十八个植物物种收集,以评估他们的抗菌、抗真菌、抗病毒、驱虫剂活动根据他们的使用在科学文献和原住民知识。树皮、树叶、果实或根所选的植物(表 1在尼泊尔)分别来自不同地区从2013年12月到2014年4月。植物的收集和识别的规则是根据植物资源,森林和环境,尼泊尔政府。所有收集到的植物材料都被专业分类学家的植物资源,和凭证标本 63年)沉积在全国植物标本和植物实验室、植物资源、森林和环境,尼泊尔政府。这些植物上的信息与他们的官方分类名称(根据植物列表: http://www.theplantlist.org),自主使用,使用部分(s),文学可用性和凭证数量如表所示 1。中收集的植物,没有或稀有物种濒临灭绝。

乙醇,甲醇,DMSO,增长媒体(组件),盐酸环丙沙星,咪康唑获得Sigma-Aldrich(比利时)。水从Milli-Q获得®积分超纯水净水系统(微孔)。

收集到的植物材料是用自来水彻底清洗和shade-dried在环境温度。样本干磨成粉末和电动搅拌器进行索氏提取使用极性溶剂(乙醇和甲醇)。提取是在旋转蒸发器蒸发压力降低到一个坚实的质量。所有的精华都保存在密封的小瓶,标签与适当的代码,并通过航空邮件运输从尼泊尔KU鲁汶,比利时、综合 在体外筛选。干提取被保持在4°C到分析。

的 在体外粗提物的抗菌活性评估使用面板的致病菌株包括革兰氏阳性细菌: 金黄色葡萄球菌(写明ATCC 6538, Rosenbach)和 英诺克李斯特菌(液化沼气11387),革兰氏阴性菌: 大肠杆菌(DH10B), 铜绿假单胞菌(PAO1), 沙门氏菌血清无性系种群。血清(写明ATCC 13076) 志贺氏杆菌sonnei(液化沼气10473),和一个真菌菌株: 白色念珠菌(SC5314)。(冻)存储、维护和准备工作文化的悬浮液进行后建立程序描述在我们先前的研究[ 64年]。

抗菌活性评估如我们之前所述研究[ 64年, 65年]。总之,双重的连续稀释的特工被准备在DMSO乘用无菌96孔采用板井。抗生素环丙沙星和咪康唑用作细菌和真菌,积极控制。细菌,5% DMSO溶液作为溶剂控制实验,而为 白念珠菌,2% DMSO溶液使用。麦克风被集成电路计算₅₀/集成电路_90年实验室Excel计算工具和表达为IC₅₀安特卫普大学的发展( http://www.leishrisk.net/leishrisk/userfiles/file/kaladrugr/sops/lab/labsop18_ic50tool.pdf)。

驱虫剂化验是乘96孔酶标与井在WMicrotracker (Phylumtech、阿根廷)装置,如我们之前所述研究[ 66年]。蠕虫的运动在每个测量每30分钟16 h WMicrotracker 20°C和记录。的比例的平均运动在16小时内蠕虫样本,DMSO控制相比,是用来计算相对打虫药活动。左旋咪唑(50 μ米)是用于每一板是一个积极的控制,和DMSO溶液作为溶剂控制。

抗病毒活性测试如前所述[ 65年, 67年]。最后,最大DMSO浓度最高的试验井示例输入(1%)被细胞耐受性良好。Rupintrivir被用作积极控制。所有数据被表示为EC₅₀,CC₅₀,如果。细胞毒性检测、植物提取物(只有那些显示抗病毒活性)由MTS方法进行评估。总之,相同的实验装置被用作抗病毒试验;除了细胞毒性测定,未受感染的文化孕育了一个串行的植物提取物稀释三天在37°C。“细胞毒性浓度计算CC₅₀或植物提取物的浓度要求细胞增殖减少50%相对于solvent-treated控制细胞的数量。公式用来计算细胞毒性活动% CPE = (OD_cc−OD植物提取物]/ OD_cc,OD_cc对应的光学密度未感染和未经处理的细胞培养和OD植物提取对应于OD未感染的文化,接受提取。此外,选择性指数(SI)被计算为CC的比率₅₀EC细胞生长₅₀(CC₅₀/电子商务₅₀)”( 65年, 67年]。

