GRP 胃肠病学研究和实践 1687 - 630 x 1687 - 6121 Hindawi出版公司 897678年 10.1155 / 2012/897678 897678年 研究文章 养分有效性改变自噬的影响在苏灵大Sulfide-Induced结肠癌细胞凋亡 http://orcid.org/0000 - 0003 - 2225 - 9390 邱 Shiun-Kwei 1、2 肥厚性骨关节病变与肺部转移 尼尔。 1 通用电气 立升 1 Jadus 马丁·R。 1、3、4 Andoh 阿基拉 1 研究部门、退伍军人医疗中心 E第七街5901号 长滩 CA 90822 美国 va.gov 2 医学系的 加州大学,101年城市开车 欧文,橙色 CA 92868 美国 uci.edu 3 UCI病理部门 曹国伟家庭综合癌症中心 加州大学 欧文92697年 美国 uci.edu 4 Neuro-Oncology程序 曹国伟综合癌症中心 加州大学欧文分校医学院的加州大学 欧文,橙色 CA 92868 美国 uci.edu 2012年 9 12 2012年 2012年 17 05年 2012年 13 11 2012年 2012年 版权©2012 Shiun-Kwei邱et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

细胞自噬是一个异化的过程,降低其细胞内的材料来补充自己。诱导细胞自噬在各种应力刺激可以导致细胞生存或通过凋亡细胞死亡和/或自噬通路(nonapoptotic)。非甾体抗炎药的硫化苏灵大在结肠癌细胞凋亡。在这里,我们表明,抑制自噬serum-deprived条件下导致显著减少苏灵大sulfide-induced HT-29结肠癌细胞凋亡。相比之下,抑制自噬的血清可明显增加的情况下苏灵大sulfide-induced HT-29细胞凋亡。我们先前表明,凋亡抑制剂、生存素在调节过程中发挥作用非甾体消炎药诱发的细胞凋亡和自噬细胞死亡。在这里,我们表明,生存素蛋白半衰期增加serum-deprived条件下自噬抑制剂的存在,但不是当血清条件下是可用的。因此,生存素水平的增加可能是一个因素抑制苏灵大sulfide-induced serum-deprived条件下细胞凋亡。这些结果表明,由于自噬诱导细胞是否存活或消亡取决于因素的平衡调节自噬和凋亡过程。

 1。介绍

自噬是一种进化保守的过程,分解破坏/不必要的细胞材料,如细胞器、蛋白质聚集,和大分子成氨基酸回收的细胞代谢和生存需求( 1, 2]。活跃在所有细胞和诱导的细胞压力,包括营养不足和氧化应激。自噬是由双层膜空泡的形成,自噬小体,检疫胞质材料和随后与溶酶体融合,降低其内容。自噬体的形成需要乳沟microtubule-associated蛋白轻链3 b (LC3b) Atg 4形成胞质LC3b-I [ 3]。LC3b-I经历结合脂质一半,由Atg 7和Atg 3酶生成LC3b-II合并,自噬体膜的援助Atg12-Apg 5-Atg16蛋白质复合体( 4, 5]。在一起,整个复杂还负责液泡的伸长和曲率产生一个成熟的自噬体( 6, 7]。检测LC3b-II一般由西方墨点法是一种利用和被广泛接受的检验监测自噬诱导。已知蛋白质的降解是通过自噬降解的过程,如p62,利用监控自噬流量( 8]。在这项研究中,这些检测方法是利用监测自噬及其抑制。

尽管自噬是众所周知的prosurvival功能和定义,最近的研究表明,自噬诱导也可能触发apoptosis-independent细胞死亡,或“自噬细胞死亡。“目前,尚不清楚何时何地自噬是prosurvival,以及何时何地prodeath [ 9, 10]。据报道,自噬也影响细胞对凋亡的敏感性。自噬与凋亡之间的联系了解甚少,目前是一个激烈的研究领域。大量的研究表明,自噬可以确保细胞生存通过抑制细胞凋亡(例如,了 11, 12])。然而,一些最近的研究表明,自噬有时导致,与细胞凋亡相关(例如, 13, 14])。

