ECAM 以证据为基础的补充和替代医学 1741 - 4288 1741 - 427 x Hindawi出版公司 508902年 10.1155 / 2012/508902 508902年 研究文章 表儿茶素用于治疗肠道炎性疾病:实验的分析模型 Vasconcelos 保罗塞萨尔·德·波拉 1 Seito 莱昂纳多现任 2 Di史塔西 路易斯克劳迪奥。 2 作者Hiruma-Lima Clelia 3 Pellizzon 克劳迪娅·海伦娜 1 Vilegas 瓦格纳 1 形态学部门 生物科学研究所 UNESP-University Estadual保利斯塔人 邮政信箱510 18618 - 970年Botucatu SP 巴西 unesp.br 2 药理学系 生物科学研究所 UNESP-University Estadual保利斯塔人 邮政信箱510 18618 - 970年Botucatu SP 巴西 unesp.br 3 生理系 生物科学研究所UNESP-University Estadual保利斯塔人 邮政信箱510 18618 - 970年Botucatu SP 巴西 unesp.br 2012年 30. 12 2012年 2012年 15 05年 2012年 11 12 2012年 2012年 版权©2012年保罗塞萨尔·德·波拉塞·伐斯冈萨雷斯等他。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。本研究的途径(−)表儿茶素(EC)的预防和治疗在急性和慢性肠道炎症大鼠模型。 方法。使用TNBS肠道炎症诱导的大鼠。形态学、炎症、免疫组织化学和免疫印迹结肠癌样本检测的特征。EC的影响评估在急性模型剂量的5、10、25、50毫克/公斤填喂法为5天。慢性结肠炎模型诱导1天,治疗21天。结肠炎复发模型,归纳重复14日。 结果。EC10 EC50有效减少病灶大小,评估宏观上;并为EC10证实了显微镜。EC10组中的谷胱甘肽水平较高但cox - 2表达降低,增加细胞增殖(PC)观察,表明抗炎活性和proliferation-stimulating效应。慢性结肠炎模型,EC10显示较低的宏观和微观损伤分数和增加谷胱甘肽的水平。急性模型中,cox - 2表达的降低和增加在EC10 PC,这可能增加的慢性模型通路EGF表达。 结论。这些结果证实了电子商务的活动作为一种抗氧化剂,可以减少损伤,有可能刺激组织愈合,指示用于预防和治疗肠道炎症。

 1。介绍

结肠炎症可以引起多种疾病和感染。炎症性肠病(IBD)是一组炎性大肠和小肠的条件,主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。炎症性肠病的病因仍知之甚少。它是假定与可怜的血液供应,预设的自体免疫反应和感染。溃疡性结肠炎,最相似的疾病实验模型,一些研究表明是由于粘膜免疫系统的放松管制和病理基因易感个体T细胞反应( 1分类),它是一种自身免疫性疾病。另一种假说表明,溃疡性结肠炎黏膜屏障的开始作为一个障碍,这种障碍可能是最初的因素,使后续的攻击结肠共生的细菌引起的炎症粘膜( 2]。

当前可用的治疗溃疡性结肠炎包括糖皮质激素、柳氮磺胺吡啶,5-aminosalicylic酸,免疫抑制剂,anti-TNF - α单克隆抗体;在某些情况下,结肠造口术手术是唯一的选择 3]。这些治疗方法不是没有副作用,这可能会成为重要的由于需要长期治疗,这是很常见的。因此,寻找替代治疗是至关重要的,并且能够提供有效cytoprotection炎症的地区尤为重要。有鉴于此,我们测试(−)表儿茶素,许多富含黄酮类植物中的一种物质,如 Mouriri天Gardn。(野牡丹科),以前在我们的实验室研究 4, 5]。在物质中发现这种植物提取物、表儿茶素被选为本研究的主题,因为它被认为是一个重要cytoprotectant由于其强大的抗氧化活性和抑制细胞凋亡的干预半胱天冬酶信号链( 6]。Galvez和合作者 7)发现,表儿茶素强有力地抑制脂质过氧化反应在酶和非酶的结肠炎模型包括花生四烯酸 在体外;这种抑制是独立于它对谷胱甘肽酶系统的影响。因此,表儿茶素可能扮演重要的角色在清除自由基的结肠粘膜发炎,从而帮助恢复过程。此外,表儿茶素可以抑制花生四烯酸的过氧化反应介导,表明其潜力作为抗炎剂在炎症性肠病,通过影响脂氧合酶和环氧合酶等酶的活性。

