DM 疾病标记 1875 - 8630 0278 - 0240 Hindawi 10.1155 / 2021/4304507 4304507 研究文章 逍遥圣机制在卵巢癌的治疗中通过网络药理学和豆甾醇对PI3K / Akt通路的影响 1 2 Linqi 1 Huibing 1 Yihan 1 1 https://orcid.org/0000 - 0003 - 3438 - 6055 1 中杰 1 药理学系 医学院的基本 河北大学中医 石家庄 050200年河北省 中国 hbtcm.edu.cn 2 血液学部门 河北医科大学第四医院 石家庄 050000年河北省 中国 hebmu.edu.cn 2021年 30. 6 2021年 2021年 26 4 2021年 19 6 2021年 30. 6 2021年 2021年 版权©2021李濛et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

目的。本研究旨在探索队的监管机制圣(xy)和它的主要化合物,豆甾醇、生物网络和信号通路的卵巢癌(OC)通过网络pharmacology-based分析和实验验证。 方法。的活性化合物和目标xy中医系统药理学研究了数据库和分析平台(TCMSP)。GeneCards和人类数据库被用来屏幕xy治疗OC的共同目标。结合数据库的字符串和Cytoscape 3.6.0, xy的核心和目标化合物。去KEGG通路富集分析的核心目标基因进行了通过使用Metascape和大卫数据库。分子对接已经通过使用七弦琴AutoDock项目讨论的核心目标和化合物之间的相互作用xy治疗OC。豆甾醇细胞增殖和迁移的影响被CCK8和伤口愈合试验评估。免疫印迹和存在用于分析蛋白质和PI3K的mRNA表达一种蛋白激酶,PTEN在治疗后的豆甾醇。 结果。共有113个常见的OC xy治疗的目标是获得从975年目标239 OC和目标xy的效果。xy包括的主要化合物槲皮素、柚苷配基、异鼠李亭,和豆甾醇,主要调控目标,如TP53 Akt1, MYC和PI3K / Akt, p53,细胞周期信号通路。同时,分子对接表明,豆甾醇和Akt1有很好的对接构象。豆甾醇抑制OC体外细胞增殖和迁移,减少了蛋白质和PI3K / Akt信号通路的mRNA表达。 结论。豆甾醇的主要化合物的xy通过PI3K-Akt信号通路抑制OC细胞活动。 关键的基本应用项目河北省科技 15967730 d 1。介绍</gydF4y2Batitle> <p>卵巢癌(OC)是最常见的诊断和妇科癌症死亡率最高。5年总体生存率40%左右时,大多数病人迟到的时候发现,因为缺乏症状不明显(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B1"> 1</gydF4y2Baxref>,<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B2"> 2</gydF4y2Baxref>]。目前,OC的治疗主要是手术,以铂为基础的化疗和放疗。在临床研究中,30 - 45% BRCA1/2 PARP抑制剂Olaparib突变患者显示响应。但复发和转移被认为是由于阻力和毒性。因此,如何提高响应率和减轻副作用仍有待完成。大量的临床试验表明,中药结合化疗或放疗患者可能受益OC (<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B3"> 3</gydF4y2Baxref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B5"> 5</gydF4y2Baxref>]。</gydF4y2Bap> <p>xy从和平仁慈的药房处方可以缓解肝脏,血液滋养,振兴脾脏和协调中心。主要用于肝停滞,脾虚,血缺陷综合症。然而,xy治疗OC的机制尚不清楚,需要进一步讨论。</gydF4y2Bap> <p>生物信息学的快速发展,系统生物学,polypharmacology,基于网络的药物发现被认为是一种经济有效的药物开发方法(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B6"> 6</gydF4y2Baxref>]。近年来,越来越多的证据表明,许多药物可以刺激他们的治疗活动通过调节多个目标(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B7"> 7</gydF4y2Baxref>]。由于丰富的中国草药成分和疾病分子的复杂变化,大多数中药的机制(TCM)及其衍生物在复杂疾病仍有待阐明。</gydF4y2Bap> <p>在这项研究中,多个药物目标预测数据库被用来分析xy,和蛋白质相互作用网络(PPI)的xy治疗OC的主要目标是构建探索其主要生物功能和信号通路。最后,豆甾醇的影响在PI3K / Akt信号通路被体外细胞实验验证,它提供了一个新的发展和应用的基础xy及其复合豆甾醇。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2"> <title>2。材料和方法</gydF4y2Batitle> <sec id="sec2.1"> <title>2.1。主要药品和试剂</gydF4y2Batitle> <p>胎牛血清(的边后卫)获得HyClone(美国),和RPMI(1640年罗斯威尔公园纪念研究所)中,青霉素、链霉素和所有其他试剂获得GIBCO(美国)。豆甾醇(纯度:98%,APExBIO科技有限责任公司)在DMSO溶液溶解,储存在-20°C。文化的最后DMSO浓度≤0.1% (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M1"> <mml:mi> v</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> /</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mi> v</gydF4y2Bamml:mi> </mml:math> </inline-formula>)。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.2"> <title>2.2。xy治疗OC的共同目标</gydF4y2Batitle> <p>中国传统医学系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="http://www.tcmspw.com/tcmsp.php"> http://www.tcmspw.com/tcmsp.php</gydF4y2Baext-link>)是用于收集xy的活性化合物,包括柴胡、白芍、当归、白术macrocephala、茯苓、甘草、生姜和薄荷。活性化合物及其目标选择xy ADME评价系统的构成、主要参数的口服生物利用度(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M2"> <mml:mtext> OB</gydF4y2Bamml:mtext> <mml:mo> ≥</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 30.