硫化苏灵大,非甾体类抗炎药(非甾体抗炎药),拥有proapoptotic,抗癌,抗炎活动。苏灵大硫化胃肠道肿瘤细胞发生凋亡。细胞的自噬抑制结肠癌HT-29据报道,使这些细胞敏感地认识到苏灵大sulfide-induced凋亡[ 15]。相反,在胃癌AGS细胞我们最近的研究表明,抑制自噬与生存素抑制硫化苏灵大下调,导致细胞凋亡增加( 16]。如何以及为什么自噬是在另一个设置和antiapoptosis proapoptosis尚不清楚。在这里,我们调查的影响自噬HT-29细胞的凋亡反应苏灵大硫化物在不同的上下文中:serum-deprivation和正常血清条件下。我们也检查了这些条件下生存素在细胞凋亡中的作用。

 2。材料和方法 2.1。细胞培养和治疗

HT-29是本人5修改的培养基培养(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国)补充10%胎牛血清(美国佐治亚州亚特兰大生物制剂,码)和1%的抗生素(青霉素G,两性霉素B和链霉素;美国弗吉尼亚州Mediatech Cellgro, Hernodon)。对于所有化验,细胞治疗0.3毫米硫化苏灵大。这种高浓度的硫化苏灵大利用是因为结肠粘膜细胞通常暴露于高浓度的非甾体抗炎药。因此,这个浓度更好地代表了生理价值。

 2.2。核转染

商用池3设计有针对性的siRNAs沉默人类Atg7(美国圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,CA)是利用。10 nM的siRNAs转染到HT-29细胞融合使用70% RNAiMax转染试剂(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA),遵循制造商的指示。模拟转染只利用转染试剂没有任何核,和转染10 nM的商用短RNA(美国圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯,CA)不沉默哺乳动物信使RNA作为控制。nonsilencing控制RNA结合的绿色荧光染料监控转染效率与荧光显微镜。荧光细胞的百分比每500总细胞数来确定转染效率。转染24小时后:(1)自噬抑制试验,细胞无血清培养系统在血清和孵化时间表示的媒体数据。在这些时候细胞溶解产物收集LC3的免疫印迹分析 β二世和β肌动蛋白水平,p62和β肌动蛋白水平在100年的存在 μg / mL放线菌酮(CHX) ± 10毫米3-MA;(2)细胞凋亡的检测,细胞在无血清培养媒体一夜之间,然后用0.3毫米苏灵大硫化表示持续时间,和在媒体含有5%的边后卫一夜之间,然后用0.3毫米苏灵大硫化表示持续时间。褶皱凋亡决心如下所述;(3)存活素半衰期的测定,细胞在无血清培养媒体和媒体包含5%的边后卫一夜之间,和治疗如下所述;(4)生存素mRNA表达分析,采用无血清细胞培养技术媒体和媒体包含时间表示5%的边后卫,和总RNA和实时定量PCR进行如下所述。

 2.3。细胞凋亡检测

相同数量的HT-29 6-well文化的细胞被播种在每个盘子和允许附加在一夜之间。然后细胞孵化在媒体包含5%不含血清的边后卫和媒体。车辆(DMSO)和硫化苏灵大被添加到媒体的时间显示在图。细胞凋亡是由比较褶皱caspase-3激活样品含有相同数量的HT-29细胞之间。比色CaspACE试验系统(WI Promega,麦迪逊,美国),是用于测量caspase-3活动,遵循制造商的指示。膜联蛋白V绑定分析工具包(Abcam Inc .,剑桥,妈,美国)也用于测量细胞凋亡诱导,按照制造商的说明。%凋亡是由数的比例使(膜联蛋白V绑定)细胞在500细胞。

