CMMM 计算和数学方法在医学 1748 - 6718 1748 - 670 x Hindawi 10.1155 / 2021/6248793 6248793 研究文章 mir - 223 - 5 - p抑制OTX1调解恶性进展肺鳞状细胞癌的细胞 https://orcid.org/0000 - 0002 - 7594 - 9638 陆 Yunping 黄 道 心胸外科学系 金华市附属医院 浙江大学医学院 金华 中国 zju.edu.cn 2021年 8 7 2021年 2021年 20. 4 2021年 12 6 2021年 8 7 2021年 2021年 版权©2021 Yunping路。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。肺鳞状细胞癌(LUSC)特性的高发病率和死亡率作为一个全球性的恶性肿瘤。本研究主要探讨mir - 223 - 5 - p -依赖机制影响扩散,入侵,LUSC细胞的迁移。 方法。成熟的microrna表达数据和测序数据的总RNA TCGA LUSC下载来自数据库的。差异表达mrna。mir - 223 - 5 - p的函数在LUSC细胞被化验检测中存在,麻省理工,伤口愈合试验,免疫印迹,Transwell化验。免疫印迹分析执行OTX1和JAK / STAT信号通路之间的关系。Dual-luciferase化验发现mir - 223 - 5 - p之间的关系和OTX1。的方式mir - 223 - 5 - p规范LUSC细胞生物功能通过OTX1进一步探索。 结果。这是指出,mir - 223 - 5 - p LUSC组织和细胞中表达明显降低。过度的mir - 223 - 5 - p负调节扩散,入侵,LUSC细胞的迁移。下游靶基因发现OTX1 LUSC细胞明显升高。OTX1之间的负相关和mir - 223 - 5 - p也发现。分析GSEA, OTX1显著富集的JAK / STAT信号通路激活途径。Dual-luciferase化验证明OTX1直接分子目标LUSC mir - 223 - 5 - p的细胞。救援实验验证,mir - 223 - 5 - p规范LUSC细胞的恶性表型与OTX1配对。 结论。本研究表明,mir - 223 - 5 - p在LUSC细胞低表达。mir - 223 - 5 - p的影响细胞增殖,入侵,迁移是实现了针对OTX1。很可能mir - 223 - 5 - p可以是小说LUSC治疗的目标,为未来LUSC治疗提供新思路。

 1。介绍

是世界上最常见的恶性肿瘤和癌症死亡的主要原因,肺癌引发的5年生存率只有19% 1]。指的是世界卫生组织(世卫组织)的分类,肺癌病理可分为两个亚型:非小细胞肺癌(NSCLC)和小细胞肺癌(SCLC)。两种类型的非小细胞肺癌可以进一步分为肺鳞状细胞癌(LUSC),肺腺癌(LUAD),和大细胞肺癌(LCLC) [ 2]。LUSC杀死大约400000以来全球每年70%的患者诊断时已发展到晚期( 3, 4]。LUSC主要治疗方法是手术和放疗或化疗,对先进的病人是低效的。然而,biomarker-oriented治疗是一种有效的方法来改善先进LC患者的总生存期( 5]。然而,公认的生物标记物用于治疗LUSC缺乏。因此,探索新的生物标记必须改善LUSC的临床诊断和治疗。

小分子核糖核酸(microrna),进化保存非编码RNA(约22个核苷酸),修饰符,转录后的调节基因的表达( 6]。microrna能相对地调节基因的表达不完整的碱基配对在3 ′ 翻译区(UTR)的目标基因,导致信使rna降解[ 7, 8]。microrna基因表达可以抑制降解信使rna,然后调节各种细胞功能,包括肿瘤细胞浸润和转移( 9]。mir - 223 - 5 - p在许多癌症起到了很重要的作用。发现mir - 223 - 5 - p作为抑制剂的进展和肺转移骨肉瘤( 10]。在会阴部的癌症,mir - 223 - 5 - p与转移,和overexpressing mir - 223 - 5 - p抑制会阴部的癌细胞的增殖和迁移 11]。在非小细胞肺癌,mir - 223 - 5 - p可以通过调节E2F8[阻碍肿瘤的生长和转移 12]。然而,mir - 223 - 5 -销LUSC机制需要进一步澄清。

因此,重要的是要完全确定的角色在LUSC mir - 223 - 5 - p,阐明潜在的分子机制。这里的作用和机制,mir - 223 - 5 - p调节增殖,迁移和入侵LUSC细胞通过一系列的细胞和分子分析探索。本研究可以为进一步理解LUSC的发病机制提供支持。

