糖尿病是导致伤口愈合延迟的常见原因。本研究旨在探讨外用生育酚乳膏对糖尿病大鼠创面愈合过程的影响。本研究将18只雄性sd大鼠分为三组:(1)糖尿病大鼠给予对照乳膏据inline-formula>
创伤可以定义为一个结构的正常细胞、解剖和功能连续性的破坏。因此,伤口愈合是一个复杂的过程,其目的是恢复损伤组织的结构和功能完整性[据xref ref-type="bibr" rid="B1"> 1据/xref>].伤口愈合可分为三个阶段,炎症、增殖、重塑和成熟阶段,涉及各种细胞、细胞因子和生长因子的相互作用[据xref ref-type="bibr" rid="B2"> 2据/xref>].在一些病理障碍如糖尿病,肾衰竭,营养不良,伤口愈合都大大受损了[据xref ref-type="bibr" rid="B3"> 3.据/xref>].在糖尿病患者中,糖尿病足溃疡的患病率为4-10%,而足溃疡的治疗既昂贵又广泛[据xref ref-type="bibr" rid="B4"> 4.据/xref>].先前的研究表明,自由基会抑制伤口愈合的过程[据xref ref-type="bibr" rid="B5"> 5.据/xref>].因此,可以通过使用抗氧化剂加速伤口愈合过程。据/p>
最近,研究专注于使用草药提取物和维生素等天然抗氧化剂对伤口愈合。使用动物模型研究了维生素对伤口愈合的有益效果。只有维生素C已显示在人类受试者中加速愈合[据xref ref-type="bibr" rid="B6"> 6.据/xref>].口服和外用维生素A已被证明可以增强糖尿病、免疫抑制和恶性肿瘤动物模型的愈合[据xref ref-type="bibr" rid="B7"> 7.据/xref>-据xref ref-type="bibr" rid="B10"> 10.据/xref>].维生素E口服对伤口愈合的积极作用也有很好的记录。以前,我们报告了口服给予棕榈 - 维生素E对衰老和糖尿病大鼠模型的伤口愈合的益处[据xref ref-type="bibr" rid="B11"> 11.据/xref>那据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].Raxofelast,腹膜内注射的亲水性维生素-E样化合物已经显示出其在糖尿病大鼠造成伤口模型中有希望的伤口愈合性能[据xref ref-type="bibr" rid="B13"> 13.据/xref>].然而,考虑到糖尿病患者的差的积液和微循环功能不全,与口服给药相比,维生素E的局部应用在加速伤口愈合方面可能更有效。因此,在这项研究中,我们旨在评估生育酚局部应用在链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠伤口愈合的形式中的作用。据/p>
健康的男性Sprague-Dawley大鼠(重250-300克)在实验室动物资源单位中繁殖,在整个实验期间使用kebangsaan Malaysia。它们在受控的环境条件下,可免费获得大鼠颗粒和清洁水,单独笼。从克班达州大学(UKMAEC)获得了前面的道德批准。据/p>
链脲佐菌素(STZ,Sigma,德国)溶解在正常盐水中。在此之后,通过横向尾静脉注射45mg / kg剂量的STZ通过在轻度乙醚麻醉下通过横向尾静脉注射过夜禁食大鼠[据xref ref-type="bibr" rid="B2"> 2据/xref>].三天后,从这些大鼠的尾部抽取血液样本,使用血糖仪(Advantage, Germany)测定空腹血糖水平。将空腹血糖大于8 mmol/L的大鼠标记为糖尿病,纳入实验。据/p>
将糖尿病大鼠随机分为3组,每组6只。I组为糖尿病对照组,给予vehicle cream。而II组和III组为糖尿病治疗组,分别用0.06%和0.29%的生育酚乳膏(Golden Hope Bioorganics, Malaysia)治疗。据/p>
用电剃须刀刮除麻醉大鼠背部的毛,并用酒精棉签擦拭。用无菌6mm穿刺针(Stiefel, Ireland)在每只大鼠背部做4个全层切除创面[据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].切除包括表皮,真皮和Panniculus carnosus。将伤口脱衣服,并根据各自的群体每天局部每次局部局部用0.1g霜处理10天。据/p>