表儿茶素在预防癌症的作用也是报道;表儿茶素促进维护上皮细胞间的缝隙连接( 8),有助于防止胃肠病变的发展为恶性病变。

我们旨在识别药物活性物质通过药用物种的研究提供新的治疗胃肠疾病的选择,从而导致植物的可持续发展圣保罗州的塞拉多,巴西。本研究的目的是评估的作用(−)表儿茶素在大鼠肠道炎症的预防和治疗通过宏观、微观和生化分析肠道病变的急性和慢性结肠炎模型。(−)表儿茶素的抗炎和治疗效果将被评估。

 2。材料和方法 2.1。动物

雄性Wistar鼠(200 - 250 g)由中央动物屋的。老鼠认证饮食的情况下,可以免费获得自来水和保持在标准照明(12 h dark-12 h灯)、湿度( 60 ± 1 %)和温度( 21 ± 2 °C)的条件。所有实验协议后的建议,动物实验伦理委员会生物科学研究所的UNESP-Botucatu,圣保罗,巴西,通过协议02/04。

 2.2。感应模式和治疗肠道炎症

肠道炎症的选择模型由intracolonic管理三硝基苯磺酸(TNBS)溶解在0.25毫升的50%的乙醇/水老鼠[ 9]。使用(−)表儿茶素的剂量(5 - 50毫克/公斤)选择基于剂量的其他酚类化合物,如其他黄酮类化合物和paepalantine已经证明了在这个实验模型抗炎活动( 10, 11]。

TNBS对照组(诱导结肠炎症,但没有药理治疗)和对照组noncolitic(没有诱导炎症)包含在每个实验中,随着积极的治疗组的动物 ( n = 7 ) 与柳氮磺胺吡啶治疗(100毫克/公斤)。所有药物溶解在10%酒精生理盐水。的一般协议实验涉及两个治疗,急性和慢性和复发,下面描述。

2.2.1。急性结肠炎

四组的动物收到不同剂量(5、10、25和50毫克/公斤)的(−)表儿茶素为前两天每天口服一次结肠炎的感应,以及前2小时和24小时后的感应结肠炎。(−)表儿茶素溶解在10%酒精生理盐水和由填喂法。动物从noncolitic TNBS控制和组只有车(10毫升/公斤)。阳性对照组收到柳氮磺胺吡啶(100毫克/公斤)溶解在同一辆车。体重和发生的腹泻是每个小组每天监测。

 2.2.2。结肠炎复发

在这三周的实验协议,结肠炎最初诱导TNBS 10毫克的50%乙醇,如前所述,动物收到第二个10毫克的剂量TNBS后14天( 12]。动物被分成5组:两组收到每日剂量的10毫克/公斤(EC10)或50毫克/公斤表儿茶素(EC50),分别;这些剂量选择基于他们在急性结肠炎疗效实验。其他组如下:noncolitic(没有引起结肠炎或复发;动物收到10毫升/公斤车辆),TNBS控制(结肠炎复发和诱导;动物收到10毫升/公斤车辆)、柳氮磺胺吡啶(结肠炎复发和诱导;柳氮磺胺吡啶动物收到100毫克/公斤),和TNBS控制不复发(结肠炎,但不复发,是诱导;动物收到10毫升/公斤车辆)。三分之一的动物从每组牺牲一周后的感应与TNBS结肠炎,三分之一是牺牲了两周后,剩下的三分之一(复发)提交后被牺牲了三个星期。TNBS控制没有复发组完全牺牲后三个星期。

