1。介绍
针灸已应用于临床治疗胃肠道(GI)疾病在中国几千年来,Zusanli穴位(ST36)被视为一个典型的穴位治疗胃肠道疾病的中医教科书。最近,大量的临床和实验研究表明,针灸是有效治疗胃肠道疾病和调节胃肠道功能,包括胃蠕动,胃酸分泌和胃肌电的活动(GMA) [
1- - - - - -
7]。然而,值得注意的是,针灸在不同地区产生不同的影响。例如,针灸在四肢增强胃肠道蠕动通过迷走神经传出(
2,
3,
7),和针灸在腹部抑制胃肠道蠕动通过交感传出(
4),这表明针灸的反射调节消化道的特点是段。在这些研究中,研究人员注意到superspinal结构参与这个过程和背侧迷走神经的复杂(")可能是一个重要的候选人
1,
2,
4]。在我们之前的作品中,电针刺激(EA)在ST36或orofacial穴位促进GMA和引起c-fos表达式在孤束核(nt) [
2,
8,
9]。同时,神经元电生理数据表明,有收敛的somatoviscera nt同时对针灸刺激反应和胃膨胀
10]。看来,"可能是一个主要目标的针灸调节胃功能。
"由nt,接收来自胃肠道,初级传入输入和迷走背运动核(DMV),其中包含传出迷走神经运动神经元支配胃肠道。因此,"被认为是作为副交感节前中心调节胃肠道功能。解剖和电生理数据展示的存在之间的兴奋和抑制性突触连接nt和事实。然而,大多数研究都集中在抑制连接,激发的望远镜神经元产生抑制突触后神经元的DMV投射到胃肠道,影响迷走神经的输出(
11- - - - - -
16]。因此,连接,尤其是抑制连接,可能起着重要的作用在调节胃肠道功能。
SiBai (ST2)是位于胃经线,主要用于治疗眼和胃肠道疾病(
17]。YangBai (GB14),作为一个控制,位于膀胱经络,主要用于治疗头痛和眼睛疾病(
17]。在目前的研究中,反射调节的EA orofacial穴位(ST2和GB14)在老鼠GMA及其神经通路研究澄清EA在胃肠道的底层机制。
2。实验的程序
2.1。实验设计
这项研究分为五个部分:(1)观察ST2 EA的效果,这是位于眼眶下的工头,GMA。同时,GB14,位于前额和学生的正上方2.5厘米,被选为控制。(2)调查EA的传入通路在ST2 GMA的事务眼眶下的神经(离子)。(3)研究"的角色在损伤后的EA效应"。(4)探索L-glutamate显微镜下注射的效果在nt EA的效果。(5)观察迷走神经切断术的EA的传出通路的影响。
2.2。动物
成人Sprague-Dawley老鼠的男女,体重从220年到250 g,被用于这项研究。每个老鼠都安置在控制环境条件(25±1°C,相对湿度40 - 60%,12 h / 12 h光暗周期从上午7点到晚7点),提供食物和水随意。程序按照指南进行广州中医药大学动物保健和使用委员会的研究。
2.3。电极植入的胃
外科手术是类似于之前报道(
2]。后一夜之间快速、动物与氨基甲酸乙酯麻醉(1克/公斤,i.p。)和剖腹手术暴露的胃。2-mm-long环铂电极是缝合的浆膜表面胃腔的前壁,近端幽门括约肌,约0.5厘米,另约1.5厘米远。电线连接电极被带来的后颈颈部皮下隧道。最后,腹腔被关闭了。
2.4。GMA的录音
如前所述(执行GMA的录音
2]。实验开始后,他们给了老鼠大概5天完全从手术中恢复过来。所有的老鼠都禁食24小时之前实验和氨基甲酸乙酯麻醉(1克/公斤,i.p)。放大器的低和高截止频率是10赫兹和30 Hz,分别慢波和尖峰脉冲叠加在慢波连续记录至少10分钟。
2.5。事务的离子
离子预处理进行五天前在ST2 EA。动物被麻醉的ip注入聚氨酯(1克/公斤)。垂直切口是在眼眶下的孔上方的皮肤暴露双边离子在解剖显微镜下。离子的事务
(
n
=
6
)
、公开的离子与丝绸缝合结扎在两个不同的点,两个联结之间的神经束切断。虚假的操作
(
n
=
6
)
离子只是暴露,不接受任何治疗。
2.6。病变的陷落
老鼠
(
n
=
6
)
与氨基甲酸乙酯麻醉(1克/公斤,i.p。)和安装在立体定位器(SR-6N、Narishige、日本)的卧姿。atlanto-occipital膜和小脑公开背髓质中删除。Obex之间的点被定义为区域postrema和菖蒲scriptorius,中央管开始的地方开到第四脑室(