 2.4。免疫印迹分析和蛋白质信号量化

细胞溶解产物准备如前所述[ 17]。150年 μ每个样本g蛋白是12% sds - page分离和转移到硝化纤维膜。细胞膜被封锁在脱脂牛奶和孵化rabbit-polyclonal anti-LC3 β抗体,兔多克隆抗体anti-survivin(利特尔顿,罗福斯生物制品有限公司,美国),兔多克隆anti-p62抗体和兔多克隆抗体anti-Atg7(圣克鲁斯生物技术,圣克鲁斯、钙、美国)在一夜之间在4°C。的anti-LC3 β抗体用于这些化验LC3承认 β我和LC3 β二世形式。这个抗体是为了确认LC3使用 β我有样品,LC3 β二世转换条件下观察到的只有当自噬诱导。膜进行清洗和孵化1小时与过氧化物酶共轭goat-anti-rabbit二级抗体(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。相同的膜被剥夺了Re-blot温和的解决方案(美国微孔,泰梅库拉,CA)根据制造商的指示,然后用鼠标单克隆抗体anti-beta-actin孵化1小时,洗,1小时孵化与过氧化物酶共轭goat-anti-mouse二级抗体(σ,圣路易斯,密苏里州,美国)。蛋白质利用微信号测量软件,和规范化beta-actin水平,如前所述 17]。所有蛋白质信号平均数据从三个重复实验。

 2.5。RNA隔离、逆转录和实时定量PCR分析

从HT-29细胞总RNA分离使用RNeasy迷你包(美国试剂盒生物科学,瓦伦西亚,CA),遵循制造商的指示。0.3 μ使用25 g的RNA样本反向转录单位的亲逆转录酶(美国应用生物系统公司,培育城市,CA)。5 μL的逆转录(RT)是利用在每个后续qPCR反应混合物。QPCR进行使用方法描述m . w . Pfaffl实时rt - pcr ( 18]。这种方法占扩增效率的影响在以下公式: (1) 比 = ( E 目标 ) δ Ct 目标 ( 控制 - - - - - - 治疗 ) ( E 裁判 ) δ Ct 裁判 ( 控制 - - - - - - 治疗 ) 。

目标是指生存素PCR产品,beta-actin用作参考,所有存活素PCR产品标准化。 E 指放大效率基于标准稀释曲线的斜率。实时PCR分析iCycler(美国Biorad大力神,CA)使用智商SYBR绿色Supermix (Biorad、大力神、钙、美国),和前面描述的生存素PCR引物( 18]。PCR反应条件是:在95°C预培养10分钟(1 x);变性在95°C 1分钟,再次退火在51°C 30秒在72°C和扩展30秒(40 x)。荧光发射数据收集在退火步骤。所有样品进行了一式三份,以便计算统计学意义。

 2.6。蛋白质和mRNA稳定的决心

小干扰rna转染细胞p62蛋白质的稳定性。确定p62蛋白质降解3-MA, untransfected HT-29细胞孵化包含5%的边后卫,在媒体和无血清媒体包含车辆和10毫米3-MA 30分钟。100 μg / mL CHX添加时间显示在图,在这段时间里,蛋白质提取物被为免疫印迹和蛋白质定量分析每个样本中p62和β肌动蛋白水平。

决定生存素蛋白半衰期HT-29细胞,100 μg / mL CHX,通常利用在许多出版物抑制蛋白质合成各种各样的培养细胞,也为本研究选择。细胞治疗这CHX浓度持续时间表示的数据。检查3-MA在生存素的半衰期的影响,细胞在无血清培养过夜媒体和媒体包含5%的边后卫使用10毫米3-MA 30分钟,然后CHX添加指定的持续时间。车辆+ CHX只作为控制治疗。检查Atg7沉默在生存素蛋白半衰期的影响,在24小时内与Atg7 siRNA转染后,细胞无血清培养系统在媒体和媒体包含5%的边后卫一夜之间,然后用CHX孵化时间。细胞转染与控制RNA作为控制。确定蛋白酶抑制剂的影响生存素半衰期,细胞治疗10 μ独自mg - 132, 10毫米3-MA + 10 μ132毫克- 30分钟,然后与CHX表示持续时间。蛋白质免疫印迹分析提取被孤立和蛋白质量化如上所述。

