ECAM 以证据为基础的补充和替代医学 1741 - 4288 1741 - 427 x Hindawi出版公司 487543年 10.1155 / 2011/487543 487543年 研究文章 密集的陆基鱼文化的影响在青岛,中国,在细菌社区周围的海洋水和沉积物 李 Qiufen 1 张 严 1 张超 大卫 2 福丁 娜塔莉 2 格里尔 查尔斯·W。 2 1 黄海渔业研究所 中国水产科学院 106年南京路 山东 青岛266071年 中国 cafs.ac.cn 2 生物技术研究所 加拿大国家研究委员会 Royalmount大街6100号 蒙特利尔 魁北克 加拿大 H4P r2 2 nrc-cnrc.gc.ca 2011年 13 9 2011年 2011年 15 01 2011年 26 05年 2011年 30. 06 2011年 2011年 版权©2011李Qiufen et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

密集的陆基鱼文化的影响在青岛,中国,在细菌社区周围的海洋环境进行了分析。培养的研究表明,异养的最高数量,ammonium-oxidizing,硝化,和硝酸盐还原细菌被发现在鱼塘和污水通道,毗邻海洋地区较低的数量和最低数量的样本500 m污水通道。变性梯度凝胶电泳(DGGE)分析被用来评估总细菌的多样性。少带观察从污水通道附近的样本和更遥远的沉积物样品相比,表明营养过剩的水产养殖设施可能会减少细菌的多样性社区附近的沉积物。系统发育分析测序DGGE乐队表明fish-culture-associated环境的细菌群落主要由Flavobacteriaceae,γ-和deltaproteobacteria,包括属 Gelidibacter、Psychroserpen Lacinutrix,和 Croceimarina。

 1。介绍

陆基密集的鱼文化在中国高速发展,带来了近年来第四海水养殖的热情。而值得注意的是,排放大量未经处理的污水,La Rosa和同事( 1)报道,在贫瘠的海洋环境中,通过饲料添加各种营养,碎石,和粪便物质能引起宏观的变化,小的,micro-fauna群落结构在水体和沉积物。此外,事实证明,密集的鱼饲养往往会导致环境富营养化,外国物种,和疾病的介绍( 2, 3]。2006年,集约化养鱼在菲律宾被证明是有害的造礁珊瑚 Pocillopora damicornis生物方面的,因为许多珊瑚被暴露在受损的废水从养鱼场 4]。

细菌社区扮演重要角色在养分循环和环境的变化很敏感。例如,积累大量的有机物能引起持久改变细菌组合( 5]。综合表征微生物种群毗邻地区水产养殖操作是预防和治疗各种疾病的重要养殖鱼类和水质的维护 6]。然而,传统文化相关的方法是费时和昂贵的,并不能代表实际情况的数据,作为微生物的~ 99.99%在自然环境中目前uncultivable [ 7]。因此,细菌在水产养殖生态系统的组成是非常了解甚少 8]。我们最好的知识,到目前为止,很少有报告细菌群落的组成和结构与陆基密集的鱼文化和渔业等性能的影响到附近的环境。

近年来,许多分子生物学方法已经成功地应用于微生物生态学分析,例如,变性梯度凝胶电泳(DGGE),它最初开发用于分析基因突变序列差异的基础上PCR电泳产品的医学研究领域。首次采用Muyzer et al。 91993年)来研究微生物的多样性。从那时起,DGGE已广泛应用于微生物多样性分析不同的生态环境,如explosive-polluted土壤( 10],河口[ 11[],扇贝早期环境 12],虾勇气[ 13),和离岸笼渔场 6]。然而,它从未被用来检查陆基fish-culture-associated环境中的微生物。在这项研究中,环境的细菌群落组成与密集的陆地海洋鱼文化是通过文化相关的调查和文化无关的方法,目的是描述环境和评估相关的细菌组成的密集的鱼文化的影响在细菌社区附近的海域。

