 幽门螺旋杆菌)被认为是第二个最常见感染人。精确的诊断是重要的治疗患者胃肠道症状说明。本研究分析了一种分子生物学方法的有效性(PCR)比较结果与组织学和快速尿素酶试验。PCR检测和基因分型的 幽门螺旋杆菌urease-C基因和从患者获得的模式进行了研究。141年131名患者的活检样本进行评估。59石蜡切片样本阳性 幽门螺旋杆菌根据组织学检查。其中,59/12(20.3%)使用PCR扩增。82个样本的新鲜的活组织检查,64是积极的 幽门螺旋杆菌根据快速尿素酶试验(78%);有一个协议与PCR的100%。六十积极 幽门螺旋杆菌样本的基因(58新鲜活检和样品2的石蜡切片样本)使用两个限制性内切酶。观察到的模式进行了分析与计算程序生物1 d;11与酶模式 HhaI和12模式与酶 MboI被发现。然而,它是不可能找到一个特定的基因型之间的显著相关性和消化疾病。因此,未来的研究应该进行确认统计上显著的基因型和胃肠道症状之间的关系。

 1。介绍

的 幽门螺杆菌( H。 幽门)感染是目前在全世界流行高患病率(60%)在南美等发展中地区。感染引起慢性胃炎、胃及十二指肠溃疡,胃腺癌,mucosa-associated淋巴组织( 1- - - - - - 6]。 H。 幽门与一些自身免疫性疾病,包括特发性血小板减少性紫癜(ITP)、干燥综合征、系统性硬化( 7),甲状腺机能亢进( 8),和自身免疫性胰腺炎( 9]。由于本协会的自身免疫性疾病,我们假设 H。 幽门可能诱发系统性免疫变化。虽然seroprevalence 幽门螺旋杆菌可能在正常人群,少数发展消化性溃疡( 10, 11]。一些可能性可以证明这个数据:在宿主基因差异的环境因素和菌株。

现在可以使用各种测试来诊断 幽门螺旋杆菌感染。胃组织的组织学检查、细菌培养、快速尿素酶试验、DNA探针的使用和PCR分析,当用于测试胃组织,都需要检查。相比之下,呼吸测试,血清学,胃液PCR和N的尿排泄15氨是侵入性的测试,不需要检查。PCR提供高敏感性和特异性的检测技术 幽门螺旋杆菌虽然这种技术的精度变化很大( 12]。这项工作的目的是分析的有效性PCR检测的分子生物学方法 幽门螺旋杆菌患者的胃肠道症状,比较结果与组织学和快速尿素酶试验和使用PCR-RFLP技术来检测 幽门螺旋杆菌亚型在内镜活检样本来自巴西的病人。

 2。材料和方法 2.1。病人

141个样本收集从131年几个患者诊断消化道疾病。其中,99名患者参与这项研究有胃炎,29日有溃疡,5有胃炎和溃疡,3有食管炎,和5有其他胃肠疾病。患者平均48岁;他们的年龄从4到90岁。81名男性和50名女性(表 1)。所有患者的内窥镜检查提交Gastrocentro(消化道研究中心),大学医院,SP,巴西坎皮纳斯州立大学获得了知情同意和协议后经医院伦理委员会批准。

病人的特点。

(总 n = 141年 )
病人
性别(男/女) 81/50
年龄年(中位数) 48年(4 - 90)
疾病
胃炎 99例(70.2%)
溃疡 29 (20.6%)
胃炎和溃疡 5 (3.5%)
食管炎 3 (2%)
其他* 5 (3.5%)

*炎症、十二指肠炎、脾肿大。

 2.2。方法

用于检测的方法 幽门螺旋杆菌聚合酶链反应(PCR)和PCR-RFLP基因分型。他们选择以检测细菌及其亚型在内镜活检的新鲜组织和石蜡组织。新鲜的活检样本保存在生理血清0.9%直到DNA提取。至少两个,5 - 10毫米,丝带的石蜡收集石蜡组织。新鲜的活组织检查,至少有两个片段被收集。