 2.3。肠道炎症过程的评估

实验过程中,动物是整体健康的评估使用各种标记,如食品消费、体重,出现腹泻。在每个治疗,动物被牺牲和结肠切除和评估使用宏观破坏,生化,微观,免疫组织化学和免疫印迹方法。

 2.4。宏观评估

冒号的重量,依从性肠的相邻器官和肠道损伤的严重程度和范围进行评估如贝尔和他的同事所述 13]。

 2.5。生化评估

冒号进行评估的组织样本总谷胱甘肽( 14)、髓过氧化酶(MPO)活动( 12),碱性磷酸酶( 15),使用bicinchoninic酸和总蛋白质含量(BCA)方法( 16]。

 2.6。微观评估

后的宏观评估结肠组织,组织样本(0.5毫米)邻近病变的焦点被组织学分析和处理;6 μ片拍摄,和幻灯片与苏木精和伊红染色。微观评估被记录在一个范围从0(无病变)27日,如Stucchi和他的同事所述 17Camuesco和他的同事()和修改 18]。

 2.7。免疫组织化学

观察样品的最大效应,基于先前测量的参数,评估了组织学检查。为组织学评估,准备组织样本deparaffinized,水化,并提交抗原恢复在微波炉中使用0.1柠檬酸缓冲高温10分钟。抗原复苏后,幻灯片被放置在屏蔽解决方案30分钟。幻灯片被放置在主要抗体在PBS溶液稀释。主要的抗体使用要么是cox - 2 (Santa Cruz),评估炎症水平( 19- - - - - - 21),增殖细胞核抗原(增殖细胞核抗原)或(Santa Cruz),细胞分裂标记,来评估组织再生的水平。样本然后洗在PBS,孵化与生物素化的二次抗体,再洗,然后用ABC孵化试剂(avidin-biotin过氧化物酶复杂)Vectastain和孵化轻拍(diaminobenzidine)。结果使用徕卡显微镜幻灯片进行了分析;0.32毫米2使用徕卡Q-Win软件领域被抓获。量化了使用AVSoft BioView 4软件。

 2.8。电泳和免疫印迹分析

蛋白质样本使用布拉德福德的肠子被量化的方法( 22),大约50 μ每道克蛋白质通过解决7.5%钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)。迁移后,蛋白免疫印迹的处理。对于样本急性结肠炎模型,反hsp - 70(热休克蛋白70)主要抗体( 23, 24使用了)。慢性结肠炎模型样本的复发,EGF(表皮生长因子) 25)和间接宾语(诱导一氧化氮合酶) 26, 27)抗体。

 2.9。统计分析

结果的平均值±标准误差表示为的意思。差异意味着由方差分析测试(方差分析)其次是测试的意义。非参数数据(分数)被表示为中位数和四分位范围,由Mann-Whitney进行了分析 U测试。频率分析的数据 χ2测试。的值 P < 0.05 被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。感应和治疗急性结肠炎

急性结肠炎的感应后,分数给每个样本基于损伤的宏观分析。这些分数显示10毫克/公斤(EC10)的有效性和50毫克/公斤(EC50)(−)表儿茶素的剂量减少损伤的严重程度(表 1与non-colitis组相比)。这些结果证实了病变的显微分析EC10剂量治疗组(表 1)。

宏观和微观不同组的分数报急性模型。

Non-colitic TNBS控制 EC 5 EC 10 EC 25 EC 50 磺胺类。
宏观的分数 0 * 9 (1.25) 8 (1) 7 (1)* 7.5 (1) 7 (0.5)* 8 (1.5)
微观的分数 0 * 19日(1.5) 18 (1.0) 15 (1.5)* 18 (3.5) 16 (2.0) 16 (1.0)

