CRIVEM 在兽医案例报告 2090 - 701 x 2090 - 7001 Hindawi 10.1155 / 2020/9785861 9785861 病例报告 Osteoarticular感染三个年轻的革兰氏阴性Cocco-Bacillus匹纯种马引起的小说 https://orcid.org/0000 - 0002 - 8582 - 058 x 哈德逊 伯纳德J。 1 凯瑟琳 2 https://orcid.org/0000 - 0001 - 7907 - 7374 Blishen 安娜 2 Todhunter 克里斯汀H。 3 4 贝格 安吉拉·P。 3 蕾奥妮 1 Karagiannis 托马斯。 1 雷蒙德 便雅悯 5 https://orcid.org/0000 - 0001 - 7013 - 7326 Bogema 丹尼尔 6 Adkins 安格斯R。 2 奥沙利文 克里斯托弗·B。 7 O’rourke 布兰登。 6 罗伊Chowdhury Piklu 5 Djordjevic Steven P。 5 查尔斯 伊恩·G。 5 8 埃德加 安德鲁 9 https://orcid.org/0000 - 0002 - 4907 - 7194 Mitsakos 怀中 1 5 Mutinelli 弗朗哥 1 新南威尔士州卫生病理学 微生物学系和传染病 皇家北岸医院 圣伦纳德、悉尼 新南威尔士2065 澳大利亚 nsw.gov.au 2 烤饼马医院 利物浦街106号 司康饼 新南威尔士2337 澳大利亚 sconeequinehospital.com.au 3 Vetnostics Laverty病理学 60滑铁卢路 麦格理公园 悉尼 新南威尔士2113 澳大利亚 vetnostics.com.au 4 纽卡斯尔马纽卡斯尔马康复中心& &繁殖中心 旧的手提建筑 Broadmeadow赛马场 新南威尔士2292 澳大利亚 5 ithree研究所 科技大学的 15百老汇,上月的 悉尼 新南威尔士2007 澳大利亚 uts.edu.au 6 主要工业部门 伊丽莎白·麦克阿瑟农业研究所 伍德布里奇,Menangle 新南威尔士2568 澳大利亚 7 Randwick马中心 3简圣,Randwick,悉尼 新南威尔士2031 澳大利亚 randwickequine.com.au 8 Quadrum研究所Bioscience-Institute食品的研究 诺维奇研究园 诺维奇NR4 7 ua 英国 norwichresearchpark.com 9 纽马克特马医院 剑桥路 纽马克特,萨福克CB8一些小 英国 newmarketequinehospital.com 2020年 19 1 2020年 2020年 2 5 2019年 22 8 2019年 18 9 2019年 19 1 2020年 2020年 版权©2020伯纳德·j·哈德逊等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

我们描述osteoarticular感染3例(OAI)在年轻匹纯种马致病有机体被MALDI-TOF确认 Kingella物种。报道的OAI的模式类似 Kingella感染人类。分析16 s rRNA PCR使构建系统发育树,把隔离接近 Simonsiella Alysiella物种,而不是 Kingella物种。平均核苷酸身份(ANI)新隔离和之间的比较 Kingella kingae Alysiella菌然而低概率透露,新隔离属于这两种物种。初步分析表明,生物分离是一个以前未被发现的物种。

1。介绍

脓毒性关节炎马高死亡率(22 - 58%)尽管治疗( 1- - - - - - 3]。在幸存者中,剩余损失导致持续的骨关节炎和残废是常见的并发症 4, 5]。匹纯种马,脓毒性关节炎与减少的可能性在比赛开始与控制( 6]。脓毒性关节炎出现创伤后,尤其是穿透损伤关节,从相邻的感染传播,造血的播种的微生物( 1, 4, 7]。后者可以从远程站点的感染,但是可能发生在许多人通过有症状或无症状菌血症( 1, 3, 4, 8]。细菌引起的确认是通过积极的显微镜,结合文化滑液(SF)或滑膜组织 9]。细菌培养的科幻小说是- 33 - 60%的情况下( 1, 3, 10, 11]。

未被发现的细菌可能会导致马的OAI但如果传染病病原学原因,非细菌性的原因也占一定比例的情况下与消极的细菌培养和PCR结果。另外,noninfective病因可能是负面的原因研究感染性代理。我们现在三(3)情况下的OAI在年轻的马在一个细菌,不是前所述,骨头隔绝,滑膜组织和滑液(SF)提交文化,并讨论相关的OAI在马。