2.2.1。DNA Extraction-Gastric石蜡切片

DNA提取的内镜活检系在随后石蜡戴维斯描述的方法et al ., 1995 13),做了一些调整。

至少两个,5 - 10毫米,丝带的石蜡被放置在一个1.5毫升埃普多夫管。一毫升的二甲苯添加到样本。他们动摇,允许休息3 - 5分钟,然后离心5分钟,丢弃之后二甲苯。三洗后在100%,95%,70%乙醇,样本分别在室温下干燥。接下来,解决方案中的材料是resuspended蛋白酶K, 50毫米三,0.5% SDS,无菌水。430年 μL(苯酚被添加到样品,均质和离心机30分钟14000 RPM。上层清液含有DNA被转移到一个新的管和430年 μL苯酚/氯仿(1:1)被添加在14000 RPM,再次离心5分钟。氯仿/异戊基乙醇(24:1)添加到上层清液,均质和离心机30分钟14000 RPM。之后的75年 μ醋酸铵和750 L μL 100%,乙醇样本倒几次和孵化隔夜−20°C。在12000转离心30分钟后−4°C,浮在表面的被丢弃。500年沉淀仔细洗了 μL(冷冻70%乙醇,立即丢弃。材料在室温下干燥,resuspended解决方案包含50毫升无菌水,三羟甲基氨基甲烷(pH值8.0)液10米,1毫升的EDTA和存储−20°C,直到它的使用。

 2.2.2。DNA提取:新鲜的活组织检查

首先,一个新的3 - 7毫米活检部分是放置在一个与190年1.5毫升无菌管 μL盐酸三的解决方案,包含0.1 (pH值7.5)和SDS的1%。其次,10 μL蛋白酶K是(10毫克/毫升)添加到解决方案。样本浸渍和孵化隔夜55°C。200年之后, μL苯酚和200 μL氯仿和异戊醇(24:1)补充道。解决方案被均质和离心机一分钟。接下来,上层清液被删除了,200 μL氯仿/异戊醇的添加,均质,离心机1分钟。接下来,上层清液又删除了,25岁 μL(醋酸钠3米和900 μL 100%乙醇的−20°C添加;涡流混合物后孵化30分钟−70°C。样品在15000 RPM离心机15分钟。浮在表面的被丢弃。最后,DNA resuspended 25 μL蒸馏和无菌水。( 14]。

 2.2.3。PCR扩增的<斜体> H。螺杆菌< /斜体>

随后的聚合酶链反应的方法描述Saiki和上校 15),做了一些调整。

为每个放大反应,0.5到0.7 μL的DNA在调查中被使用,反应总额的20.0 μl反应缓冲区包含50 mM氯化钾,10毫米Tris-HCL pH值8.4,2.5毫米MgCL2,2.0 pmol每个“入门”,200 μ每个deoxynucleotide M三磷酸(dATP, dCTP dGTP, dTTP), 2.5单位的Taq (Gibco-BRL),和足够的水给20.0的总量 μl反应混合物是覆盖着100年 μL矿物油和管被放置在一个DNA热循环(优秀)。

随后的反应被发现是最优的。样本加热到94°C 60年代变性DNA,冷却到57°C 90年代允许DNA引物和再退火,然后加热到72°C的120年代底漆扩展。通过最后的周期,伸展期是7分钟。共40个循环进行。放大产品被直接探测到凝胶分析。5 μL的反应混合物受到与2%琼脂糖电泳minigel, DNA是可视化使用紫外荧光与溴化乙锭染色后。分子量标记包含在每个凝胶。820碱基对乐队被当样本使用引物P1和P2检测放大 幽门螺旋杆菌(表 1和图 1)。

自动测序(Abi棱镜377)ureC地区 幽门螺旋杆菌。积极的样本 幽门螺旋杆菌感染从PCR为了证明获得序列的基因序列被放大并属于urease-C区域的DNA片段 幽门螺旋杆菌(酶HhaI和MboI)。所有的DNA样本取自病人提出基因序列相似 幽门螺旋杆菌,所述urease-C基因库的面积(我广场1)。