结果表示为中位数(四分位距)。Kruskal-Wallis-Mann-Whitney, * P< 0.05的检查。 n= 5 - 8。EC 5到50:表儿茶素,剂量5到50毫克/公斤;磺胺类。:柳氮磺胺吡啶。

结肠炎引起的感应身体体重的降低,增加体重的冒号和冒号的长度减少。这些变化是相似的在所有的组织中,结肠炎被诱导,无论治疗(数据未显示)。

组织学分析TNBS控件显示溃疡和无序的粘膜和增加水肿在固有层和黏膜下层(图 1)。EC10和EC50治疗组中,组织的形态组织noncolitic组接近,比TNBS控制表现出更少的溃疡和无序。治疗组EC5和EC25显示溃疡和增加水肿的固有层和黏膜下层。

组织学分析冒号的老鼠受到急性实验性结肠炎。样本Hemantoxylin和伊红染色。

 3.2。生化分析急性结肠炎模型

生化分析提供信息的作用可能的机制EC在从大鼠结肠组织对待EC10(降低了宏观和微观的分数)。这组提出的谷胱甘肽水平明显高于TNBS控件(表 2)。没有发现差异之间的结肠炎治疗组和TNBS控制对其他参数进行了分析(MPO、碱性磷酸酶和总蛋白)(表 2)。

生化量化的谷胱甘肽、髓过氧化酶(MPO),结肠和碱性磷酸酶的动物报急性结肠炎模型。

谷胱甘肽(nmol / g) MPO (U / g) 碱性磷酸酶(μ/毫克的蛋白质)
Non-colitic 1555±107.83 * 16.98±4.63 * 8.43±0.79 *
TNBS控制 954.73±69.74 1780 .19±263.77 17.21±1.16
EC 5 1035±72.95 1975 .90±294.86 20.78±1.98
EC 10 1176 .55±46.34 * 1876 .74±243.27 17.83±1.30
EC 25 1130 .95±42.46 1973 .38点±178.27 20.04±2.71
EC 50 1127±35.36 1806点±219.35 20.47±2.02
柳氮磺胺吡啶 1104 .60±22.33 1814 .55±214.46 20.49±2.01

结果均值±E.P.M. ANOVA-Dunnet TNBS对照组比较,* P< 0.05。 n= 5 - 8。EC 5到50:表儿茶素,剂量5到50毫克/公斤。

3.3。Immunolabeling分析急性结肠炎模型

免疫组织化学与cox - 2(图 2)透露,EC10(唯一的剂量评估,因为它提供了最大的效果)cox - 2的表达明显下降而造成TNBS控制(表 3)。增殖细胞核抗原(图的抗体标记 3)增加表达的肽EC10组与TNBS相比对照组(表 3)。

免疫组织化学量化cox - 2和PCNA-positive hsp - 70的细胞和免疫印迹结肠的动物报急性结肠炎模型。

cox - 2 ( μ 米2/毫米2) PCNA(细胞/毫米2) hsp - 70(俄文)
Non-colitic 4058 .65点±3356.31 * 249.21±18.49 * 4.61
TNBS控制 24207 .99±2614.22 399.34±19.43 335.70
EC 10 9257 .06点±3110.30 * 572.83±15.69 * 456.28
柳氮磺胺吡啶 14635 .04点±2039.01 * 372.52±24.85 541.07

结果均值±E.P.M. ANOVA-Dunnet。* P< 0.05比较TNBS控制。 n= 5 - 8。EC 10:表儿茶素,剂量10毫克/公斤。俄罗斯:随机单位。