</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mi> %</gydF4y2Bamml:mi> </mml:math> </inline-formula>)和drug-likeness (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M3"> <mml:mtext> 戴斯。莱纳姆:</gydF4y2Bamml:mtext> <mml:mo> ≥</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.18</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。通过字符串数据库(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://string-db.org/"> https://string-db.org/</gydF4y2Baext-link>)[<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B8"> 8</gydF4y2Baxref>),收集到的目标名称xy是标准化的基因的id,人类和物种来源(“智人”)。GeneCards (<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://www.genecards.org/"> https://www.genecards.org/</gydF4y2Baext-link>)和人类(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://omim.org/"> https://omim.org/</gydF4y2Baext-link>)是利用收集与OC和目标相关的基因(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B9"> 9</gydF4y2Baxref>]。113 OC的共同目标和活性成分通过画维恩图(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/"> http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/</gydF4y2Baext-link>)(图<gydF4y2Baxref rid="fig1" ref-type="fig"> 1</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> <fig-group id="fig1"> <label>图1</gydF4y2Balabel> <p>(一)OC的xy治疗的目标。维恩图解显示975年的目标与OC和239年xy的目标。重叠代表113年共同的目标基因。(b)的高表达Akt1 MYC和TP53和低表达的OC。<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M4"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.01</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>,<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M5"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.001</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>。(c)交互的目标网络xy OC。前三目标的程度值TP53 Akt1, MYC。</gydF4y2Bap> <fig id="fig1a"> <label>(一)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.001a"></graphic> </fig> <fig id="fig1b"> <label>(b)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.001b"></graphic> </fig> <fig id="fig1c"> <label>(c)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.001c"></graphic> </fig> </fig-group> </sec> <sec id="sec2.3"> <title>2.3。蛋白质相互作用网络(PPI)</gydF4y2Batitle> <p>PPI网络是113年从上面获得共同的目标字符串并选择“人类物种”。最低交互阈值被选为“中等信心> 0.4。“Cytoscape 3.6.0软件被用来分析的核心目标网络,和“PNG格式是输出(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1</gydF4y2Baxref>)。前三目标(TP53 Akt1 MYC)被确定为中心的xy基因治疗OC,在研究中使用。排名前三的目标是获得的表达式<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://www.helixlife.cn/"> https://www.helixlife.cn/</gydF4y2Baext-link>。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.4"> <title>2.4。基因本体论(去)和《京都议定书》百科全书的基因和基因组(KEGG)通路富集分析</gydF4y2Batitle> <p>去和KEGG富集分析从超过113获得共同的目标Metascape数据库(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="http://metascape.org/"> http://metascape.org/</gydF4y2Baext-link>)和大卫•数据库(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://david.ncifcrf.gov/"> https://david.ncifcrf.gov/</gydF4y2Baext-link>);<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M6"> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.05</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>是重要的。