 2。材料和方法 2.1。细胞培养

正常的人类肺上皮细胞系BEAS-2B (3131 c0001000200027)被要求从上海生命科学研究院细胞库,中国科学院。LUSC细胞系H2170 (3111 c0001ccc000354)和H1703 (3111 c0001ccc000353)从细胞获得银行基本医疗科学研究所、中国医学科学院。LUSC细胞系SK-MES-1 (3142 c0001000000946)和H226 (3142 c0001000000966)从细胞访问中国银行类型文化中心集合(CCTCC)。与文化条件37°C公司为5%2,所有的细胞系都生长在rpmi - 1640中(Gibco,罗克维尔市,医学博士,美国)添加1%青霉素(表达载体)和10%胎牛血清(的边后卫;Gibco)。

 2.2。生物信息学分析

成熟的microrna表达数据(包括473癌症组织样本和45相邻正常组织样本)和测序数据的RNA-seq(包括497年癌症组织样本和49相邻正常组织样本)从TCGA-LUSC获得数据集( https://portal.gdc.cancer.gov/)。mir - 223 - 5 - p的表达差异分析指的是下载数据。差异表达mrna (DEmRNAs)检测到R包“刨边机”( ∣ logFC ∣ > 2 , p 邻接的 < 0.05 )。目标基因的mir - 223 - 5 - p在miRTarBase研究和TargetScan数据库。结果与调节DEmRNAs,和候选人DEmRNAs绑定mir - 223 - 5 - p序列筛选出来。通过相关分析确定的目标mRNA。

 2.3。细胞转染

mir - 223 - 5 - p模仿,mir - 223 - 5 - p抑制剂,nc GenePharma被命令从上海。针对OTX1小干扰rna (siRNAs)是由上海Sangon生物技术有限公司,有限公司重组质粒pEGFP1-OTX1是使用pEGFP1 overexpressing向量。模仿、siRNAs抑制剂,重组质粒,转染治疗和相应的控制被使用Lipofectamine®3000(美国表达载体)遵循指令。

 2.4。实时定量聚合酶链反应(存在)

获得的总RNA试剂盒(表达载体)细胞是合成cDNA逆转录系统(Promega)。mir - 223 - 5 - p的表达和OTX1信使rna是量化SYBR PrimeScript microrna的rt - pcr试剂盒(豆类,大连,中国)。互补脱氧核糖核酸模板放大ABI 7900实时荧光定量PCR仪(美国应用生物系统公司,CA)。存在条件如下:94°C, 3分钟;34个周期:94°C, 15秒;60°C, 55岁;和72°C, 30年代。OTX1 mRNA和mir - 223 - 5 - p内部引用GAPDH和U6,分别。有2所示的结果- - - - - - ΔΔCt价值。实验重复3次。引物序列表中列出 1。

引物序列中存在使用。

基因 引物序列
mir - 223 - 5 - p F: 5 ′ -TGGATCCGTGTCACTCGGGCTTTACCTG-3 ′
R: 5 ′ -CGAATTCGTAGACACAGCCCAGGGCTGT-3 ′
GAPDH F: 5 ′ -GGGAGCCAAAAGGGTCATCATCTC-3 ′
R: 5 ′ -CCATGCCAGTGAGCTTCCCGTTC-3 ′
U6 F: 5 ′ -CTCGCTTCGGGCAGCACA-3 ′
R: 5 ′ -AACGCTTCACGAATTTGCGT-3 ′
OTX1 F: 5 ′ -GCGTCGTCGCTGAGTACAC-3 ′
R: 5 ′ -ACATGGGATAAGAGGCTGCTG-3 ′
2.5。免疫印迹分析

使用冷磷酸盐(PBS)转染细胞暴露于radioimmunoprecipitation化验(里帕)裂解缓冲添加1%的蛋白酶抑制剂(Sigma-Aldrich)蛋白质提取。蛋白质浓度与BCA评估分析工具包(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)。蛋白质样品40岁 μL /巷相隔十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sds - page)(美国Bio-Rad大力神,CA)。然后,分离蛋白质转移到一个聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(美国微孔,Billerica的)。5%脱脂奶粉的孵化后,细胞膜是孵化一夜之间在4°C使用目标主要抗体,其次是2 h与辣根peroxidase-labeled二级抗体杂交山羊anti-rabbit免疫球蛋白。Tris-Buffered盐水Tween-20 (TBST) (Sigma-Aldrich)被用来洗膜三次。蛋白质乐队与电化学发光检测(发射极耦合逻辑;Beyotime、上海、中国),进行了定量分析与图像实验室(Bio-Rad)。实验重复3次。(抗体信息如表所示 2。)