2。情况下

三个案例的细节补充表中列出 1。下面是具体的额外信息。所有情况下,微生物学测试和结果分别进行了讨论,也补充表中列出 1。距离有80多公里的农场发生病例1和3。有超过300公里的位置之间的距离情况下2和其他两个农场。没有已知的接触任何马匹和人员的农场。

案例1是一个优秀的小母马,15个月岁居住在澳大利亚新南威尔士州的猎人谷,2012年11月,与进步残废的右前腿2周的时间。到达马很聪明,警惕,严重的右前腿,除了发热(38.9°C),生命体征正常,也没有其他发现感染的焦点。有肿胀和明显的痛苦直接触诊的前肩区域,包括二头肌的囊。射线探伤的肩膀没有发现重大异常。超声检查显示大量的拟声的质量,最有可能的纤维蛋白的物质,有两头的内囊只有滑液的体积小。中间的远端方面肱骨结节是异常与正常光滑轮廓的丧失。未遂愿望的二头肌的滑液囊是不成功的,但从肩膀关节滑液被成功地吸气。结果补充表中列出 1

马接受全身麻醉和内窥镜可视化的右肩关节和二头肌的囊。滑液囊和关节是收集和提交的文化。内窥镜检查显示正常的肩关节滑膜,但大量的自由和粘纤维蛋白的二头肌的囊摘除和提交的文化。有一个区域(12毫米×15毫米)中间结节的远端方面,缺乏纤维软骨,当探测软。该地区被去除掉正常软骨下的组织,这个组织也提交文化。二头肌囊滑膜活检组织病理学的主要确定了亚急性脓性增生的滑膜炎没有细菌在显微镜检测。抗菌治疗是补充表中列出 1。在手术后6周马小跑的声音。随后马跑(被)为一个两岁的,随后在3和4岁,省级维多利亚多个比赛冠军,多次在大都市维多利亚。其他母亲的后代这匹马被多个股权赢家。

案例2是一个优秀的小母马7个月岁居住在新南威尔士州南部高地地区,2013年8月残废的左前腿、不确定的时间。尽管与强力霉素治疗72小时,残废的进展和马被进一步评估和可能的手术。到达马是明亮和警惕,严重跛行走的左前腿,无热的生命体征正常,也没有其他发现感染的焦点。有肿胀和疼痛的触诊夹板内侧骨近端轴向的方面。射线投影显示的证据焦点区域的皮质骨吸收palmaromedial mid-proximal生长皮层左边第三掌骨(McIII)。骨光亮在维度(2毫米×14毫米)是目前在该地区intraosseous韧带的第二和第三掌骨之间的依恋。超声显示一个明显的骨缺损表面皮层McIII相应的射线照片上看到的光亮。血异常温和(见补充表 1)。手术探索小坏死分离McIII骨头碎片高架和删除和提交的微生物。抗菌治疗与阿米卡星珠子放在骨缺损,头孢曲松钠(地区肢体灌注),普鲁卡因青霉素G,庆大霉素和那里口服甲氧苄氨嘧啶/硫七天。在六个星期对象、残废和疼痛已经解决。在维多利亚和小雌马障碍进行一次销售和出口澳大利亚。

案例3是一个还在吃奶的男性良种的三个月岁居住在澳大利亚新南威尔士州猎人谷,2016年12月的积液严重残废和左后指屈肌腱鞘。一些其他临床信息是可用的。普通x射线的左后球节和侧面都是正常的。肌腱鞘是洗胃,大量纤维蛋白是全身麻醉下褪了下来。滑液被形容为浑浊的,蛋白质和细胞计数异常。抗菌治疗是在补充表 1。术后第六天家农场马出院,声音在走,但是没有其他临床细节是可用的。马随后跑两岁,放置在一个屏障试验在省级新南威尔士(NSW),但后来没有入选的十六岁开始在新南威尔士和昆士兰地区的国家。其他母亲的后代这匹马unraced或者没有入选的。