 2。材料和方法 2.1。描述的网站和抽样

密集的陆基fish-culturing农场位于郊区的青岛,中国。这是一个新开发的行业,主要提出了大菱( Scophthalmus马克西姆斯)和日本比目鱼( Paralichthys olivaceus)与自然和地下海水。大部分的未经处理的污水被直接排入附近的凹湾。样本收集的鱼类养殖池塘、污水通道,污染海域10米的污水通道,和未受污染的海域500频道。一式三份样本收集与消毒容器从每个网站,每个包括2 L的海水和沉积物50克,并被转移到实验室在冰上。次级样本然后治疗细菌培养。剩余的样本存储在−20°C分子分析。

 2.2。检测细菌群体具有不同的生理功能

沉积物和水和消毒海水样本连续稀释10倍,和0.1毫升稀释被传播到Zobell整除的2216 e中异养细菌和其他适当的媒体对氨氧化细菌和硝化细菌( 8]。殖民地的盘子被数2 - 3天后孵化28°C。

硫酸盐和硝酸盐还原菌检测到“最可能数”方法如前所述[ 6, 14]。短暂,整除1 mL系列稀释被添加进系列10毫升的媒体。一式三份管准备每个稀释。文化被发现后7天的孵化28°C的硝酸盐还原菌和硫酸盐还原菌的14天。细菌的人口规模是指计算表,根据每个稀释管与积极成果。三个计算每个采样点的平均结果,和标准偏差(方差)。

 2.3。细菌基因组DNA的提取

基因组DNA提取使用chemical-enzymatic溶解协议( 15有一些修改。简单,膜对水的样本或10 g的每一个沉积物样品5毫升无菌蒸馏水涡在最大速度为5分钟,然后1毫升溶菌酶(100毫克/毫升)和4毫升DNA提取缓冲(Tris-HCl 100毫米,100毫米EDTA, 100毫米Na3阿宝41.5米,氯化钠,pH值8.0)被添加到管。颤抖的接种者的样本孵化1 h在30°C,和另一个20后1 h在37°C μL蛋白酶K(100毫克/毫升)补充说,其次是5 ~ 15分钟与100年在85°C μL 20% SDS。随后,样本然后离心机在4100克,持续15分钟。一秒钟7.5醋酸铵量添加到上层清液,其次是孵化在冰上,持续15分钟。此后,管离心机在4°C和9,400克15分钟,一夜之间,浮在表面的被对待冷丙胺−20°C。丸分别提高了70%和95%的乙醇。DNA终于resuspended灭菌蒸馏水。原油的DNA提取纯化了polyvinylpolypyrrolidone (PVPP)和sephacryl s - 400旋列如艾略特所述 2)去除PCR抑制剂,如潮湿的酸。治疗和治疗DNA电泳比较0.7%琼脂糖凝胶在60 V 2 h和可视化多重图象光内阁(αInnotech公司、法国)。

 2.4。16 s rDNA放大

细菌通用引物,U341 U758,被用来放大418个基点片段对应位置341至758个基点 大肠杆菌16 s rDNA序列( 9]。稳定DGGE的扩增片段的融化行为反应,正向引物包含GC-clamp [ 10]。U341和U758序列如下:U341: 5 - GCGGGCGGGGCGGGGGGCACGGGGGGCGCCGGC- - - - - - GGGCGGGGCGGGGGCCTACGGGAGGCAGCAG-3′;U758: 5′-CTACCAGG GTATCTAATCC-3′。为最佳DGGE的结果,不同的PCR条件测试。优化PCR反应进行了50 μL卷,包括5 μL的基因组DNA为模板,5 μL 10×PCR缓冲,25 pmol每个引物,200年 μ每个核苷酸的M, 1毫米MgCl2和2.5单位的聚合酶(美国皮斯卡塔韦Amersham生物科学)。添加Taq之前,样品在96°C变性5分钟,其次是降落PCR协议( 15)的退火温度设置为65°C和下降了1°C每一辆自行车,直到它达到55°C。每个周期包括变性在94°C 1分钟,1分钟的退火,在72°C扩展为3分钟。20个额外的周期进行了退火55°C。最后,5 μL的PCR产品是装上1.4%的琼脂糖凝胶100 bp DNA梯(MBI Fermentas,阿默斯特,美国)。乐队在多重图象可视化SYBR安全染料光内阁。