在伤害第0天,第6天和第10天后拍摄患有厘米级的伤口。使用图像分析仪软件使用照片用于测量伤口区域[据xref ref-type="bibr" rid="B2">
2据/xref>].伤口封闭率,即,使用下式计算来自原始伤口的伤口减少的百分比[据xref ref-type="bibr" rid="B14">
14.据/xref>]:据disp-formula>
每日外用乳膏治疗10天后(STZ治疗20天后),麻醉下实施颈椎脱位安乐死。用同样大小的穿刺活检针切除一对伤口并储存在据inline-formula>
Bradford方法用于定量伤口中的总蛋白质含量[据xref ref-type="bibr" rid="B15"> 15.据/xref>].伤口组织以1:5 (wt/vol)的比例用1.15%的氯化钾均匀化。加入5 mL蛋白试剂(0.01%考马斯亮蓝G250, 4.7%乙醇,8.5%磷酸),加入0.1 mL匀浆中。用0.1 mL生理盐水和5 mL蛋白试剂配制的空白蛋白试剂在595 nm处测定吸光度。用0、20、40、60、80、100制备标准曲线据italic> μ据/italic>G / ml在正常盐水中的BSA同样处理。据/p>
福尔马林固定组织按标准程序进行常规处理,并连续切片据italic> μ据/italic>m,用苏木精伊红(H&E)和Verhoeff 's van Gieson (VVG)染色。使用数码相机(Pixelink,加拿大)和光学显微镜(徕卡,德国)对载玻片进行检查并获得显微照片。据/p>
所有结果都表示为平均值±SEM。使用差异分析(ANOVA)进行比较该组的手段,然后进行Scheffe的测试。使用统计包装程序SPS 11.5进行数据分析。一种据inline-formula>
大鼠静脉注射STZ后,空腹血糖较注射前升高3-4倍(图)据xref ref-type="fig" rid="fig1">
1据/xref>那据inline-formula>
数字据xref ref-type="fig" rid="fig2">
2据/xref>显示了实验大鼠不同时间创面的收缩率。伤口愈合率计算为伤口从原始伤口愈合的百分比(图)据xref ref-type="fig" rid="fig3">
3.据/xref>).糖尿病大鼠接受治疗的伤口闭合率显着增加(据inline-formula>
伤口的总蛋白质含量(图据xref ref-type="fig" rid="fig4">
4.据/xref>),用Bradford’s法估计。使用生育酚乳膏治疗后,伤口总蛋白含量显著增加(据inline-formula>
在第10天收获的伤口上进行H&E染色(图据xref ref-type="fig" rid="fig5">
5.据/xref>和据xref ref-type="fig" rid="fig6">
6.据/xref>).所有基团的实验大鼠都显示出伤口区域的完全上皮化。在群中形成的新上皮层出现薄而薄而显示出所有四个地层结构。生育酚霜治疗组显示出良好形成的上皮。用0.29%生育酚奶油的处理增加了上皮和真皮层之间的血栓层。VVG染色(图据xref ref-type="fig" rid="fig7">
7.据/xref>)显示两组均有丰富的胶原纤维形成,而对照组纤维沉积较少。据/p>
第10天创面进行H&E染色切片(10X)。各组均观察创面完全上皮化。I组新生上皮较薄。III组皮肤上皮与真皮呈交指状,皮肤完整性较强。E:表皮,S:疤痕/肉芽组织。据/p>
第10天创面(20X) he染色切片。对新形成的上皮进行评估,发现I组不包含上皮的所有层。而II组和III组则表现为萌发层(G)、棘层(S)、颗粒层(Gr)和角质层(C)。E为表皮层。据/p>
在第10天伤口(40x)上染色部分。在瘢痕组织中发现的胶原纤维(箭头)在群体中深入上皮,我出现薄而稀释。用生育酚奶油处理增加了瘢痕组织中发现的胶原纤维的丰度。据/p>
