ECAM 以证据为基础的补充和替代医学 1741 - 4288 1741 - 427 x Hindawi 10.1155 / 2020/4095967 4095967 研究文章 断面公式有一个保护作用在Pressure-Overloaded大鼠左心室重构 刘 钱 1 2 https://orcid.org/0000 - 0002 - 6880 - 844 x 曲 Hui-Yan 1 https://orcid.org/0000 - 0001 - 6508 - 7942 周 华 1 2 荣 景锋英 1 https://orcid.org/0000 - 0003 - 4067 - 589 x 杨 Tian-Shu 1 徐 Ji-Jie 1 2 https://orcid.org/0000 - 0003 - 4283 - 9667 杨 小李 1 https://orcid.org/0000 - 0002 - 7127 - 6536 局域网 甄蛰 1 Mukudai Yoshiki 1 心血管疾病的中医 曙光医院隶属于上海中医药大学 上海201203 中国 shutcm.edu.cn 2 中医心血管研究所 曙光医院隶属于上海中医药大学 上海201203 中国 shutcm.edu.cn 2020年 30. 5 2020年 2020年 05年 12 2019年 08年 04 2020年 12 05年 2020年 30. 5 2020年 2020年 版权©2020钱氏et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。断面公式(LHF)——中药含有Cervus日本Temminck,红花L素。,黄芪(费)。知母。var. mongholicus (。)萧,种植党参(法语)。Nannf。,Cinnamomum cassia Presl, and Lepidium apetalum Willd—is used in the treatment of heart failure, but little is known about its mechanism of action. We have investigated the effects of LHF on antifibrosis. 方法。48 SD雄性大鼠随机分为6组( n= 8)、模型组、sham-operation集团联合培组(0.036毫克/毫升),LHF高剂量(LHF-H, 1.44 g / ml), LHF中间剂量(LHF-M, 0.72 g / ml),和LHF低剂量(LHF-L, 0.36 g / ml)。除了sham-operation组,另一组接受腹部动脉收缩建立心肌肥厚模型。HW和LVW测量计算LVW / BW和HW / BW。利用ELISA检测血清BNP浓度。以挪士的表情,TGF - β1,caspase-3、VEGF和VEGFR2心脏组织中被免疫印迹分析评估。信使rna的表达以挪士、Col1a1 Col3a1 TGF - β1、VEGF和心里VEGFR2组织通过rt - pcr检测。标本被沾hematoxylin-eosin(他)和picrosirius红染色观察的形态特征和胶原纤维和III光学显微镜下的心肌。 结果。LHF显著降低大鼠的HW / BW和LVM / BW,和法国巴黎银行(BNP水平LHF-treated组与模型组相比。组织病理学和pathomorphological胶原纤维的变化我三世表明LHF抑制在心力衰竭大鼠心肌纤维化。治疗LHF调节以挪士表达式在心脏组织和表达下调Col1a1, Col3a1 TGF - β1,caspase-3、VEGF和VEGFR2表达式。 结论。LHF能改善左心室重构在pressure-overloaded心力衰竭大鼠模型;这种心脏保护的能力可能是由于心脏纤维化和减毒细胞凋亡。调节以挪士表达和表达下调Col1a1、Col3a1 TGF - β1 caspase-3 VEGF, VEGFR2表达式可能发挥作用在观察LHF保护作用。

 中国国家自然科学基金 81803881 81673753 上海市卫生委员会 20184 y0236 1。介绍

心力衰竭(HF)的临床症状表现为心脏功能下降;这是大多数心血管疾病的最终目的地。高频折磨每年数以百万计的患者。心力衰竭的发生率高,预后很差。中国的心力衰竭是一种严重的公共问题。目前,心血管疾病死亡的主要原因是在中国城乡居民( 1]。流行病学调查显示,成人心力衰竭的流行率是0.9% 2]。高血压(HTN)是最常见的心血管疾病之一,影响了全球9.72亿人( 3]。此外,HTN是心力衰竭患者最常见的前提条件。在心血管健康的一项研究中,与高频HTN是82%的比例选择并存病( 4]。在中国心脏衰竭注册研究中,有4649名患者(54.6%)高频HTN 8516 HF患者( 5]。因此,研究具有重要意义治疗心脏衰竭引起的高血压。由于长期高血压,HTN最终将导致心脏功能障碍与左心室肥大,心肌纤维化和进一步促进心室重塑。心肌纤维化是心力衰竭的主要病理改变。心力衰竭的发病,胶原沉积增加,导致纤维化。最近的研究表明,有许多经典的因素和途径导致心肌纤维化和心室重塑的规定,如以挪士,Col1a1 Col3a1 TGF - β1,VEGF / VEGFR2途径[ 8, 9]。然而,目前没有有效的antifibrotic代理打断这个途径的特定方面。识别信号通路和蛋白质调节治疗肥厚性增长和纤维化将提供有用的信息旨在防止高频的发展。