3所示。方法

滑液用于接种到Oxoid信号血培养瓶(BCB) (Provet Vi、悉尼、新南威尔士、澳大利亚)集合的时候从手术,例1和3,但对第二种情况是不可用。其他样品用于文化是纤维蛋白从例1和例3和灌洗去除掉骨头从病例2。所有收集的样本,包括接种BCBs当天送交实验室在例1和3在30分钟的收集,并在6小时内收集的案例2。所有样品后收集被接种到哥伦比亚羊血琼脂和巧克力琼脂(bioMerieux,澳大利亚)和煮熟的肉浓缩媒体(CMM)按照生产厂家的建议(热费希尔科学、阿德莱德、澳大利亚),一旦他们到达实验室。孵化条件培养媒体有氧(35°C±2°C和5%二氧化碳气氛)和厌氧(35°C±2°C和10%二氧化碳气氛)。盘子在36个小时然后读re-incubated长达五天,检查每24小时增长,除了厌氧板,检查每48小时五天。CMM是孵化到积极和检查日常视觉浊度的迹象,然后亚文化,如果浑浊的,在相同的方式作为文化最初的样品。为识别、隔离治疗的成员 奈瑟氏菌科和HACEK集团基于最初的形态学特征。HACEK代表一群革兰氏阴性细菌(GNB)人类正常菌群的一部分: 嗜血杆菌物种,Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Cardiobacterium hominis, Eikenella corrodens, Kingella物种。这些生物可以很容易地确定等商业系统API NH和VITEK - 2 (bioMerieux, Marcy-l 'Etoile,法国)和matrix-assisted激光解吸电离时间飞行质谱( 12- - - - - - 15]。最初的隔离(隔离1例1)未能经过反复亚文化传播,但隔离2和隔离3(例2和3,分别)幸存下来重复亚文化在哥伦比亚的马血琼脂(补充 16在大气二氧化碳的5%。这些隔离被送到实验室在圣伦纳德比是更广泛的测试实验室生物被孤立的最初的地方。隔离2和3(例2和3)存储在−70°C 15% glycerol-containing介质,从那里他们获取更广泛的测试。

隔离2 3,能动性研究进行按发表的方法( 17, 18]。细菌在营养肉汤乳化,允许增长2-24小时15 - 25°C至37°C和肉汤检查间隔(4 8 24小时)。减少细菌悬液的放置到载玻片盖玻片覆盖和使用相差显微镜检查。写明ATCC写明ATCC细菌所描述的控制和传播作为文化指南( 19],Garitty et al。 20.)是: 肠杆菌属泄殖腔,铜绿假单胞菌写明ATCC 27853(正面); 肺炎克雷伯菌写明ATCC 13882(负);和 Kingella kingae写明ATCC 23330(抽搐发生运动性为扩展和收缩的IV型菌毛)。

36小时后生化测试进行亚文化孵化在哥伦比亚的马血琼脂(Oxoid) [ 16]。有限的测试是在隔离1,因为它没有经受一次又一次的亚文化。隔离2和3以下的利用:ID32葡萄球菌版本3,API版本5葡萄球菌,快速ID 32喉炎版本4,API 20喉炎,version 8, API 20版本7,Vitek 2版本8 (bioMerieux、马西l 'Etoile、法国);和RapidID NH系统(热费希尔科学、阿德莱德、澳大利亚),按照制造商的说明。

MALDI-TOF分析由bioMerieux MALDI-TOF v2.0在所有三个隔离的实验室初步分解动作发生。隔离2和3,力量MALDI生物型罗经试管版本3(力量Daltonik,不来梅,德国)并行测试的隔离与已知写明ATCC生物,一式两份,来验证MALDI-TOF和Vitek系统属和物种水平的结果。这些都是 淋病奈瑟氏菌5239年(ACM), 莫拉克斯氏菌属复活(写明ATCC 25238), 流感嗜血杆菌(写明ATCC 49766年和8468年国家反恐怖主义中心的), Aggregatibacter aphrophilus(写明ATCC 7901), Kingella denitrificans(写明ATCC 33394), Eikenella corrodens(写明ATCC BAA115), Kingella kingae(写明ATCC 23330)。