生育酚和生育三烯醇的结构相似,是维生素E的亚家族[据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].据italic> α据/italic>-生育酚被认为是人类体内最丰富、最活跃的维生素E形式[据xref ref-type="bibr" rid="B16"> 16.据/xref>那据xref ref-type="bibr" rid="B17"> 17.据/xref>].以前的研究表明,当给予口头时,在口服时已经证明了维生素E在伤口愈合过程中的有益作用据xref ref-type="bibr" rid="B11"> 11.据/xref>那据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].本研究表明,外用生育酚乳膏也可促进糖尿病大鼠创面愈合。据/p>
在本研究中,STZ用于静脉内诱导实验大鼠的糖尿病。注射STZ后三天,所有大鼠都显示出血糖水平的增加,体重减轻,粘合剂和聚尿。在整个实验期间,禁食血糖仍然不断升高。这些标志和症状也在先前的研究中显示[据xref ref-type="bibr" rid="B18"> 18.据/xref>].II组和III组外用生育酚乳膏对空腹血糖无影响。据/p>
伤口闭合是评估伤口愈合进展的有用测量。已经表明,与正常大鼠相比,糖尿病大鼠伤口收缩率降低了[据xref ref-type="bibr" rid="B2"> 2据/xref>].在本研究中,应用0.06%和0.29%的生育酚霜能够增加伤口收缩的速率。这是根据先前的研究,其表现出伤口收缩率提高,术后的生育酚(Tocophherol)据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].据/p>
总蛋白含量是伤口组织蛋白水平和细胞增殖的指标[据xref ref-type="bibr" rid="B2"> 2据/xref>].在这项研究中,生育酚乳膏能够增加糖尿病大鼠的总蛋白质含量,这与之前的一项研究一致[据xref ref-type="bibr" rid="B12"> 12.据/xref>].这可能表明生育酚增强了伤口组织中的蛋白质合成,细胞增殖和迁移。有趣的是,先前的研究表明生理上相关的浓度据italic> α据/italic>-生育酚抑制血管平滑肌细胞增殖,而成纤维细胞增殖未受抑制[据xref ref-type="bibr" rid="B19"> 19.据/xref>].据/p>
组织学观察揭示了所有糖尿病大鼠的完全上皮化,在伤害10天后,在10天后,没有生育酚霜处理。然而,未处理的糖尿病大鼠显示出未成熟和薄的上皮层。生育酚治疗组表明,新成型的上皮含有地层胚胎,锭型,颗粒体和角质盐。在第三组中,上皮细胞和真皮之间存在间隔。这些间断很重要,因为它为由于撕裂而提供表皮层的分离的抵抗力。还表明,随着生育酚处理,瘢痕组织中的胶原纤维在瘢痕组织中越多,也反映在总蛋白质含量中。据/p>
糖尿病是一种常见的内分泌疾病,是损伤愈合的主要原因之一。糖尿病的伤口延迟愈合是多因素的,包括高血糖、感染、免疫抑制、局部缺血和氧化应激[据xref ref-type="bibr" rid="B20"> 20.据/xref>].在糖尿病病症中,高血糖可降低细胞增殖和胶原沉积。在伤口部位发生的慢性炎症导致局部缺血,反应性氧物质(ROS)的产生,微循环中的血管淤滞,减少趋化性和吞噬作用,减少生长因子水平,抑制成纤维细胞增殖,并降低细胞外基质分子的沉积减少然后将其导致糖尿病患者的伤口愈合延迟[据xref ref-type="bibr" rid="B20"> 20.据/xref>那据xref ref-type="bibr" rid="B21"> 21.据/xref>].先前的研究表明,生育酚刺激环磷酸腺苷(cAMP)的产生,cAMP通常通过调节多种免疫细胞类型(包括巨噬细胞)的炎症反应而与免疫调节作用相关[据xref ref-type="bibr" rid="B22"> 22.据/xref>].通过促进促炎细胞因子和趋化因子生产,还已显示生育酚具有抗炎作用[据xref ref-type="bibr" rid="B22"> 22.据/xref>].因此,应用生育酚有助于糖尿病大鼠创面愈合,这可能是由于其抗氧化和抗炎特性。据/p>
总之,局部生育酚霜的给药对糖尿病动物模型的伤口愈合过程具有积极影响。在本研究中,与0.06%生育酚霜相比,0.29%的生育酚霜的较高剂量显示出更好的伤口愈合。据/p>
本研究资助了Sime Darby Research Grant No。JJ-001-2008。据/p>
提交人声明他们没有利益冲突。据/p>