CDTP 心血管疾病的治疗 1755 - 5922 1755 - 5914 Hindawi 10.1155 / 2020/6758934 6758934 研究文章 长非编码RNA TUG1促进功能ox-LDL-Treated HA-VSMCs通过mir - 141 - 3 - p / ROR2轴 唐 余 1 胡 京 1 https://orcid.org/0000 - 0002 - 3232 - 5649 钟 判断 2 刘 延 1 王 选手 1 余 邯钢 1 心内科 江西省人民医院 330002年 南昌 中国 jxsrmyy.cn 2 心内科 南昌大学第四附属医院 330002年 南昌 中国 ncu.edu.cn 2020年 1 6 2020年 2020年 30. 12 2019年 27 02 2020年 1 6 2020年 2020年 版权©2020余汤等。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。动脉粥样硬化(AS)是一种常见的严重疾病。合并报纸报道,长非编码rna (lncRNAs)参加了多元化的病理过程,尽管机制仍然未知。本研究旨在揭示的形象lncRNA taurine-upregulated基因1 (TUG1),生物功能,和潜在的发展机制 在体外。 方法。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是用于模型建设 在体外。水平lncRNA TUG1, mir - 141 - 3 - p,和受体酪氨酸kinase-like孤儿受体2 (ROR2)检测到定量实时聚合酶链反应(存在)的组织或ox-LDL-treated血管平滑肌细胞(HA-VSMCs)。摘要影响检查3 - (4 5-dimethyl-2-thiazolyl) 2, 5-diphenyl-2-H-tetrazolium溴化(MTT)和transwell化验。扩散的蛋白质的表达(CyclinD1、ki - 67)和转移相关蛋白( β连环蛋白、波形蛋白)和ROR2细胞被免疫印迹分析确定。潜在的结合位点被母星软件在线预测,证实了dual-luciferase记者分析。 结果。TUG1的表达和ROR2被提升为组织和ox-LDL-treated HA-VSMCs。而低mir - 141 - 3 - p的表达与TUG1负相关或ROR2组织。沉默TUG1抑制增殖、迁移、入侵和转移ox-LDL-treated HA-VSMCs。此外,假定的结合位点之间mir - 141 - 3 - p和TUG1或ROR2被母星软件在线预测。同时,mir - 141 - 3 - p删除细胞逆转TUG1击倒的积极作用。的差别之外,对这些mir - 141 - 3 - p扰乱了摘要的结果ROR2沉默。 结论。TUG1增强的发展 在体外通过调节mir - 141 - 3 - p / ROR2轴。

 中国国家自然科学基金 81760053 1。介绍

动脉粥样硬化(AS),一个常见的慢性多因子的血管疾病,是心血管疾病(CVD)的主要类( 1, 2]。心血管疾病被认为是一种严重的疾病与高死亡率和发病率在全球范围内,伴随着各种各样的风险因素,如内皮损伤,内皮细胞凋亡,巨噬细胞招聘、积累的血管平滑肌细胞(VSMCs)和促炎细胞因子生成( 3]。病态的发展从VSMC增殖和炎症反应可以促进动脉粥样硬化和动脉再狭窄 4]。氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)被认为是发展的一个重要因素,通过促进内皮功能障碍和加速增长和迁移VSMCs [ 5]。

长非编码rna (lncRNAs)是一类长rna的长度超过200个核苷酸(nt),没有翻译能力和影响基因表达在转录阶段( 6]。证据表明lncRNAs作为功能性监管机构在肿瘤发生[ 7,神经学 8),心血管系统( 9),和其他疾病的发展 10]。

最近,越来越多的证据表明,针对lncRNA taurine-upregulated基因1 (lncRNA TUG1)可以作为一种新的辅助治疗策略( 11]。李等人表明TUG1表达增加的患者血清标本38,相比之下,24个健康的参与者( 12]。同时,TUG1促进细胞生长的异常表达和炎症因子分泌和抑制ox-LDL-stimulated巨噬细胞的凋亡和VSMCs [ 11]。机械,增加扩散和迁移变化主要转染诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs) TUG1超表达可以通过抑制Wnt通路( 13]。然而,小信息调查TUG1和潜在的作用机制的发展。