 2.2.4。pcr限制性内切酶片段长度多态性打字的<斜体>幽门螺杆菌< /斜体> (RFLP)

放大后被证实,PCR产品提交与限制性内切酶消化HhaI和MboI碎片Urease-C [ 16]。

产生的碎片被提交到1000年2%的琼脂糖凝胶电泳(Gibco-BRL)和溴化乙锭染色,可视化在紫外线照射下,宝丽来拍摄系统。被发现的模式进行比较和分析与计算程序生物1 d (Restriction-PCR-RFLP-Restriction片段长度多态性分析),99年版(Vilber Loumart)(数据 2和 3)。

与酶消化模式 HhaI发现在某些分析样本。1000年2%的琼脂糖凝胶电泳,溴化沾ethidium。M分子量的标志,C + (1), 1 (H2), 2 (H3), 3 (H4), 4 (H4)、5 (H2) C-negative控制。注意:最常见的模式发现H4, 14个病人(25.8%)。

与酶消化模式 MboI发现在某些分析样本。1000年2%的琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色。分子量的M标志;C + (M1);1 (M2);2 (M4);3 (M2);4 (M5);5 (M3);C-negative控制。 Note 1: Pattern M4 was the most frequent, with 15 patients (25.8%). Note 2: patient 1(M2) presented very clear bands in this analysis, but in a posterior analysis it was possible to classify this patient in group M2.

大约10 μL的放大产品被用于消化过程也包含2.0 μ相应的酶。水被添加到20.0 μL和混合物放置在37°C浴过夜。

 2.2.5。自动测序

使用这个程序执行自动测序Abi棱镜,型号377,3.4版本,100年Abi, 3.2版。DNA测序允许识别的研究区域(引物P1和P2)。图 1显示了自动测序,序列的证明 幽门螺杆菌。

 3所示。结果

共有141名内镜活检样本131名患者进行了研究 幽门螺旋杆菌感染和PCR结果与脲酶和组织学检查。82/64(78%)的新鲜样本有一个积极的脲酶试验 幽门螺旋杆菌。PCR试验检测到的所有64份阳性样本确定的脲酶试验(100%)(表 2)。

比较PCR和脲酶测试新鲜活检样本。

脲酶试验 聚合酶链反应
积极的 64年 64年
负 18 18
总 82年 82年

100%的协议。

59石蜡切片,通过组织学检查发现是积极的,提交到DNA提取过程和β球蛋白PCR来证明质量和样本中提取DNA的存在。只有14/59(23.7%)样本阳性β球蛋白基因,但在两个 幽门螺旋杆菌不是由PCR放大,即使他们有一个积极的组织学测试(表吗 3)。其他45个样品,是不可能使用PCR检测DNAβ球蛋白,主要是因为低数量的石蜡样品和/或由于反应是抑制由于石蜡和xilol提取过程。没有受到污染和样本测试两次。

比较PCR和组织学检测石蜡切片样本。

组织学 聚合酶链反应
积极的 59 12
负 0 47
总 59 59
积极的 β球蛋白(DNA检测) - - - - - - 14
负 β球蛋白(没有DNA检测) - - - - - - 45
总 0 59

*两个石蜡样本呈阳性 β球蛋白基因,但消极的 幽门螺旋杆菌基因。

141份新鲜内镜活检样本中,58测试使用RFLP技术检测不同 幽门螺旋杆菌strainswith的限制性内切酶 HhaI和 MboI。所有58样品显示积极为β球蛋白和PCR 幽门螺旋杆菌基因。从获得的产品 幽门螺旋杆菌通过直接PCR扩增基因820个碱基对。十一消化模式 HhaI和十二个MboI(表中被发现 4)。最常见的模式是HhaI-3 12.58 (18.3%), HhaI-4 14.58 (23.3%), MboI-2 13.58(21.7%),和MboI-4 15.58 (23.3%)。中位数年龄为45,39岁,39岁,和57个,分别在每个检测模式。在本研究的患者最常见的疾病是胃炎和溃疡。