植物化学的分析通过TLC进行粗提取,如前所述,熊猫等。 65年]。薄层色谱板(尺寸2.5×7.5厘米,涂上硅胶60 F254,默克公司,德国)开发甲醇:二氯甲烷(95:5,v / v)环境温度(约20°C)和干在烤箱90°C 5分钟蒸发溶剂。板是可视化在紫外线(UV)光在254和360海里。后,同样的板是用于可视化的地方喷洒5%硫酸乙醇,紧随其后的是加热5分钟的100°C。植物化学物质被比较的初步确认射频值与文献数据和现货颜色。

因为有一个新的兴趣寻找植物性药物使用传统知识(表 1),我们测试了十八个原油ethanolic / methanolic植物提取物对微生物的面板:两个革兰氏阳性细菌( 金黄色葡萄球菌和 l . innocua),四个革兰氏阴性细菌( 大肠杆菌, 铜绿假单胞菌,血清, 美国sonnei),一个真菌物种: 白色念珠菌。18这些植物提取物,这些的 Clerodendrum serratum, Sapindus mukorossi, Ampelocissus tomentosa, Dicrocephala integrifolia, Boerhavia diffusa, 杜鹃arboreum,爵床adhatoda, 榄仁树属chebula活跃在各种各样的病原体为粗提取液浓度的1000 μ克/毫升(表 2)。进一步活跃的植物提取物系列稀释后,大部分的植物提取物(尤其是 美国mukorossi和d . integrifolia)迅速失去了他们的活动。这可能是由于低效力化合物,低浓度的化合物,或有色化合物的提取干涉光谱光度测量的端点在高浓度。然而,一些植物提取物,如 答:tomentosa和 Aleuritopteris anceps,值得注意的抗菌活性与显示 金黄色葡萄球菌(MIC 35 μ克/毫升和649年 μ分别为g / mL) 铜绿假单胞菌(MIC 15 μg / mL, 38 μ分别为g / mL)。此外 ,r . arboreum和 j . adhatoda被发现是活跃的反对 美国血清285年(麦克风 μ克/毫升和326年 μ分别为g / mL)(表 3)。

我们已经报道了antiprotozoal尼泊尔活动选择粗提取物的药用植物,发现三个活跃的物种: 芦苇vallatoria, Ampelocissus tomentosa(没有antiprotozoal活动之前报告),和 榄仁树属chebula( 63年]。此外,非选择性antileishmanial活动了 p .重楼, k . pinnata, 榄仁树属chebula( 63年]。受这些发现,也由传统的使用植物驱肠虫剂( 63年, 68年),我们测试的影响这些植物提取物的L4阶段的能动性 C。 线虫。我们使用此nonparasitic独立生存的线虫和生物模型来测试驱虫剂活动由于其低成本和容易获得的突变体和转基因菌株为功能基因组学和蛋白质组学研究以及调查关键信号事件和药物的相互作用及其顺从实验室文化的方法。此外, 秀丽隐杆线虫分类学的密切相关的亚目Strongylida,由几个重要经济动物寄生虫,如 Haemonchus contortus和 类圆线虫属stercoralis,导致人类和动物疾病( 69年]。药物筛选的自然宿主对每一个蠕虫病几乎是不可能的,一个昂贵的过程。因此,基于植物提取物影响的假设 秀丽隐杆线虫也可能影响其他(包括寄生线虫,我们筛选代理寄生线虫植物提取物 秀丽隐杆线虫。监控蠕虫可行性,我们使用WMicrotracker,设备实时监控寄生虫的运动使用红外光束。使用WMicrotracker在其他方法的优势在于它允许筛选大量的化合物在一个完全自动化的方式很简单,快速,label-free,高度可再生的。有趣的是,四个植物被发现是活跃的18个工厂测试: a . tomentosa b . albiflora pinnata, 和d . integrifolia。这四个植物显著降低 秀丽隐杆线虫能动性,与积极的控制(> 50%) (图 1 )。此外,植物等 b . diffusa重楼, t . chebula显示使用WMicrotracker温和抑制,但在显微镜下,这些提取物显示清晰的麻痹性活动。平均抑制较低;然而,非常好的活动被认为在过去4个小时的WMicrotracker运动记录,显示许多提取似乎缓慢的行动。