药敏测试执行(AST)根据盘CLSI指南方法使用穆勒辛顿血去纤维蛋白的马血琼脂(尼古拉斯)和5% (bioMerieux),孵化在5%二氧化碳35°C为24 - 48小时,按照CLSI AST细菌分离方法从动物(2013、2015) 21, 22)和人( 23- - - - - - 25]。观察增长这个琼脂是穷,但是隔离不长在其他AST琼脂。尼古拉斯没有增长,没有血。因为没有兽医指导方针在动物或马这种生物,我们使用了CLSI指南 放线杆菌 Enterobacteriales( 21, 22]。Beta-lactamase测试测试使用青霉素抗生素光盘(1单元)(Oxoid、澳大利亚),Remel™Nitrocefin光盘(热费希尔、阿德莱德、澳大利亚),BD洗液™Cefinase™光盘的检测 淋病奈瑟氏菌,Staphylocooccus物种,流感嗜血杆菌,莫拉克斯氏菌属复活,Enterococci和厌氧细菌的生产 β内酰胺酶。我们也使用了一个内部TGA机密类1,5 Beta-lactamase文化方法,改编自“加以测试”( 26]。二是穆勒辛顿琼脂板(桶)含有青霉素和暂停 金黄色葡萄球菌(1 - 2麦克法兰标准)。板块penicillin-sensitive播种 金黄色葡萄球菌(写明ATCC 25992,青霉素麦克风= 0.025 mg / L),含有青霉素浓度略高于麦克风(0.028 mg / L)的种子内部文化准备。菌株生产 β内酰胺酶复制到盘子时,将呈现的青霉素不活跃,并允许增长播种应变作为接种体周围区域。任何生物被≤0.028 mg / L青霉素不会生长在盘子上。质量控制生物用于“加以测试” 金黄色葡萄球菌写明ATCC 29213(增长表明积极的 β内酰胺酶生产),写明ATCC 25993(没有增长表明消极 β内酰胺酶生产)。

扫描电子显微镜(SEM),细胞从肉汤在PBS洗两次,漩涡,添加到poly-l-lysine镀膜玻璃盖玻片,在室温下将30分钟。其次是固定在5%戊二醛在PBS一夜之间在4°C。戊二醛是移除和盖玻片在PBS洗了5次,其次是在分级脱水乙醇系列为20%,30%,50%,70%,80%,90%,和95%,每15分钟。其次是两个20分钟的交流100%乙醇,一个20分钟的交流2:1乙醇:Hexamethyldisilazane (HMDS),一个20分钟的交流1:2乙醇:HMDS, HMDS交流100%和两个20分钟。最后的交换后,样本晾干完全在一个干燥室至少48小时。样本被安装到标本存根,涂在~ 5纳米金/钯和成像蔡司上55副场发射扫描电子显微镜的加速电压5 kV。

16 s rRNA基因分析最初进行隔离,不能传播,但材料可以从最初的文化。因此,一段16 s rRNA基因放大使用双重退化了底漆27 f-cm (F 5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG,其中M或C)和反向引物1492 R (R 5′-TACCTTGTTACGACTT),被弗兰克et al。 27]。

隔离2 3可以在亚文化传播。DNA提取从一个纯粹的文化隔离。总共2毫升的液体培养每个孤立的离心机和DNA提取使用bead-beating (5.5 ms−130年代)和试剂盒AllPrep工具包(试剂盒、钙、美国)。两组引物被用来放大段16 s rRNA的两个领域。设置一个由一个通用1020碱基对(bp) 16 s rRNA细菌引物(域III): F 5′广汽太极拳TAC GGG gg CAG CAG-3 R′, 5′ctg ATC公司治理文化得到TAC标记注册会计师TTC-3′( 28]。B组由490个基点的16 s rRNA基因的部分序列(域):F 5′有条件现金援助AAC ACA TGC亚美大陆煤层气有限公司TCG ARCG-3 R′, 5′cgt ATT ACC GCG GCT GCT-3′( 29日]。这些被用来放大这种基因使用10 ng从每个菌株基因组DNA分离。16 s rRNA发展史为基础的分类是由比较高度保守的16 s rRNA都是小亚基的一部分出现在所有原核生物的核糖体。样本提取试剂盒使用半自动BioRobot®(M48)系统(美国CA试剂盒)。一旦放大完成,通过电泳(Biorad) PCR产品量化和可视化σ4%琼脂糖凝胶与溴化乙锭染色使用1×此种(0.089 M三羟甲基氨基甲烷硼酸液pH值8.3包含2 mN EDTA)对分子统治者缓冲系统。凝胶加载缓冲区包含0.25%溴酚蓝,0.25%二甲苯苯胺,40%蔗糖。溴化乙锭(0.5 µg / mL)包含在简单的可视化的凝胶乐队在紫外线下确认的1020碱基对(bp)和490 bp的乐队。PCR QIAquick净化设备协议被用来净化单引号或双链DNA片段PCR和其他酶反应。碎片从490年到1020年英国石油公司从引物纯化,核苷酸聚合酶和盐测序的放大产品做准备。桑格序列生成使用Bigdye终结者音序器ABI科学棱镜/日立(3135型)棱镜遗传分析仪(应用生物系统公司、生命技术公司、促进城市,促进城市,加利福尼亚,美国)。桑格的分离序列2和3,然后分析了在NCBI基因库( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/对其他16 s rRNA)参考数据库识别。是在大型X[进行进化分析 30.),使用复合方法田村和Nei的可能性最大 31日]。隔离2和3相同的结果(补充图 5)。