使用限制片段长度的产品(RFLP)基因分型技术积极的一面 幽门螺旋杆菌PCR产品使用限制性内切酶( HhaI和 MboI)。

限制性内切酶 频率(%) 疾病 平均年龄(岁)
HhaI-1 1/58 (1.7) 胃炎和溃疡 41
HhaI-2 5/58 (8.6) 3胃炎;2溃疡 29日
HhaI- - - - - - 3 12/58 (20.7) 9胃炎; 3溃疡; 45
HhaI- - - - - - 4 14/58 (24.1) 8胃炎; 3溃疡; 1食管炎; 1炎 39
HhaI-5 3/58 (5.2) 1胃炎;2溃疡 54
HhaI-6 6/58 (10.3) 3胃炎;2溃疡;1胃炎+溃疡 39
HhaI-7 1/58 (1.7) 1溃疡 19
HhaI-8 4/58 (6.9) 1胃炎;2溃疡;1食管炎 48
HhaI-9 2/58 (3.4) 1胃炎;1溃疡 37
HhaI-10 2/58 (3.4) 2溃疡 72年
HhaI-11 8/58 (13.8) 6胃炎;1炎症;1溃疡 54
MboI-1 2/58 (3.4) 2胃炎 72年
MboI- - - - - - 2 13/58 (22.4) 7胃炎; 5溃疡, 1食管炎 39
MboI-3 8/58 (13.8) 3胃炎;3溃疡;1炎 49
MboI- - - - - - 4 15/58 (25.8) 10胃炎; 5溃疡 57
MboI-5 4/58 (6.9) 1胃炎;1溃疡;1食管炎;1胃炎胃溃疡 27
MboI-6 2/58 (3.4) 1胃炎;1溃疡 37
MboI-7 4/58 (6.9) 1胃炎、脾肿大;2溃疡 50
MboI-8 1/58 (1.7) 1胃炎 45
MboI-9 5/58 (8.6) 2胃炎;2溃疡;1胃炎+溃疡 47
MboI-10 2/58 (3.4) 2胃炎 28
MboI-11 1/58 (1.7) 1胃炎 31日
MboI-12 1/58 (1.7) 1胃炎 38
4所示。讨论

胃癌是一种肿瘤,导致大多数的死亡不仅在巴西,世界各地。造成癌症的类型 幽门螺旋杆菌可能与胃慢性。菌株之间的差异程度的毒性导致罹患胃疾病的风险增加( 17]。

的 幽门螺旋杆菌感染是分布在一个世界性的方式,主要是成年人口的发展中国家的社会经济水平低。排放感染率与细菌毒力和特定主机的内在因素,主要对免疫系统( 18]。

应该注意到,粪口传播的路线似乎是在感染的患病率,最大的问题 H。 幽门一个严重的公共卫生问题在发达国家和发展中国家 19]。

本研究分析了分子生物学方法的有效性PCR的检测 幽门螺旋杆菌患者的胃肠道症状,比较它与组织学和快速尿素酶试验。

聚合酶链反应(PCR)的诊断 幽门螺旋杆菌是一个非常敏感的和特定的方法( 20.),提供快速和安全的诊断。许多研究结果表明,PCR的灵敏度是接近文化测试( 21),但对于验证根除 幽门螺旋杆菌PCR可以明显优越的有效性 22, 23]。其他的研究中使用的方法来区分不同的 幽门螺旋杆菌亚型已经PCR-RFLP [ 24),通过与限制性内切酶分析PCR产物产生不同大小的碎片和消化配置文件是决定性的定义菌株。使用的限制性内切酶HhaI和MboI Urease-C区域( 16]。极端程度的变化观察到的菌株 幽门螺旋杆菌成为一个重要的科学关注的焦点,研究人员认识到重大的影响,这一现象可以在几个研究领域,如疫苗的发展,抗菌药物耐药性的发展,和宿植病原体相互作用的研究 25, 26]。考虑到10 - 20%的人感染 幽门螺旋杆菌发展明显的疾病,血统的可靠识别可能是非常有益的 27]。之前的研究使用几个技术特征 幽门螺旋杆菌作为一个高度可变的物种提供了无数的血统,每一个与自己的不同的基因型 28- - - - - - 31日]。