抗体用于免疫印迹。

抗体 白平衡 特异性 公司
β肌动蛋白 1:5000 兔单克隆 Abcam,中国
OTX1 0.5 - 4 μ克/毫升 兔多克隆 Abcam,中国
免疫球蛋白 1:5000 山羊抗兔 Abcam,中国
STAT5 0.5 - 4 μ克/毫升 兔单克隆 Abcam,中国
p-STAT5 0.5 - 4 μ克/毫升 兔单克隆 Abcam,中国
JAK2 0.5 - 4 μ克/毫升 兔单克隆 Abcam,中国
P-JAK2 0.5 - 4 μ克/毫升 兔单克隆 Abcam,中国
2.6。细胞增殖实验

SK-MES-1细胞准备成单个细胞悬液与文化解决方案包含10%的边后卫,在96孔板接种为200 μL / ( 5 × 10 3 细胞每100 μL),每组被一式三份。麻省理工的解决方案(Solarbio M1020)和PBS(5毫克/毫升)(20 μL)添加到每个在表示时间点(0 h、12小时、24小时、48 h,和72 h)。细胞被孵化为进一步4 h。上层清液的吸收和废弃的井。之后,细胞被离心机,浮在表面的吸收和再次放弃了。DMSO(二甲亚砜(150) μL)被添加进来,以使晶体完全融化。分光光度计(分子器件、桑尼维尔,美国)应用于测量每个在490纳米波长的吸光度。

 2.7。伤口愈合实验

SK-MES-1细胞被播种在3.5厘米盘子和孵化RPMI 1640培养基。越来越多的细胞层汇合的时,通过中心的直线划痕在每块板都有一个无菌吸管。PBS是用来洗井移除所有漂浮细胞。然后,细胞无血清培养系统在24小时。伤口愈合是监控和拍照在0 h和24 h,分别。

 2.8。Transwell入侵检测

所有文化试剂和Transwell钱伯斯被放置在37°C。当达到SK-MES-1细胞的生长对数期,细胞消化,用PBS洗净,被无血清培养基。调整细胞浓度 2 × 10 5 细胞/毫升。下室挤满了培养基(600 - 800年 μL)与添加10%血清而上部腔体100 - 150 μL细胞悬液。上满是人工基底膜。孵化后24 h,钱伯斯和钳搬了出去。液体上钱伯斯是排水。的钱伯斯被转移到一个盘子已经预装好的约有800 μL的甲醇。30分钟后固定在室温下,钱伯斯被搬了出来,液体在心房是排水。细胞在膜的上表面是用棉球擦去器。膜被小钳,细胞在膜结晶紫染色与0.5%。然后,染色细胞在显微镜下观察。

 2.9。Dual-Luciferase报告基因分析

野生型(WT)和突变(傻瓜)3 ′ UTR OTX1与下游的荧光素酶报告基因在目标向量。荧光素酶质粒OTX1-WT OTX1-MUT构造。后来,mimic-NC和mir - 223 - 5 - p模仿cotransfected SK-MES-1细胞OTX1-WT和OTX1-MUT,分别。与Renilla荧光素酶向量pRL-TK(豆类,大连,中国)作为内部参考,荧光素酶活性测定和荧光素酶报告基因分析工具。

 2.10。统计数据

Prism 8.0被用于数据处理。 的意思是 ± 标准 偏差 用于显示测量数据,然后呢 t 以及用于分析两组之间的差异。 p < 0.05 被设置为一个阈值来定义统计学意义。

 3所示。结果 3.1。减少表达mir - 223 - 5 - p LUSC细胞系和组织

成熟的microrna的表达数据和RNA序列数据从TCGA-LUSC获得数据集被用来分析的表达在LUSC mir - 223 - 5 - p。mir - 223 - 5 - p被发现特别是在LUSC不善表达(图 1(一))。报道,中mir - 223 - 5 - p可以影响细胞增殖,迁移和入侵NSCLC肿瘤抑制( 12]。在这项研究中,mir - 223 - 5 - p LUSC细胞株H2170言论,H1703, SK-MES-1, H226分析中存在。显著降低mir - 223 - 5 - p的表达在这些细胞系是比指出,在人类正常细胞系BEAS-2B(图 1 (b))。这些癌症细胞系,mir - 223 - 5 - p表达SK-MES-1细胞系是最低的。因此,SK-MES-1被选作进一步的实验。这些实验的结果表明,mir - 223 - 5 - p在LUSC细胞系和组织表达减少。