在中国,中药(TCM)是一种有效的治疗心力衰竭、和高频的类别属于“heart-kidney阳虚、血瘀”( 8]。断面公式(LHF,中国国家专利号ZL2006101473050)是一种实证化合物处方的几个常见的中医草药。在多中心临床研究(中国临床试验注册号码 chictr委员会- 13003242LHF),心力衰竭治疗3个月后表现出优越的性能跟踪对左心室射血分数(LVEF),部分缩短(FS)、中风量(SV)、纽约心脏协会功能分类、明尼苏达生活质量分数,和6分钟步行距离的测试( 9]。最近的研究表明,LHF产生心脏保护效应通过多种途径参与anti-renin-angiotensin系统(ras), antifibrosis和心肌代谢。LHF被证明能显著提高等离子体ACE2-Ang(1 - 7)轴和降低Angⅱ水平与心衰大鼠( 10]。此外,LHF抑制心肌纤维化以旁分泌的方式通过激活gp130 / JAK2 / STAT3通路在心肌细胞( 11]。Col1a1和Col3a1编码心脏胶原蛋白的主要组件。TGF - β1影响第三我胶原蛋白和胶原蛋白的表达,从而导致心肌间质纤维化。VEGF / VEGFR2通路参与心肌细胞肥大和促进心室重塑。以挪士活动增强和提高水平无法抑制心脏重构高频所致。他们都是古典因素和途径导致心肌纤维化的规定和心室重塑。Caspase-3是一种重要的蛋白质与心肌细胞凋亡有关。尚不清楚LHF可以抑制心肌纤维化和这些经典的因素减弱细胞凋亡等其他方式和途径。在这项研究中,我们第一次调查的antifibrotic疗效LHF引起的心力衰竭大鼠的腹主动脉收缩。然后我们决定背后的机制的保护作用LHF通过检查它的影响以挪士,Col1a1 Col3a1 TGF - β1、caspase-3和VEGF / VEGFR2通路,以及它们之间的关系。

 2。方法 2.1。材料

培(一种ACE抑制剂)从Servier购买(天津)制药有限公司有限公司(中国),和法国巴黎检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所(中国)。逆转录酶(RT)包买来热费希尔科学公司(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)。Bicinchoninic酸(BCA)试剂盒购自热费希尔科学公司(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)。

 2.2。制备特殊断面的公式

创建一个剂量的断面的公式是在桌子上 1。断面公式由9 g (Cervus日本Temminck(批号2012102601)、9克红花l .素(批号13011401)、30克,黄芪(费)。知母。var. mongholicus (。)萧(批号2013011504)、党参30克(法国)。Nannf。(批号2012122701)、9克肉桂Presl(批号2012120212)、和20克、Willd(批号11111401)( 11]。草药都是根据生产的中华人民共和国药典》(2010年)。所有的草药,除了Cervus日本Temminck鹿角,被添加到10倍的水,浸泡30分钟,“煮45分钟(100°C), 6号筛,过滤,滤液收集。草药的残留继续被添加到8倍的水,“煮30分钟(100°C),过滤和收集。汤总,解压,集中的相对密度1.02 - -1.07 (60±2°C)。冷却到室温后,汤在高速离心机(10000 r / min, 10分钟)。粉Cervus日本Temminck鹿角(超过100网屏)和10%糊精混合添加到离心后上清液。最后,利用喷雾干燥干燥和提取颗粒(1 g LHF颗粒含有7.92克的草药混合物)。LHF颗粒是由原上海中医药大学的技术。颗粒是溶解在水中使用前原油药物浓度为0.72 g / ml。

体重变化、心脏重量、左心室重量,心脏重量/体重(HW / BW),和左心室重量/体重(LVW / BW)。

集团 n 体重(g) 心脏重量(毫克) 左心室重量(毫克) HW / BW(毫克/克) LVW / BW(毫克/克)
虚假的 8 520.13±5.99 1251.19±43.65 1047.59±32.08 2.41±0.20 2.01±0.04
模型 7 493.00±4.97 1489.22±57.09 1212.19±25.90 3.02±0.09<年代up>Δ 2.46±0.03<年代up>Δ
联合培 7 507.14±3.85 1384.54±21.26 1145.52±24.61 2.73±0.03 Δ ∗ 2.26±0.03 Δ ∗
LHF-H 8 503.25±4.46 1399.20±34.08 1161.63±42.81 2.78±0.04 Δ ∗ # # 2.31±0.07 Δ ∗
LHF-M 7 504.43±4.86 1433.47±34.72 1200.07±42.78 2.84±0.04 Δ ∗ #★ 2.38±0.06 Δ ∗ #
LHF-L 6 501.67±3.67 1407.26±23.89 1174.83±23.87 2.81±0.03 Δ ∗ #▲ 2.34±0.03 Δ ∗ #