 2.5。DGGE分析放大DNA

DGGE进行解码普遍突变检测系统(Bio-Rad Inc .、米西索加、加拿大)所描述的制造商。进行分离的8% (W / V)丙烯酰胺凝胶1 x TAE(40毫米Tris-acetate, pH值8.0;1毫米Na2DETA)包含一个线性梯度从25%到65%变性剂(100%变性剂由7 M尿素和甲酰胺40%)所描述的Muyzer et al。 9]。在梳插入,避免干扰梯度acrylamide-N 6%, N-methylene: bisacrylamide(37.5: 1)叠加凝胶不变性剂添加( 15]。每个纯化PCR产品(约600 ng) 15 μL 2 x加载缓冲区是应用于一个车道的变性梯度凝胶。电泳运行16 h在80 V,然后染色1:10000稀释Vistra绿色染色溶液(Amersham法玛西亚生物科学公司Baie-d 'Urfe,加拿大)30分钟,和可视化FluorImager系统(型号595,Amersham) 488海里激发过滤器和530海里排放过滤器。

分析细菌多样性,每个样本的香农指数是根据强度计算(吸光度)和位置DGGE乐队的每一个车道,( 1使用) , H = - - - - - - ∑ ( n 我 N ) lg ( n 我 N ) 。

在( 1), n 我 意味着每个波段的吸收峰面积和 N 意味着吸收峰的面积的乐队在车道上。

系统树图DGGE分析带模式进行使用树枝石2.2软件包(美国代尔Soll-tech Inc .)。未加权的两组方法,基于相似度矩阵的计算存在/缺乏DGGE乐队,被用来分析样本之间的相似性。

 2.6。Reamplification和DGGE乐队的测序

从凝胶,32特定DGGE乐队与无菌外科手术刀切除。从这些乐队在一夜之间被孵化筛选了DNA在37°C消毒去离子水( 16),然后用卡塔尔投资局快速纯化PCR净化设备(试剂盒、米西索加、加拿大)。为reamplification获得的DNA作为模板。标准的PCR进行50 μL反应体积,包含1 μL DNA, 1 μL U341底漆(25 pmoL) 1 μL U758底漆(25 pmoL), 0.625 μL BSA(10毫克/毫升),5 μ8.0 L 10 x PCR缓冲 μL MgCl28.0(100毫克) μ24.9 L核苷酸(1.25毫米) μL无菌去离子水,0.5 μL Taq酶分别添加当温度达到80°C初始变性5分钟后95°C。1分钟的PCR包括25周期在94°C,在64°C 1分钟,1分钟在72°C。为了得到单一乐队清洁测序结果,模板的数量,退火温度和循环数是根据标准PCR的结果调整协议对个人样本。Amplicants显示单一乐队在1.4%琼脂糖凝胶纯化GFX净化设备(美国皮斯卡塔韦Amersham)和量化通过加载1 μL与稀释到1.4%的琼脂糖凝胶比较一系列DNA梯100个基点。样品(20 μng / L, 2 μ拉瓦尔大学L)被送到测序。

 2.7。系统发育分析细菌社区

获得的序列是手动更正通过比较正向和反向的共识序列与软件Macvector 8.1(美国卡里Macvector Inc .)。修正序列的长度变化范围从352到387个基点。序列使用Clustal W项目最初对齐,然后分析指的是密切相关的序列从NCBI检索网站: http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastn。相同的序列相同的移民对DGGE被视为一个。进一步手动修改对齐进行使用multicluster函数。

 3所示。结果 3.1。与文化相关的细菌检测方法的数量

细菌从5重要生理上定义组是所有沉积物和水样品中发现的。如表所示 1总异养细菌的数量在鱼池和污水通道是最高(1.25 - 1.29×105CFU / g),其次是污染海域接受鱼文化废水(1.23 - 4.7×104CFU / g),未受污染的海域500 m污水通道是最低(1.6到4.3×103CFU / g)。沉积物中细菌数量均高于相关的水环境。ammonium-oxidizing的数量细菌、硝化细菌、异养细菌,硝酸盐还原菌也有相似的分布趋势,变化从4.0×101细胞/ g 1.5×105细胞/ g,表明活性氮污染地区的发行量。然而,硫酸盐还原细菌的数量只有2.3×101细胞/ g 4.6×102沉积物中细胞/ g和3 ~7.5×101细胞/ g的水域,明显低于其他细菌。