基因组核苷酸身份计算平均JSpecies使用ANIb方法( 32, 33]。全基因组核苷酸身份(gANI),平均对齐分数(AF)和intra-species概率计算使用蛋白编码基因作为描述Varghese et al。 34]。dna dna杂交估计在网上使用身份/ HSP长度公式从Genome-to-Genome距离计算器 33]。

4所示。结果

积极的文化从CMM获得的只是对三例病例。时间文化的积极性是4 - 5天(见补充表 1)。

在这里,我们报告的特点 隔离1(例1)分开,因为它没有提供更详细的测试,因为它未能存活重复亚文化。革兰氏染色剂的形态分离1革兰氏阴性cocco-bacilli (GNCB)出现在短,双长链。菌落形态很小,灰色清除殖民地,显示beta-hemolysis羊血琼脂。API NH版本3 (bioMerieux、法国)对葡萄糖产生了积极的反应,果糖、蔗糖和碱性磷酸酶(代码3120)和识别 嗜血杆菌paragallinarum (Hp)。Vitek测试没有进行隔离,因为它不能重复亚文化传播。bioMerieux MALDI-TOF v2.0隔离1的识别 Kingella kingae在99.9%的置信水平。

革兰氏染色剂的形态 隔离2 3相同的是革兰氏阴性cocco-bacilli (GNCB)出现在短,双长链,但是没有典型的形态学特征的 Kingella, Simonsiella, Alysiella(补充图 1)。单个细胞的马隔离宽(6.9 - -7.3 µ米),中等长度(1.0 - -1.2 µ米),相对椭圆形状和高度形成细丝长8 - 12或更多的细胞。长链的链与相似的特征 Simonsiella Alysiella物种,以及偶尔看到一些莫拉克斯氏菌属的物种,但却不像典型的革兰氏染色剂的出现 Kingella kingae( 13]。

菌落形态的 隔离2 3相同的是小灰清除殖民地,显示beta-hemolysis羊和哥伦比亚的马血琼脂(补充 16]。板有一个独特的“漂白”气味类似于其他生物HACEK组。在24小时内孵化,殖民地光滑的外观和表现出轻微点蚀的琼脂,然后开发传播区域(“煎蛋”外观)48小时的潜伏期(补充图 2)。最佳生长在37±2°C,公司为5%2在有氧条件下,但也有增长,虽然不那么丰富的,在厌氧条件下与10 - 15%二氧化碳富集大气。没有增长MacConkey琼脂(补充表 2)。两个隔离2和图3展示了抽搐的能动性。

这两个 隔离2 3氧化酶是积极的,消极的结果对过氧化氢酶,过氧化氢溶液(3%、10%和30%)和硝酸还原亚硝酸盐。隔离2和3为专有的测试结果是:ID32葡萄球菌版本3 (ArgA和朋友积极)API版本5葡萄球菌(葡萄糖、果糖和朋友积极),快速ID 32喉炎version 4(抗利尿激素,伙计,肋骨,囊积极),API 20喉炎version 8 (PAL &圈正面);API 20 ne版本7,RapidID NH为葡萄糖氧化酶系统都产生了积极的反应。隔离2和3,Vitek - 2系统(bioMerieux、马西l 'Etoile、法国)产生低区别的标识(“禁忌biopatterns”)。生物检测呈阳性ArgA LeuA。识别等 Methylobacterium物种,脑膜炎灰质(快速三角帆船99%)和 莫拉克斯氏菌属羊属(脑膜炎)(没有399%,PheA 92%, ArgA 1%)也较低的歧视。

补充表 2显示选定的表型结果 隔离2 3(相同的结果),而其他革兰氏阴性的生物体,包括 Kingella kingae

MALDI-TOF鉴定不同的设备显示不一致的结果。bioMerieux MALDI-TOF v2.0的识别 隔离2 3 Kingella kingae在99.9%的置信水平。结果力量MALDI-TOF隔离2和3 克雷伯氏菌aerogenes(1.62分)紧随其后 Kingella kingae作为下一个最高等级得分(1.55),在三次重复测试。

