DM 疾病标记 1875-8630 0278 - 0240 Hindawi 10.1155 / 2021/5592693 5592693 研究文章 抗p53, MMP-7和Hsp70的自身抗体作为非黑素瘤皮肤癌检测的潜在生物标志物 https://orcid.org/0000-0002-9007-0234 杨 sh汉 1 https://orcid.org/0000-0001-6479-8793 刘 罐头 2 3. https://orcid.org/0000-0002-7090-2355 在香港 Chao-Qun 4 黄 Ze-Yuan 1 王 Huan-Zhu 1 https://orcid.org/0000-0001-9930-5178 魏 赖锋 2 3. https://orcid.org/0000-0002-6273-3387 林 益威 2 3. https://orcid.org/0000-0001-5431-517X 郭 海鹏 5 https://orcid.org/0000-0002-1866-4679 彭 我家 2 3. 6 https://orcid.org/0000-0002-8670-592X 徐 益威 2 3. 6 西蒙森 安雅Hviid 1 皮肤性病科 中山大学附属汕头医院 Waima路114号 515041年汕头 中国 sysu.edu.cn 2 临床检验医学系 汕头大学医学院肿瘤医院 7饶平路 515041年汕头 中国 3. 精准医学研究中心 汕头大学医学院 新陵路22 515041年汕头 中国 stu.edu.cn. 4 肿瘤实验室研究室 汕头大学医学院肿瘤医院 7饶平路 515041年汕头 中国 5 头颈外科 汕头大学医学院肿瘤医院 7饶平路 515041年汕头 中国 6 广东省食管癌研究所 汕头大学医学院 新陵路22 515041年汕头 中国 stu.edu.cn. 2021 12 7 2021 2021 19 2 2021 31 5 2021 12 7 2021 2021 版权所有©2021 Shi-Han Yang等。 这是一篇在知识共享署名许可下发布的开放存取的文章，它允许在任何媒体上无限制地使用、传播和复制，只要原始作品被适当地引用。

基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)是非黑色素瘤皮肤癌(NMSC)的两种主要组织学类型，缺乏有效的早期诊断标志物。在本研究中，我们评估了抗p53、MMP-7和Hsp70的自身抗体在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的诊断价值。采用ELISA法检测汕头大学医学院肿瘤医院101例NMSC患者和102例正常人血清中自身抗体水平。采用接受者-操作者特征曲线评价诊断价值。NMSCs血清中抗p53、MMP-7和Hsp70的自身抗体水平高于正常对照组(均为阴性) P < 0.01 )．三抗体组的AUC为0.841 (95% CI: 0.788-0.894)，在区分NMSCs与正常对照时，敏感性和特异性分别为60.40%和91.20%。此外，该面板的测量可以区分早期皮肤癌患者与正常对照组(AUC: 0.851;95%置信区间:0.793—-0.908)。Oncomine的数据显示，BCC中p53 mRNA水平升高( P < 0．05 ），HSP70 mRNA在SCC中上调（ P < ０．００１ )这种血清三自身抗体组合可能有助于NMSC的早期诊断。

 广东省科技专项资金 180918114960704 190829105556145 李嘉盛基金会 2020年lksfg01b 汕头市科技计划医学项目 181203204010504 1.介绍

皮肤癌是最常见的癌，分类为黑色素瘤和非母瘤皮肤癌（NMSC）。除了梅尔克尔细胞癌，基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）是其他两个主要的组织学类型的NMSC [ 1]．皮肤基底细胞癌起源于滤泡间表皮或上漏斗的细胞，约占NMSCs的80% [ 2]．与普通人群相比，有皮肤基底细胞癌病史的患者3年累积风险为44%，复发风险增加10倍[ 3.， 4]．作为第二常见的NMSC，早期皮肤鳞状细胞癌患者的5年疾病特异性生存率超过75%。然而，对于有淋巴结转移的患者，5年总生存率低于50%，发生远处转移时大多低于10% [ 5]．皮肤癌的诊断主要基于病理;因此，有必要探索一些血清学指标来辅助诊断。