人口规模的各种细菌组沉积物和水样本。

采样地点 总没有。异养细菌(CFU / g或毫升) 不。ammonium-oxidizing细菌(CFU / g或毫升) 不。硝化细菌(CFU / g或毫升) 不。硫酸盐还原菌(细胞/ g或毫升) 不。硝酸盐还原菌(细胞/ g或毫升)
沉积物的污染海域 6.70±0.05×104 1.90±0.01×103 9.80±0.03×103 4.60±0.04×102 1.20±0.10×103
未受污染的海域的沉积物 4.30±0.10×103 1.50±0.12×103 4.60±0.14×103 2.30±0.20×101 2.10±0.03×103
水鱼的池塘 1.25±0.13×105 7.50±0.01×102 4.40±0.17×104 < 3 4.30±0.20×103
废水的水通道 1.29±0.32×105 2.10±0.05×102 4.90±0.06×103 < 3 1.50±0.09×104
水的污染海域 1.23±0.15×104 6.20±0.08×102 4.60±0.09×103 7.50±0.21×101 1.10±0.05×103
未受污染的海域的水 1.60±0.08×103 4.00±0.20×101 1.00±0.05×102 < 3 9.00±0.15×102
3.2。基因组DNA的细菌隔绝Fish-Culture-Associated环境

获得基因组细菌的DNA片段的大小约为23 kb。从布朗提取成为无色,电泳乐队变得清晰和PVPP净化后,Sephacryl (s - 400)列(数字 1(一)和 1(B)),这表明PVPP Sephacryl净化和有效地去除粗提取物的抑制因素。

的基因组DNA电泳分离水和沉积物中细菌群落的fish-culture-associated环境在青岛,中国。显示PVPP和Sephacryl是有效净化原油DNA提取。(一)纯化DNA提取和PVPP Sephacryl;(B)原油净化前DNA。标记: λDNA消化HindIII(箭头表示23.1 kb片段),1:水从池塘的鱼文化;2:水在污水通道;3:水从污染海域;4:从受污染的海域沉积物;5:水未受污染的海域;6:未受污染的海域的沉积物。

 3.3。16 s rDNA放大

417年英国石油公司16 s rRNA基因的片段与引物GC U341和U758放大。保险single-specific乐队的代表协议。收益率是相当高的,明亮的乐队如图 2。

凝胶电泳扩增16 s rDNA菌进行基因的基因组DNA,表明目标6样本DNA片段被成功放大。M: 100个基点DNA梯;−:负控制;+:积极的控制;1;水从池塘渔业;2:水在污水通道;3:水从污染海域;4:从受污染的海域沉积物;5:水未受污染的海域; 6: sediment from unpolluted sea area.

 3.4。DGGE带概要文件的样本来自不同的环境

PCR DGGE分析产品相同的模式,与20多个乐队为每个示例,表明高细菌群落的多样性。如图 3带沉积物的模式显示,更高的多样性和更多的均相分布的水域。在水中的细菌多样性的增加减少了鱼塘的距离。这可以证明他们的香农指数,如表所示 2。主导乐队这些样本的重要性也大大不同,水从鱼塘>水从污水频道>从未受污染的海域污染海域>水>沉积物的污染海域>未受污染的海域的沉积物,表明鱼文化可能导致减少细菌多样性和一些物种可能成为绝对优势。

香农指数所表现出的水和沉积物样品中的细菌DGGE乐队。

样品没有。 1 2 3 4 5 6
香农指数 1.25 1.27 1.37 1.46 1.15 1.19

DGGE的16 s rDNA片段在不同的水和沉积物样品中的细菌群落,显示高多样性鱼文化相关的环境和样品之间的差异。1:水从污染海域;2:水未受污染的海域;3:从受污染的海域沉积物;4:未受污染的海域沉积物;5:水从池塘的鱼文化;6:水从污水通道;M:标记。