18]。使用这个作为参考点,绝缘钨电极被插入到马"和2阴极电流应用10年代。坐标的陷落obex喙的0.5 - -0.7毫米,0.5毫米侧中线双边和0.4毫米背脑干表面(
18]。虚假的病变
(
n
=
6
)
,电极被插入到相同的位置没有电流。
2.7。显微镜下注射的L-Glutamate nt
老鼠
(
n
=
6
)
与氨基甲酸乙酯麻醉和背髓质暴露如上所述。在EA ST2之前,L-Glutamate (5 50 nmol / nl)(美国σ)microinjected到nt (obex喙的坐标:0.5 - -0.7毫米,0.5毫米侧中线双边和0.3 - -0.4毫米背到脑干表面)。生理盐水是microinjected在相同的位置控制
(
n
=
6
)
。
2.8。迷走神经切断术
EA刺激之前,老鼠
(
n
=
6
)
与氨基甲酸乙酯麻醉(1克/公斤,i.p。),与迷走神经切断术进行预处理。双边迷走神经(VN)在食管贲门附近仔细隔绝周围组织与丝绸缝合和结扎在两个不同的点,和两个联结之间的神经束切断。虚假的操作
(
n
=
6
)
,VN只是暴露,不接受任何治疗。
2.9。EA治疗
老鼠与氨基甲酸乙酯麻醉(1克/公斤,i.p。)和固定在一个塑料盒子里。两个不锈钢针灸针(0.28毫米外径)皮下注射5毫米插入ST2或两边GB14穴位,留给20分钟。电刺激是来自医学EA装置(模型G6805-2,中国上海)。刺激参数2和20赫兹的频率,或者,和强度足以只引起轻微的抽搐orofacial地区。ST2 GB14位于眼眶下的孔和额头上的瞳孔正上方2.5厘米,分别为(
19]。
2.10。组织学
在显微镜下注射,显微镜下注射部位,注射50问2% pontamine天空蓝。然后老鼠通过升主动脉灌注,100毫升生理盐水的其次是400毫升的4%多聚甲醛。脑干被除去,你找找在同一个固定剂解决方案6 - 8 h和20%蔗糖溶液中浸泡过夜。
40
μ
米
冰冻的横向部分得到−20°C的冷冻切片机(CM1850、徕卡、德国)。最后,脑干部分与中性红染色确定微量吸液管的放置显微镜。
灌注损伤的陷落,老鼠和固定如上所述,和冷冻横向部分被hematoxylin-eosin治疗(他)染色显微镜下识别损伤的位置。
2.11。统计分析
数据提出了平均值±标准平均误差(SEM)和设置在显著性水平
P
<
0.05
。使用成对样品或independent-samples结果进行了分析
t
测试。非正态分布或异方差性,结果被非参数测试(Mann-Whitney治疗
U
)。
3所示。结果
3.1。EA在Orofacial穴位GMA的影响
EA在ST2产生显著增加集群的数量每分钟的尖峰脉冲
(
4.50
±
0.99
与
7.00
±
0.82
,
P
<
0.0
5
)
;然而EA GB14没有
(
5.17
±
0.87
与
5.00
±
0.93
,
P
>
0.0
5
)
。尖峰脉冲的变化在ST2 EA后明显高于在GB14 EA
(
1.33
±
0.21
与
0.17
±
0.48
,
P
<
0.0
5
)
(图
1)。
:EA在GMA orofacial穴位的作用。
*
P
<
0.05
而preEAST2。
#
P
<
0.0
5
与EAGB14 (postEA-preEA)。(一)EA ST2集团;(B)在GB14 EA组。(一)PreEA;(b) postEA。
![]()
3.2。EA离子事务对GMA诱导的影响
离子事务后,EA在GMA ST2没有产生任何改变
(
5.00
±
0.58
与
5.67
±
0.55
,
P
>
0.0
5
)
。sham-operated组,EA ST2诱导说增加尖峰脉冲
(
4.83
±
0.95
与
7.17
±
1.31
,
P
<
0.0
5
)
,这是类似于改变后EA ST2孤单。变化后的尖峰脉冲离子事务明显低于虚假的操作组
(
0.67
±
0.33
与
2.33
±