减少mir - 223 - 5 - p LUSC细胞系和组织。(一)箱形图显示mir - 223 - 5 - p在TCGA-LUSC数据集表达式;(b) mir - 223 - 5 - p的表达在不同LUSC细胞系H2170, H1703, SK-MES-1, H226和一个正常的人类肺上皮细胞系BEAS-2B检测中存在; ∗ 意味着 p < 0.05 而BEAS-2B。

 3.2。mir - 223 - 5 - p抑制恶性行为LUSC细胞体外<斜体> < /斜体>

为了探讨mir - 223 - 5 - p影响扩散,入侵,LUSC细胞和迁移,mir - 223 - 5 - p模仿/抑制剂及其控制模拟/抑制剂,分别转染SK-MES-1 LUSC细胞系。中存在的结果显示,mir - 223 - 5 - p模仿显著增加mir - 223 - 5 - p SK-MES-1言论,而mir - 223 - 5 - p抑制剂减少mir - 223 - 5(图- p表达式 2(一个))。然后,超表达或抑制mir - 223 - 5 - p LUSC细胞增殖的影响,入侵和迁移是由一系列化验检测包括MTT测定、Transwell化验,伤口愈合试验。结果表明,与相应的对照组相比,overexpressing mir - 223 - 5 - p高度抑制SK-MES-1增殖的细胞活动,入侵和迁移,而沉默mir - 223 - 5 - p提升这种能力(数据 2 (b)- - - - - - 2 (d))。它表明,mir - 223 - 5 - p抑制了 在体外扩散、入侵和LUSC细胞的迁移。

mir - 223 - 5 - p抑制增殖,入侵,LUSC细胞的迁移 在体外:(一)mir - 223 - 5 - p表达组与mir - 223 - 5 - p模仿/抑制剂检测到存在;(b) SK-MES-1细胞的增殖能力后mir - 223 - 5 - p是过表达或抑制肝癌和被检测到;(c)入侵的能力后SK-MES-1 mir - 223 - 5 - p是过表达或抑制被Transwell化验(×100);(d)迁徙的能力后SK-MES-1 mir - 223 - 5 - p是过表达或抑制检测到伤口愈合试验(×40); ∗ 意味着 p < 0.05 虽然mir - 223 - 5 - p模仿和mimic-NC mir - 223 - 5 - p抑制剂和inhibitor-NC。

 3.3。mir - 223 - 5 - p OTX1结合,抑制OTX1表达式

调节机制的深入理解LUSC mir - 223 - 5 - p, R包磨边机是用于微分表达式分析( ∣ logFC ∣ > 2 , p 邻接的 < 0.05 )。3469 DEmRNAs TCGA-LUSC得到,其中1179为表达下调,2290人调节(图 3(一个))。目标基因的调节DEmRNAs被分割的mir - 223 - 5 - p预测TargetScan和miRTarBase数据库。获得(图19候选目标基因 3 (b)),其中OTX1显著高表达在癌症LUSC组织(图 3 (c))。OTX1 mir - 223有最强的负相关,根据相关分析(图5 - p 3 (d))。OTX1据报道的能力促进肝细胞癌的增殖和转移和结肠直肠癌 13, 14]。因此,OTX1被选为一个可能的目标,mir - 223 - 5 - p进行进一步的研究。潜在的结合位点之间mir - 223 - 5 - p和OTX1被miRTarBase预测数据库(图 3 (e))。此外,这两个基因之间的结合位点突变,dual-luciferase分析用来确定绑定序列的有效性。结果表明,中mir - 223 - 5 - p与OTX1-WT显著降低了荧光素酶活性的细胞,没有影响OTX1-MUT(图 3 (f))。的结果中存在和免疫印迹显示overexpressing mir - 223 - 5 - p可以抑制OTX1 mRNA和蛋白表达,而抑制mir - 223 - 5 - p可以促进OTX1表达式(数据 3 (g)和 3 (h))。这些分析表明,mir - 223 - 5 - p抑制OTX1表达式。

mir - 223 - 5 - p目标和抑制OTX1表达式:(a)火山的情节DEmRNAs TCGA-LUSC;(b)有针对性的基因之间的交集mir - 223 - 5 - p TargetScan miRTarBase数据库和预测的调节DEmRNAs TCGA-LUSC数据集;(c)箱线图OTX1表达在肿瘤和正常样本TCGA;(d)之间的相关性mir - 223 - 5 - p和19个候选目标基因;(e)预测结合位点之间mir - 223 - 5 - p和OTX1;(f)之间的目标绑定mir - 223 - 5 - p和OTX1 dual-luciferase试验确认了;(g) OTX1 mRNA表达细胞overexpressing mir - 223 - 5 - p或者抑制mir - 223 - 5 - p是检测到存在;(h) OTX1蛋白表达在细胞overexpressing mir - 223 - 5 - p或者抑制mir - 223 - 5 - p是评估免疫印迹; ∗ 比较mir - 223 - 5 - p模仿+ OTX1-WT mimic-NC + OTX1-WT,比较mir - 223 - 5 - p与模拟数控模拟,并比较mir - 223 - 5 - p与抑制剂数控抑制剂, p < 0.05 。