免疫组织化学分析cox - 2的表达在冒号不同治疗的老鼠受到急性实验性结肠炎。箭头表示的表达式。

PCNA-positive细胞的免疫组织化学的分析表达式冒号不同治疗的老鼠受到急性实验性结肠炎。箭头表示的表达式。

没有区别的表达hsp - 70样本EC10之间和TNBS对照组观察了免疫印迹(图 4)。

免疫印迹和测量冒号hsp - 70的不同治疗的老鼠受到急性实验性结肠炎。

 3.4。感应和治疗慢性结肠炎复发

我们使用两个治疗组评估慢性结肠炎基于这样的观察:10到50毫克/公斤剂量的EC急性化验有最好的治疗效果。最后三周的每周化验,损伤的宏观得分记录。在急性实验,EC10治疗组比有显著较低的得分TNBS对照组(表 4),包括那些发生后复发。后第三周(复发),EC10治疗组的得分没有显著不同于TNBS对照组没有复发与其他的colitic组。

宏观和微观分数colitic病变的不同群体提交与复发慢性结肠炎模型。

1星期得分 第二周得分 第三周得分
宏 微 宏 微 宏 微
Non-colitic 0 * 0 * 0 * 0 * 0* # 0* #
TNBS控制 6 (1.5) 18 (2) 6 (1.5) 19日(2.5) 5.5 (1.75)# 18.5 (1)#
EC 10 4 (1)* 14 (1.5)* 2 (1)* 13 (2)* 3 (1)* 15 (2)*
EC 50 4 (2.5) 16 (2.5) 3 (1) 15 (1.5) 4 (1.5)# 16 (1.5)
柳氮磺胺吡啶 3.5 (2.5) 15.5 (2.5) 4 (1.5) 16 (1.5) 5 (2)# 17 (2)#
不复发TNBS - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 2 (1)* 12 (1)*

结果表示为中位数(四分位距)。Kruskal-Wallis-Mann-Whitney, * P< 0.05 TNBS组比较,# P< 0.05比较不复发TNBS控制。 n= 4 - 7。EC 10到50:表儿茶素,剂量10到50毫克/公斤。

平均身体重量治疗组之间没有显著差异表儿茶素和noncolitic组(数据未显示)。关于重量和长度的结肠慢性实验,noncolitic集团冒号较长,如急性试验,但只有在第二和第三周。电子商务集团没有不同于TNBS对照组在任何时候。

EC10集团组织的组织学分析表明,粘膜的完整性维护,和小水肿的黏膜和黏膜下层,noncolitic组中观察到。TNBS控件显示溃烂区域的分析和广泛水肿(图 5)。

组织学分析冒号的老鼠受到慢性实验性结肠炎复发。样本Hemantoxylin和伊红染色。

 3.5。生化分析慢性结肠炎复发模型的分析

在急性试验、生化量化显示组中的谷胱甘肽水平显著增加处理EC10 TNBS控制相比第一和第三周。这证实,电子商务作为一种抗氧化剂通过维持谷胱甘肽的水平组织(表 5)。在第二周,没有增加检测,由于长时间以来感应(两周)比第一个(一个星期)或第三周(一周后复发)。髓过氧物酶和碱性磷酸酶活性的差异不显著观察到EC团体和TNBS之间的控制。