注:虚假的:对照组;模型:模型组;培培组;LHF-L:低剂量LHF组;LHF-M:中等剂量LHF组;LHF-H:高剂量LHF组。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 Δ P < 0.01 而虚假的; ∗ P < 0.01 与模型;<年代up># P < 0.01 ,<年代up># # P < 0.05 相比之下,培; ★ P < 0.05 相比之下,LHF-H; ▲ P < 0.05 相比之下,LHF-M。分析组间体重和左心室重量符合常态和方差的同质性,所以我们用单向方差分析测试。体重( F:26.185, P < 0.01 );左心室重量( F:23.655, P < 0.01 )。分析各组心脏重量,HW / BW和LVW / BW不符合正常和方差的同质性,所以我们用秩和检验的两个独立的样本,获得了 Z价值。心脏重量( P < 0.01 );HW / BW ( P < 0.01 );LVW / BW ( P < 0.01 )。

 2.3。联合培

培平板电脑(4毫克/片)被用于本研究。培平板电脑(国家药品许可H20034053数量)从Servier购买(天津)制药有限公司(中国)。平板电脑被压碎,受到药典100目筛,并添加到重蒸馏的水。最后,培制定0.036毫克/毫升的浓度。

 2.4。动物模型和管理

男性雄性sd大鼠中(体重200 - 230克)是由上海中医药大学动物实验中心。所有动物实验协议依法进行指导的护理和使用实验动物发表的美国国立卫生研究院(NIH出版物85号- 23,1996年修订)和动物伦理委员会的批准上海中医药大学(SZY2013037数量)。所有老鼠都成长于上海中医药大学动物实验中心。喂养的房间的温度保持在20°C∼25°C。相对湿度是50%∼65%之间。饲养环境很安静,没有噪音被允许。封闭的喂养室采用了光定时装置提供适当的(12 h, 12小时黑暗)昼夜光线变化周期。心力衰竭模型建立了腹主动脉收缩(AAC)如前所述 12];54老鼠纳入本研究。简单地说,老鼠与戊巴比妥钠麻醉由腹腔内注射(45毫克/公斤)。上面的腹主动脉是解剖两个肾动脉。穿刺针(0.7毫米外径)放在一起和结扎腹主动脉线程4。然后,穿刺针吸引了部分结扎动脉结扎以60% - -70%程度的收缩。4周后,收缩压> 140毫米汞柱,这表明高血压模型是成功的( 13]。总共11%的老鼠死于实验,和其余48个幸存的老鼠被随机分配到第二组:模型组;sham-operation组;培群;和高剂量(LHF-H),中(LHF-M)和低剂量(LHF-L) LHF组,每组8老鼠。sham-operation组作为对照组没有高频,那里的老鼠做过一个类似的过程,但是没有实际的腹主动脉结扎。大鼠4周后手术被认为是高频。从第五周,模型组和sham-operation组是饮用水处理;培集团是培处理;LHF的高、中、低剂量组治疗高,中间,和低剂量的LHF分别。 According to the human and animal surface area of the equivalent dose conversion ratio table, the concentrations of LHF in high, middle, and low doses of LHF groups were 1.44 g/mL, 0.72 g/mL, and 0.36 g/mL, respectively. Rats were given by gavage once a day, 6 times a week. All animals were intragastrically administered by intragastric syringe and fed under the same condition for 8 weeks. The head of the rat was fixed by grasping the skin of the back and neck behind the two ears of the rat with thumb and index finger of the left hand. The syringe was taken with the right hand and the needle was inserted into the pharynx from the left corner of the mouth of the rat. Along the back wall of the upper jaw, the front end of the needle was moved gently into the esophagus without any sense of conflict, and then the needle was inserted into the stomach and the needle core was pushed, and the test substance was injected. During treatment, 1 rat in the model group died of heart failure; 1 rat in the perindopril group died of heart failure; 1 rat in the middle-dose (LHF-M) LHF group died of heart failure; 1 rat in the low-dose (LHF-L) LHF group died of heart failure; 1 rat in the low-dose (LHF-L) LHF group died of improper gavage. There were 43 rats at the end of the treatment.

 2.5。心脏重量指数和左心室质量指数

治疗8周后,动物麻醉从腹主动脉,采集血液和心脏迅速移除和冷生理盐水冲洗,和水被滤纸吸收。多余的组织,如心包和血管周围的心,被免职,水被滤纸吸收。心被拖累平衡后,左心室部分来自整个心脏重量,然后立即投入液氮贮存。整个心脏重量(HW)和左心室重量(LVW)测量计算左心室质量指数(LVW / BW)和心脏重量指数(HW / BW)使用以下公式(表 1): (1) 心脏重量指数 = 心脏重量 HW 体重 BW , 左心室质量指数 = 左心室重量 LVW 体重 BW 。

2.6。血清脑利钠肽

收集血液样本从腹主动脉和腌2小时。离心后的血清收集。生物素双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清脑利钠肽(BNP)浓度。吸光度(光密度、OD)的酶读者阅读450海里。BNP浓度的样品是由标准曲线计算(表 2)。