肿瘤相关抗原(tumor associated antigens, TAAs)不仅可在癌组织中过表达，还可分泌到外周血中，这可能是远处转移的基础[ 6]．在识别TAA之后，免疫系统可以分泌特定的自身抗体[ 7]．近十年来，大量研究关注血清抗TAAs自身抗体在不同癌症中的诊断价值，特别是在早期检测中的价值[ 8- - - - - - 11]．当涉及到皮肤癌时，大多数相关研究关注的是黑色素瘤，而不是NMSC [ 12- - - - - - 14]．血清自身抗体是否对NMSC具有潜在的诊断价值有待探讨。

在本研究中，我们评估了一组针对皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中三种公认TAAs的自身抗体的诊断价值，这三种TAAs包括p53、基质金属蛋白酶7 (MMP-7)和热休克蛋白70 (Hsp7)。p53编码于肿瘤抑制基因TP53，被描述为在癌症中引发自身抗体的第一个抗原[ 15]．从那时起，对肺癌等癌症中抗p53自身抗体的研究增多[ 16]食管[ 17]，以及口腔癌[ 18]．基质金属蛋白酶-7 (MMP-7)是基质金属蛋白酶家族的一员，在许多癌症中也发现了抗基质金属蛋白酶-7的自身抗体，包括食管癌[ 17]和口腔鳞状细胞癌[ 19]．最后一种抗原Hsp70是一种高免疫原性抗原，已被证明在几种癌症中诱导自身抗体反应[ 20.]．

 2.材料和方法 ２.１.实验对象

收集2014年11月至2020年1月汕头大学医学院肿瘤医院病理诊断为皮肤癌患者的血清样本。本研究不合格的皮肤癌标准如下:有任何其他病理类型包括黑色素瘤、皮肤纤维肉瘤或没有明确病理类型的肿瘤，既往有其他恶性肿瘤病史的患者。正常对照组由有肿瘤不存在证据的健康志愿者组成。经汕头大学医学院肿瘤医院机构伦理委员会批准，并获得每位参与者的书面同意。这项研究符合《赫尔辛基宣言》的规定。

同时收集患者的临床病理资料，包括年龄、性别、组织学类型、肿瘤部位、TNM分期等，以供进一步研究。TNM分期根据国际癌症控制联盟发布的皮肤癌分期第8版进行评估[ 21]．在本研究中，I期和II期肿瘤被定义为早期皮肤癌，III期和IV期肿瘤被认为是晚期皮肤癌。在抗癌治疗前采集外周血，室温凝血30 min, 1250 g离心5 min。然后取出血清，在-80°C的生物库中保存，直到实验开始。

 ２.２.重组蛋白表达

将P53 (NM_001276760.1)、MMP-7 (NM_002423.3)和HSP70 (NM_005345.5)编码序列亚克隆到pDEST17表达载体(Invitrogen, Waltham, MA)中。这些重组蛋白的表达、纯化和分析如我们之前的研究所述[ 17]．

 2．3.酶联免疫吸附试验(ELISA)

如SH Yang和CT Liu之前所描述的那样进行ELISA，他们对所有患者信息均不知情[ 17]．简单地说，将纯化的p53、MMP-7和Hsp70重组抗原用50 mM碳酸氢盐缓冲液稀释。血清样本和质控样本(随机采集50例癌症患者的混合血清样本)在阻断缓冲液中1:110稀释，37℃孵育1小时，对照兔多克隆抗体。洗涤三次后，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG或抗人IgG (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)作为二抗。孵育一小时后再洗一次，3,3 ” 、5、5 ” 加入-四甲基联苯胺(TMB)和双氧水形成颜色。每个孔的吸光度在450 nm处读取，并在5分钟内由赛默飞世尔科技公司(Thermo Fisher Scientific, Boston, USA)的平板微标仪参考630 nm。所有血清标本均进行双重检测。

 ２.４.Oncomine数据库分析

我们获得了Oncomine中p53、MMP-7和Hsp70基因表达的rna测序数据，Oncomine包括15例皮肤BCC样本、11例皮肤SCC样本和4例正常样本[ 22]．通过热图和箱形图比较两者的表达。