生化量化的谷胱甘肽、髓过氧物酶和碱性磷酸酶在结肠内的动物报慢性结肠炎模型。

谷胱甘肽(GSH) (nmol / g)
谷胱甘肽1星期 谷胱甘肽2星期 谷胱甘肽3周
Non-colitic 1727 .88点±95.34 * 1134 .20±79.27 1726 .73点±34.92* #
TNBS控制 1323±43.15 1353 .74±77.53 1374点±77.55#
EC 10 1662 .56点±99.92 * 1236 .37点±45.62 1673 .06点±82.37* #
EC 50 1529 .50±87.26 1150 .68点±52.38 1658 .92±110.49
柳氮磺胺吡啶 1555点±141.52 1269 .79±57.53 1562 .79±110.64#
不复发TNBS - - - - - - - - - - - - 1914 .64点±63.62 *
髓过氧化酶(MPO) (U / g)
MPO 1星期 MPO 2星期 MPO第三周
Non-colitic 64.56±19.05 * 101.65±6.63 * 71.69±5.64* #
TNBS控制 377.52±85.14 219.49±25.09 634.42±149.44#
EC 10 386.31±76.80 247.64±34.71 401.91±70.28
EC 50 463.36±98.97 211.67±51.93 504.98±144.73
柳氮磺胺吡啶 383.79±81.39 179.12±26.34 450.46±73.96#
不复发TNBS - - - - - - - - - - - - 225.23±46.09 *
碱性磷酸酶(ALP)(μ/毫克的蛋白质)
高山1星期 高山2星期 高山三星期
Non-colitic 20.93±2.21 * 28.18±1.56 * 17.56±1.39 *
TNBS控制 46.94±2.62 40.02±3.63 27.39±3.76
EC 10 54.04±6.67 34.96±1.56 27.23±2.10
EC 50 49.89±7.95 48.16±9.97 30.31±1.20
柳氮磺胺吡啶 55.92±7.85 39.40±5.07 38.38±4.96#
不复发TNBS - - - - - - - - - - - - 24.25±2.71

结果表示为均值±E.P.M. ANOVA-Dunnet比较每组的检查。* P< 0.05 TNBS控制相比,# P< 0.05比较不复发TNBS控制。 n= 4 - 7。EC 10到50:表儿茶素,剂量10到50毫克/公斤。

 3.6。Immunolabeling分析慢性模型

在急性实验,降低cox - 2的表达(图 6EC10-treated集团)在结肠组织,通过免疫组织化学方法评估(表 6)。为所有三个星期了,cox - 2的表达显著低于比TNBS EC10集团控制,证实了抗炎活动中观察到急性试验。更高水平的PCNA阳性细胞(图 7)观察EC10比TNBS控制第一和第三周(表 6)。

免疫组织化学的量化cyclooxygenase-2 (cox - 2)和poliferating细胞核抗原(PCNA)和免疫印迹的表皮生长因子(EGF)和诱导一氧化氮sintase(间接宾语)结肠的动物报慢性结肠炎模型。

cox - 2 ( μ 米2/毫米2) PCNA(细胞/毫米2) EGF(俄文) 伊诺(俄文)
1日星期
Non-colitic 13151 .38点±7642 .79 * 277.94±21.54 * 73.50 62.68
TNBS控制 42561 .22±7504 .32 452.82±74.51 156.94 199.82
EC 10 8515 .84±7309 .41点* 568.37±20.43 * 298.14 * 166.03
柳氮磺胺吡啶 16594 .99±6111 .12点* 387.24±23.76 139.87 132.46
第二周
Non-colitic 5899 .88点±6947 .30 * 274.82±28.95 * 66.47 53.30
TNBS控制 52894 .12点±10978 .02点 371.63±25.49 98.12 258.84
EC 10 8599 .16±7965 * 306.04±19.91 225.38 * 195.38
柳氮磺胺吡啶 29415 .99±11128 .13 396.61±22.43 82.07 271.02
第三周,复发
Non-colitic 6618 .02点±7509 .17 * 237.34±30.82 * 105.70 92.57
TNBS控制 46529±11713 .00 359.13±16.83 131.66 180.48
EC 10 8139 .53点±8095 .28点* 484.05±21.86* # 201.54 * 198.47
柳氮磺胺吡啶 ±16125 .29 10938 .09点 412.22±28.92# 94.62 147.59
不复发TNBS 8481 .50 16986 .12点± 306.04±23.26 - - - - - - - - - - - -

结果表示为均值±E.P.M. ANOVA-Dunnet, * P< 0.05 TNBS组比较,# P< 0.05比较不复发TNBS控制。 n= 4 - 7。EC 10:表儿茶素,剂量10毫克/公斤。俄罗斯:随机单位。