 3.4。OTX1引起JAK / STAT信号激活和促进扩散,入侵,LUSC细胞的迁移

OTX1受到GSEA,结果表明OTX1显著激活JAK / STAT信号通路(图 4(一))。众所周知,JAK / STAT信号通路可以促进肿瘤细胞生存、增殖,和入侵 15]。因此,我们进一步探讨OTX1能否调节JAK / STAT信号通路。在这里,我们研究蛋白质的表达有关SK-MES-1 LUSC JAK / STAT通路的细胞转染oe-OTX1和si-OTX1。发现过表达OTX1可以促进磷酸化STAT5和JAK2 SK-MES-1通过免疫印迹,而沉默OTX1可以抑制磷酸化。然而,总蛋白表达STAT5 JAK2并没有显著影响(图 4 (b))。识别的影响OTX1 LUSC细胞,存在被用来检测转染效率(图 4 (c))。MTT分析是用来确定的角色中OTX1或沉默OTX1 SK-MES-1扩散。分析,过表达OTX1大大增加SK-MES-1扩散而沉默OTX1抑制(图这样的能力 4 (d))。Transwell试验的结果表明,过表达OTX1可以显著促进SK-MES-1入侵而沉默OTX1可以显著抑制(图的能力 4 (e))。作为实验揭示了伤口愈合,沉默OTX1可以显著减少SK-MES-1迁移而过表达OTX1可以增强migrative(图的能力 4 (f))。这些化验证明OTX1可以激活JAK / STAT信号通路,从而提升增殖,迁移,入侵LUSC细胞的能力。

OTX1引起JAK / STAT信号通路激活和增强其增殖,入侵,LUSC细胞的迁移。(一)信号通路由通过GSEA OTX1进行了分析。(b)的相对表达相关蛋白JAK / STAT信号通路OTX1过表达或沉默后被免疫印迹检测。(c) OTX1 mRNA表达SK-MES-1 OTX1后过表达或沉默。(d)的变化SK-MES-1细胞增殖过度或者沉默的OTX1被MTT试验检测。(e)的变化SK-MES-1细胞入侵在过度或沉默OTX1 Transwell探测到(×100)。(f)的变化SK-MES-1细胞迁移在过度或沉默的OTX1检测到伤口愈合试验(×40); ∗ 意味着 p < 0.05 oe-OTX1组与oe-NC或si-OTX1和si-NC。

 3.5。mir - 223 - 5 - p抑制针对OTX1 LUSC细胞的生物学行为

进一步阐明mir - 223 - 5 - p -依赖的分子机制,针对OTX1调解LUSC细胞生物学行为,OTX1超表达载体和mir - 223 - 5 - p模仿cotransfected SK-MES-1细胞检测细胞增殖的变化,入侵,迁徙的能力。中存在的结果表明,中mir - 223 - 5 - p OTX1表达减少,而oe-OTX1 OTX1的表达增加。Cotransfection mir - 223 - 3 - p模仿和oe-OTX1逆转的抑制作用mir - 223 - 5 - p模仿OTX1表达式。(图 5(一个))。MTT试验的结果表明,与NC组相比,mir - 223 - 3 - p模仿抑制SK-MES-1细胞的增殖,而oe-OTX1促进了扩散。Overexpressing OTX1可以反向抑制mir - 223 - 5(图- p SK-MES-1细胞增殖能力 5 (b))。Transwell化验和伤口愈合试验进行,这是表明,mir - 223 - 3 - p模仿抑制SK-MES-1细胞的入侵和迁移与NC组相比,虽然oe-OTX1促进了这些函数。OTX1可能极大地扭转mir - 223 - 5 - p的抑制过度SK-MES-1细胞入侵和迁移(数据 5 (c)和 5 (d))。作为实验揭示了世行,mir - 223 - 5 - p模拟受限的磷酸化STAT5和JAK2 SK-MES-1细胞,同时oe-OTX1刺激磷酸化。然而,cotransfection mir - 223 - 3 p模仿和oe-OTX1逆转mir - 223 - 3 p的抑制磷酸化的模仿STAT5和JAK2(图 5 (e))。这些化验发现mir - 223 - 5 - p抑制增殖,LUSC细胞的侵入性和迁移能力,通过抑制OTX1表达式。