 2．5．统计分析

所有分析均使用IBM SPSS Statistics 24 (SPSS Inc, Chicago, IL, USA)、GraphPad Prism 8.0 (GraphPad Software, San Diego, CA, USA)和R package 3.6.1进行。的Mann-Whitney U 比较正常组与皮肤癌组、鳞状细胞癌组与基底细胞癌组的不同标志物水平。我们应用logistic回归分析构造一个预测概率( P )被诊断为皮肤癌的一个标志来自三种自身抗体。采用受试者工作特征(ROC)分析评估诊断边界，包括ROC曲线下面积(AUC)的95%置信区间(CI)。当特异性设定在90%以上时，敏感度达到最大。对于肿瘤标志物的临床诊断实践，其敏感性达到95%。我们比较了在皮肤癌患者手术切除前后自身抗体组的阳性率与Fisher确切试验。应用pheatmap R包绘制不同患者mrna表达热图。在这项研究中, P < 0．05 有两条尾巴被认为是有统计学意义的。

 3.结果 ３．１．病人的特点

如图所示 1在排除已确诊或未确诊的黑色素瘤12例、皮肤纤维肉瘤4例、其他肿瘤5例、未病理诊断8例等29例患者后，纳入101例NMSCs和102例正常对照。其中SCC 67例(66.3%)，BCC 34例(33.7%)。I期和II期患者分别占33/101和36/101 1)．

研究资料。ELISA:酶联免疫吸附试验。

NMSC患者和正常对照组的详细资料。

测试参数 类别 NMSC ( n ＝ 101 ） 正常( n ＝ 102 ）
情况下 ％ 情况下 ％
性别 男性 56 55.4％ 50 49.0%
女 45 44.6% 52 51.0%
入学年龄(年) ≤60 16 15.8% - - - - - - - - - - - -
61 - 70 26 25.7% - - - - - - - - - - - -
71 - 80 37 36.6% - - - - - - - - - - - -
81-100 22 21.8% - - - - - - - - - - - -
组织学类型 鳞状细胞癌 67 66.3% - - - - - - - - - - - -
基底细胞癌 34 33.7％ - - - - - - - - - - - -
网站的肿瘤 面部/头皮/额头 50 49.5% - - - - - - - - - - - -
鼻子/耳朵/唇/眼睑 31 30.7% - - - - - - - - - - - -
腿/手臂/手 10 9.9% - - - - - - - - - - - -
其他人 10 9.9% - - - - - - - - - - - -
T类别 T1 32 31.7% - - - - - - - - - - - -
T2 37 36.6% - - - - - - - - - - - -
T3 21 20.8% - - - - - - - - - - - -
T4 11 10.9% - - - - - - - - - - - -
淋巴结转移 积极的 9 8.9% - - - - - - - - - - - -
负 92 91.1% - - - - - - - - - - - -
TNM阶段 我 33 32.7% - - - - - - - - - - - -
2 36 35.6% - - - - - - - - - - - -
3 17 16.8% - - - - - - - - - - - -
4 15 14.9％ - - - - - - - - - - - -

注意：NMSC：非蛋白酶瘤皮肤癌。

 ３.２．血清自身抗体水平

如图所示 2(一个)，这三种自身抗体的水平在皮肤癌组中比正常组中的统计学上更高（p53和hsp70：两者 P < ０．００１ ；MMP-7： P < 0.01 )．为了明确区分鳞状细胞癌和基底细胞癌的特异性，我们比较了鳞状细胞癌和基底细胞癌的这些自身抗体水平。但两者之间差异无统计学意义(图 2 (b))．

研究对象的血清自身抗体测量。（a）从NMSCs患者和正常对照组中检测p53、MMP-7和Hsp70自身抗体的OD值。（b）鳞状细胞癌和基底细胞癌中显示p53、MMP-7和Hsp70自身抗体的水平。ns：无统计学意义。