0.67
,
P
<
0.0
5
)
(图
2)。
EA离子事务对GMA诱导的影响。
*
P
<
0.05
与preEA(虚假的交易)。
#
P
<
0.0
5
与(postEA-preEA)(离子事务)。(一)EA ST2和离子trancsaction;(B) EA ST2和虚假的交易。(一)PreEA;(b) postEA。
![]()
3.3。影响陷落在GMA EA引起的病变
电损伤后的陷落,EA ST2没有任何影响的
(
4.50
±
0.99
与
3.83
±
0.48
,
P
>
0.0
5
)
。虚假的病变组,EA ST2尖峰脉冲的数量产生显著增加
(
4.17
±
0.60
与
5.83
±
0.87
,
P
<
0.0
1
)
。变化的峰值脉冲损伤后的"显然低于虚假的病变组织
(
0.67
±
0.42
与
1
。
67年
±
0.33
,
P
<
0.0
5
)
(图
3)。
影响陷落在GMA EA引起的病变。
*
*
P
<
0.0
1
与preEA(虚假的损伤)。
#
P
<
0.0
5
vesrus (postEA-preEA)(陷落病变)。(一)EA ST2 "的病变;(B) EA ST2和虚假的病变。(一)PreEA;(b) postEA。
![]()
3.4。影响显微镜下注射谷氨酸到nt GMA由EA
预处理的显微镜下注射L-glutamate nt, EA在ST2没有引起显著的尖峰脉冲的变化
(
5.67
±
0.92
与
5.16
±
0.91
,
P
>
0.0
5
)
持续了约5 - 10分钟。生理盐水显微镜下注射没有影响的变化在ST2 EA引发的尖峰脉冲
(
5.17
±
1.40
与
9.33
±
1.41
,
P
<
0.0
5
)
。组织学显示,显微镜下注射都是位于nt。变化的峰值脉冲后显微镜下注射谷氨酸到nt显然低于盐水显微镜下注射
(
0.50
±
0.56
与
1.83
±
0.87
,
P
<
0.0
5
)
(图
4)。
影响显微镜下注射谷氨酸到nt GMA由EA。
*
P
<
0.05
与preEA (NS)。
#
P
<
0.0
5
与(postEA-preEA)(谷氨酸)。(一)EA ST2和谷氨酸显微镜下注射;(B) EA ST2和NS显微镜下注射。(一)PreEA;(b) postEA。
![]()
3.5。EA迷走神经切断术对GMA诱导的影响
后两国迷走神经切断术,EA ST2没有尖峰脉冲的影响
(
5.33
±
1
。
26
与
5.83
±
1.70
,
P
>
0.0
5
)
。虚假的操作没有影响对GMA EA在ST2引起兴奋性的影响
(
4.17
±
0.79
与
6.67
±
1.12
,
P
<
0.0
1
)
。变化的峰值脉冲后迷走神经切断术显然低于虚假的尖峰脉冲的变化后显微镜下注射谷氨酸到nt显然低于盐水显微镜下注射操作
(
0.50
±
0.67
与
2.50
±
0.5
,
P
<
0.0
5
)
(图
5)。
EA vagatomy对GMA诱导的影响。
*
P
<
0.05
与preEA(虚假vagatomy)。
#
P
<
0.0
5
与(postEA-preEA) (vagatomy)。
![]()
3.6。组织学
电解的图解表示病变的陷落和显微镜下注射网站到元数据所示
6和
7,分别。
电解的图解表示病变的陷落(阴影区域)(改编自Paxinos和华生的阿特拉斯(
18])。美联社:postrema区域;答:中央管;铜:楔形纤维束;格:细长的核;索尔:孤束核;索尔:孤束;sp5:脊髓三叉神经束。
![]()
显微镜下注射的图解表示网站(⚫)在nt(改编自Paxinos和华生的阿特拉斯(
18])。美联社:postrema区域;答:中央管;铜:楔形纤维束;格:细长的核;索尔:孤束核;索尔:孤束;sp5:脊髓三叉神经束;Sp5C:脊髓三叉神经核,尾部分;Sp5I:脊髓三叉神经核,极间的一部分; 10 N: dorsal motor nucleus of vagus; 12 N: hypoglossal nucleus.