脑利钠肽(BNP)的变化。

集团 n 法国巴黎(ng / L)
虚假的 8 393.95±12.30
模型 7 785.83±5.85<年代up>Δ
联合培 7 511.81±9.65 Δ ∗
LHF-H 8 539.40±16.14 Δ ∗ #
LHF-M 7 555.34±12.40 Δ ∗ #★★
LHF-L 6 567.33±12.32 Δ ∗ #★
F 828.289
P < 0.01

注:虚假的:对照组;模型:模型组;培培组;LHF-L:低剂量LHF组;LHF-M:中等剂量LHF组;LHF-H:高剂量LHF组。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。<年代up>Δ P < 0.01 而虚假的; ∗ P < 0.01 与模型; # P < 0.01 相比之下,培;<年代up>★ P < 0.01 ,<年代up>★★ P < 0.05 相比之下,LHF-H。

 2.7。免疫印迹分析

以挪士的表情,TGF - β1,caspase-3、VEGF和VEGFR2心脏组织中被免疫印迹分析评估。简单地说,心肌组织切成小碎片。总共150 - 250 μl溶解产物被添加到每个20毫克组织,和匀浆均质,直到完全溶解。离心后的上层清液收集(4°C, 12000 rpm 15分钟)。蛋白质的提取、分离和转移到聚乙二烯二氟化物薄膜(PVDF)。5%脱脂奶粉的膜被封锁在一夜之间在4°C。这些墨迹与抗体反应以挪士(1:500年,Abcam Ab50010)、TGF - β1(1:800年,Abcam Ab92486), caspase-3(1: 500年,春秋国旅,14220 t), VEGF(1: 1000年,Abcam Ab46154)和VEGFR2(1: 1000年,Abcam Ab11939)一夜之间在4°C,然后用二次抗体在37°C 1小时。这些墨迹的灰度信号可视化,然后分析了使用图像分析。

 2.8。实时聚合酶链反应

信使rna的表达以挪士、Col1a1 Col3a1 TGF - β1、VEGF和VEGFR2在心脏组织衡量定量实时聚合酶链反应(rt - pcr)。总RNA分离试剂盒试剂(美国表达载体,1596 - 026)。PCR在下列条件下进行:消除在37°C DNA总RNA是30分钟,然后EDTA (1 μL)举行65°C 10分钟。逆转录反应在37°C程序进行60分钟,5分钟85°C, 4°C为5分钟。准备的cDNA放大了PCR在95°C 10分钟,其次是40周期在95°C 15秒和60°C 45 s。然后,反应过程是在95°C 15年代,60°C, 1分钟15秒95°C, 60°C 15 s。我们使用了GAPDH基因作为内部参考和ΔCT方法分析结果。引物序列见表 3。

正向和反向引物序列用于实时PCR。

基因 向前 反向
以挪士 5′CTTTCGGAAGGCGTTTGAC3′ 5′AACTCTTGTGCTGCTCAGG3′
COL1A1 5′TCAAGATGTGCCACTCTG3′ 5′ACCTTCGCTTCCATACTC3′
COL3A1 5′GTCCACAGCCTTCTACAC3′ 5′TCCGACTCCAGACTTGAC3′
TGF - β1 5′AAGGACCTGGGTTGGAAGTG3′ 5′TGGTTGTAGAGGGCAAGGAC3′
VEGF 5′GAGTCTGTGCTCTGGGATTTG3′ 5′TCCTGCTACCTCTTTCCTCTG3′
VEGFR2 5′TTACTGTCCAGCCTGCTAC3′ 5′CCAAAGAGCGTCCAAGTTC3′
GAPDH 5′GTCGGTGTGAACGGATTTG3′ 5′TCCCATTCTCAGCCTTGAC3′
2.9。组织形态学观察

左心室心肌和脑室隔分开,以10%甲醛溶液固定,在日冕部分,嵌入在石蜡,切块。最后,标本沾hematoxylin-eosin(他)和picrosirius红染色观察的形态特征和胶原纤维和III光学显微镜下的心肌。检测是由曙光医院病理部门(数字 1- - - - - - 4)。

组织形态学观察代表图像显示心肌细胞和间质纤维化(他染色,100×)。(一)模型组;(b) LHF-L组;(c) LHF-M组;(d)培群;(e) LHF-H组;(f)虚假的组。

组织形态学观察代表图像显示心肌细胞和间质纤维化(picrosirius红染色,100×)。(一)模型组;(b) LHF-L组;(c) LHF-M组;(d)培群;(e) LHF-H组;(f)虚假的组。

组织形态学观察代表图像显示心肌细胞和间质纤维化(胶原纤维我100×)。(一)模型组;(b) LHF-L组;(c) LHF-M组;(d)培群;(e) LHF-H组;(f)虚假的组。

组织形态学观察代表图像显示心肌细胞和间质纤维化(胶原纤维三世100×)。(一)模型组;(b) LHF-L组;(c) LHF-M组;(d)培群;(e) LHF-H组;(f)虚假的组。