SEM,从补充图 3,可以看出 隔离2 3不同于 Kingella kingae控制( Kingella kingae写明ATCC 23330),比杆状的球菌样的。突出的外膜小泡(omv)清楚的看到。图片不像发表的扫描电镜图像 Simonsiella Alysiella( 13]。

抗菌药物敏感性试验结果提供了补充表 1。值得注意的是,一个隔离beta-lactamase积极(隔离2)。 隔离2,阳性 β内酰胺酶使用Remel™Nitrocefin和Cefinase™光盘以及“加以测试”方法中所描述的方法。 隔离1,测试-在所有上面提到的 β内酰胺酶的方法。

16 s rRNA分析 隔离1(m12 - 17630),使用引物在弗兰克et al。 27)如上所述的方法,尽管优秀的决议在属水平(100%同源性),不能独立 Kingella kingae Kingella denitrificans发现,一些差异(96%同源性)之间的隔离1和这些 Kingella物种。基因库加入这隔离KR494280数量(见附加图 4)。

16 s rRNA分析 分离出1、2、 3使用引物按引用( 28, 29日),生成的补充提供的系统树图 5。隔离1,2,3似乎是相同的。

全基因组比较 隔离2 3和类型菌株的系统发育的亲戚 Alysiella菌 Kingella kingae使用ANIb方法显示平均核苷酸的身份76.60和76.44%,分别为( 35]。这些值远低于公认物种ANI(95 - 96%的阈值 36]。进一步分析使用全基因组核苷酸身份(ANI)平均方法产生最大gANI / AF / 0.54 77.77%的价值观 Alysiella菌/ 0.52和77.61% Kingella kingae。在比较这相当于一个概率的< 1.0 e-06小说马隔离属于这两种物种( 34]。最后,计算Genome-to-Genome距离生产硅片dna dna杂交(dDDH)值低于阈值> 70%用于划分物种( 35]。比较孤立的3 Alysiella菌 Kingella kingae基因组显示dDDH值25.3%±2.4%和23.4%±2.4%,分别。这些值等同于一个非常低的概率(≤0.01%),实验dna dna杂交比较阈值会高于70%的物种。

5。讨论

我们描述一本小说的隔离细菌从三个来自不同地区的年轻匹纯种马在新南威尔士州,澳大利亚。革兰氏染色剂形态是革兰氏阴性cocco-bacilli (GNCB)出现在双链,但没有典型的形态学特征 Kingella, Simonsiella, Alysiella

表型测试提供了相互矛盾的结果。但大多数像我们隔离表现出独特的特征 Kingella物种,而不是 Simonsiella,尽管我们对过氧化氢酶的分离显示负面结果和过氧化氢溶液(3%、10%和30%),硝酸还原亚硝酸盐( Simonsiella Alysiella都是过氧化氢酶阳性, Alysiella硝酸盐、亚硝酸盐-)、麦芽糖( Simonsiella Kingella kingae是积极的)和碱性磷酸酶阳性结果( Simonsiella是负的, Kingella kingae是积极的)。像我们的马隔离, Kingella kingae也不动的,表现出积极的氧化酶活动-过氧化氢酶反应,并产生酸葡萄糖和麦芽糖而不是从其他糖,看到补充表吗 2

由不同设备MALDI-TOF还给了相互矛盾的结果。细菌的鉴定 Kingella kingae由bioMerieux MALDI-TOF为3隔离99.9%的水平。然而,使用力量MALDI生物型罗经试管版本3隔离2和3,没有可靠的识别获得最佳匹配得分值为1.55。

根据16 s rRNA分析,系统发育树显示 分离出1、2、 3最密切相关 Kingella kingae但平均核身份(ANI)不到89%。进一步16 s rRNA基因序列分析,构建系统发育树使用隔离的人类和动物源MEGA-X邻国加入方法使用木村相关性和引导值计算从1000年树木,隔离2和3不与任何的对齐 奈瑟氏菌科的物种或附近的邻居 Simonsiella muelleri Alysiella菌 Kingella kingae(补充数据 4 5)。