的基因分型 幽门螺旋杆菌是描述最重要的致病基因型和最常见的压力。此信息可以用于临床和流行病研究。即使许多感染是临床沉默,机体感染 幽门螺旋杆菌提出了增加发病率和死亡率( 5, 32, 33]。

在目前的研究中我们标准化PCR和物质从新鲜内镜活检样本获得的病人参加Gastrocentro(消化道研究中心),由医学院。一些胃活检样本中收集的石蜡和一些没有。对DNA提取技术的标准化的石蜡切片样本,发现了一些困难,因为样品含有少量的组织碎片和许多石蜡样品没有放大 β球蛋白基因,表明退化DNA质量差或抑制。

使用PCR相比,因为它是更具体的和更快的其他方法;聚合酶链反应的产物可以用限制性内切酶处理来验证 幽门螺旋杆菌菌株。此外,从PCR、DNA测序可以验证突变,没有其他技术就是这样做的能力。

作为内部控制的反应是用于所有样品(人类 β球蛋白基因),也许活检阳性样品 幽门螺旋杆菌,我们有100%的PCR扩增。然而,在一些石蜡样品, β球蛋白没有放大,表明低效的DNA提取的样品。

的效率 幽门螺旋杆菌检测PCR在新鲜样品优于石蜡样品。我们怀疑PCR抑制可能发生由于用于DNA提取方法从石蜡或样本不足的事实。

DNA的提取从新鲜样品有极好的结果。在82分析样本,64是积极的和18负,100%赞同PCR。

在目前的研究中,我们使用了PCR-RFLP分化的方法 幽门螺旋杆菌菌株从胃活检标本获得来自巴西的病人。使用这种方法,我们观察到12和11个生产模式,分别由两个限制性内切酶 MboI和 HhaI从58标本来自胃活检。两个样本的石蜡切片,58 nonfastened胃活检(表的样本 1)。

这些数据表明,使用pcr PCR-RFLP可能是有用的作为一个快速的具体识别过程 幽门螺旋杆菌血统在胃活检标本 16]。基因分型分析的若干协议提出了区分临床孤立的血统 幽门螺旋杆菌( 34- - - - - - 38]。几个引物对输入的检测和描述 幽门螺旋杆菌是基于放大的尿素 34],尿素+ ureB [ 35[],ureC基因 36, 38]。这些结果表明脲酶基因在临床的多样性 幽门螺旋杆菌样本。李等人。 16]发现3、11、6种模式是由19个临床孤立的样本,分别由限制性内切酶消化 HhaI, MboI和AluI。Foxall et al。 35)发现了10个不同的模式是由22个临床孤立样本,限制性内切酶 HaeIII消化的PCR产物2.4 Kb被放大的尿素和ureB基因。洛佩兹et al。 37)发现的模式生成的消化的PCR产物 HaeIII酶,从尿素和ureB一样不同的标准 HaeIII。Akopyanz et al。 28)发现18 MboI和27 HaeIIIRFLP模式,由尿素和ureB基因PCR产品放大2.4 Kb的60 幽门螺旋杆菌血统,杰出的44个独立团体模式。每个孤立的组没有不同于其他的RFLP分析尿素和ureB产品,但不同 MboI1.7 Kb ureC消化和保险人的段。这样一个事实表明PCR-RFLP分析ureC基因可以产生大量的rflp标准。

几项研究已经证实,PCR-RFLP ureC基因的分析就可以区分临床孤立 幽门螺旋杆菌。用限制性内切酶,摩尔et al。 38]分析了1.1 Kb部分ureC“PCR基因放大的21个临床孤立 幽门螺旋杆菌。样本与酶消化后分成四组 HindIII,而血统被分成15组后消化的酶 AluI和 PvuI。藤本et al。 36]证明了消化的820个基点 幽门螺旋杆菌ureC与限制性内切酶基因 HhaI, MboI,和 MseI导致10、10和11种不同的模式,分别。Dooley et al。 3)三种类型的酶用于PCR产品1.179个基点的一部分 幽门螺旋杆菌ureC基因。11、10和6消化模式产生的 HhaI MboI,和 AluI酶,分别。

