卵巢癌(OC)是最常见的诊断和妇科癌症死亡率最高。5年总体生存率40%左右时,大多数病人迟到的时候发现,因为缺乏症状不明显(
xy从和平仁慈的药房处方可以缓解肝脏,血液滋养,振兴脾脏和协调中心。主要用于肝停滞,脾虚,血缺陷综合症。然而,xy治疗OC的机制尚不清楚,需要进一步讨论。
生物信息学的快速发展,系统生物学,polypharmacology,基于网络的药物发现被认为是一种经济有效的药物开发方法(
在这项研究中,多个药物目标预测数据库被用来分析xy,和蛋白质相互作用网络(PPI)的xy治疗OC的主要目标是构建探索其主要生物功能和信号通路。最后,豆甾醇的影响在PI3K / Akt信号通路被体外细胞实验验证,它提供了一个新的发展和应用的基础xy及其复合豆甾醇。
胎牛血清(的边后卫)获得HyClone(美国),和RPMI(1640年罗斯威尔公园纪念研究所)中,青霉素、链霉素和所有其他试剂获得GIBCO(美国)。豆甾醇(纯度:98%,APExBIO科技有限责任公司)在DMSO溶液溶解,储存在-20°C。文化的最后DMSO浓度≤0.1% (
中国传统医学系统药理学数据库和分析平台(TCMSP,
PPI网络是113年从上面获得共同的目标字符串并选择“人类物种”。最低交互阈值被选为“中等信心> 0.4。“Cytoscape 3.6.0软件被用来分析的核心目标网络,和“PNG格式是输出(图
去和KEGG富集分析从超过113获得共同的目标Metascape数据库(
Cytoscape 3.6.0被用来构造“herb-active compound-target”网络的xy OC的治疗。我们确定的十大活跃的化合物为核心的化合物xy治疗OC。
之间的交互的核心目标化合物和xy检查治疗OC使用分子对接技术。目标蛋白质结构从PDB网站下载(
地图得到的热量GraphPad棱镜8。PyMOL和大师11.9被用来吸引最好的结构对接的结果。
我们利用R3.6.3软件进行接受者操作特征曲线(ROC曲线)和kaplan meier曲线曲线(公里)富集分析。我们准备RNAseq数据和临床数据从卵巢浆液性囊腺癌(OV) TCGA项目(
A2780和SKOV3细胞株在RPMI1640培养介质与10% (
卵巢癌A2780和SKOV3细胞被播种到96孔板与梯度浓度(0
豆甾醇在DMSO溶液溶解,混合和0.22过滤
愈合的细胞培养领域的比较分析是由一个10
从上述细胞总RNA是孤立的试剂盒试剂(生活技术,美国)根据制造商的指示。RNA浓度和纯度在260海里被分光光度法评估。共有1 基因的引物。
引物
转发(5 反向(5
PI3K
AGTAGGCAACCGTGAAGAAAAG
GAGGTGAATTGAGGTCCCTAAGA
一种蛋白激酶
AGCGACGTGGCTATTGTGAAG
GCCATCATTCTTGAGGAGGAAGT
PTEN
TGGATTCGACTTAGACTTGACCT
GGTGGGTTATGGTCTTCAAAAGG
TGACGTGGACATCCGCAAAG
CTGGAAGGTGGACAGCGAGG
和豆甾醇A2780和SKOV3细胞治疗48 h。与PBS三次洗涤后,30分钟的细胞细胞溶解冰和离心机
在图
的目标去KEGG通路xy治疗OC参与338信号通路,包括PI3K-Akt信号通路、膀胱癌、胰腺癌、乙型肝炎、癌症小分子核糖核酸,HIF-1信号通路。排名前20的通路图所示 (一)浓缩在xy OC的治疗的目标。(b)的前20名KEGG通路富集在xy OC的治疗的目标。(c)分子对接的结果。图Akt1蛋白之间的相互作用和豆甾醇(3 d)。(d)的mRNA水平之间的关系Akt1和患者的生存结果OC。一个是OC Akt1的ROC曲线。B是公里中Akt1 OC曲线。
这个网络图直接评估的机制通过multicompound xy治疗OC和多目标协同行动。的herb-active compound-target网络显示xy的十大活性化合物OC的治疗包括槲皮素、山柰酚、豆甾醇(表 排名前十的xy治疗OC的活性化合物。