系统树图的DGGE乐队模式反映了相关相似/不同的DGGE车道。如图 4,这两个沉积物样品污染和未受污染的海域被聚集到一组(SAB0.67)和聚集成一个大群和两个水样来自同一海域(SAB0.52)。然而,这两个从鱼塘水样和污水通道被聚集到另一组(SAB0.65)。与此同时,相似系数(SAB)的海域的鱼文化池塘和样本的样本仅为0.34,表明细菌群落组成在同一生境更相似。

UPGMA树枝石相似性评估DGGE概要见图 3显示样本之间的相似性。1:水从污染海域;2:水未受污染的海域;3:从受污染的海域沉积物;4:未受污染的海域沉积物;5:水从池塘渔业;6:水从污水通道。

 3.5。系统发育分析测序DGGE乐队

总共32波段选择DGGE凝胶和reamplified引物U341 U758。其中,19个生产清洁的测序结果。最接近的匹配这些序列被确定通过NCBI BLAST分析。研究结果总结在表 3。这些序列的相似性而引用数据库从93%到100%不等。

最近的爆炸与16 s rRNA fish-culture-associated环境中细菌的基因。

采样地点 不。DG E乐队 大小的DNA (bp) 最近的亲戚 加入不。爆炸的最接近的匹配 %的身份 菌株的分类
沉积物的污染海域 H1 408年 Gelidibactersp。 EF108219 99% Flavobacteriaceae
H2 415年 Psychroserpens mesophilus DQ001321 98% Flavobacteriaceae
H3 410年 Lacinutrix copepodicola AB261015 98% Flavobacteriaceae
H4 412年 Croceimarina litoralis EF108214 96% Flavobacteriaceae
H5 407年 Actibacter sediminis EF670651 100% Flavobacteriaceae
编辑 415年 Maribacter polysiphoniae AM497875 98% Flavobacteriaceae
未受污染的海域的沉积物 I1 408年 Flavobacteriaceae细菌 EF527870 97% Flavobacteriaceae
I2 409年 Winogradskyella thalassocola AY771720 98% Flavobacteriaceae
I3 399年 Desulfuromonassp。 AY177801 97% δ-proteobacterium
预告 412年 无教养的deltaproteo——细菌 DQ351798 99% δ-proteobacterium
池塘里的水 j - 1 391年 Thiotrophic内共生体的 艾达sp。 AM402957 93% 细菌
J2 410年 Zobellia laminariae AB121975 98% Flavobacteriaceae
废水的水通道 K1 402年 福尔摩沙sp 。 AY612758 97% Flavobacteriaceae
K2 405年 Winogradskyella thalassocola AY771720 97% Flavobacteriaceae
K3 397年 Polaribactersp 。 AF493675 98% Flavobacteriaceae
K4 400年 Polaribacter dokdonensis DQ481463 98% Flavobacteriaceae
K5 411年 Marinobactersp 。 DQ530471 98% γ变形菌门
K7 407年 未受教育的 f .细菌 AM279213 98% Flavobacteriaceae
美丽 409年 Pseudoalteromonassp 。 EF673280 95% γ变形菌门

系统发育分析序列揭示了细菌群落结构的陆基fish-culture-associated环境。一般而言,社区是由Flavobacteria, Gammaproteobacteria Deltaproteobacteria。其中,Flavobacteria显示强大的主导地位,它属覆盖 Gelidibacter、Psychroserpen Lacinutrix、Croceimarina Actibacter, Maribacter, Winogradskyella, Zobellia,福尔摩沙,和 Polaribacter。两个组变形菌门咆哮总人口的一小部分。这些物种没有独立培养,如预告和K7。对个人的环境, Polaribactersp 。(K3, K4), Marinobactersp。(K5) thiotrophic内共生体 艾达sp。(j - 1) Pseudoalteromonassp.像细菌(美丽)鱼文化中占主导地位的废水和污染海水样本。此外, 福尔摩沙sp 。(K1)也发现显著优势被污染的海水。另一方面,占主导地位的细菌污染海域的沉积物样品不一样重要,在水样。这些占主导地位的细菌在沉积物组成的 Gelidibactersp 。(H1), Lacinutrix copepodicola(H3), Croceimarina litoralis(H4), Maribacter polysiphoniae(编辑) 。未受污染的海域中几乎所有的细菌物种比他们在上述环境中且分布均匀。与此同时,一些独特的物种,如 Winogradskyella thalassocola(I2), Desulfuromonassp 。(I3)和无教养的三角洲proteobacterium(预告),在未受污染的海域。上述细菌的系统发育关系图所示 5。