在我们的研究中,我们使用两种类型的限制性内切酶放大产品820 pb的 幽门螺旋杆菌ureC基因。我们获得11和12种不同的模式,分别从58临床孤立样本进行了研究。我们的研究结果表明,PCR-RFLP的这一部分的分析 幽门螺旋杆菌ureC基因是一种可靠的方法,和在这一领域,基因分型的PCR可以用于流行病研究和孤立的分化 幽门螺杆菌链。

这项研究还显示高水平的遗传多样性孤立的不同 幽门螺旋杆菌积极的病人在巴西进行了研究。

使用计算程序获得的基因分型模式比较生物1 d。我们发现11模式 HhaI酶和12模式 MboI酶。少量的研究样本的原因是由于这样的事实,是不可能建立一个重要的标准具体消化疾病和基因型之间的统计相关性。

我们相信的基因分型 幽门螺旋杆菌可以促进微生物的特点的研究,促进检测致病性或不致病的病毒株,反过来,提供一个更好的理解一些细菌毒力因子,使用引起的疾病。

4.1。统计数据

协议是百分比计算比较 幽门螺旋杆菌基因型获得直接PCR进行胃活检,从PCR获得基因型的DNA提取石蜡和新鲜的样品,以及组织学和脲酶测试。

 利益冲突

作者声明没有冲突。

 承认

作者感谢病人同意参与这项研究。

 格雷厄姆 d . Y。 Malaty h . M。 埃文斯 d·G。 埃文斯 d . J。 克莱因 p D。 亚当 E。 流行病学的 幽门螺杆菌在无症状的人群中在美国:年龄、种族和社会经济地位 胃肠病学 1991年 One hundred. 6 1495年 1501年 2 - s2.0 - 0025897596 Scheiman j . M。 卡特勒 答:F。 幽门螺杆菌和胃癌 美国医学杂志 1999年 106年 2 222年 226年 2 - s2.0 - 0033082208 10.1016 / s0002 - 9343 (98) 00393 - 3 杜利 c·P。 科恩 H。 费茨基布斯 p . L。 鲍尔 M。 阿普曼 m D。 Perez-Perez g . I。 巴索 m·J。 普遍存在的 幽门螺杆菌在无症状的感染和组织学胃炎的人 《新英格兰医学杂志》上 1989年 321年 23 1562年 1566年 2 - s2.0 - 0024316918 泰勒 n S。 福克斯 j·G。 Akopyants n S。 伯格 d E。 汤普森 N。 羞愧的事 B。 严 l Fontham E。 詹尼 F。 猎人 f·M。 科雷亚 P。 长期殖民的单个和多个菌株 幽门螺杆菌DNA指纹分析评估 临床微生物学杂志 1995年 33 4 918年 923年 2 - s2.0 - 0028967698 Megraud F。 流行病学的 幽门螺杆菌感染 北美胃肠病学诊所 1993年 22 1 73年 88年 阿瑟顿 j . C。 应变类型的的临床意义 幽门螺杆菌 肠道 1997年 40 6 701年 703年 2 - s2.0 - 0030835425 Radić M。 Kaliterna d . M。 Radić J。 幽门螺杆菌感染和系统性硬化是一个链接吗? 脊柱关节骨 2011年 78年 4 337年 340年 10.1016 / j.jbspin.2010.10.005 低音部 V。 革命 C。 Iengo 一个。 Romano C。 识别之间的相关性 幽门螺杆菌感染和甲状腺机能亢进 幽门螺杆菌 2010年 15 6 558年 562年 2 - s2.0 - 78349280713 10.1111 / j.1523-5378.2010.00802.x Jesnowski R。 法甲 B。 Mohrcke C。 伯奇 C。 Bulajic M。 Schneider-Brachert W。 Kloppel G。 Lowenfels 答:B。 Maisonneuve P。 Lohr 人类。 幽门螺杆菌在自身免疫性胰腺炎和胰癌 Pancreatology 2010年 10 4 462年 466年 10.1159 / 000264677 去 m F。 格雷厄姆 d . Y。 如何 幽门螺杆菌引起十二指肠溃疡疾病:bug,主机,或都有? 