不。
活性化合物
1
槲皮素
2
山柰酚
3
豆甾醇
4
Beta-sitosterol
5
柚苷配基
6
异鼠李亭
7
毛地黄黄酮
8
芒柄花黄素
9
Licochalcone一
10
Medicarpin
的十大主要化合物xy Akt1蛋白结构的对接,TP53, MYC。结果表明,豆甾醇是最好的七弦琴Akt1绑定能力和分数(
我们进一步探讨的关键效率Akt1 OC患者的生存。ROC曲线分析中Akt1 OC确定ROC曲线的AUC是0.702。kaplan meier曲线和生存率较分析显示,增加Akt1 mRNA水平明显与OC患者的总生存期(OS)(图
CCK8测定结果表明,豆甾醇可以显著抑制A2780和SKOV3细胞增殖在剂量依赖性的方式( 集成电路
时间(小时)
集成电路
A2780
SKOV3
24
48
72年
作为复合豆甾醇的结果呈现出明显的细胞毒性的活动对卵巢癌A2780和SKOV3细胞系,伤口愈合试验表明,豆甾醇抑制A2780和SKOV3细胞迁移(图 (一)豆甾醇抑制A2780细胞的迁移。(b)的影响,豆甾醇的表情PI3K-Akt A2780细胞信号通路的存在。(c, d)免疫印迹试验表明,豆甾醇下调p-PI3K和p-Akt蛋白质的表达水平和调节PI3K的表达,一种蛋白激酶,在A2780细胞PTEN蛋白水平。(e)豆甾醇抑制SKOV3细胞的迁移。(f)的影响,豆甾醇的表情PI3K-Akt SKOV3细胞信号通路的存在。豆甾醇的影响的表达式PI3K-Akt SKOV3细胞信号通路。豆甾醇增加PTEN的信使rna表达水平和减少PI3K和Akt的信使rna表达水平。(g h)免疫印迹试验表明,豆甾醇下调p-PI3K和p-Akt蛋白质的表达水平和调节PI3K的表达,一种蛋白激酶,在SKOV3细胞PTEN蛋白水平。
中存在的结果显示与控制和DMSO组相比,PI3K的mRNA表达和Akt1显著减少豆甾醇。PTEN的mRNA表达增加豆甾醇组(
蛋白质的表达p-PI3K / PI3K和p-Akt / Akt明显减少,和豆甾醇的PTEN表达增加组织与控制和DMSO组(
在传统中药中,提出了xy抗癌活动,用于治疗乳腺增生、乳腺癌和OC加强气和血液的滋养。xy是一个典型的中国处方第一次描述了在和平仁慈的药房处方在宋代(公元1151年)。
在这项研究中,由于网络药理学,xy具有多组分、多目标协同效应治疗OC。xy的主要活性化合物在这个网络包括槲皮素、
OC的PPI网络的xy治疗表明,核心目标包括Akt1 TP53, MYC。因此,我们使用数据库来分析以上3中心基因的表达在OC组织和正常组织。结果表明,Akt1和TP53 OC组织中高度表达,MYC OC组织的表达低于正常组织。去KEGG xy治疗OC的通路富集分析还发现,PI3K / Akt信号通路在OC信号通路中发挥作用。从分子对接结果,豆甾醇与Akt1表现出强烈的交互。同时,OC Akt1的表达密切相关操作系统的临床病人。因此,我们预测,Akt1可能是一个潜在的豆甾醇治疗OC的核心目标。
在临床研究,PI3K / Akt信号通路的失调被发现在70% OC,涉及PTEN缺失和PIK3CA基因突变
基于这些结果,我们进一步验证了影响PI3K-Akt豆甾醇的信号通路在OC细胞株A2780和SKOV3。根据CCK8化验的结果和伤口愈合试验,豆甾醇的影响可以显著抑制A2780和SKOV3细胞的增殖和迁移。此外,豆甾醇可以减少PI3K和Akt的水平和增加A2780和SKOV3细胞中PTEN的表达。本研究不仅为更深入的研究提供了理论和实验基础,但也提供了一个有效的方法合理利用一系列的中药活性成分的抗肿瘤药物。
总之,豆甾醇,xy的主要活性化合物,可以预测候选化合物在OC疗法针对PI3K / Akt信号通路。
的数据直接请求相应的作者。
作者宣称没有利益冲突。
本研究的财政支持的关键应用项目基础河北省科技部门Z.W.(批准号15967730 d)