序列的系统发育树16 s rDNA DGGE的碎片分开显示的分类位置细菌和彼此之间的系统发育关系。参考序列与各自的基因库加入数字显示。这棵树是1000年建造的大型引导使用邻居加入。

 4所示。讨论

报道集中养殖鱼类的饲料保护比率71.2 - -74.9%,和粪便生产比率为9.6 -3.1%。这些暗示,133公斤的氮和磷的28.8公斤排入环境1吨的鱼( 17]。放电产生的碎屑和粪便问题由于添加饲料,贫瘠海洋环境可以促使宏观的社会结构的变化,小的和在水中微动物区系列和沉积物 1),以及营养水平,物理和化学条件。定义的五个生理细菌群体选择在这个研究与有机质的含量有密切关系,溶氧水平、氮和硫循环活动在其环境。我们的研究结果表明,异养细菌的数量逐渐减少与鱼塘的距离的增加,表明鱼文化废水可以引入丰富的有机物和异养细菌的海域接受它。ammonium-oxidizing大量的细菌、硝化细菌、硝酸盐还原菌在污水污染水和海域表示活性氮循环在这些领域。这可能是由于丰富的渔业废水氮带来的鱼类代谢排泄物(粪便等)和浪费饲料。

Yoza et al。 6)观察到类似的DGGE梯度概要文件为新开发的笼子渔业沉积物样本和300米上升气流控制样本。然而,他们仍然预计,足够的营养素添加会影响沉积物环境。在我们的实验中,观察更少的多样性和物种分布的均匀度污染海域沉积物样品的比未受污染的海域,香农指数分别为1.37和1.46。这些观察建议强化陆基渔业废水对细菌社区产生了重大的影响,导致细菌多样性的减少。此外,这两个研究进行了后不久鱼文化的发展。随着时间延长培养,有理由相信,将会更加显著的影响。Asami et al。 18)也报道,密集的贝类养殖加速在沿海海洋沉积物中硫循环( 17]。此外,细菌群落生境而不是由其地理位置决定的( 19]。即渔业的影响废水的细菌群落可能发生改变它们的栖息地的化学和物理条件,除了从污水进口细菌。

的一个主导phylotype(美丽)中发现的鱼文化废水和污染海水面积属于属, Pseudoalteromonas细菌中。这属广泛分布在海洋环境 20.]。据报道, Pseudoalteromonas对海洋真核生物(有害和有益的影响 21- - - - - - 23]。主导phylotype (I3)在未受污染的海域的沉积物是类似的 Desulfuromonas sp。硫酸盐还原细菌 δ-变形菌门的家庭。并不让人觉得惊讶找到海洋沉积物中硫酸盐还原,由于硫酸是一个支持终端电子受体在这种环境下( 24),但细菌的数量通过文化相关的方法检测到很低。属 福尔摩沙(K1)被发现在污水通道水和原生海水,和异养,革兰氏阴性,运动型,有氧,布朗alga-degrading细菌组( 25, 26),表明其对海洋环境的承诺。

许多主要的细菌群体,如 Aeromonadaceae、假单胞菌科和 弧菌科检测病原体的养殖鱼类与传统culture-depended方法,并非本文通过分子生物学方法检测,表明病原菌可能不是主导整个社区。因此,细菌成分仍远比我们想象的更复杂。进一步的研究是必要的,以确定是否和水产养殖多长时间可以改变细菌群落的组成和破坏平衡在其附近的海域。

 5。结论

在本文,密集的陆基鱼文化的影响在青岛,中国,在周围的海洋环境细菌社区通过培养和分子方法进行了分析。结果异养培养的研究表明,计数,ammonium-oxidizing,硝化,硝酸盐还原菌减少距离增加从鱼塘到未受污染的海域。DGGE概要文件显示更少的乐队在污水通道附近的样本相比更遥远的沉积物样品。上述建议,过剩的营养密集的陆基鱼文化设施可能导入细菌和改变的化学和物理条件附近海域也减少细菌的多样性社区在附近水域和沉积物。