胃肠病学和肝脏病学杂志》上 1994年 9 补充1 S8 S10 2 - s2.0 - 0028712580 Labigne 一个。 德重用 H。 的决定因素 幽门螺杆菌致病性 传染性病原体和疾病 1996年 5 4 191年 202年 2 - s2.0 - 0029838654 邓恩 b E。 科恩 H。 巴索 m·J。 幽门螺杆菌 临床微生物学检查 1997年 10 4 720年 741年 2 - s2.0 - 0030725576 戴维斯 l·G。 Dibner m D。 电池 j·F。 在分子生物学基本Metthods 1995年 纽约,纽约,美国 爱思唯尔 Latchman d S。 PCR在病理学中的应用。原则和实践 1995年 牛津大学出版社 saki r·K。 Scharf 年代。 Faloona F。 酶放大的 β球蛋白基因序列和限制网站分析镰状细胞性贫血的诊断 科学 1985年 230年 4732年 1350年 1354年 2 - s2.0 - 0022372670 李 C。 哈 T。 气 d S。 弗格森 d . A。 Jr。 江 C。 之际, J·J。 托马斯。 E。 分化的 幽门螺杆菌菌株直接从胃活检标本通过pcr限制性内切酶片段长度多态性分析没有文化 临床微生物学杂志 1997年 35 12 3021年 3025年 Kague E。 Thomazini c . M。 帕帝尼 M . i d . c . M。 德·卡瓦略 F。 雷特 c V。 ibsen Pinheiro n。 是携带者基因的甲基化状态的样本从巴西慢性胃炎患者胃粘膜感染 幽门螺杆菌 Arquivos de Gastroenterologia 2010年 47 1 7 12 2 - s2.0 - 77953181804 10.1590 / s0004 - 28032010000100002 多雷尔 N。 瑰柏翠 j·E。 雷恩 b·W。 Host-bacterial交互的发病机理 幽门螺杆菌感染 微生物学的趋势 1998年 6 10 379年 380年 2 - s2.0 - 0031794114 10.1016 / s0966 - 842 x (98) 01367 - 5 Quaglia n . C。 Dambrosio 一个。 Normanno G。 Celano g . V。 Nested-PCR试验的评估基于phosphoglucosamine变位酶基因(glmM)的检测 幽门螺杆菌从原料奶 食品控制 2009年 20. 2 119年 123年 2 - s2.0 - 50849091274 10.1016 / j.foodcont.2008.02.010 范·多尔恩 L.-J。 Figueiredo C。 桑娜 R。 佩纳 年代。 Midolo P。 Ng e·k·W。 阿瑟顿 j . C。 巴索 m·J。 五胞胎 w·g·V。 扩大等位基因的多样性 幽门螺杆菌vacA 临床微生物学杂志 1998年 36 9 2597年 2603年 范Zwet 答:一个。 Thijs j . C。 Kooistra-Smid a . m . D。 Schirm J。 Snijder j . a . M。 文化的敏感性与聚合酶链反应检测 幽门螺杆菌从窦的活检样本 临床微生物学杂志 1993年 31日 7 1918年 1920年 2 - s2.0 - 0027164243 Engstrand l Pahlson C。 Gustavsson 年代。 施万 一个。 单克隆抗体的快速识别 弯曲杆菌pyloridis 《柳叶刀》 1986年 2 8520年 1402年 1403年 2 - s2.0 - 0023005531 Lamouliatte H。 华 J。 Birac C。 Caular R。 Megraud F。 治疗后随访的反 幽门螺杆菌养生法:标准细菌学或PCR吗? Acta Gastro-Enterologica贝尔基卡号 1993年 56 补充 104年 119年 Megraud F。 