免疫组织化学分析cox - 2的表达在冒号不同治疗的老鼠受到慢性实验性结肠炎复发。箭头表示的表达式。

PCNA-positive细胞的免疫组织化学的分析表达式冒号不同治疗的老鼠受到慢性实验性结肠炎复发。箭头表示的表达式。

探讨细胞增殖的机制增加,粘膜EGF的冒号的存在是由免疫印迹 。发现的冒号EC10组EGF水平高于那些TNBS控制(图 8)。在EGF水平可以解释这种差异的增加细胞增殖引起的EC治疗。伊诺的表达也评估了免疫印迹;没有在本研究中使用的治疗减少了伊诺的表达式(图 9)。

免疫印迹和诱导后EGF水平测量慢性结肠炎复发。

免疫印迹和伊诺测量水平感应后慢性结肠炎复发。

 4所示。讨论

肠道炎症的感应TNBS提供了一个有效的结肠炎动物模型。动物受到TNBS-induced结肠炎患有腹泻、体重(特殊TNBS对照组)和结肠黏膜和黏膜下层的瓦解;这些参数的变化测量获得的类似Luchini和合作者 28测试了香豆素和4-hydroxycoumarin]。

其中一个最有趣的发现在这个研究谷胱甘肽(GSH)问好。谷胱甘肽是一种三肽,是由粘膜细胞和功能是一种抗氧化剂在氧化代谢;其角色包括氢过氧化物的去除和生理状态的蛋白质巯基的维护组( 29日, 30.]。EC10导致更高的谷胱甘肽水平在急性和慢性复发模型,可以推断表儿茶素刺激组织谷胱甘肽的表达,从而作为一种抗氧化剂。也有可能表儿茶素直接谷胱甘肽的抗氧化作用,防止损耗炎症过程。这个观察证实的保护上皮结构EC-treated组。

尽管它可以降低中性粒细胞的浸润能力(如显微镜观察到),表儿茶素无法降低MPO水平在结肠组织相比TNBS控制。这种能力可能与诱导结肠炎的性质,导致这样一个广泛的损害MPO强烈持续的高水平,这是罕见的任何治疗展览这药理作用[ 31日]。,不能补偿水平较高的谷胱甘肽在动物的冒号处理表儿茶素,一起,表儿茶素,抑制脂质过氧化的能力 在体外,独立的干涉谷胱甘肽活动( 7),支持假设表儿茶素行为规范化氧化应激的抗氧化机制。这种有益的活动在肠道炎症经常观察治疗后植物提取物富含多酚化合物(如 Turnera ulmifolia( 32),因为它们的抗氧化活性。失衡oxygen-reactive物种的形成和氧化微量元素是非常重要的在发病机理及延续组织损伤的炎性疾病一般( 33]。因此,治疗使用抗氧化剂的方法可能有前途的溃疡性结肠炎的治疗和预防。

抗炎活动也是对炎症性肠病的治疗。黄酮类化合物被认为是抗炎化合物,其治疗效果在保护粘膜是通过一个复杂的机制,涉及对类二十烷酸合成的抑制和/或清除自由基和抗氧化活性 34]。几项研究表明,类黄酮 Mouriri天导致降低cox - 2的表达在胃粘膜 5, 34]。类似的效果观察在这项研究中,强调电子商务可能的作用机制之一。

损伤愈合被增殖细胞核抗原和表皮生长因子的量化评估。PCNA阳性细胞的S期细胞周期,所以可以使用这种抗原作为增殖细胞的标记( 35]。在结肠隐窝细胞的数量是严格监管,细胞增殖和细胞死亡之间的平衡需要维持体内平衡( 36]。PCNA immunolabeling实验中,我们观察到的增加电子商务组PCNA标记在急性实验模型中。在慢性模型中,尽管PCNA水平增加EC10小组第一和第三周的治疗,在第二周,没有明显改变,最有可能因为显著损伤已愈合。这个细胞增殖是非常有利于肠道粘膜的再生,因为新细胞取代受损的上皮细胞。