LncRNA-miRNA-gene监管网络引起了极大关注血管病理生理学( 14]。据报道,mir - 141可能发挥重要作用在ox-LDL-induced异常VSMC的增殖。例如,过度的爸爸受损mir - 141诱导增殖的抑制VSMCs [ 15]。同时,microrna - 141还发现激活Wnt信号通路在食道癌 16)和间充质干细胞( 17]。然而,很少有研究报道在心血管领域。具体Wnt /受体/ coreceptor组合尤为重要的决定产生的下游信号的影响。ROR2由Wnt5a关键信号通路的激活。Wnt5a ROR2明显表达了在先进的动脉粥样硬化病变和巨噬细胞/斑块内泡沫细胞( 18]。

在这项研究中,我们探索TUG1表达模式的组织或ox-LDL-treated HA-VSMCs和摘要影响扩散、迁移,入侵和转移ox-LDL-treated HA-VSMCs。此外,TUG1参与的分子机制在HA-VSMCs进一步调查。

 2。材料和方法 2.1。临床样本

实验经江西省人民医院伦理委员会和执行根据赫尔辛基宣言的原则。组织样本为例( n = 30. )和健康志愿者( n = 30. )收集来自江西省人民医院。所有样品都保存在-80°C存储。知情同意是由所有参与者提供。

 2.2。细胞培养、管理和转染

人血管平滑肌细胞(HA-VSMC)获得美国类型文化集合(写明ATCC马纳萨斯,弗吉尼亚州,美国),有1%的青霉素和链霉素(Beyotime生物科技公司、上海、中国),培养如前所述[ 19]。ox-LDL(生物合成生物技术公司,北京)是用于模型建设 在体外。具体而言,这些细胞被培养在中存在的不同剂量的ox-LDL (0 μg / mL, 25岁 μ50 g / mL, μ克/毫升和75 μ24 h和g / mL)生长在中包含ox-LDL在最后50浓度 μg / mL 24 h ( 11]。短发卡RNA(成分)针对TUG1 (sh-TUG1) shRNA针对ROR2 (sh-ROR2) TUG1超表达质粒(TUG1), mir - 141 - 3 - p抑制剂(anti - mir - 141 - 3 - p), mir - 141 - 3 - p模仿(mir - 141 - 3 - p)和控制(sh-NC, pcDNA、anti-miR-NC miR-NC)是获得GenePharma(上海,中国)。3000 Lipofectamine(美国表达载体,卡尔斯巴德,CA)工具包用于转染根据制造商的指示。所示的序列如下:sh-TUG1,序列,5 ′ -GACTACCTTCCCTGTGCTATT-3 ′ ;sh-ROR2序列5 ′ -GCCCGATTCCAACTCTGAAAG-3 ′ 。

 2.3。RNA分离和定量实时聚合酶链反应(存在)

从组织和细胞总RNA提取使用试剂盒试剂(热费希尔科学、沃尔瑟姆,妈,美国)并使用一体化reverse-transcribed™microrna PrimeScript™RT试剂盒(豆类、志贺、日本)和PrimeScript RT试剂盒(豆类)。存在了7500年快速实时PCR系统(热费希尔科学)中存在检测设备(位于马里兰州Rockville GeneCopoeia, Inc .)、美国)和SYBR混合(豆类)。U6或glyceraldehyde-3-phosphate脱氢酶(GAPDH)作为内部参考基因。的相对表达水平TUG1, mir - 141 - 3 - p, ROR2 2计算- - - - - - ΔΔCt方法。引物的序列mir - 141 - 3 - p和U6设计并获得Sangon生物技术(上海,中国),和TUG1的引物序列,mir - 141 - 3 - p, ROR2, U6,和GAPDH用于存在反应是:列出TUG1 (5 ′ -GCUUGGCUUCUAUUCUGAAUCCUUU-3 ′ )、反向(5 ′ -AAAGGAUUCAGAAUAGAAGCCAAGC-3 ′ );mir - 141 - 3 - p (5 ′ -AAGACGTACTCAGGCCATGTCC-3 ′ )、反向(5 ′ -GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3 ′ );ROR2向前(5 ′ -CTTGATGGCATTGTCGCTAA-3 ′ )、反向(5 ′ -TCCAGTGGCTGTGCTAGATG-3 ′ );U6向前(5 ′ -GCTTCGGCAGCACATATACTAAAAT-3 ′ )、反向(5 ′ -CGCTTCACGAATTTGCGTGTCAT-3 ′ );和GAPDH (5 ′ -GACTCATGACCACAGTCCATGC-3 ′ )、反向(5 ′ -AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3 ′ )。