 确认

提供的金融支持本文的山东省博士后研究基金(200601011)、中国国家高技术发展项目(2006 aa10z414 2006 aa10z415)和国家海洋公益性研究项目(没有。200805069)。作者感谢教授瞿崔克明协助样本集合。

 La Rosa T。 Mirto 年代。 Mazzola 一个。 Danovaro R。 微分反应底栖微生物和较小型底栖生物的养鱼场扰动在沿海沉积物 环境污染 2001年 112年 3 427年 434年 2 - s2.0 - 0035130476 10.1016 / s0269 - 7491 (00) 00141 - x 艾略特 M。 生物污染和生物污染越来越引起人们的关注 海洋污染公告 2003年 46 3 275年 280年 2 - s2.0 - 0037366731 10.1016 / s0025 - 326 x (02) 00423 - x 麦克卢尔 c。 Hammell k . L。 Dohoo i R。 Nerette P。 霍金斯 l . J。 评估病毒的传染性鲑鱼贫血患病率不同组的养殖的大西洋鲑鱼, 大西洋鲑l,我nNew Brunswick 鱼类疾病杂志 2004年 27 7 375年 383年 2 - s2.0 - 3142691999 10.1111 / j.1365-2761.2004.00547.x 维拉纽瓦 r D。 狂吠 h·T。 Montano m . n E。 集约化养鱼造礁珊瑚在菲律宾是有害的 Pocillopora damicornis 《海洋生态发展系列 2006年 316年 165年 174年 2 - s2.0 - 33746594154 10.3354 / meps316165 Danovaro R。 Armeni M。 戴尔'Anno 一个。 粒入球 M。 Manini E。 Marrale D。 Pusceddu 一个。 Vanucci 年代。 小规模的细菌分布、酶的活动,在沿海沉积物中有机质 微生物生态学 2001年 42 2 177年 185年 2 - s2.0 - 0034891728 Yoza b。 原田 r·M。 Nihous C . C。 李 问:X。 Masutani s M。 海水养殖对附近的沉积物中微生物多样性的影响开放海洋农业Polydactylus sexfilis 生态指标 2007年 7 1 108年 122年 2 - s2.0 - 33750691053 10.1016 / j.ecolind.2005.11.001 阿曼 r . I。 路德维希 W。 Schleifer k . H。 系统识别和 原位检测单个微生物细胞培养 微生物学检查 1995年 59 1 143年 169年 2 - s2.0 - 0028946084 李 Q。 陈 B。 曲 K。 元 Y。 李 J。 太阳 X。 赵 F。 变异的细菌数量fish-shrimp mix-culturing生态系统 中国应用生态学》杂志上 2002年 13 6 731年 734年 Muyzer G。 瓦尔 e . C。 Uitterlinden a·G。 分析复杂的微生物种群通过变性梯度凝胶电泳分析聚合酶链reaction-amplified 16 s rRNA的基因编码 应用与环境微生物学 1993年 59 3 695年 700年 2 - s2.0 - 0027460328 张超 D。 德里斯科尔 b . T。 查尔斯 t . C。 格里尔 c·W。 实验效果与爆炸hexahydro-1污染,3,5-trinitro-1, 3, 5-triazine对土壤细菌群落 《微生物生态学 2003年 43 2 255年 262年 2 - s2.0 - 0037445302 10.1016 / s0168 - 6496 (02) 00403 - 8 Freitag t E。 常 l 压 j . I。 群落结构和活动的变化 β-proteobacterial ammonia-oxidizing沉积物细菌沿着freshwater-marine梯度 环境微生物学 2006年 8 4 684年 696年 Sandaa R。 Magnesen T。 Torkildsen l 马瑞医生 O。 描述相关的细菌群落与早期伟大的扇贝( 梳状突起马克西姆斯),使用变性梯度凝胶电泳(DGGE) 系统和应用微生物学 2003年 26 2 302年 311年 10.1078 / 072320203322346164 罗 P。 胡 C。 谢 Z。 PCR-DGGE分析微咸水的细菌群落组成 方面对虾系统 热带海洋学报 2006年 25 2 49 50 陈 年代。 