 3.3.用于检测NMSC的三个自身抗体面板

抗p53、MMP-7和Hsp70的自身抗体均被确定为有效的预测因子 P 值计算 ln P / 1 − P ＝ 10.347 × p 53 + 5.590 × MMP的 量 7 + 9.483 × Hsp 70 − 2.828 ．然后, P 值绘制ROC曲线。来自ROC分析(图 3.)，特异度超过90%，抗p53自身抗体的AUC值为0.799 (95% CI: 0.739 ~ 0.859)，敏感度为48.5%(表2) 2)，抗MMP-7和Hsp70的自身抗体AUC分别为0.621和0.719，敏感性分别为34.7%和31.7%。将这三个biomarkers组合到一个panel中，我们得到的panel的AUC值提高到0.841 (95% CI: 0.788-0.894)，在区分NMSC组和正常对照组时，敏感度为60.4%，特异性为91.2%。此外，该三种自身抗体组对诊断早期NMSC患者具有很高的AUC (0.851, 95% CI: 0.793-0.908)和中等敏感性(59.4%)。对不同组织学类型也有较高的诊断价值。同时，我们评估了当特异性设置为95.0%时该专家组的诊断性能，我们发现该专家组对NMSC和早期NMSC的诊断仍然具有较高的敏感性(表) 2)．这些结果表明四自身抗体小组的稳健性。综上所述，该小组可能是区分非msc患者与正常对照组的潜在生物标志物。

个体自身抗体和自身抗体组在皮肤癌检测中的诊断性能(a)受试者工作特征(ROC)曲线，用于区分皮肤癌患者与正常对照组的能力。(b)区分早期皮肤癌个体与正常对照组能力的ROC曲线。(c)区分鳞状细胞癌患者与正常对照组的ROC曲线。(d)区分基底细胞癌患者与正常对照组的ROC曲线。

NMSC中单个自身抗体和自身抗体面板的诊断值。

AUC 森 SPE PPV 净现值 PLR NLR
NMSC的所有阶段
p53自身抗体 0.799 (0.739 - -0.859) 48.5%/40.6% 90.2%/95.0% 83.1% / 89.2% 63.8% / 61.7% 4.95 / 8.29 0.57/0.63
MMP-7自身抗体 0.621 (0.543 - -0.699) 34.7％/ 31.7％ 91.2% / 95.0% 79.6% / 86.5% 58.5% / 58.4% 3.94/6.47 0.72/0.72
HSP70自身抗体 0.719 (0.649 - -0.789) 31.7% / 29.7% 93.1% / 95.0% 82.0% / 85.7% 57.9％/ 57.7％ 4.59 / 6.06 0.73/0.74
自身抗体面板 0.841（0.788-0.894） 60.4% / 51.5% 91.2% / 95.0% 87.2% / 91.2% 69.9% / 66.4% 6.86/10.51 0.43/0.51
NMSC的早期阶段
p53自身抗体 0.819 (0.754 - -0.885) 49.3% / 43.5% 90.2%/95.0% 77.3％/ 85.8％ 72.4％/ 70.3％ 5.03/8.88 0.56/0.59
MMP-7自身抗体 0.627 (0.536 - -0.718) 37.7% / 33.3% 91.2% / 95.0% 74.4% / 82.2% 68.4% / 67.8% 4.28/6.80 0.68/0.70
HSP70自身抗体 0.746 (0.673 - -0.820) 31.9% / 30.4% 93.1% / 95.0% 75.8％/ 80.8％ 66.9% / 66.8% 4.62/6.20 0.73/0.73
自身抗体面板 0.851 (0.793 - -0.908) 59.4％/ 52.2％ 91.2% / 95.0% 82.1%/87.8% 76.8% / 74.6% 6.75/10.65 0.45/0.50
皮肤鳞状细胞癌
p53自身抗体 0.790 (0.719 - -0.860) 47.8％/ 38.8％ 90.2%/95.0% 76.2% / 83.8% 72.5% / 70.3% 4.88/7.92 0.58/0.64
MMP-7自身抗体 0.616 (0.524 - -0.708) 34.3% / 32.8% 91.2% / 95.0% 71.8% / 81.4% 67.9% / 68.3% 3.90/6.69 0.72/0.71
HSP70自身抗体 0.697 (0.616 - -0.777) 28.4% / 25.4% 93.1% / 95.0% 73.0% / 77.3% 66.5% / 66.0% 4.12/5.18 0.77/0.78
自身抗体面板 0.826 (0.761 - -0.891) 56.7％/ 49.3％ 91.2% / 95.0% 80.9% / 86.8% 76.3% / 74.1% 6.44/10.06 0.48/0.53
皮肤基底细胞癌
p53自身抗体 0.818 (0.736 - -0.900) 50.0% / 44.1% 90.2%/95.0% 63.0% / 85.5% 84.4％/ 72.2％ 5.10 / 9.00 0.55/0.59
MMP-7自身抗体 0.631 (0.509 - -0.753) 35.3% / 29.4% 91.2% / 95.0% 57.2% / 79.7% 80.9％/ 67.3％ 4.01/6.00 0.71/0.74
HSP70自身抗体 0.763 (0.672 - -0.854) 38.2% / 38.2% 93.1% / 95.0% 64.9%/83.6% 81.9% / 70.1% 5.54/7.80 0.66/0.65
自身抗体面板 0.870 (0.803 - -0.937) 67.6% / 55.9% 91.2% / 95.0% 71.9% / 88.2% 89.4% / 76.7% 7.68/11.41 0.35/0.46