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.5"> <title>2.5。建设Herb-Active Compound-Target网络</gydF4y2Batitle> <p>Cytoscape 3.6.0被用来构造“herb-active compound-target”网络的xy OC的治疗。我们确定的十大活跃的化合物为核心的化合物xy治疗OC。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.6"> <title>2.6。分子对接</gydF4y2Batitle> <p>之间的交互的核心目标化合物和xy检查治疗OC使用分子对接技术。目标蛋白质结构从PDB网站下载(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="http://www.rcsb.org/"> http://www.rcsb.org/</gydF4y2Baext-link>)和三维结构的核心化合物从TCMSP数据库下载。分子对接和构象得分进行了AutoDock七弦琴。</gydF4y2Bap> <p>地图得到的热量GraphPad棱镜8。PyMOL和大师11.9被用来吸引最好的结构对接的结果。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.7"> <title>2.7。关系的mRNA水平Akt1和患者的生存结果OC</gydF4y2Batitle> <p>我们利用R3.6.3软件进行接受者操作特征曲线(ROC曲线)和kaplan meier曲线曲线(公里)富集分析。我们准备RNAseq数据和临床数据从卵巢浆液性囊腺癌(OV) TCGA项目(<gydF4y2Baext-link ext-link-type="uri" xlink:href="https://portal.gdc.cancer.gov/"> https://portal.gdc.cancer.gov/</gydF4y2Baext-link>)和每百万读(TPM)转换成文本格式,然后进行分析,根据分子的表达。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.8"> <title>2.8。OC细胞系的文化</gydF4y2Batitle> <p>A2780和SKOV3细胞株在RPMI1640培养介质与10% (<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M7"> <mml:mi> v</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> /</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mi> v</gydF4y2Bamml:mi> </mml:math> </inline-formula>)的边后卫和100 U /毫升青霉素/ 100毫克/毫升链霉素在37°C公司的5%<gydF4y2Basub>2</gydF4y2Basub>的气氛。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.9"> <title>2.9。细胞增殖实验</gydF4y2Batitle> <p>卵巢癌A2780和SKOV3细胞被播种到96孔板与梯度浓度(0<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>10米,<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>25米,<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>50米,<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米、100<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米,500<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米豆甾醇24、48和72小时37°C。OC细胞取代10%的细胞计数Kit-8 (CCK8;北京Zoman生物技术有限公司,北京,中国)与正常培养基稀释和孵化1 h。的吸光度测定,Motic数码医学图像分析系统(徕卡DM2500、海德堡、德国)在450海里。所有的测试重复三次(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B10"> 10</gydF4y2Baxref>]。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.10"> <title>2.10。豆甾醇的准备</gydF4y2Batitle> <p>豆甾醇在DMSO溶液溶解,混合和0.22过滤<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>m过滤器。股票的解决方案在10毫米浓度制备和存储在一个冰箱在-20°C,它是解冻和稀释至所需浓度与1640年之前完成媒介使用。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.11"> <title>2.11。伤口愈合实验</gydF4y2Batitle> <p>愈合的细胞培养领域的比较分析是由一个10<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>l吸管,后A2780和RPMI1640 SKOV3细胞培养介质与10%的边后卫没有或25 - 50<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米豆甾醇。Motic数码医学图像分析系统用徕卡DM2500,德国海德堡(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B11"> 11</gydF4y2Baxref>]。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec2.12"> <title>2.12。实时荧光定量聚合酶链反应(存在)</gydF4y2Batitle> <p>从上述细胞总RNA是孤立的试剂盒试剂(生活技术,美国)根据制造商的指示。RNA浓度和纯度在260海里被分光光度法评估。共有1<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>g RNA被'脚本转换成cDNA RT试剂盒(美国豆类有限公司)。存在是由使用一个实时PCR系统(美国Bio-Rad Co . Ltd .)