所有的植物提取物(列在表 1针对三种不同的病毒即)测试。、黄热病、基孔肯雅病毒(CHIKV ),和肠病毒71。三分之一的植物对这些病毒活跃。其中, k . pinnata(EC₅₀= 6.1 μg / mL, SI = 4.29) ,a tomentosa(EC₅₀= 7.79 μg / mL, SI = 4.69) p .重楼(EC₅₀= 8.74 μg / mL,如果对CHIKV = 1.75)是活跃的, c . serratum对黄热病病毒活跃,电子商务₅₀15.9 μg / mL t . chebula(EC₅₀= 10.6 μg / mL, SI = 5.94)活性对肠道病毒71(表 4)。

所有的植物提取物进行薄层色谱,生成指纹。使用甲醇:二氯甲烷(95:5,v / v)为流动相,大量吸收波段紫外线下观察(254 nm和360 nm)。此外,暴露后板5%硫酸乙醇,斑点可视化,在紫外光照射下反应产物进行了比较。有趣的是,有或没有衍生,几个提取物显示相似的指纹(观察到的颜色以及Rf),标志着类似的化学类的存在。大部分的植物提取物暴露在254 nm紫外线显示橙色,黄色,粉色,绿色,或蓝色荧光,证实存在的类黄酮和多酚(补充图 2)。选择植物提取物等 a . anceps a . tomentosa和 b . albiflora显示类似的Rf值和乐队模式(蓝色或绿色荧光在360 nm,转化为黄色,蓝色,或接触硫酸后蓝荧光)确认香豆素(补充表的存在 1)。 c . zeylanicum提取形式UV 254下的黑区,消失在360 nm,倍半萜烯内酯。几种植物提取物等 c . zeylanicum d . integrifolia大肠渐尖,j . adhatoda k . pinnata和 美国mukorossi没有任何乐队在紫外线起初但形式清楚乐队的蓝色,亮绿色或棕色颜色接触硫酸后,确认皂苷的存在。三种植物提取物: c . wallichii j . adhatoda和 p .重楼显示蓝色荧光转向绿色或灰色接触硫酸后,证实了生物碱的存在。只有一个提取, r . arboreum显示了单宁的存在,而提取等 b . albiflora c . serratum d . integrifolia和 p . tithymaloides含有植物固醇和苷。TLC指纹显示几组植物化学的成分的存在,但这些构成了生物活性化合物的负责检测活动需要进一步研究。

传染病的面积,141年的小分子抗菌药物批准了1981年和2014年之间,82人,或58%,源于天然来源( 6]。因此,有一个巨大的潜力发现新化合物与抗感染药从自然资源属性。我们的一些发现了Tantry et al。 70年孤立oleanadien-3] β-ethan-3-oate从 杜鹃物种,这种化合物抑制 伤寒沙门氏菌(MTCC 53)(18.6毫米)的抑菌圈0.1浓度 μL /毫升。同样,普拉丹et al。 71年78.12)观察到的麦克风 μ克/毫升methanolic提取的 j . adhatoda对 美国肠炎与我们的研究结果,在协议。在我们的研究中,我们找不到值得注意的抗菌活性 k . pinnata和 Dichrocephala integrifolia。相比之下,Tatsimo et al。 72年抗菌活性的研究 Bryophyllum pinnatum(同义词 k . pinnata)大面板的细菌和酵母,发现值得注意的原油methanolic提取物抗菌活性,与中等收入国家从32到512 μ克/毫升。同样的,早些时候研究人员表明抑制的影响 d . integrifolia对 金黄色葡萄球菌, 大肠杆菌, 伤寒杆菌剂量依赖性的方式从原油中提取,主要在非极性溶剂除乙醇( 73年]。几个因素可能解释这些差异:不同的植物部分或品种、土壤和气候、集合或采后治疗,萃取过程,等。此外,在我们的研究中,我们只发现适度的活动 Clerodendrum serratum对 美国血清882年(麦克风 μg / mL)。大量化学成分(∼283化合物)已报告属 Clerodendrum(单萜和衍生品、倍半萜烯、二萜、常用药用,类黄酮和黄酮苷,信息,类固醇和甾体苷,cyclohexylethanoids,蒽醌类,和生氰苷),显示大量的生物活性( 74年]。Arokiyaraj和他的同事测量了抗菌活性 Clerodendrum siphonanthus对 肺炎克雷伯菌, 变形杆菌、伤寒杆菌、金黄色葡萄球菌, 大肠杆菌,和 枯草芽孢杆菌30日,16日和观察抑制区16日12日11.5,和10毫米,分别 75年]。