 2.4。(3)- 4 5-Dimethyl-2-thiazolyl 2, 5-diphenyl-2-H-tetrazolium溴化(MTT)

MTT试剂(英杰公司)被添加到每个96孔板,和细胞( 5 × 10 3 /)维持24小时、48 h,和72 h和孵化为另一个4 h。在那之后,细胞上清液被丢弃,200 μL (DMSO (Solarbio,北京)添加到溶解细胞内甲瓒晶体在每个好( 19]。细胞增殖测定使用标在490海里(热费希尔科学)。

 2.5。免疫印迹

里帕缓冲区(Solarbio)是用来隔离总蛋白质从细胞,然后,蛋白质被NanoDrop量化3000(热费希尔科学)。钠十二烷基sulfate-polyacrylamide凝胶电泳(sds - page)用于分离蛋白质,然后,蛋白质被转移到聚偏二氟乙烯(PVDF)膜。之后,膜被封锁在脱脂牛奶2 h 37°C之后,一夜之间孵化主要抗体在4°C。2 h后孵化与二级抗体:山羊Anti-Rabbit免疫球蛋白g h和l(合)(1:1000;ab205718 Abcam,剑桥,英国),化学发光是由使用ECL检测设备(Beyotime、上海、中国)。主要的抗体如下:anti-ROR2 (1: 1000;ab245456 Abcam) anti-CyclinD1 (1: 1000;ab226977 Abcam),反- ki - 67 (1): 1000;ab92742 Abcam),反 β连环蛋白(1:1000;ab2365 Abcam) anti-Vimentin (1: 1000;ab137321 Abcam)和anti-GAPDH (1: 5000;ab37168 Abcam)。

 2.6。Transwell化验

细胞迁移的速度被transwell调查室(美国纽约康宁生命科学,康宁)没有人工基底膜矩阵,而入侵进行了实验与基底膜基质transwell室预镀矩阵(康宁)。众议院增加了rpmi - 1640中10%的边后卫,而转染ox-LDL-stimulated HA-VSMCs注入上有100人 μL无血清培养基,整个步骤根据制造商的说明进行。最后,多聚甲醛(PFA;σ,圣路易斯,密苏里州,美国)被用来连接细胞位于参议院的下表面。细胞在显微镜下进行分析之前用结晶紫染色。

 2.7。Dual-Luciferase化验

假定的结合位点的mir - 141 - 3 - p和TUG1或ROR2被母星软件在线预测。放大野生型和突变体的碎片TUG1和ROR2 3 ′ UTR插入pMIR-REPORT荧光素酶向量(OBio生物学、上海、中国)构建荧光素酶记者,即WT-TUG1, MUT-TUG1 WT-ROR2, MUT-ROR2。荧光素酶的cotransfection记者和mir - 141 - 3 - p或者miR-NC规定执行( 19]。荧光素酶活性进行了测试使用Dual-Lucy分析工具包(WI Promega,麦迪逊,美国)。

 2.8。统计分析

所有的数据都表示为 的意思是 ± 标准 偏差 SD 和分析SPSS 17.0软件。比较分析了不同群体之间使用成对的学生的 t 以及和单向方差分析(方差分析)。一个 P 值小于0.05被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。TUG1的表达和mir - 141 - 3 - p在患者的组织和ox-LDL-Treated HA-VSMCs

首先,我们调查了TUG1水平,患者的组织( n = 30. )和健康人群( n = 30. )。TUG1作为组织和正常的表达是如图 1(一);可见促销在TUG1表达式被组织的病人。与此同时,我们还探讨了mir - 141 - 3 - p水平的组织。有趣的是,逆转趋势可以观察到组织,而TUG1(图 1 (b))。此外,我们的数据表明,之间存在着负相关TUG1 mir - 141 - 3 - p组织(图 1 (c))。随后,我们使用了一个剂量的增加ox-LDL诱导HA-VSMCs模型建设 在体外和50 μ为进一步的实验(克/毫升ox-LDL 11]。如数据所示 1 (d)和 1 (e),增加ox-LDL浓度与TUG1的表达和mir - 141 - 3 - p。具体而言,TUG1增强执行(图的水平 1 (d))而减少的表达mir - 141 - 3 - p(图 1 (e))作为ox-LDL浓度增大。