在反应混合物(25<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>l)包含cDNA、引物(表<gydF4y2Baxref rid="tab1" ref-type="table"> 1</gydF4y2Baxref>),结核绿色预混料交货Taq II(美国豆类有限公司)。</gydF4y2Bap> <table-wrap id="tab1"> <label>表1</gydF4y2Balabel> <p>基因的引物。</gydF4y2Bap> <table> <thead> <tr> <th align="left">引物</gydF4y2Bath> <th align="center">转发(5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M8"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ′</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>3<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M9"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ′</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)</gydF4y2Bath> <th align="center">反向(5<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M10"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ′</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>3<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M11"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ′</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> </mml:math> </inline-formula>)</gydF4y2Bath> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">PI3K</gydF4y2Batd> <td align="center">AGTAGGCAACCGTGAAGAAAAG</gydF4y2Batd> <td align="center">GAGGTGAATTGAGGTCCCTAAGA</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">一种蛋白激酶</gydF4y2Batd> <td align="center">AGCGACGTGGCTATTGTGAAG</gydF4y2Batd> <td align="center">GCCATCATTCTTGAGGAGGAAGT</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">PTEN</gydF4y2Batd> <td align="center">TGGATTCGACTTAGACTTGACCT</gydF4y2Batd> <td align="center">GGTGGGTTATGGTCTTCAAAAGG</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left"> <italic> β</gydF4y2Baitalic>肌动蛋白</gydF4y2Batd> <td align="center">TGACGTGGACATCCGCAAAG</gydF4y2Batd> <td align="center">CTGGAAGGTGGACAGCGAGG</gydF4y2Batd> </tr> </tbody> </table> </table-wrap> </sec> <sec id="sec2.13"> <title>2.13。免疫印迹(WB)</gydF4y2Batitle> <p>和豆甾醇A2780和SKOV3细胞治疗48 h。与PBS三次洗涤后,30分钟的细胞细胞溶解冰和离心机<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M12"> <mml:mn> 10000年</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ×</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mtext> g</gydF4y2Bamml:mtext> </mml:math> </inline-formula>5分钟在4°C。种族隔离的蛋白质在细胞溶解产物被量化的内容用nd - 1000分光光度计(美国特拉华州威尔明顿NanoDrop,)。等量的蛋白质样本通过10% sds - page电泳(聚丙烯酰胺凝胶电泳)和转移到PVDF膜(微孔,贝德福德,马萨诸塞州,美国)。5% BSA块2 h后,他们与主要抗体免疫印迹一夜之间在4°C。主要抗体包括p-Akt (GB13012-3, 1: 500),一种蛋白激酶(GTX28805, 1: 800), p-PI3K (GTX132597, 1: 800), PI3K (ab40755, 1: 1000), PTEN (ET1606-43, 1: 800)<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>肌动蛋白(AC026 1: 10000)。接下来,膜与二次孵化山羊anti-rabbit IG的抗体(kpl074 - 1506, 1: 5000稀释)1 h在37°C。蛋白质带的强度是通过执行融合估计FX5光谱(融合、法国)。</gydF4y2Bap> </sec> </sec> <sec id="sec3"> <title>3所示。结果</gydF4y2Batitle> <sec id="sec3.1"> <title>3.1。PPI网络的xy OC</gydF4y2Batitle> <p>在图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1</gydF4y2Baxref>OC的xy治疗交互网络113个节点和1805边缘。采用Cytoscape获得前三的中心目标的交互,包括TP53 Akt1, MYC。因此,Akt1的表达和TP53更高,MYC在OC组织低于在正常组织(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig1"> 1</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec3.2"> <title>3.2。