保 W。 李 B。 污染情况近日湾和异养微生物的分析 山东海洋学院杂志》上 1987年 17 4 86年 94年 福丁 N。 Beaumier D。 李 K。 格里尔 c·W。 土壤清洗改善社区总DNA污染的恢复,沉积物有机质含量高 《微生物方法 2004年 56 2 181年 191年 2 - s2.0 - 1642523441 10.1016 / j.mimet.2003.10.006 Purdy k·J。 Nedwell d·B。 Embley t M。 分析硫酸盐还原细菌和产甲烷古细菌种群对比南极沉积物 应用与环境微生物学 2003年 69年 6 3181年 3191年 2 - s2.0 - 0037641305 蔡 H。 太阳 Y。 张 X。 环境的影响笼水产养殖和水产养殖环境容量在香山港 环境污染控制技术和设备 2006年 7 11 71年 76年 Asami H。 阿伊达 M。 渡边 K。 加快沿海海洋沉积物硫循环下的密集的贝类养殖领域 应用与环境微生物学 2005年 71年 6 2925年 2933年 2 - s2.0 - 20444376852 10.1128 / aem.71.6.2925 - 2933.2005 Staufenberger T。 泰尔 V。 威斯 J。 英霍夫 j·F。 系统发育分析相关的细菌 昆布属植物saccharina 《微生物生态学 2008年 64年 1 65年 77年 2 - s2.0 - 40549123753 10.1111 / j.1574-6941.2008.00445.x Skovhus t . L。 Holmstrom C。 Kjelleberg 年代。 Dahllof 我。 分子分布的调查,属的丰度和多样性 Pseudoalteromonas在海洋样品 《微生物生态学 2007年 61年 2 348年 361年 2 - s2.0 - 34447539880 10.1111 / j.1574-6941.2007.00339.x Sawabe T。 牧野 H。 辰 M。 Nakano K。 日本田岛 K。 伊克巴尔 M . M。 Yumoto 我。 Ezura Y。 Christen R。 Pseudoalteromonas bacteriolytica sp。11月,海洋细菌的红斑病的病原体 昆布属植物粳稻 国际期刊的细菌学 1998年 48 3 769年 774年 2 - s2.0 - 0031875269 Negri 答:P。 韦伯斯特 n S。 山 r·T。 海伍德 a·J。 蜕变的广播产卵珊瑚针对细菌隔绝壳状藻类 《海洋生态发展系列 2001年 223年 121年 131年 2 - s2.0 - 0035965856 Migue B。 Combarro m P。 细菌与沙丁鱼( Sardinapil chardus)在自然环境中鸡蛋(Ria德维,加利西亚,北西部西班牙) 《微生物生态学 2003年 44 3 329年 334年 10.1016 / s0168 - 6496 (03) 00070 - 9 灰色的 j . P。 赫韦格 r P。 在海洋沉积物中细菌的系统发育分析社区 应用与环境微生物学 1996年 62年 11 4049年 4059年 2 - s2.0 - 0029660135 vanova e . P。 Alexeeva y V。 Flavier 年代。 莱特 j . P。 可娃 n V。 Gorshkova n·M。 Mikhailov 诉V。 尼克洛 d . V。 Christen R。 福尔摩沙藻类gen。11月,sp. 11月,一个新的家庭成员 Flavobacteriaceae 国际系统与进化微生物学杂志》上 2004年 54 3 705年 711年 2 - s2.0 - 2942655110 10.1099 / ijs.0.02763-0 Nedashkovskaya o . I。 金 美国B。 Vancanneyt M。 Snauwaert C。 李森科事件 a . M。 罗德 M。 Frolova g . M。 可娃 n V。 Mikhailov 诉V。 英国宇航系统公司 k . S。 哦 h·W。 波动 J。 福尔摩沙agariphila sp。家庭的11月,一个崭露头角的细菌 Flavobacteriaceae从海洋环境隔离,校正属的描述 福尔摩沙 国际系统与进化微生物学杂志》上 2006年 56 1 161年 167年 2 - s2.0 - 31144464547 10.1099 / ijs.0.63875-0