 2.10。统计分析

统计测试用SPSS 21.0进行。结果表示为意味着±standarddeviation ( x ¯ ± 年代 )。单向方差分析测试时使用组间分析符合常态和方差的同质性。LSD事后的统计检验后使用方差分析。迷幻药是用来比较组。秩和检验分析组间时,使用两个独立样本不符合正常和方差的同质性。 P 小于0.05的值被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。LHF LV重塑改善心衰大鼠

HW / BW和LVW / BW是每个LHF组和联合培组明显低于模型组( P < 0.01 ),但高于虚假的集团( P < 0.01 )。培组表现出更低的HW / BW和LVW / BW与每个LHF组( P < 0.01 )。HW / BW LHF-H组低于LHF-M组( P < 0.05 )。LHF-H之间没有统计上的显著差异,LHF-M, LHF-L组LVW / BW(表 1)。

 3.2。影响脑利钠肽(BNP)

法国明显高于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。所有LHF组和联合培集团有效地降低小鼠BNP与高频与模型组相比 P < 0.01 )。比LHF-M LHF-H集团更有效地减少BNP ( P < 0.05 )和LHF-L ( P < 0.01 )组(表 2)。

 3.3。蛋白表达在心力衰竭大鼠心肌细胞肥厚性和LHF的影响

以挪士的蛋白表达水平,TGF - β1,caspase-3、VEGF和VEGFR2被免疫印迹分析(数据检测 5(一个), 5 (c), 5 (e), 5 (g), 5(我))。以挪士的表达水平显著低于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 ),TGF - β1和VEGF蛋白水平明显高于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。VEGFR2蛋白水平明显高于模型组,联合培组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。以挪士的表达水平,TGF - β1,VEGFR2蛋白质在每个LHF组明显不同,培组与模型组相比,( P < 0.01 );VEGF蛋白的表达水平明显不同LHF-H集团LHF-M组和联合培组与模型组相比,( P < 0.01 )。以挪士蛋白质的表达水平较低的LHF-M组和LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 );TGF -的表达水平 β1、VEGF和VEGFR2蛋白质更高LHF-M组和LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 )。caspase-3蛋白质的表达水平高于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。caspase-3蛋白质的表达水平显著低于LHF-H组较模型组( P < 0.01 )和较低的培组与模型组相比,( P < 0.05 )。caspase-3蛋白质的表达水平更高LHF-M组和LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 )(表 4和 5;数据 5 (b), 5 (d), 5 (f), 5 (h), 5 (j))。

蛋白表达pressure-overloaded心力衰竭大鼠的心肌组织。(一)免疫印迹分析以挪士在心肌组织蛋白表达。(b)的量化以挪士通过微蛋白表达在心肌组织。(c)免疫印迹分析TGF - β1蛋白表达在心肌组织。(d)量化的TGF - β由微1蛋白表达在心肌组织。(e)的免疫印迹分析心肌组织中VEGF蛋白表达。(f)在心肌组织中VEGF蛋白表达的量化微。(g)的免疫印迹分析VEGFR2蛋白表达在心肌组织中。(h)量化VEGFR2微蛋白表达在心肌组织。(我)的免疫印迹分析caspase-3心肌组织中蛋白表达。(j)量化caspase-3微蛋白表达在心肌组织。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。<年代up>Δ P < 0.01 ,<年代up>ΔΔ P < 0.05 而虚假的; ∗ P < 0.01 , ∗ ∗ P < 0.05 与模型;<年代up># P < 0.01 相比之下,培;<年代up>★ P < 0.01 相比之下,LHF-H;<年代up>▲ P < 0.01 ,<年代up>▲▲ P < 0.05 相比之下,LHF-M。

以挪士,TGF - β1、VEGF和VEGFR2蛋白表达不同的实验组,每组的心肌组织。

集团 以挪士 TGF - β1 VEGF VEGFR2
虚假的 9561.96±33.16 3133.25±73.43 5203.72±30.36 3537.75±35.46
模型 1597.54±17.20<年代up>Δ 15123.09±324.21<年代up>Δ 12228.70±265.10<年代up>Δ 9925.97±33.22<年代up>Δ
联合培 5064.68±53.09 Δ ∗ 6719.59±98.97 Δ ∗ 9390.58±194.44 Δ ∗ 4661.49±53.39 Δ ∗
LHF-L 1942.86±28.25 Δ ∗ #★▲ 9283.95±65.31 Δ ∗ #★▲ 12163.34±319.95<年代up>Δ#★▲ 8712.10±31.46 Δ ∗ #★▲
LHF-M 5920.88±33.99 Δ ∗ #★ 4994.44±94.47 Δ ∗ #★ 8713.85±176.83 Δ ∗ #★ 5092.42±63.87 Δ ∗ #★
LHF-H 7623.87±37.84 Δ ∗ # 3805.52±53.03 Δ Δ ∗ # 7762.68±130.11 Δ ∗ # 3571.35±108.94 ∗ #
F 23205.479 2848.484 502.776 6063.123
P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01