去KEGG通路富集分析</gydF4y2Batitle> <p>的目标去KEGG通路xy治疗OC参与338信号通路,包括PI3K-Akt信号通路、膀胱癌、胰腺癌、乙型肝炎、癌症小分子核糖核酸,HIF-1信号通路。排名前20的通路图所示<gydF4y2Baxref rid="fig2" ref-type="fig"> 2</gydF4y2Baxref>。</gydF4y2Bap> <fig-group id="fig2"> <label>图2</gydF4y2Balabel> <p>(一)浓缩在xy OC的治疗的目标。(b)的前20名KEGG通路富集在xy OC的治疗的目标。(c)分子对接的结果。图Akt1蛋白之间的相互作用和豆甾醇(3 d)。(d)的mRNA水平之间的关系Akt1和患者的生存结果OC。一个是OC Akt1的ROC曲线。B是公里中Akt1 OC曲线。</gydF4y2Bap> <fig id="fig2a"> <label>(一)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.002a"></graphic> </fig> <fig id="fig2b"> <label>(b)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.002b"></graphic> </fig> <fig id="fig2c"> <label>(c)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.002c"></graphic> </fig> <fig id="fig2d"> <label>(d)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.002d"></graphic> </fig> </fig-group> </sec> <sec id="sec3.3"> <title>3.3。Herb-Active Compound-Target网络</gydF4y2Batitle> <p>这个网络图直接评估的机制通过multicompound xy治疗OC和多目标协同行动。的herb-active compound-target网络显示xy的十大活性化合物OC的治疗包括槲皮素、山柰酚、豆甾醇(表<gydF4y2Baxref rid="tab2" ref-type="table"> 2</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> <table-wrap id="tab2"> <label>表2</gydF4y2Balabel> <p>排名前十的xy治疗OC的活性化合物。</gydF4y2Bap> <table> <thead> <tr> <th align="left">不。</gydF4y2Bath> <th align="center">活性化合物</gydF4y2Bath> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">1</gydF4y2Batd> <td align="center">槲皮素</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">2</gydF4y2Batd> <td align="center">山柰酚</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">3</gydF4y2Batd> <td align="center">豆甾醇</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">4</gydF4y2Batd> <td align="center">Beta-sitosterol</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">5</gydF4y2Batd> <td align="center">柚苷配基</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">6</gydF4y2Batd> <td align="center">异鼠李亭</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">7</gydF4y2Batd> <td align="center">毛地黄黄酮</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">8</gydF4y2Batd> <td align="center">芒柄花黄素</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">9</gydF4y2Batd> <td align="center">Licochalcone一</gydF4y2Batd> </tr> <tr> <td align="left">10</gydF4y2Batd> <td align="center">Medicarpin</gydF4y2Batd> </tr> </tbody> </table> </table-wrap> </sec> <sec id="sec3.4"> <title>3.4。分子对接</gydF4y2Batitle> <p>的十大主要化合物xy Akt1蛋白结构的对接,TP53, MYC。结果表明,豆甾醇是最好的七弦琴Akt1绑定能力和分数(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M13"> <mml:mi> Δ</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mtext> G</gydF4y2Bamml:mtext> </mml:math> </inline-formula>)是-10.60 kca1 /摩尔(图<gydF4y2Baxref rid="fig2" ref-type="fig"> 2</gydF4y2Baxref>)。分子对接揭示了豆甾醇债券通过疏水作用与Akt1 LEU264等网站,VAL270 LEU210, LEU264(图<gydF4y2Baxref rid="fig2" ref-type="fig"> 2</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec3.5"> <title>3.5。关系的mRNA水平Akt1和患者的生存结果OC</gydF4y2Batitle> <p>我们进一步探讨的关键效率Akt1 OC患者的生存。ROC曲线分析中Akt1 OC确定ROC曲线的AUC是0.702。kaplan meier曲线和生存率较分析显示,增加Akt1 mRNA水平明显与OC患者的总生存期(OS)(图<gydF4y2Baxref rid="fig2" ref-type="fig"> 2</gydF4y2Baxref>)。高表达Akt1显示总体生存时间越长。