目前的研究发现广谱抗菌活性(对一组测试细菌提取物有效)和植物等 Ampelocissus tomentosa, Boerhavia diffusa, Dichrocephala integrifolia, Pedilanthus tithymaloides,巴黎重楼, Sapindus mukorossi。事实上,植物等 Boerhavia diffusa( 76年), Dichrocephala integrifolia( 73年] ,Pedilanthus tithymaloides( 77年), 巴黎重楼( 78年, 79年),而 Sapindus mukorossi( 80年, 81年以前报道的抗菌性。然而,我们的报告在这里第一次methanolic提取的 Ampelocissus tomentosa根是有效的对所有检测病原体:Gram-positives,革兰氏阴性细菌的好药 白色念珠菌。同样,植物等 Aleuritopteris anceps, Boenninghausenia albiflora, Cynoglossum zeylanicum, Clerodendrum serratum, 杜鹃植物园, 榄仁树属chebula被发现显示窄谱对革兰氏阴性细菌的好药或Gram-positives活动。植物等 Boenninghausenia albiflora( 56, 82年), Clerodendrum serratum( 83年, 84年), 杜鹃arboreum( 85年, 86年),而 榄仁树属chebula( 34, 76年, 87年已经报道有抗菌活性。我们所知, Aleuritopteris anceps和 Cynoglossum zeylanicum所示为第一次主动对细菌。三种植物, Ampelocissus tomentosa, Dichrocephala integrifolia, 巴黎重楼,发现抑制显著的增长 白色念珠菌。

18植物,在我们家庭菊科最表示,有三个工厂。尽管菊科许多次生代谢产物的发现,这个家庭在ethnopharmacological研究却没有得到足够关注,导致一些系统的探索和一些商业化的产品 88年]。然而,在目前的研究中,一种菊科植物: Cirsium wallichii,没有显示抗菌财产反对任何微生物测试当我们解决截止抑制50%。此外,其他两个工厂没有显示抗菌活性: 高凉菜属pinnata(景天科)和 芦苇vallatoria(禾本科)。

植物学期刊已经不可分割的一部分,传统的卫生保健系统在世界大部分地区几千年来( 89年]。植物含有成千上万的次生代谢物,具有广泛的生物活性。因此,有趣的是测试的植物提取物抗病毒性质活跃对抗传染病。对于植物我们选择,我们没有发现任何黄热病报告活动之前,基孔肯雅热或肠病毒。尽管如此,来自同一属的一个成员( 高凉菜属股薄肌),化合物如阿魏酸、槲皮素和山柰酚已被孤立,表现出抗病毒效应对肠道病毒71 (EV71)和柯萨奇病毒A16 (CVA16)。