mir - 223 - 5 - p抑制增殖,入侵和迁移LUSC细胞的靶向抑制OTX1表达式:(a) OTX1 mRNA表达的变化与oe-OTX1 SK-MES-1细胞组和mir - 223 - 5 - p模拟检测到存在;(b)每组细胞增殖活性的变化检测到MTT试验;(c)的变化在不同治疗组细胞入侵潜力发现通过Transwell化验(×100);(d)转染后的细胞迁移能力变化检测到伤口愈合试验(×40);(e)免疫印迹检测JAK-STAT信号通路的表达的变化在每个治疗组; ∗ 意味着 p < 0.05 两组之间的数据。

 4所示。讨论

LUSC可分为嗜碱性鳞状细胞癌(BSCC),角质化的鳞状细胞癌(KSCC)和nonkeratinized鳞状细胞癌(NKSCC),这是最常见的一种肺癌的组织学亚型 16]。在过去的几十年中,学者们一直探索microrna的生物功能。越来越多的证据表明,microrna是至关重要的球员在不同的生物过程,表示microrna的表达与人类癌症密切相关( 17]。一些研究表明,microrna是有前途的治疗肿瘤介入治疗的目标 18]。因此,microrna的研究具有十分重要的临床意义。在这里的作用和基本机制mir - 223 - 5 - p,参与LUSC进展进行了讨论。作为一个重要的microrna, mir - 223 - 5 - p可以调节许多癌症,如胃癌、膀胱癌( 19, 20.]。此外,它是证明overexpressing mir - 223 - 5 - p在特定癌症会导致不利预后[ 21]。然而,没有研究报道的角色在LUSC mir - 223 - 5 - p。在这项研究中,我们在TCGA-LUSC microrna的表达谱分析,发现降低LUSC mir - 223 - 5 - p。此外,我们注意到,mir - 223 - 5 - p的表达与LUSC细胞生物学行为,包括增殖、迁移和入侵,这标志着链接mir - 223 - 5 - p的表达首次LUSC进程。然而,mir - 223 - 5 - p的影响在癌症仍然是有争议的。mir - 223 - 5 - p的调节细胞增殖和分化的癌细胞可能的修复。特异性强,可能是由于纯粹的 在体外实验在我们的研究中。因此,mir - 223 - 5 - p的影响等需要进一步研究。然后,我们预测的下游基因mir - 223 - 5 - p,发现mir - 223 - 5 - p可以通过绑定OTX1调节OTX1的表达。报道,OTX1能促进结直肠癌发展诱导epithelial-mesenchymal过渡( 14]。也发现OTX1增殖的积极功能,胃癌细胞的迁徙和入侵功能( 22]。此外,OTX1可以调节细胞增殖和迁移通过中介ADPGK-AS1乳腺癌。这些发现符合本研究的发现,OTX1促进癌症发展。

之后,通路富集分析采用OTX1并发现OTX1主要富集在JAK / STAT信号通路,与许多癌症的进展密切相关。例如,在结肠直肠癌,击倒TfR1促进癌症恶化通过JAK / STAT通路( 23]。此外,mir - 196 a / -196 b可以促进肝癌进展通过瞄准SOCS2和调节JAK / STAT ( 24]。这些研究表明,木菠萝的磷酸化和统计可以促进癌症恶化。在这项研究中,我们发现overexpressing OTX1可以通过诱导调节癌症恶化相关蛋白质的磷酸化激活JAK / STAT通路。因此,我们发现一个监管轴由mir - 223 - 5 - p / OTX1 / JAK / STAT。验证,mir - 223 - 5 - p可以调解扩散,入侵和迁移LUSC细胞的表达下调OTX1,救援实验。结果表明,OTX1在过度可能减弱的影响调节mir - 223 - 5 - p LUSC细胞的生物功能。

在结论,在目前的研究中发现,mir - 223 - 5 - p在LUSC细胞低表达和增殖的负面作用,入侵,LUSC细胞的迁移能力。下游靶基因OTX1癌症细胞中高度表达,与JAK / STAT信号通路的激活。此外,mir - 223 - 5 - p的影响LUSC细胞的生物功能是通过针对OTX1。这些结果可能为鉴定提供参考和支持新的LUSC靶向治疗。在未来,我们将继续探索机制mir - 223 - 5 - p / OTX1 LUSC 在活的有机体内。