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec3.6"> <title>3.6。豆甾醇对A2780和SKOV3细胞的扩散</gydF4y2Batitle> <p>CCK8测定结果表明,豆甾醇可以显著抑制A2780和SKOV3细胞增殖在剂量依赖性的方式(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M14"> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.05</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>)。的集成电路<gydF4y2Basub>50</gydF4y2Basub>值如表所示<gydF4y2Baxref rid="tab3" ref-type="table"> 3</gydF4y2Baxref>。以下实验和豆甾醇25的浓度<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米和50<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>M 48 h。</gydF4y2Bap> <table-wrap id="tab3"> <label>表3</gydF4y2Balabel> <p>集成电路<gydF4y2Basub>50</gydF4y2Basub>豆甾醇A2780和SKOV3细胞。</gydF4y2Bap> <table> <thead> <tr> <th align="left" rowspan="2">时间(小时)</gydF4y2Bath> <th align="center" colspan="2">集成电路<gydF4y2Basub>50</gydF4y2Basub>(<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米)(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M15"> <mml:mtext> 的意思是</gydF4y2Bamml:mtext> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mtext> SD</gydF4y2Bamml:mtext> </mml:math> </inline-formula>)</gydF4y2Bath> </tr> <tr> <th align="center">A2780</gydF4y2Bath> <th align="center">SKOV3</gydF4y2Bath> </tr> </thead> <tbody> <tr> <td align="left">24</gydF4y2Batd> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M16"> <mml:mn> 69.24</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 7.31</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M17"> <mml:mn> 83.39</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 3.75</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">48</gydF4y2Batd> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M18"> <mml:mn> 49.74</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 3.18</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M19"> <mml:mn> 77.68</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 5.43</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> <tr> <td align="left">72年</gydF4y2Batd> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M20"> <mml:mn> 38.12</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 4.69</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> <td align="center"> <inline-formula> <mml:math display="block" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M21"> <mml:mn> 67.02</gydF4y2Bamml:mn> <mml:mo> ±</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 3.13</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula></td> </tr> </tbody> </table> </table-wrap> </sec> <sec id="sec3.7"> <title>3.7。豆甾醇对A2780和SKOV3细胞的迁移</gydF4y2Batitle> <p>作为复合豆甾醇的结果呈现出明显的细胞毒性的活动对卵巢癌A2780和SKOV3细胞系,伤口愈合试验表明,豆甾醇抑制A2780和SKOV3细胞迁移(图<gydF4y2Baxref ref-type="fig" rid="fig3"> 3</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> <fig-group id="fig3"> <label>图3</gydF4y2Balabel> <p>(一)豆甾醇抑制A2780细胞的迁移。(b)的影响,豆甾醇的表情PI3K-Akt A2780细胞信号通路的存在。(c, d)免疫印迹试验表明,豆甾醇下调p-PI3K和p-Akt蛋白质的表达水平和调节PI3K的表达,一种蛋白激酶,在A2780细胞PTEN蛋白水平。(e)豆甾醇抑制SKOV3细胞的迁移。(f)的影响,豆甾醇的表情PI3K-Akt SKOV3细胞信号通路的存在。豆甾醇的影响的表达式PI3K-Akt SKOV3细胞信号通路。豆甾醇增加PTEN的信使rna表达水平和减少PI3K和Akt的信使rna表达水平。(g h)免疫印迹试验表明,豆甾醇下调p-PI3K和p-Akt蛋白质的表达水平和调节PI3K的表达,一种蛋白激酶,在SKOV3细胞PTEN蛋白水平。