EGF表达的增加在我们的工作可以解释观察到的细胞增殖增加,和可能的作用机制之一EC10结肠炎。众所周知,EGF刺激上皮细胞增殖在多种系统( 37];事实上许多生长因子调节细胞增殖、细胞分化、血管生成、炎症和胃肠道防御机制。这就是以肠道伤口修复 在体外和 体内( 38]。政府EGF的灌肠结合口服mesalazine治疗显著降低colitic炎症mesalazine治疗和安慰剂相比灌肠( 39]。上皮的溃疡诱发胃肠道干细胞的分化菌株生长局部溃疡附近小管,生产和分泌表皮生长因子( 40]。在这种情况下,EGF刺激细胞增殖和肠道粘膜上皮细胞的再生 25]。

慢性结肠炎的模型提供了重要的证据表儿茶素的疗效,因为复发病变EC10集团的发展是低效的,表明表儿茶素的恶化有可能防止结肠炎病变由于有害刺激的复发。符合这一假说,病变的显微分析表明EC10组得分明显低于对照组TNBS三周的评估和没有明显不同于TNBS控制没有复发。

在这项研究中,10毫克/公斤的有益作用剂量的表儿茶素在肠道病变消失剂量增加时,这一现象此前证明与其他酚类物质中使用相同的疾病模型。这表明,在高剂量,这些物质的氧化剂作用要远远超过他们的有益影响肠道炎症( 41]。

为了阐明其他机制、蛋白质hsp - 70等急性慢性模型中的模型和伊诺也量化。hsp - 70(热休克蛋白70)是一个重要的蛋白质对维持肠道内稳态在结肠炎 42]。这种蛋白质比较丰富,守恒和持续生产的细胞,以应对各种形式的压力( 43如热,有毒代理人,感染,和扩散 44]。此外,有证据表明,hsp - 70在保护中扮演着重要角色的结肠粘膜colitis-induced压力( 45]。图 2显示hsp - 70的表达,表明该蛋白质既不增加EC10行动的机制和减少细胞的减少对压力的敏感性;这也是观察与槲皮素等黄酮类化合物( 46]。

伊诺的表达(诱导一氧化氮合酶)也评估了免疫印迹,因为它是一种酶在溃疡性结肠炎的发病机制有重要的作用[ 27),其表达式是增加colitic结肠( 47]。溃疡性结肠炎的类黄酮素槲皮素的抗炎效果可能与抑制伊诺的表达的能力。然而,尽管TNBS控制伊诺的表达而增加展出noncolitic集团( 18),没有治疗减少了伊诺的表达式。

 5。结论

这些结果提供的证据表明,10毫克/公斤表儿茶素有效减少病变严重程度在两个急性和慢性结肠炎模型。虽然表儿茶素没有减少中性粒细胞浸润黏膜,如缺乏酶MPO的浓度的变化,表儿茶素对损伤的粘膜免受炎症浸润通过减少氧化应激,观察到的谷胱甘肽水平的维护。表儿茶素的抗炎作用也在降低组织中cox - 2的水平。此外,表儿茶素能刺激细胞增殖和修复上皮细胞的刺激EGF的表达。EGF等生长因子已被越来越多的用于治疗肠道炎性疾病和揭示潜在的新药的发展目标。

 确认

这项工作是企业管理学院德基金会支持的“尽管做Estado de圣保罗02/05503-6 06/55542-9,07/53201-2,09-52237-9,10/08536-9。作者要感谢Souza, v . M。丰塔纳,f·J。,和Sarzi, and M. R. R. for technical support (Laboratório de Histologia Do Departamento de Clínica Médica FMB UNESP).

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