使用特定PCR诊断的OAI的人类, Kingella kingae被发现的最常见原因脓毒性关节炎6个月至5岁儿童的年龄,导致53%的83例证明的OAI [ 37]。在马,尽管努力改善脓毒性关节炎的细菌病原体的检测,优化文化和使用16 s rRNA实时PCR,在大约60%的情况下,没有病原体识别( 38]。在这个研究中,科幻是收集到无菌血清收集管和trypticase酱油汤(TSB)。血琼脂平板直接接种和孵化35°C 48小时(耗氧和厌氧)。浓缩,TSB是在有氧条件下孵化35°C 72小时之后他们的亚文化在血琼脂24日,48岁,72小时进行孵化。38样本,18(38%)文化是积极的。一(1)样本产生混合增长。18岁的积极的文化,从浓缩获得7(39%)的文化。细菌隔绝7/28(25%)的科幻样本21马已知样本集合之前接受抗菌素治疗相比,5/13(38%),没有收到抗菌素。两(2)从科幻样本共享生物培养 放线杆菌equuli(6)隔离, 金黄色葡萄球菌(5),其余部分由凝固酶阴性 葡萄球菌sp。(2)和一个(1)以下: 沙门氏菌的物种,肠杆菌泄殖腔,肠杆菌agglomerans,肠球菌sp。 铜绿假单胞菌、链球菌zooepidemicus。rt - pcr未能发现3/18(17%)的文化优点,但正在4/30(13%)的文化负样本。作者确实提到,然而,一些扩增子生成并没有在他们的参考数据库。

没有数据表明流行病学、微生物学、临床表现或管理 Kingella感染马。唯一的其他动物的隔离 Kingella Kingella饮剂隔绝饲养员蜜熊(咬伤的伤口 饮剂flavus)[ 39]。分类学上, Kingella物种的秩序 Neisseriales和校正的家人 奈瑟氏菌科,包括属 Alysiella、Bergeriella Conchiformibius、Eikenella Kingella,脑膜炎,Simonsiella, Stenoxybacter Uruburuella 透明颤菌、奈瑟氏菌属是家庭的模式属( 40]。所有物种都预留host-associated有机体除了 透明颤菌,这可能是独立生存的。而革兰氏染色剂的大多数成员的家庭是球菌的,球菌样的,或杆状,单个细胞,对,群众或短链, Alysiella Simonsiella可能形成链八(8)细胞或更多。Flagellae缺席但滑翔或抽搐能动性可能存在( 40]。革兰氏染色剂隔离(补充图 1)更像一些莫拉克斯氏菌属的物种,而不是 Kingella, Alysiella Simonsiella,后两个形态学特征。

口腔的一种新的物种隔离羊革兰氏阴性球菌形成长链,虽然最初分为 Alysiellasp,后来被重新归类为一个新物种 莫拉克斯氏菌属( 莫拉克斯氏菌属oblonga)、基于16 s rRNA基因序列、脂肪酸组成、醌系统分析和生化测试( 41]。尽管SEM外表相似,无论是生化测试(补充表 1)和16 s rRNA基因序列分析(补充数据 4 5)表明亲缘的隔离 莫拉克斯氏菌属包括 莫拉克斯氏菌属oblonga

Simonsiella物种是正常口腔菌群的各种各样的温血脊椎动物 Simonsiella从数量有限的物种只有被隔离动物:人类( 美国muelleri),猫( Simonsiella sp。)、狗( 美国steedae),几内亚猪、兔子和羊( 美国菌)[ 42]。只有三个(3)物种然而有效描述( s . muelleri steedae, 美国菌),这样Bergey手册古生菌和细菌分类学的建议” Alysiella有报导说,许多动物的口腔,但生物体的嘴里只有被隔离的牛,几内亚猪和羊,与羊只是几个分离已经详细描述了” 13]。属 Alysiella最初只包含一个物种隔离从羊的口( Alysiella filiformis),但是以前命名的 Simonsiella菌(羊)被重新分类属 Alysiella菌基于16 s rRNA序列( 43]。虽然没有报告的孤立 Simonsiella Alysiella从马类物种,近一百年前,西蒙斯的外观 Simonsiella——生物显微镜口腔样本马类( 44]。 Simonsiella Alysiella被视为非病原的免疫活性的主机( 42]。我们的隔离不显示的特征形态 Alysiella Simonsiella