检查3-MA存活素mRNA稳定的影响,细胞无血清培养系统在媒体和媒体包含5%的边后卫是使用10毫米3-MA 30分钟,然后1 μM放线菌素D (actD)添加到停止mRNA转录为0,1、3、6和12小时。车辆+ actD只作为控制治疗。检查Atg7沉默在生存素mRNA的稳定性的影响,在24小时内与Atg7 siRNA转染后,细胞无血清培养系统在媒体和媒体包含5%的边后卫一夜之间,然后用actD孵化的时间相同。细胞转染与控制RNA作为控制。时间显示,总RNA是孤立和存活素mRNA稳定由实时定量PCR利用gene-specific底漆如上所述。

 2.7。统计分析

所有数据进行统计分析是重复在一式三份。学生的 t 以及被用来比较两组之间的数据。单向方差分析和Bonferroni调整使用三个或更多组之间比较数据。 P 值< 0.05被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。血清剥夺增强硫化苏灵大HT-29细胞诱导细胞凋亡

硫化苏灵大诱导细胞凋亡的程度随着时间的推移HT-29细胞培养在媒体中含有5%的边后卫HT-29细胞相比,不含血清培养的媒体。媒体包含的边后卫,车辆治疗不会增加从基底在HT-29细胞凋亡研究的整个持续时间(96小时)(图 1)。苏灵大硫化处理逐步增加细胞凋亡开始大约24小时的治疗,约12倍(图96小时的治疗 1)。在媒体不含血清、车辆治疗导致少量细胞凋亡在整个研究的持续时间(图 1)。苏灵大硫化处理逐步增加细胞凋亡,开始约12个小时的治疗,大约30倍(图48小时的治疗 1)。在这些数据的支持,膜联蛋白V 1.5绑定硫化试验表明,苏灵大引起的 ± 凋亡细胞在0 0.12%和11.6小时的治疗 ± 2.1%凋亡细胞在治疗96小时血清媒体,但诱导1.6 ± 凋亡细胞0.21%和43.5 ± 3.7%凋亡细胞无血清培养系统治疗的48小时内媒体。因此,血清剥夺HT-29细胞的敏感性显著增强苏灵大sulfide-induced细胞凋亡。

苏灵大sulfide-induced采用无血清细胞凋亡增强媒体与血清媒体。相同数量的HT-29细胞被镀在每个6-well板,允许附加在一夜之间,采用无血清培养技术媒体和媒体包含5%的边后卫前一夜治疗与车辆和硫化苏灵大表示持续时间。褶皱凋亡是由测量caspase-3活动总细胞溶解产物。*表示显著增加褶皱凋亡相对于0小时计算, P < 0.01 。

 3.2。采用无血清抑制自噬减少苏灵大Sulfide-Induced凋亡媒体,但促进苏灵大Sulfide-Induced在媒体血清细胞凋亡

检查是否自噬是一个因素影响的能力以HT-29细胞凋亡在苏灵大硫化物的存在,首先自噬诱导在血清检查血清中自由媒体和媒体。在血清媒体中,基底HT-29细胞自噬的发生,表明,存在少量的胞质空泡(图 2(一个))。3-MA和转染Atg7 siRNA减少基底的自噬在血清媒体。在无血清的媒体,自噬在HT-29细胞增加,如图所示,存在大量的胞质空泡(图 2(一个)),大量的LC3的截断 β我(顶级乐队的紧身上衣,图形式 2 (b))LC3 β二世(底部乐队的紧身上衣,图 2 (b)),重大p62蛋白质降解(图 2 (c))。无血清培养系统增加3-MA媒体抑制LC3 β二世转换和p62蛋白质降解(数字 2 (b)和 2 (c)、职责)。RNA转染控制没有减少HT-27 Atg7表达细胞(图 2 (b)),不抑制自噬诱导(数字 2 (b)和 2 (c))。相比之下,转染与Atg7 siRNA减少Atg7表达HT-29细胞(图 2 (b))和抑制自噬诱导(数字 2 (b)和 2 (c))。