<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M22"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.05</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>,<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M23"> <mml:msup> <mml:mrow></mml:mrow> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mrow> <mml:mo> ∗</gydF4y2Bamml:mo> </mml:mrow> </mml:mrow> </mml:msup> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.01</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>与对照组。豆甾醇的剂量是25<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>米和50<gydF4y2Baitalic> μ</gydF4y2Baitalic>分别在A2780和SKOV3细胞。</gydF4y2Bap> <fig id="fig3a"> <label>(一)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003a"></graphic> </fig> <fig id="fig3b"> <label>(b)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003b"></graphic> </fig> <fig id="fig3c"> <label>(c)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003c"></graphic> </fig> <fig id="fig3d"> <label>(d)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003d"></graphic> </fig> <fig id="fig3e"> <label>(e)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003e"></graphic> </fig> <fig id="fig3f"> <label>(f)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003f"></graphic> </fig> <fig id="fig3g"> <label>(g)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003g"></graphic> </fig> <fig id="fig3h"> <label>(h)</gydF4y2Balabel> <graphic xlink:href="//www.newsama.com/downloads/journals/dm/2021/4304507.fig.003h"></graphic> </fig> </fig-group> </sec> <sec id="sec3.8"> <title>3.8。豆甾醇抑制的mRNA表达PI3K-Akt A2780和SKOV3细胞信号通路的存在</gydF4y2Batitle> <p>中存在的结果显示与控制和DMSO组相比,PI3K的mRNA表达和Akt1显著减少豆甾醇。PTEN的mRNA表达增加豆甾醇组(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M24"> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.05</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>)(图<gydF4y2Baxref rid="fig3" ref-type="fig"> 3</gydF4y2Baxref>)。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec3.9"> <title>3.9。豆甾醇抑制PI3K-Akt信号通路蛋白表达的细胞系A2780和SKOV3免疫印迹分析</gydF4y2Batitle> <p>蛋白质的表达p-PI3K / PI3K和p-Akt / Akt明显减少,和豆甾醇的PTEN表达增加组织与控制和DMSO组(<gydF4y2Bainline-formula> <mml:math xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" id="M25"> <mml:mi> P</gydF4y2Bamml:mi> <mml:mo> <</gydF4y2Bamml:mo> <mml:mn> 0.05</gydF4y2Bamml:mn> </mml:math> </inline-formula>)(图<gydF4y2Baxref rid="fig3" ref-type="fig"> 3</gydF4y2Baxref>)。这一结果表明,豆甾醇可以有效地抑制PI3K-Akt人类A2780和SKOV3细胞信号通路。</gydF4y2Bap> </sec> </sec> <sec id="sec4"> <title>4所示。讨论</gydF4y2Batitle> <p>在传统中药中,提出了xy抗癌活动,用于治疗乳腺增生、乳腺癌和OC加强气和血液的滋养。xy是一个典型的中国处方第一次描述了在和平仁慈的药房处方在宋代(公元1151年)。</gydF4y2Bap> <p>在这项研究中,由于网络药理学,xy具有多组分、多目标协同效应治疗OC。xy的主要活性化合物在这个网络包括槲皮素、<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>谷甾醇、山柰酚、豆甾醇。先前的研究表明,槲皮素具有抗癌活动参与表达下调RAS的水平,bcl - 2, P53基因突变,移植伯灵顿(<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B12"> 12</gydF4y2Baxref>]。研究表明,<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>谷甾醇有宽阔的抗癌特性,如诱导细胞凋亡和抑制癌细胞增殖,入侵,转移和血管生成在结肠癌、卵巢癌、肺癌、乳腺癌和前列腺癌。<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>谷甾醇对雌激素对卵巢癌的重吸收。