基孔肯雅病毒(CHIKV)东山再起的媒介传播病毒性疾病之一,被认为是一种被忽视的热带疾病,主要是因为受影响的地区是非洲和东南亚。CHIKV最近爆发的中美洲和南美洲也提出了大规模流行的可能性与蚊子向量的世界范围内的扩散,传播这种疾病。此外,目前还没有批准的疫苗或抗病毒治疗可用但CHIKV感染的预防;因此必须寻找新的生物活性分子,我们发现一些植物( 高凉菜属pinnata, Ampelocissus tomentosa, 巴黎重楼针对CHIKV(表)展示活动 4)。考虑到集成电路₅₀值抑制CHIKV复制和SI值,进一步的研究是必要的有效成分的结构说明。识别小说CHIKV复制的抑制剂,研究人员选择了大戟科物种,获得和净化,分离瑞香烷-和tigliane-type酯anti-CHIKV活动。大戟属植物物种的特点是生产二萜的能力属于tigliane ingenane和jatrophane化学类,以及其他类型的二萜酯。在我们的研究中,我们也发现了有前景的结果 p . tithymaloides(大戟科物种)提取物对CHIKV;然而,其抗病毒作用没有选择性。温和的细胞毒性可能是因为pedilstatin或eurphorbol的存在,这已经成为刺激物和致癌物质。同样,最近发表的手稿,Shrestha et al。 90年)报道, 巴黎重楼是第二个最广泛使用的植物在尼泊尔东部(使用价值= 0.96,忠诚水平= 77.42)治疗各种疾病(表吗 1)。在早期作品中,我们还发现的承诺活动 p .重楼利什曼虫;然而,它的行动是非选择性由于其毒性影响MRC-5细胞系( 63年]。我们还发现这些植物的活动 假丝酵母和CHIKV。然而,由于其毒性特性,谨慎是必要的,因为有害健康后果可能发生如果高剂量进行了很长一段时间。

同样,另一个重要的病毒性疾病(黄热病),通过蚊虫叮咬传播,导致的偶发性病死率的15 - 50%,没有治愈。虽然有效的疫苗接种有这种疾病,由于疫苗接种覆盖率不足在非洲地区和重新崛起的流行栖息地的威胁,迫切需要新的药物。在我们的研究中,我们发现了一个有趣的活动 c . serratum首次对黄热病病毒。尽管抗惊厥的治疗糖尿病药,抗疟活性已经被报道 c . serratum( 45),没有人检查其活动对黄热病病毒迄今为止。开发新的anti-yellow发烧的药物从这些植物获得生物活性化合物和生物活性成分的局部使用 c . serratum如羽扇豆醇和pellitorine可能探索预防病毒感染的蚊子咬的向量。

只有一个植物提取物( t . chebula)被发现对肠道病毒活跃。EV71感染可引起轻度的手,脚,口病(很少)也导致严重致命的神经系统并发症。的anti-enterovirus活动 t . chebula可能是由于的存在可水解的单宁(chebulagic酸),因为杨et al。 91年]表明chebulagic酸处理降低了病毒细胞病变效应对横纹肌肉瘤细胞IC₅₀12.5 μ克/毫升。此外,在小鼠挑战致命剂量的EV71, chebulagic酸治疗显著降低了老鼠死亡率和缓解临床症状的抑制病毒复制。 Dichrocephala integrifolia根和花提取物是有效的控制人类单纯疱疹病毒( 92年]。另一项研究由Ojha et al。 42孤立的(使用获得净化)木樨草素,积极反对单纯疱疹病毒2型- 2)。

寻找新的抗寄生虫药物已经在过去的几十年里。然而,尽管丰富的文学,还需要更多的工作来产生强大的,商用基于天然产物的药物( 93年]。我们所知,此前从没有打虫药活动的报道 答:tomentosa和 b . albiflora;然而,杀虫香豆素化合物、murraxocin jayantinin, murralongin已经隔绝 b . albiflora( 55, 94年]。与我们的研究一致,Takaishi et al。 95年)不同亚型的香豆素从植物的特征 藿香conyzoides通过获得净化,他们发现活动对植物病原线虫: Bursaphelenchus xylophilus。此外,在以后的研究中,研究小组还化学合成香豆素的不同衍生品,发现5-ethoxycoumarin杀线虫的活性最高,这是相对无害的对盐水虾、 卤虫盐水湖,那日本鳉鱼, Oryzias latipes( 69年, 95年]。

此外,王et al。 68年调查的打虫药活动 巴黎重楼,发现两种甾体皂苷:薯蓣皂苷和polyphyllin D,获得其methanolic提取,表现出显著的活动 Dactylogyrus中间部与电子商务₅₀值分别为0.44和0.70 mg / L。这些比积极的更强有力的控制,甲苯咪唑(EC₅₀值= 1.25 mg / L)。