成员的顺序 Neisseriales(包含一个家族 奈瑟氏菌科)没有具体区分生化、表型和分子特征。成员可能最杰出的相比之下守恒的签名indels (CSIs)广泛分布的特定蛋白质 奈瑟氏菌科( 40]。进化枝1包含属 Eikenella Kingella,脑膜炎, Simonsiella-专host-associated生物缺乏flagellae和显示不同形态( 40]。

所有马匹似乎完全康复手术治疗和抗生素治疗。什么影响感染对赛马场性能难以确定等有许多变量参与性能。儿童的OAI所致 Kingella kingae可能遵循一个相对良性的课程,通常解决没有抗生素疗法或任何干预 45]。

需要进一步分析来确定这一潜在新物种的分类。直到更多的隔离和临床病例材料可用,AST应该遵循指南发表兽医CLSI指南,为马目前信息不足AST隔离可以替代动物来源。

唯一的抗生素,所有三个分离株进行了测试,发现ceftiofur和四环素敏感。抵抗复方磺胺甲基异恶唑是隔离1中演示,对青霉素、氨苄青霉素、庆大霉素隔离2。事实上,第二种情况只有一个肠外抗生素分离2是敏感地区肢体灌注(头孢曲松钠)。两个隔离测试氟喹诺酮类原料药和敏感。尽管所有病例出现全面复苏,经验性抗生素疗法治疗的OAI在马怀疑是由于这种生物应该包括第三代头孢菌素、四环素、或氟喹诺酮类,直到进一步的数据可用。

这种生物感染的流行病学意义仍有待确定,但它发生在年轻马匹可能表明流行病学相似之处 Kingella kingae感染人类。

的利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

作者的贡献

概念化,伯纳德·j·哈德逊,克里斯托弗·b·奥沙利文安格斯r . Adkins,伊恩·g·查尔斯和凯瑟琳鸡方法,克里斯汀h . Todhunter安吉拉·贝格安娜Blishen,怀中Mitsakos,蕾奥妮陈软件,伯纳德·j·哈德逊,布兰登a . O’rourke陈蕾奥妮斯和Mitsakos验证、陈蕾奥妮斯和Mitsakos正式分析,布兰登a . O’rourke Piklu罗伊Chowdhury,陈蕾奥妮斯和Mitsakos调查,伯纳德·j·哈德逊,凯瑟琳鸡肉,安吉拉·p·贝格,克里斯汀h . Todhunter本杰明·雷蒙德·安格斯r . Adkins, Steven p . Djordjevic伊恩·g·查尔斯·克里斯托弗·b·奥沙利文安德鲁·埃德加和怀中Mitsakos资源,伯纳德·j·哈德逊数据管理(Katerina Mitsakos和陈蕾奥妮写初稿准备,伯纳德·j·哈德逊写作——审查和编辑,伯纳德·j·哈德逊(Katerina Mitsakos可视化,伯纳德·j·哈德逊,凯瑟琳鸡怀中Mitsakos,蕾奥妮陈监督,伯纳德·j·哈德逊和怀中Mitsakos项目管理,伯纳德·j·哈德逊,怀中Mitsakos资金收购,伯纳德·j·哈德逊。

补充材料

表1:三osteoarticular感染病例的临床和实验室特征可能引起的新型物种。表2:表型和生化特征的新隔离(s)(2 & 3)与Kingella kingae,莫拉克斯氏菌属oblonga,牛结核莫拉克斯氏菌属,Alysiella filiformis。图1:革兰氏染色剂的小说马细菌隔离。图1 b:革兰氏染色剂的小说马细菌隔离。图2:小说马与β溶血性细菌隔离,灰色的半透明的殖民地上显示马血琼脂( 16在36°C) 24小时后孵化5% 28日有限公司2。图2 b:小说马细菌分离与“煎蛋”的殖民地显示在哥伦比亚的马血琼脂( 16]72小时孵化后36°C。图3:扫描电子显微镜(SEM)的小说马细菌分离,而Kingella kingae。小说马隔离比杆状球菌样的。突出的外膜小泡(omv)清楚地看到。图3 b:小说马细菌分离链。图3 c:小说马细菌隔离维度(1143×732.8 nm)。图3 d:小说马细菌隔离维度(1143×732.8 nm)。图4:16 s rRNA分析,分离出1 ( 27];分子系统树由最大似然引导方法概述了基于Tamura-Nei模型[进化历史 31日, 40]。图5:16 s rRNA分析,分离出2和3 ( 28, 29日];分子系统树由最大似然引导方法概述了基于Tamura-Nei模型[进化历史 31日, 40]。

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