注:虚假的:对照组;模型:模型组;培培组;LHF-L:低剂量LHF组;LHF-M:中等剂量LHF组;LHF-H:高剂量LHF组。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 Δ P < 0.01 , Δ Δ P < 0.05 而虚假的; ∗ P < 0.01 与模型; # P < 0.01 相比之下,培;<年代up>★ P < 0.01 相比之下,LHF-H;<年代up>▲ P < 0.01 相比之下,LHF-M。

Caspase-3蛋白表达不同的实验组,每组的心肌组织。

集团 Caspase-3
虚假的 7970.00±768.09
模型 43367.67±2851.72<年代up>Δ
联合培 37305.67±1761.21 Δ ∗ ∗
LHF-H 17494.33±5575.60 Δ ∗ #
LHF-M 38680.00±1566.17 Δ ★
LHF-L 45671.67±1120.39<年代up>Δ#★▲▲
F 90.841
P < 0.01

注:虚假的:对照组;模型:模型组;培培组;LHF-L:低剂量LHF组;LHF-M:中等剂量LHF组;LHF-H:高剂量LHF组。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 Δ P < 0.01 而虚假的; ∗ P < 0.01 , ∗ ∗ P < 0.05 与模型; # P < 0.01 相比之下,培; ★ P < 0.01 相比之下,LHF-H; ▲▲ P < 0.05 相比之下,LHF-M。

 3.4。信使rna表达心力衰竭大鼠心肌细胞肥厚性和LHF的影响

实时PCR用于检查的mRNA表达COL1a1, COL3a1,以挪士,TGF - β1、VEGF和VEGFR2。以挪士表达显著低于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。COL3a1、VEGF和VEGFR2蛋白质含量明显高于模型组,联合培集团LHF-H组、LHF-M组和LHF-L组与虚假的集团( P < 0.01 )。以挪士,COL1a1的表达水平,COL3a1 TGF - β1,VEGFR2蛋白质在每个LHF组明显不同,培组与模型组相比,( P < 0.01 )。VEGF蛋白的表达水平明显不同于LHF-H集团LHF-M组和联合培组与模型组相比,( P < 0.01 )和不同LHF-L组与模型组相比,( P < 0.05 )。以挪士蛋白质的表达水平显著低于LHF-M组和LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 );的表达水平COL1a1、COL3a1 TGF - β1,VEGFR2蛋白显著高于在LHF-M组和LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 )。VEGF蛋白的表达水平明显高于LHF-L组相比LHF-H集团( P < 0.01 LHF-M组)和更高的比LHF-H ( P < 0.05 )(表 6;数据 6(一)- - - - - - 6 (f))。

Col1a1 Col3a1,以挪士,TGF - β1、VEGF和VEGFR2相对表达心肌组织实验不同的群体。

集团 Col1a1 Col3a1 以挪士 TGF - β1 VEGF VEGFR2
虚假的 0.015±0.002 0.010±0.001 0.055±0.003 0.020±0.002 0.014±0.001 0.004±0.000
模型 0.080±0.011<年代up>Δ 0.037±0.002<年代up>Δ 0.019±0.001<年代up>Δ 0.124±0.017<年代up>Δ 0.063±0.008<年代up>Δ 0.015±0.001<年代up>Δ
联合培 0.029±0.003 Δ Δ ∗ 0.016±0.001 Δ ∗ 0.039±0.003 Δ ∗ 0.047±0.009 Δ ∗ 0.040±0.004 Δ ∗ 0.007±0.001 Δ ∗
LHF-L 0.063±0.006 Δ ∗ #★▲ 0.031±0.001 Δ ∗ #★▲ 0.026±0.002 Δ ∗ #★▲▲ 0.092±0.007 Δ ∗ #★▲ 0.051±0.003 Δ ∗∗ # #★▲▲ 0.012±0.001 Δ ∗ #★▲
LHF-M 0.045±0.007 Δ ∗ #★ 0.023±0.001 Δ ∗ #★ 0.030±0.002 Δ ∗ #★ 0.067±0.005 Δ ★ ∗# # 0.042±0.005 Δ ∗ ★★ 0.009±0.001 Δ ∗ # #★★
LHF-H 0.022±0.001 ∗ 0.014±0.001 Δ ∗ 0.044±0.003 Δ ∗ # # 0.037±0.005 Δ Δ ∗ 0.031±0.006 Δ ∗ 0.006±0.000 Δ ∗
F 51.979 191.059 83.422 56.008 34.994 81.270
P < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01 < 0.01

注:虚假的:对照组;模型:模型组;培培组;LHF-L:低剂量LHF组;LHF-M:中等剂量LHF组;LHF-H:高剂量LHF组。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 Δ P < 0.01 , Δ Δ P < 0.05 而虚假的; ∗ P < 0.01 , ∗ ∗ P < 0.05 与模型; # P < 0.01 , # # P < 0.05 相比之下,培; ★ P < 0.01 , ★★ P < 0.05 相比之下,LHF-H; ▲ P < 0.01 , ▲▲ P < 0.05 相比之下,LHF-M。