Wabo et al。 22)评估ethanolic提取的 D。 integrifolia在胃肠道线虫 Heligmosomoides bakeri并认为它们包含的化合物有卵和杀灭幼虫的属性。ethanolic提取的 d . integrifolia抑制L1和L2幼虫的98.1%和98%,分别 Heligmosomoides bakeri在5毫克/毫升( 22]。越早发现 p .重楼和 d . integrifolia作为驱虫剂 22, 68年)也支持我们的研究使用生物模型 秀丽隐杆线虫。

当然,植物传统上用作驱肠虫剂由当地治疗师并不一定显示打虫药活动 秀丽隐杆线虫。虽然活动 秀丽隐杆线虫不完全相关活动对寄生线虫,它仍然是一个有用的初步测试。一些植物提取物,不表现出直接打虫药活动可能作为刺激胃肠道和驱逐蠕虫的肠道。

有趣的是,一个植物提取物( Sapindus mukorossi)增加的运动 秀丽隐杆线虫(图 1),但具体机制尚不清楚。众所周知,许多植物含有抗氧化剂和增加寿命,健寿,抵抗压力 秀丽隐杆线虫( 96年]。此外,这种植物时没有显示任何细胞毒性测试等细胞系哈,RD, VCL (CC₅₀> 100 μg / mL,表 4),提供无毒性的进一步证据。

主要限制在天然植物提取物,含有植物成份的复杂混合物,可单独或协同行动,有时在一个敌对的方式,导致不同的生物活性。然而,筛选驱虫剂原油提取活动将有助于找到新的打虫药药物铅化合物,这是一个紧迫的需要目前只有有限数量的打虫药药物类,和寄生虫病对人类产生重大的社会经济后果以及牲畜。此外,过度使用商用驱肠虫剂(苯并咪唑、imidazothiazoles / tetrahydropyrimidines、大环内酯,amino-acetonitrile衍生品)导致耐药性,这些治疗方法不再是最初一样有效。

一直在努力开发新的疫苗寄生性扁形动物和线虫。尽管如此,一个有效的疫苗并没有成功,因为它未能提供保护性免疫。鉴于没有新的有效的打虫药化合物变得可用,加上缺乏疫苗和新兴阻力问题对当前可用的抗寄生虫药物,替代药物的来源研究是迫切需要的。因为没有人类驱肠虫剂开发植物来源到目前为止,有希望可以找到新的驱虫剂分子在广谱的植物展览活动中,优秀的安全,和治疗资料也显示重大活动对不同发育阶段的寄生虫( 97年]。因此,找到一种广谱药物可以治疗多种寄生虫或多个生命阶段是可取的,尤其是在发展中国家有限的资源。

另一个主要限制在我们的研究中(由于时间和金融的限制),我们只能测试methanolic /乙醇植物提取物及其单一的植物部分。一些生物活性成分最好是由非极性溶剂,如氯仿或己烷提取,或由轻微的极性溶剂乙酸乙酯等。在我们的研究中,我们只使用一个极性溶剂(甲醇) d . integrifolia这也许可以解释为什么我们不能观察到显著的抗菌活性 金黄色葡萄球菌和 白念珠菌,尽管这种植物使用传统的治疗伤口感染和其他传染性疾病。选择一个合适的溶剂对生物活性是至关重要的。中使用的溶剂萃取技术,提取方案更改数量和提取的植物成份的功效。例如,在著名的抗疟药物青蒿素的情况下,热水提取的 青蒿在啮齿动物感染小鼠模型是无效的吗 p .鼠,而醚提取物确实展现出了不错的效果。

此外,植物没有证据的活动在我们的研究中可能值得进一步研究自植物在1毫克/毫升,学习测试和许多原油提取可能只显示活动显著更高的浓度。同时,提取的活动是受到时空变化的影响,筛选目的,所花费的植物部分和环境条件下,植物是收获。这些因素也可以解释我们的一些负面结果或与先前的报告差异。