目前的诊断测试的优点和缺点的检测 幽门螺杆菌 斯堪的纳维亚胃肠病学杂志》上的补充 1996年 31日 215年 57 62年 洛根 r . p . H。 伯格 d E。 遗传多样性的 幽门螺杆菌 《柳叶刀》 1996年 348年 9040年 1462年 1463年 2 - s2.0 - 0029800122 封面 t . L。 空泡细胞毒素的 幽门螺杆菌 分子微生物学 1996年 20. 2 241年 246年 2 - s2.0 - 0029923910 10.1111 / j.1365-2958.1996.tb02612.x 《福布斯》 k·J。 方 Z。 彭宁顿 t·H。 等位基因变异 幽门螺杆菌 鞭毛蛋白基因 flaA和松弛:应变输入计划和人口结构的影响 流行病学和感染 1995年 114年 2 257年 266年 2 - s2.0 - 0028923609 Akopyanz N。 Bukanov n . O。 Westblom t U。 伯格 d E。 pcr RFLP分析DNA序列的多样性在胃的病原体 幽门螺杆菌 核酸的研究 1992年 20. 23 6221年 6225年 2 - s2.0 - 0027068228 泰勒 d E。 伊顿 M。 常 N。 Salama s M。 建设 幽门螺杆菌基因组地图和示范基因组多样性的水平 细菌学期刊 1992年 174年 21 6800年 6806年 2 - s2.0 - 0026665395 Akopyanz N。 Bukanov n . O。 Westblom t U。 Kresovich 年代。 伯格 d E。 DNA临床分离株之间的差异 幽门螺杆菌检测到pcr RAPD指纹 核酸的研究 1992年 20. 19 5137年 5142年 2 - s2.0 - 0026675742 德赛 M。 林惇 D。 欧文 r . J。 斯坦利 J。 分子类型 幽门螺杆菌隔离从无症状,溃疡、胃炎患者由脲酶基因多态性 流行病学和感染 1994年 112年 1 151年 160年 2 - s2.0 - 0028049385 巴索 m·J。 Intrastrain差异 幽门螺杆菌:粘膜损伤的关键问题? 医学年鉴 1995年 27 5 559年 563年 2 - s2.0 - 0028784059 NIH共识会议。 幽门螺杆菌消化性溃疡疾病。NIH共识开发小组 幽门螺杆菌消化性溃疡疾病 《美国医学会杂志》 1994年 272年 1 65年 69年 克莱顿 c . L。 Kleanthous H。 摩根 D D。 Puckey l Tabaqchali 年代。 的快速指纹 幽门螺杆菌通过聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析 临床微生物学杂志 1993年 31日 6 1420年 1425年 2 - s2.0 - 0027153350 Foxall p。 胡 l . T。 莫布里 h·l·T。 使用聚合酶链reaction-amplified 幽门螺杆菌脲酶的结构基因分化的隔离 临床微生物学杂志 1992年 30. 3 739年 741年 2 - s2.0 - 0026580428 藤本 年代。 马歇尔 B。 巴索 m·J。 pcr限制性内切酶片段长度多态性打字的 幽门螺杆菌 临床微生物学杂志 1994年 32 2 331年 334年 2 - s2.0 - 0028157302 洛佩兹 c·R。 欧文 r . J。 德赛 M。 区分隔离的 幽门螺杆菌通过PCR-RFLP分析尿素酶A和B的基因与核糖体RNA基因模式和比较 《微生物学字母 1993年 110年 1 37 44 2 - s2.0 - 0027324992 10.1016 / 0378 - 1097 (93)90239 - x 摩尔 r。 Kureishi 一个。 黄 年代。 布莱恩 l E。 临床分离株的分类 幽门螺杆菌限制消化的基础上分析聚合酶链reaction-amplified ureC基因 临床微生物学杂志 1993年 31日 5 1334年 1335年 2 - s2.0 - 0027288880