信使rna表达pressure-overloaded心力衰竭大鼠的心肌组织。(一)实时PCR COL1a1 mRNA表达心肌组织。(b)的实时PCR COL3a1 mRNA表达心肌组织。(c)的实时PCR TGF - β1 mRNA表达心肌组织。(d)的实时PCR以挪士mRNA表达心肌组织。(e)实时PCR在心肌组织中VEGF mRNA的表达。(f)的实时PCR VEGFR2 mRNA表达心肌组织。数据表示为平均值±标准偏差(SD)。 Δ P < 0.01 , Δ Δ P < 0.05 而虚假的; ∗ P < 0.01 , ∗ ∗ P < 0.05 与模型; # P < 0.01 , # # P < 0.05 相比之下,培;<年代up>★ P < 0.01 ,<年代up>★★ P < 0.05 相比之下,LHF-H;<年代up>▲ P < 0.01 ,<年代up>▲▲ P < 0.05 相比之下,LHF-M。

 3.5。对心肌纤维化的影响

虚假的组表现出正常的心肌细胞,心肌纤维排列顺序和他或picrosirius红染色均匀。模型组心肌细胞肿胀,增生的胶原纤维的心肌和炎性细胞浸润。模型组心肌细胞显示异常与虚假的集团相比,虽然每个LHF组和联合培组比模型组。LHF-H组在减少肿胀的细胞更有效,减少炎症细胞入侵,防止胶原蛋白增生与培集团(数字 1和 2)。

很少有棕色和黄色我三世胶原纤维的骗局。大量的棕色和黄色我三世与不规则的胶原纤维安排观察模型组。与模型组相比,胶原纤维减少在每个LHF组和联合培组,但是显示异常而虚假的集团。LHF-H组更强的数量在减少,我三世在心肌胶原纤维,改善排列的障碍与培(数字 3和 4)。

 4所示。讨论

LHF是一个中医,是根据中医理论发展起来的。药理研究发现,LHF包含许多活性物质,如hydroxysafflor黄色,套,肉桂酸,codonolactone, quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden,芒柄花黄素,calycosin [ 11]。质量控制,指纹谱LHF是由UHPLC-Q Exactive系统(美国热,圣何塞,CA)(图 7)。LV改造后高血压导致心力衰竭。有益的LHF LV改造曾被观察到在心力衰竭患者 9]。我们的研究表明,LHF可以改善心脏重构通过抑制fibrosis-related基因表达。

总离子色谱(TIC)和select-ion色谱LHF提取样本,(a)的混合标准溶液,1.25 μg / ml;(b)样品溶液,8.00毫克/毫升(固定相:ACQUITY UPLC高速钢T3(2.1毫米×100毫米,1.8 μ米);流动相:乙腈水(a)和(b)在梯度(时间、最小/ b %: 0/95, 25/5);流量:0.3 mL / min)。峰没有:(1)肉桂酸;(2)codonolactone;(3)芒柄花黄素;(4)calycosin;(5)hydroxysafflor黄色;(6)quercetin-3-O-b-D-glucose-7-O-b-D-gentiobiosiden;(7)套。

HW / BW反映心脏肥大和LVM / BW尤其反映了LV肥大。心脏肥大,只有当伴随着纤维化在装修期间,会导致高频( 14]。我们的数据表明,HW / BW和LVM / BW LHF减少每组和联合培组与模型组相比。因此,我们的研究结果表明,LHF能够抑制LV重构与心衰大鼠。

法国巴黎是一个经典的和高度敏感的心肌功能障碍的标志,这是发布的心脏心室反应室压力和/或体积的变化。先前的研究表明,法国巴黎的增加与高频( 15]。法国巴黎的增加表达一直连接到LV的重构过程( 16]。每个LHF组(特别是LHF-H集团)和培组显示显著降低BNP水平与心衰大鼠。因此,LHF pressure-overloaded高频老鼠可以改善心脏功能。

Caspase-3是一种重要的蛋白质与心肌细胞凋亡有关。激活caspase-3报道心肌细胞凋亡的过程中( 17]。LHF-H集团和LHF-M集团(特别是LHF-H集团)和培组显示显著降低caspase-3水平有高频的老鼠。我们发现LHF(特别是LHF-H集团)可以通过下调减弱凋亡caspase-3表达式。

心肌细胞动作电位以挪士表示,在心血管系统起着重要的作用。以挪士是一个重要的信号分子参与内源性一氧化氮(NO)的生产( 18]。内生没有展品antimyocardial肥大效果和防止心室重构( 19]。以挪士活动增强和提高水平无法抑制心脏重构高频所致。实时聚合酶链反应和免疫印迹分析显示,以挪士是在每个LHF组显著升高(尤其是LHF-H集团)和培组与模型组相比。我们发现LHF能阻止心室重构通过增强以挪士活动。