HT-29细胞自噬增加血清剥夺和抑制3-methyladenine (3-MA)和Atg7核。(一)细胞包含基底在媒体血清水平的胞质空泡。胞质空泡(用箭头指示)无血清培养系统极大地提高了孵化24小时的媒体。(b)西方siRNA墨迹显示Atg7沉默,但不是控制RNA (ctrl)相对于模拟转染,LC3的转换 β我到LC3 β二世在车辆和控制RNA-treated细胞随着时间的推移,和LC3的抑制 β二世在3-MA转换(10毫米)和小干扰rna (10 ng)治疗Atg7细胞在无血清的媒体。Beta-actin墨迹显示相同的蛋白质加载在所有样本。(c)图的蛋白质定量从西方印迹显示p62退化在车辆和控制细胞RNA治疗随着时间的推移,和抑制中p62退化3-MA(10毫米)和小干扰RNA (10 ng)治疗Atg7细胞在无血清的媒体。一个代表西方涂抹3用于p62定量。*表示显著降低p62水平相对于0小时, P < 0.02 。

接下来,对细胞凋亡诱导的自噬抑制效果苏灵大硫化在血清血清自由媒体与媒体审查。在无血清的媒体,3-MA治疗和小干扰rna转染Atg7苏灵大硫化物的存在显著降低caspase-3硫化活化而苏灵大只(图 3顶图)。相反,在血清媒体,3-MA治疗和小干扰rna转染Atg7硫化在苏灵大导致显著增加caspase-3硫化活化而苏灵大只(图 3,底部图)。综上所述,这些结果表明,抑制自噬可以增强或降低苏灵大sulfide-induced凋亡取决于可用性的营养在癌症细胞的环境。

自噬抑制减少苏灵大sulfide-induced采用无血清细胞凋亡随时间媒体和随着时间的推移sulfide-induced凋亡增加血清媒体。HT-29 untransfected和转染的细胞控制RNA和Atg7 siRNA镀作为图中描述 1。3-MA加入细胞培养添加硫化苏灵大前30分钟。细胞凋亡是由测量褶皱caspase-3活动。*表示显著减少褶皱caspase-3活动细胞培养接受自噬抑制剂和硫化苏灵大相对于硫化苏灵大只, P < 0.01 。* *表示显著增加褶皱caspase-3活动细胞培养接受自噬抑制剂和硫化苏灵大相对于硫化苏灵大只, P < 0.01 。

 3.3。苏灵大的程度Sulfide-Induced凋亡存活素的大小对应于稳定,不肥沃的条件下由自噬抑制改变

我们之前的差别表明,对这些基因的细胞凋亡抑制剂,生存素,NSAIDs-induced是一个关键因素在肿瘤细胞凋亡,这苏灵大硫化物会使生存素mRNA表达( 17]。自从苏灵大sulfide-induced采用无血清细胞凋亡增强媒体与血清媒体(图 1由苏灵大差别),生存素mRNA的程度对这些硫化物在血清血清自由媒体与媒体审查。结果表明,硫化苏灵大衰减存活素mRNA表达以同样的速度,和类似的程度,无论血清内容在媒体上(图 4)。因此,苏灵大的程度sulfide-induced细胞凋亡并不是由于任何监管的差异采用无血清硫化苏灵大媒体生存素mRNA表达与血清媒体。