注:“/”后的数据的特异性为95.0%。NMSC:非黑色素瘤皮肤癌;AUC:接收机工作特性曲线下的面积;森:敏感性;SPE:特异性;PPV:阳性预测值;NPV:阴性预测值;PLR:阳性似然比;NLR:负似然比。

 3．4．手术治疗后的三联抗体水平

我们选择7例术前三自身抗体阳性的NMSC患者，比较术后4周水平的变化。结果显示，5例患者术后面板呈阴性(5/7， P < 0．05 )．如图所示 4，对P53和MMP-7的自身抗体水平显示出在原发性肿瘤的手术切除后的下降趋势，与相应的术前样品相比。但是，对于HSP70自身抗体，似乎在手术后水平没有改变（图 4)．在大样本集中，单抗体或NMSC专家组的监测治疗效果有待进一步探讨。

手术切除后的皮肤癌患者个体自身抗体水平。

 3．5．自身抗体与临床病理变量的相关性

接下来，我们评估了血清中抗p53、MMP-7和Hsp70的自身抗体水平与NMSCs的临床病理特征的关系(图) 5)．然而，血清自身抗体水平与检查的临床病理变量(包括年龄、性别、组织学类型、浸润深度、淋巴结状态、早期和晚期组)之间没有显著关联 P > 0．05 )．

NMSC患者p53、MMP-7、Hsp70等肿瘤临床病理变量的阳性率。

 3.6。Oncomine中p53、MMP-7和Hsp70的mRNA水平

为了进一步评估p53、MMP-7和Hsp70的mRNA水平，我们探索了Oncomine中皮肤SCC和BCC的数据集，组织中的mRNA水平在热图中直观显示(图) 6(一))．如图所示 6 (b)， BCC中p53 mRNA水平明显高于正常皮肤( P < 0．05 )，而在SCC中Hsp70 mRNA水平较高( P < ０．００１ )．而BCC和SCC与正常皮肤间MMP-7 mRNA水平无显著差异。

Oncomine在鳞状细胞癌、BCC及相应正常组织中p53、MMP-7、Hsp70基因表达的rna测序数据(a)皮肤癌患者与对照组p53、MMP-7、Hsp70 mRNA表达水平的分级聚类分析。(b)散点图和箱形图相结合，显示皮肤癌患者与对照组p53、MMP-7、Hsp70 mRNA表达水平。 P 学生分析了价值观 t 以及。 ∗ P < 0．05 ； ∗ ∗ P < ０．００１ ．Ns:无统计学意义;NC:正常控制;BCC:基底细胞癌;鳞状细胞癌:鳞状细胞癌。

 4.讨论

在本研究中，我们进行了一个三抗体小组来评估其在包括皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌在内的NMSC中的诊断价值。结果显示，NMSC患者血清中p53、MMP-7、Hsp70等自身抗体水平均高于正常对照组。ROC曲线显示，三种自身抗体组的AUC大于一种自身抗体组的AUC，也可以发现自身抗体组在早期肿瘤诊断中的有意义的疗效。通过对Oncomine的rna序列数据的探索，我们发现p53和Hsp70 mrna在BCC和SCC中分别上调。