 数据可用性

数据和材料在当前的研究中可从相应的作者以合理的要求。

 伦理批准

本文伦理审批不适用。这篇文章不包含任何与人类或动物研究主题。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 吸附 l Zwaenepoel K。 Deschoolmeester V。 范Schil p . e . Y。 范Meerbeeck J。 肥腊肉片 F。 Rolfo C。 Pauwels P。 循环核酸和血小板游离液体活检提供个性化治疗肺癌患者 肺癌 2017年 107年 One hundred. 107年 10.1016 / j.lungcan.2016.04.026 2 - s2.0 - 84970021896 27180141 徐 F。 凌ydF4y2Ba H。 他 P。 他 l 程ydF4y2Ba J。 凌ydF4y2Ba l 程ydF4y2Ba Y。 ATP53-associated基因签名的预测预后和治疗反应肺鳞状细胞癌 Oncoimmunology 2020年 9 1,1731943条 10.1080 / 2162402 x.2020.1731943 32158625 Socinski m·A。 Obasaju C。 Gandara D。 赫希 f·R。 Bonomi P。 邦 p。 Jr。 金 大肠。 兰格 c·J。 纳塔尔 r B。 ,由 年代。 Paz-Ares l Perol M。 有关系 M。 Ramalingam 美国年代。 雷诺兹 c . H。 腾出空间 d·R。 Wakelee H。 撒切尔夫人 N。 当前和紧急治疗选择先进的鳞状细胞肺癌 胸部肿瘤杂志 2018年 13 2 165年 183年 10.1016 / j.jtho.2017.11.111 2 - s2.0 - 85042408205 29175116 癌症基因组图谱的研究网络 全面的鳞状细胞肺癌基因组特征 自然 2012年 489年 7417年 519年 525年 10.1038 / nature11404 2 - s2.0 - 84866894408 22960745 凉亭 k . C。 rie g . J。 系统性治疗局部晚期和转移性非小细胞肺癌:复习一下 《美国医学会杂志》 2019年 322年 8 764年 774年 10.1001 / jama.2019.11058 2 - s2.0 - 85071285353 31454018 刘 Y。 王 Y。 太阳 X。 梅 C。 王 l 李 Z。 咋 X。 mir - 449的差别——促进肝癌细胞凋亡对这些Calpain 6和POU2F1 Oncotarget 2016年 7 12 13491年 13501年 10.18632 / oncotarget.4821 2 - s2.0 - 84971669531 26375440 田 W。 吴 W。 李 X。 鲁伊 X。 吴 Y。 microrna - 139 - 3 - p抑制增殖,入侵,人类神经胶质瘤细胞的迁移目标MDA-9 / syntenin 生物化学和生物物理研究通信 2019年 508年 1 295年 301年 10.1016 / j.bbrc.2018.11.144 2 - s2.0 - 85058911871 30502089 雪 F。 李 问:R。 徐 y . H。 周 h . B。 微rna - 139 - 3 - p抑制卵巢癌的生长和转移通过抑制ELAVL1 OncoTargets和治疗 2019年 12 8935年 8945年 10.2147 / OTT.S210739 31806990 邹 z . C。 戴 M。 黄 z Y。 陆 Y。 谢 h·P。 李 y F。 李 Y。 棕褐色 Y。 王 f . L。 微rna - 139 - 3 - p抑制肝细胞癌肿瘤的生长和转移的抑制ANXA2R 肿瘤研究 2018年 26 9 1391年 1399年 10.3727 / 096504018 x15178798885361 2 - s2.0 - 85049739878 29422116 谢 l 姚 Z。 张 Y。 李 D。 胡 F。 廖 Y。 周 l 周 Y。 黄 Z。 他 Z。 汉 l 杨 Y。 杨 Z。 深RNA序列揭示了microrna的动态监管,lncRNAs, mrna在骨肉瘤肿瘤发生和肺转移 细胞死亡和疾病 2018年 9 7 772年 10.1038 / s41419 - 018 - 0813 - 5 2 - s2.0 - 85049854358 29991755 德梅洛玛雅 B。 罗德里格斯 i S。 船长 e . M。 苏亚雷斯做阿马拉尔 N。 凌 H。 Monroig P。 苏亚雷斯 f。 Calin g。 罗查 r·M。 mir - 223 - 5 - p是一个oncomiR TP63外阴癌的抑制 Oncotarget 2016年 7 31日 49217年 49231年 10.18632 / oncotarget.10247 2 - s2.0 - 84981313529 27359057 窦 l 汉 K。 肖 M。 Lv F。 