![]()
4所示。讨论
众所周知,体细胞输入从皮肤和/或肌肉诱发自主神经功能的变化,叫做somato-autonomic反射和部分特征。在麻醉大鼠,捏腹部皮肤抑制胃蠕动和捏四肢增强胃蠕动(
20.- - - - - -
22]。作为一种躯体刺激、针灸也有类似的效果。针灸在腹部和胸部低抑制胃蠕动通过交感神经传出,而针灸在肢体促进胃蠕动通过迷走神经传出(
4,
23]。此外,EA在人类肢体加速胃排空,提高GMA和/或动物,也是由迷走神经(
6,
24]。在目前的研究中,EA在orofacial穴位(ST2)生产的数量的增加集群GMA的尖峰脉冲,这是废除后双边迷走神经切断术。胃肠道蠕动GMA的控制下,由慢波(慢节奏性)和峰值(快节奏性)。慢波决定胃肠收缩和尖峰的频率和传播活动叠加在慢波和电气的收缩。胃肠道收缩时总是出现峰值。因此,EA在orofacial穴位(ST2)产生对胃蠕动和迷走神经兴奋性影响是参与的过程,这是类似于在四肢和相反的EA在腹部,表明针刺对胃运动的反射性调节功能和特定的穴位与脏腑之间的关系具有段。
在这项研究中,EA在ST2 GMA的兴奋性影响是由离子事务,废除"的病变和迷走神经切断术,分别,这表明神经通路由ION-DVC-VN对这种反应至关重要。ST2位于眼眶下的孔和由眼眶下的神经支配,没有直接预测陷落。以前的工作表明,EA在nt ST2诱导c-fos表达和抑制内脏痛大鼠,由离子由paratrigeminal核和废除事务(
8,
9]。作为副交感节前中心,"发挥重要作用在EA的调制在胃肠道功能。EA解剖学证据表明,躯体传入纤维诱导的足三里是转达了nt,作用于车管所,促进胃蠕动(
23]。此外,门冬氨酸受体gastric-projecting DMV神经元参与EA的规定在BL21在大鼠胃排空
25]。我们之前的作品也同时表明,EA在GMI ST36增强和抑制物质的释放
P
",由迷走神经的交易取消
2]。
另一个有趣的问题是,orofacial体细胞输入引起的EA在车管所神经元ST2行为直接或间接通过nt DMV的神经元。电生理和解剖数据展示的存在大量的突触连接nt DMV和抑制之间的关系是一个关键的调节胃肠道功能(
11- - - - - -
16]。众所周知,许多神经递质和神经调质"参与调节胃肠道功能和谷氨酸主要候选人。vagovagal反射,胃肠道感觉输入终止在nt和释放谷氨酸,主要作用于non-NMDA受体和nt激活抑制性神经元投射到DMV最后抑制DMV神经元(
26- - - - - -
28]。几组调查人员表明,显微镜下注射谷氨酸到陷落产生抑制或兴奋性影响胃蠕动。似乎是谷氨酸显微镜下注射到nt诱发胃抑制(
29日,
30.),而谷氨酸显微镜下注射到DMV导致胃励磁(
31日,
32]。电生理数据表明,室旁核的激活gut-sensitive DMV神经元可能是一个间接的影响(nt神经元
33]。它已经表明nt接收内脏和躯体感觉afferentsand somato-visceral处理中起着重要的作用[
2,
8- - - - - -
10]。体细胞输入通过nt从EA在DMV肢体行为,促进胃蠕动,从EA和体细胞投入腹部作用于延髓腹外侧的髓质(RVLM)通过nt和抑制胃蠕动
23]。在这项研究中,显微镜下注射谷氨酸的nt抑制GMA的励磁由EA ST2,表明NTS-to-DMV抑制连接参与EA的规定在ST2副交感神经运动输出。
总之,综上所述,上述研究结果表明,神经通路的ION-NTS-DMV-VN参与EA在orofacial穴位的反射调节胃功能和NTS-DMV抑制连接可能是至关重要的。