针对p53的自身抗体已在几种肿瘤中检测到过表达[ 16- - - - - - 18]．在我们的研究中，与正常对照相比，NMSC的自身抗体水平较高。但是，Moch等人。发现差异的结果，皮肤癌和正常对照之间的P53自身抗体水平没有差异[ 23]．本研究中p53自身抗体在NMSCs中的AUC为0.799 (95% CI: 0.739-0.859)，在早期NMSCs中的AUC为0.819 (95% CI: 0.754-0.885)，敏感性略高于前者(48.50%)，为49.3%，说明抗p53在区分NMSCs与正常对照中的潜在价值。越来越多的证据表明，血清p53自身抗体作为早期癌症检测的广谱生物标志物，其AUCs范围为0.627 - 0.781 [ 8， 24- - - - - - 28]．最近一项包括182例0/I期乳腺癌患者的研究显示p53自身抗体阳性率为10% [ 29]．另一项使用新型电化学发光免疫分析法的研究表明，p53自身抗体有助于检测食管癌和结直肠癌，具有很高的特异性[ 30.]．如我们所知，有一些关于MMP-7和Hsp70自身抗体在其他癌症中的诊断价值的研究，但在皮肤癌中没有。Jiang等发现MMP-7自身抗体诊断早期口腔癌的敏感性为48.6%，AUC为0.761 [ 19]．在上胃肠肿瘤中，MMP-7自身抗体的AUC从0.597变化到0.870 [ 23， 31]．Zhong等发现非小细胞肺癌患者血清Hsp70自身抗体水平提高，诊断AUC为0.731，敏感性为0.74，特异性为0.73 [ 32]．据报道，针对HSP70的自身抗体的AUC在食管胃癌接线癌中为0.652 [ 24]鼻咽癌为0.765 [ 27]．在我们的研究中也发现了类似的诊断价值。因此，尽管我们的研究显示了任何一种自身抗体的诊断价值，但这些自身抗体并不局限于NMSCs。

一个单一的自身抗体可能缺乏足够的敏感性和特异性诊断，而一组自身抗体可能压倒这个问题[ 33， 34]．鉴定癌症诊断的新血清生物标志物是提高临床疗效的重要手段，特别是对于早期恶性肿瘤的临床疗效[ 35]．先前关于其他肿瘤的报告强调了自身抗体组的潜在价值[ 17， 24]．举个例子,在我们之前的研究中,六个小组的自身抗体的AUC taa (p53、NYESO-1 PRDX6, MMP-7, Hsp70,和BMI-1)可能会提高到0.786的敏感性为50.0%,特异性为90.5%的诊断早期esophagogastric结腺癌与个人(相比 24]．关于自身抗体组在NMSCs中的早期诊断价值的研究较少。在此，我们的研究可能是首次探索一组抗p53、MMP-7和Hsp70的自身抗体在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的诊断价值。在本研究的早期SCC和BCC中，panel的AUC和敏感度与正常对照组有很大的区别(AUC: 0.851 (95% CI: 0.793-0.908);敏感性:59.40%)，提示该指标在未来临床应用中可能成为NMSCs的早期检测指标。