mir - 223 - 5 - p抑制肿瘤生长和转移的非小细胞肺癌瞄准E2F8 肿瘤研究 2019年 27 2 261年 268年 10.3727 / 096504018 x15219188894056 2 - s2.0 - 85060789772 29615147 李 H。 苗族 Q。 徐 c·W。 黄 j . H。 周 y F。 吴 m·J。 OTX1有助于肝癌进展ERK / MAPK通路的调控 韩国医学科学杂志》上 2016年 31日 8 1215年 1223年 10.3346 / jkms.2016.31.8.1215 2 - s2.0 - 85047289916 27478331 余 K。 蔡 x Y。 李 Q。 杨 z . B。 熊 W。 盛ydF4y2Ba T。 王 w . Y。 李 y F。 通过epithelial-mesenchymal OTX1促进结直肠癌发展转变 生物化学和生物物理研究通信 2014年 444年 1 1 5 10.1016 / j.bbrc.2013.12.125 2 - s2.0 - 84893862661 24388989 格 B。 冯·曼施坦因 V。 木菠萝Stat信号和癌症:机会、福利和有针对性的抑制的副作用 分子和细胞内分泌学 2017年 451年 1 14 10.1016 / j.mce.2017.05.033 2 - s2.0 - 85020000069 28576744 一个 N。 愣 X。 王 X。 太阳 Y。 程ydF4y2Ba Z。 生存的比较三个肺鳞状细胞癌的组织学亚型:以人群为基础的倾向得分匹配分析 肺癌 2020年 142年 13 19 10.1016 / j.lungcan.2020.01.020 32062199 居 J。 江 J。 Fesler 一个。 microrna:癌症医学的新领域 未来药物化学 2013年 5 9 983年 985年 10.4155 / fmc.13.74 2 - s2.0 - 84878696881 23734680 Weidle 美国H。 Birzele F。 Kollmorgen G。 Nopora 一个。 潜在microRNA-related目标与卵巢癌转移治疗干预 癌症基因组蛋白质组学 2018年 15 1 1 15 10.21873 / cgp.20061 2 - s2.0 - 85040177956 29275359 Aalami a . H。 Pouresmaeil V。 Amirabadi 一个。 Mojahed f . H。 Rad m Q。 Sahebkar 一个。 诊断性能评价血清hsa - mir - 223 - 5 - p的检测胃癌:病例对照研究 在药物化学抗癌药物 2020年 20. 7 800年 808年 10.2174 / 1871520620666200204100602 32013852 Sugawara 年代。 山田 Y。 时候 T。 Okato 一个。 Idichi T。 加藤 M。 Koshizuka K。 市川 T。 塞其 N。 双链的 mir - 223双( mir - 223 - 5 - p和 mir - 223 - 3 - p)抑制癌细胞侵犯:有针对性的基因是参与膀胱癌发病机理 人类遗传学杂志》上 2018年 63年 5 657年 668年 10.1038 / s10038 - 018 - 0437 - 8 2 - s2.0 - 85043701047 29540855 王 H。 王 l 吴 Z。 太阳 R。 金 H。 马 J。 刘 l 凌 R。 易 J。 王 l 扁 J。 程ydF4y2Ba J。 李 N。 元 年代。 云 J。 三个小分子核糖核酸特异表达血清作为胃癌筛查的新颖的生物标志物 医学肿瘤学 2014年 31日 12 298年 10.1007 / s12032 - 014 - 0298 - 8 2 - s2.0 - 84919928594 25367852 秦 s . C。 赵 Z。 盛 j . -。X。 徐 x -。H。 姚 J。 陆 j . -。J。 程ydF4y2Ba B。 赵 g -。D。 王 x -。Y。 杨 y -。D。 Dowregulation OTX1的变弱胃癌细胞增殖,迁移和入侵 肿瘤的报道 2018年 40 1907年 1916年 10.3892 / or.2018.6596 2 - s2.0 - 85051568492 崔 C。 程 X。 杨ydF4y2Ba l 丁 H。 关 X。 张 W。 田 X。 郝 C。 Downregulation TfR1促进发展的结直肠癌通过JAK / STAT通路 癌症管理和研究 2019年 卷11 6323年 6341年 10.2147 / CMAR.S198911 2 - s2.0 - 85070108787 31372038 任 W。 吴 年代。 吴 Y。 刘 T。 赵 X。 李 Y。 微rna - 196 a / -196 b调节通过调节肝细胞癌的进展通过针对SOCS2 JAK / STAT通路 细胞死亡和疾病 2019年 10 5 333年 10.1038 / s41419 - 019 - 1530 - 4 2 - s2.0 - 85064453167 30988277