在心肌间质胶原纤维沉积是一个具有里程碑意义的重构过程中看到各种心血管疾病的病因。pressure-overloaded心脏,间质纤维化引起心脏功能障碍( 20.]。Col1a1和Col3a1明确表示在成纤维细胞和心脏胶原蛋白的编码主要组件 21]。我们的研究结果表明,与模型组相比,Col1a1和Col3a1表达减少每个LHF组(尤其是LHF-H集团)和培组。这些发现表明LHF可以通过减少缓解间质纤维化Col1a1的表达和Col3al鼠心肌组织。

TGF - β1是一个生成的细胞因子和纤维母细胞增殖中起着重要的作用,尤其是在纤连蛋白和胶原蛋白。越来越多的证据表明,TGF - β1参与心脏纤维化[ 22,过度的TGF - β1导致心肌间质纤维化。近年来,许多研究已经证实,抑制TGF - β1可以抑制心肌纤维化[ 23, 24]。TGF - β心肌细胞动作电位1表达和成纤维细胞,可以增加I型,三世胶原、纤粘连蛋白mRNA和蛋白表达。每个LHF组(特别是LHF-H集团)和培组显著抑制TGF - β1表达与模型组相比,LV心肌。

纤维胶原蛋白类型我和III是心脏细胞外基质(ECM)的主要组件,这是与心肌纤维化有关。研究表明,TGF - β1影响胶原蛋白的表达和胶原蛋白3 ( 25]。I型胶原的含量决定了心肌的刚度和III型胶原的含量决定了合规的心肌。通过心肌细胞和间质纤维化的组织形态学观察,我们发现LHF能抑制胶原蛋白的增生。心肌纤维化的病理改变是心室重构。

因此,LHF可以减少Col1al的表达和Col3al鼠心肌通过抑制TGF -的表达 β1,最终减少了心肌间质纤维化。

VEGF被认为是最有效的血管生成因子。一些研究表明,VEGF有利于心脏通过抑制纤维化( 26, 27),但越来越多的证据表明,超表达VEGF对心脏有害的 28, 29日]。VEGF参与了心肌细胞肥大和促进心室重构( 30.]。在高频,ras系统被激活,Angⅱ在大量合成和释放,从而导致内皮功能障碍,减少的合成。内源性没有展品antimyocardial肥大效果和防止心室重塑。适量的VEGF增加释放没有通过感应以挪士。VEGF修理受损的内皮细胞,抑制破坏子宫内膜的增厚,可以改善心室重构。心肌细胞肥厚性心力衰竭导致心肌缺血、缺氧,导致的高表达VEGF ( 31日]。VEGF的过度破坏心脏的脂肪代谢,引起心脏肥大,形成一个恶性循环,最终导致心力衰竭( 28]。VEGF受体2 (VEGFR2)属于VEGFR总科和表达心肌( 32]。VEGF及其受体结合在高频中发挥作用。我们的研究显示降低VEGF和VEGFR2表达LHF组(尤其是LHF-H集团)和培组与模型组相比。

因此,LHF可以增强以挪士活动和降低VEGF和VEGFR2表达式。我们假设LHF相对地抑制VEGF / VEGFR2信号通路通过刺激以挪士表达式。

在结果中,我们发现每个LHF组(特别是LHF-H集团)和培组显示显著降低BNP水平与心衰大鼠。LHF-H组明显不同于其他指标与模型组相比。我们的结论是,心力衰竭的治疗效果LHF-H组优于LHF-M和LHF-L组。

 5。限制

在这项研究中,我们发现LHF可以加强以挪士活动和降低VEGF和VEGFR2表达式。所以我们假设LHF相对地抑制VEGF / VEGFR2信号通路通过刺激以挪士表达式。然而,我们无法学习之间的通路以挪士和VEGF / VEGFR2更加深入。在未来,我们将更深入地阐明LHF的心脏保护。

 6。结论

总之,改善心室重构是延缓心衰进展的一个重要组成部分。心室重构包括心肌细胞重构和心肌间质重构。在目前的研究中,我们已经表明,LHF可以防止心脏纤维化的进展和LV重塑,这可能是由移植以挪士表达和表达下调Col1a1, Col3a1 TGF - β1、VEGF和VEGFR2表达式。LHF也可能减弱心肌细胞凋亡通过下调caspase-3表达保护作用中扮演一个角色。尽管LHF有限的信息和进一步的调查是必要的披露的精确分子机制的行动,我们的研究结果提供了一个高频的新治疗方案。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

 伦理批准

动物实验动物伦理委员会批准的协议是上海中医药大学(SZY2013037数量)。

 信息披露

钱氏和瞿杨惠妍co-first作者对本文。

 的利益冲突

作者宣称他们没有利益冲突,财务或其他。

 确认

这项工作得到了国家自然科学基金(国家自然科学基金委)(批准号81803881和81803881)和上海市卫生委员会(批准号20184 y0236)。

 补充材料

图形抽象。

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