生存素mRNA的硫化苏灵大下调血清和血清媒体。实时定量PCR分析表明生存素mRNA水平差别的速率和程度对这些基因在苏灵大硫化物的存在类似的无血清培养系统随着时间的推移,在媒体和血清媒体。*表示显著降低生存素mRNA水平相对于0小时, P < 0.01 。

检查是否存活素是一个因素影响的能力以HT-29细胞凋亡抑制自噬时,存活素mRNA表达和稳定,半衰期和蛋白质在血清检查血清中自由媒体和媒体在没有和自噬抑制剂的存在。3-MA Atg7 siRNA并没有改变生存素mRNA表达或稳定相比,车辆在无血清或血清媒体。相比之下,生存素蛋白半衰期影响血清内容和自噬抑制剂:在放线菌酮(CHX),在无血清媒体生存素半衰期约为1.5小时,大约2小时血清媒体(图 5)。添加3-MA延长生存素蛋白半衰期大约3小时在无血清的媒体,但并未改变生存素蛋白在媒体血清半衰期(图 5)。Atg7 siRNA也延长生存素蛋白半衰期大约2.5小时血清媒体,但不是在血清媒体(图 5)。

生存素蛋白稳定增加的存在自噬抑制剂在无血清的媒体,但不是在媒体血清。西方的屁股和蛋白质定量图表显示生存素蛋白水平增加CHX(100后随着时间的推移 μ米)媒体。一个代表免疫印迹的每个处理三个重复实验显示和条件。生存素而显示的著名乐队小乐队是特异性的,通过控制实验确定利用生存素抗体的中和肽。*表示的时间生存素蛋白一半的量在0小时(半衰期), P < 0.02 。

我们之前表明生存素蛋白是通过泛素蛋白酶体降解的非甾体抗炎药如消炎痛( 17]。因此,我们研究了影响生存素蛋白的蛋白酶体抑制剂mg - 132半衰期在没有和自噬抑制剂的存在。结果表明,mg - 132仅延长生存素蛋白在媒体无血清半衰期约2小时,和大约3小时血清媒体(图 6)。3-MA结合mg - 132扩展生存素蛋白半衰期时间超过4小时血清媒体(图 6),但没有增加生存素蛋白在媒体血清半衰期超出3小时。因此生存素蛋白是通过蛋白酶体降解不管血清在媒体上的内容。然而,在无血清的媒体、监管的生存素蛋白降解似乎更加复杂。

生存素蛋白是由泛素蛋白酶体降解无血清和血清媒体。西方的屁股和蛋白质定量的图表显示,添加蛋白酶抑制剂(10 mg - 132 μ采用无血清M)延长生存素蛋白半衰期和血清媒体。一个代表西方涂抹一式三份的实验显示为每个治疗和条件。*表示的时间生存素蛋白一半的量在0小时(半衰期), P < 0.02 。

 4所示。讨论

HT-29结肠癌细胞被选为模型(1)以来这些研究我们和其他人表明硫化苏灵大在这些细胞凋亡 15, 19]。(2)自噬影响硫化苏灵大诱导细胞凋亡的能力在这些细胞( 15]。(3)血清剥夺诱导自噬( 20.),我们的研究结果证实,自噬在媒体HT-29无血清细胞明显增加。因此,HT-29细胞是一个适当的模型来研究自噬的影响在苏灵大sulfide-induced不同血清条件下细胞凋亡。