同时,<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>谷甾醇的表达下降<gydF4y2Baitalic> β</gydF4y2Baitalic>增殖细胞核抗原(增殖细胞核抗原),连环蛋白,和bcl - 2在结肠癌<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B13"> 13</gydF4y2Baxref>]。山柰酚能减少p-Akt的表达式(磷酸化Akt)蛋白在OC细胞。它能抑制细胞迁移和血管生成在人类OC细胞,诱导细胞凋亡和ROS生产,从而抑制人类OC细胞的增长和发展<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B14"> 14</gydF4y2Baxref>];豆甾醇有效目标肿瘤内皮细胞通过抑制TNF-2的表情,VEGFR-2 p-Akt, PCL, FAK [<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B15"> 15</gydF4y2Baxref>]。</gydF4y2Bap> <p>OC的PPI网络的xy治疗表明,核心目标包括Akt1 TP53, MYC。因此,我们使用数据库来分析以上3中心基因的表达在OC组织和正常组织。结果表明,Akt1和TP53 OC组织中高度表达,MYC OC组织的表达低于正常组织。去KEGG xy治疗OC的通路富集分析还发现,PI3K / Akt信号通路在OC信号通路中发挥作用。从分子对接结果,豆甾醇与Akt1表现出强烈的交互。同时,OC Akt1的表达密切相关操作系统的临床病人。因此,我们预测,Akt1可能是一个潜在的豆甾醇治疗OC的核心目标。</gydF4y2Bap> <p>在临床研究,PI3K / Akt信号通路的失调被发现在70% OC,涉及PTEN缺失和PIK3CA基因突变<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16</gydF4y2Baxref>]。基因改变和AKT的异常激活是由于卵巢细胞癌。一些研究表明,AKT通路参与癌细胞迁移,入侵和自噬,这被认为是潜在的治疗靶点治疗OC (<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B16"> 16</gydF4y2Baxref>- - - - - -<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B19"> 19</gydF4y2Baxref>]。mTOR / PI3K / Akt通路抑制剂在OC成为新的目标肿瘤药物临床适用性<gydF4y2Baxref ref-type="bibr" rid="B18"> 18</gydF4y2Baxref>]。</gydF4y2Bap> <p>基于这些结果,我们进一步验证了影响PI3K-Akt豆甾醇的信号通路在OC细胞株A2780和SKOV3。根据CCK8化验的结果和伤口愈合试验,豆甾醇的影响可以显著抑制A2780和SKOV3细胞的增殖和迁移。此外,豆甾醇可以减少PI3K和Akt的水平和增加A2780和SKOV3细胞中PTEN的表达。本研究不仅为更深入的研究提供了理论和实验基础,但也提供了一个有效的方法合理利用一系列的中药活性成分的抗肿瘤药物。</gydF4y2Bap> </sec> <sec id="sec5"> <title>5。结论</gydF4y2Batitle> <p>总之,豆甾醇,xy的主要活性化合物,可以预测候选化合物在OC疗法针对PI3K / Akt信号通路。</gydF4y2Bap> </sec> <back> <sec sec-type="data-availability"> <title>数据可用性</gydF4y2Batitle> <p>的数据直接请求相应的作者。</gydF4y2Bap> </sec> <sec sec-type="COI-statement"> <title>的利益冲突</gydF4y2Batitle> <p>作者宣称没有利益冲突。</gydF4y2Bap> </sec> <ack> <title>确认</gydF4y2Batitle> <p>本研究的财政支持的关键应用项目基础河北省科技部门Z.W.(批准号15967730 d)</gydF4y2Bap> </ack> <ref-list> <ref id="B1" content-type="article"> <label>1</gydF4y2Balabel> <element-citation publication-type="journal"> <person-group person-group-type="author"> <name> <surname> Pisanic</gydF4y2Basurname> <given-names> t·R。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 应对</gydF4y2Basurname> <given-names> l . M。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 林</gydF4y2Basurname> <given-names> 美国F。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 日元</gydF4y2Basurname> <given-names> T . T。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> Athamanolap</gydF4y2Basurname> <given-names> P。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> Asaka</gydF4y2Basurname> <given-names> R。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 中山</gydF4y2Basurname> <given-names> K。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 音量控制器</gydF4y2Basurname> <given-names> a . N。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 王</gydF4y2Basurname> <given-names> t·H。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 施</gydF4y2Basurname> <given-names> i M。</ggydF4y2Baiven-names> </name> <name> <surname> 王</gydF4y2Basurname> <given-names> t . 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