自身抗体是免疫系统在识别抗原后分泌的，抗原可能是由异常转录或基因修饰产生的，如组蛋白乙酰化[ 36]．在几种癌症中观察到自身抗体和MRNA的同步增加，例如宫颈癌中的BMI-1 [ 37]和FKBP52在乳腺癌中的作用[ 38]．在皮肤癌方面也进行了相关研究。Moch等人发现皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌中存在p53基因突变，但检测到血清p53自身抗体水平较低[ 23]．与这些出版物不同，在我们的研究中，我们发现皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌中p53自身抗体水平都很高( P < ０．００１ )， Oncomine的数据显示，BCC中的p53 mRNA水平明显高于正常皮肤( P < 0．05 )．可以怀疑这种不一致可能是由于不同种族造成的，p53自身抗体的产生可能与皮肤基底细胞癌的基因突变无关。对于Hsp70, Oncomine数据显示皮肤SCC中Hsp70 mRNA水平上调( P < ０．００１ )．Wood等人观察到Hsp70自身抗原在皮肤鳞状细胞癌中过表达[ 39]，我们的研究还发现皮肤SCC的Hsp70自身抗体水平高于正常受试者( P < ０．００１ ），这可能表明HSP70在皮肤SCC肿瘤中的重要作用。最近，两项研究表明，HSP70和Hsp90有利于对细胞环境中P53构象和活性的反向调节。通过分子伴侣机构的循环，P53不断重构，其活性状态与细胞的应力状态有关，因此P53可以快速响应细胞环境的变化，以防止极端环境中的不可逆转降级[ 40， 41]．基于SCC中BCC和HSP70 mRNA中P53 mRNA的上调，我们推测HSP70和HSP90驱动的P53的不同状态可能暗示不同的NMSC组织学类型。因此，在未来的研究中，P53和HSP70表达水平和诱导其在NMSC，尤其是皮肤SCC和BCC中的自身抗体之间的关联需要进一步验证。

三井等人观察到IL-24驱动的皮肤侵袭性鳞状细胞癌中MMP-7 mRNA的上调可能会增强皮肤侵袭性鳞状细胞癌细胞的增殖、迁移和侵袭[ 42]．然而，在本研究中，Oncomine的公开数据显示，MMP-7 mRNA的表达在皮肤癌和正常皮肤之间没有显著差异。这种不一致性可能是由于所获得数据的样本量太小造成的。因此，MMP-7自身抗体的产生机制是否与其基因的高表达有关还有待进一步探讨。

有几个我们无法控制的重要缺点。首先，由于Oncomine的样本量较小，最好收集相关的皮肤癌组织和我们研究对象的正常组织，进一步评估p53、MMP-7、Hsp70 mRNA的表达。然而，由于部分入组患者在做出治疗决定时拒绝手术，我们未能完成这项工作。第二，我们的研究是单中心小样本研究，需要在未来的研究中进一步验证。第三，紫外线B照射被广泛认为是皮肤癌的危险因素[ 43]，最好比较过度暴露在阳光下与我们自身抗体面板的关系。如果在未来完成这项工作，将进一步补充皮肤肿瘤发生机制和紫外线B照射。最后，由于缺乏随访数据，我们无法评估这些自身抗体对皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌预后的预测价值。实际上，肿瘤相关自身抗体是否可以作为预后指标仍有争议，需要进一步澄清。针对p53的自身抗体在其预后价值方面的研究最为广泛。大多数研究表明，抗p53的自身抗体可能与肿瘤预后有关，如卵巢癌和食道癌[ 44， 45]．相反，一些研究表明p53自身抗体对总体生存预测的预后价值是有限的[ 46]．对于MMP-7和Hsp70的自身抗体，肿瘤预后的研究相对较少。只有一项研究表明MMP-7自身抗体可能是口腔鳞状细胞癌的一种新的预后生物标志物[ 19]．一些研究发现Hsp70自身抗体阳性的癌症患者预后往往较差[ 47]．基于以上证据，我们认为这种自身抗体可能与NMSC的预后有关，这需要在未来的工作中得到验证。

 5.结论

总之，我们利用ELISA检测皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌患者的血清三种自身抗体水平，并与正常对照组进行比较。观察到了高水平，以及高诊断价值，尤其是在早期皮肤癌中。来自Oncomine的RNA-seq公开数据显示BCC中p53 mRNA和SCC中Hsp70 mRNA显著上调。综上所述，我们目前的研究结果可能有助于未来针对该血清组筛查NMSC的研究。

 数据可用性

支持本研究结果的数据可根据要求从相应作者处获得。

 利益冲突

作者声明，本论文的发表不存在利益冲突。

 作者的贡献

杨世汉和刘灿通对这部著作贡献相当。

 致谢

汕头市科技计划医学项目(no . 181203204010504); 2020年李嘉诚基金交叉学科研究基金(no . 2020LKSFG01B);广东省科技专项基金资助项目(资助号:190829105556145、180918114960704)。

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