目前,自噬是prosurvival的一般观点,因为它可以保护细胞免受长期饥饿和其他压力,与抗癌药物治疗,目的是杀死癌细胞。一些已发表的研究表明,癌细胞的生存机制,通常是通过抑制自噬抑制剂,以可以引发细胞凋亡,增强他们对抗癌药物的敏感性。这是显示在胃肠道间质瘤( 21),胰腺腺癌( 19),和淋巴瘤( 22),等等。一些出版物还表明,自噬可以促进细胞死亡,自噬本身是细胞死亡的一种形式(了 9, 23])。我们的研究结果表明,自噬可以支持prosurvival或prodeath结果HT-29结肠癌细胞根据应力刺激,他们同时接收和物理背景。硫化苏灵大细胞凋亡显著更大数量的在serum-deprived HT-29细胞的条件下,自噬在哪里显著增加,而在条件血清是可用的和自噬是最小的。这些结果的一个解释是,自噬不是一个因素影响苏灵大sulfide-induced在这些细胞凋亡,但东西是通过血清剥夺。进一步的调查显示,有一个清晰的关系自噬和苏灵大sulfide-induced细胞凋亡,抑制自噬通过3-MA和Atg7 siRNA以来治疗导致减少硫化苏灵大serum-deprived条件下诱导细胞凋亡的能力和增强硫化苏灵大诱导细胞凋亡的能力条件下,血清是可用的。

自噬和其他类型的细胞死亡之间的联系,如细胞凋亡和坏死,了解甚少,目前一个主题的研究。我们的研究显示的证据表明,自噬通过共同影响细胞凋亡分子因素调节两个过程。这些结果表明,抑制自噬3-MA和Atg7核的半衰期有明显影响细胞凋亡抑制剂生存素在一定条件下。我们之前确定的监管存活素水平细胞凋亡诱导的非甾体抗炎药是一个关键因素在结肠癌细胞( 24]。生存素也调节自噬 25, 26]。在目前的研究中,生存素蛋白稳定性的敏感性解释了不同HT-29细胞苏灵大sulfide-induced细胞凋亡在不同条件下。血清剥夺生存素半衰期约2小时减少到约1.5小时,导致更大的潜在的凋亡诱导硫化苏灵大在血清血清媒体和媒体。采用无血清抑制自噬媒体增加存活素半衰期从大约1.5小时到3个小时,这有助于抵抗苏灵大sulfide-induced细胞凋亡。在血清媒体中,抑制自噬似乎没有影响生存素半衰期。这可能允许细胞凋亡诱导在苏灵大硫化物的存在,它会使生存素mRNA水平( 17, 27]。代表我们的模型图的自噬抑制效果存活素和苏灵大sulfide-induced凋亡图所示 7。

我们的模型的自噬抑制效果存活素和苏灵大sulfide-induced细胞凋亡在血清和serum-deprived条件。

自噬可以影响生存素半衰期的机制还不清楚,需要进一步的调查。以前,我们表明,生存素蛋白是由泛素蛋白酶体降解的非甾体抗炎药( 17]。在这里,我们表明,蛋白酶体抑制剂mg - 132延迟生存素蛋白降解,和3-MA结合mg - 132在无血清媒体进一步推迟。这些结果可能意味着生存素蛋白通过蛋白酶体和自噬降解,或者生存素的物理相互作用与另一个蛋白质抑制自噬时防止生存素在媒体无血清蛋白酶体降解。生存素已经报告给身体与Beclin - 1 ( 25),和分子网络由Beclin 1调节自噬和凋亡[ 26]。生存素蛋白是否稳定直接影响物理协会autophagy-associated蛋白质如Beclin 1和/或其他蛋白质尚未确定仍有待确定。

 5。结论

从目前的研究结果表明,自噬的刺激serum-deprivation增强易感性苏灵大sulfide-induced细胞凋亡,而基底条件下自噬在血清可抑制苏灵大sulfide-induced细胞凋亡,在HT-29结肠癌细胞。这表明细胞自噬可以支持prosurvival或赞成的结果取决于他们获得的应力刺激,和他们的物理环境。自噬诱导有显著影响生存素半衰期,和易感性HT-29细胞苏灵大sulfide-induced细胞凋亡与降低生存素在各种条件下的半衰期。这表明修改因素,如生存素,调节自噬和凋亡过程可以确定癌细胞凋亡刺激的敏感性。

 承认

这项工作由弗吉尼亚州绩效评审奖,和SCIRE小格兰特研究。邱。

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