TUG1的表达和mir - 141 - 3 - p在患者的组织和ox-LDL-treated HA-VSMCs。(a)中存在被用来检测的表达lncRNA TUG1组织从30患者动脉粥样硬化,而与30名健康志愿者。(b)的表达mir - 141 - 3 - p在组织中存在分析探测到。(c)之间的相关分析表达式TUG1和mir - 141 - 3 - p。(d, e) HA-VSMCs孵化了ox-LDL在不同浓度(0 μg / mL, 25岁 μ50 g / mL, μ克/毫升和75 μ24 h g / mL),其次是存在化验的TUG1 (d)和mir - 141 - 3 - p (e)表达式。 ∗ P < 0.05 。

 3.2。击倒的TUG1抑制增殖,迁移,入侵和转移相关蛋白的表达ox-LDL-Stimulated HA-VSMCs体外<斜体> < /斜体>

在ox-LDL-stimulated HA-VSMCs,高细胞活力,加速迁移和入侵的能力,调节metastasis-related蛋白质含量被认为是模仿与早期研究[ 11]。进一步调查摘要TUG1对ox-LDL-treated HA-VSMCs,我们撞倒TUG1表达式使用合成成分。后来,TUG1的表达水平下调细胞转染后sh-TUG1(图 2(一个))。loss-functional实验进行时,细胞活性显著降低了决心使用MTT试验(图 2 (b))。然后,利用免疫印迹检测扩散的蛋白质的表达(CyclinD1和ki - 67),以上的差别,结果表明,对这些TUG1这些蛋白质水平显著降低(图 2 (c))。通过使用transwell化验,迁移和入侵的能力显然是TUG1击倒后(数据有限 2 (d)和 2 (e))。此外,免疫印迹结果表现出的差别,对这些基因的表达 β连环蛋白和波形蛋白在ox-LDL + sh-TUG1-treated细胞与细胞治疗ox-LDL + sh-NC(图 2 (f))。这些结果表明,TUG1击倒扩散的能力,减少迁移和入侵,以及抑制转移相关蛋白的表达, β连环蛋白和波形蛋白ox-LDL-treated HA-VSMCs。

击倒的TUG1抑制增殖,迁移,入侵和转移相关蛋白的表达ox-LDL-stimulated HA-VSMCs 在体外。转染了HA-VSMCs sh-NC或sh-TUG1。(一)识别中存在击倒TUG1的效率进行了分析。(b)细胞生存能力在决定时间(24小时、48小时和72小时)进行了分析通过MTT测定ox-LDL-stimulated HA-VSMCs。(c)的水平扩散蛋白质ki - 67和CyclinD1经免疫印迹。(d, e)细胞迁移和入侵被transwell试验评估。(f)的免疫印迹试验用于检测转移相关蛋白的表达, β连环蛋白和波形蛋白 ∗ P < 0.05 。

 3.3。TUG1直接mir - 141 - 3 - p的目标

接下来,我们预测TUG1之间的关系和mir - 141 - 3 - p母星,和结果表明,mir - 141 - 3 - p与TUG1包含互补序列(图 3(一个))。然后,dual-luciferase记者向量(TUG1-WT或TUG1-MUT)是由cotransfected mir - 141 - 3 - p或miR-NC ox-LDL-treated HA-VSMCs。Dual-luciferase记者化验表明,mir - 141 - 3 - p TUG1-WT记者向量的荧光素酶活性降低,但不是TUG1-MUT记者向量(图 3 (b))。损失——和gain-functional实验证实了存在,细胞见证了一种改进的表达后TUG1 TUG1过度治疗或有限的表达TUG1 TUG1击倒后管理(图 3 (c))。此外,在ox-LDL-treated HA-VSMCs, mir - 141 - 3 - p的表达水平显著调节TUG1击倒,而mir - 141 - 3 - p水平大大降低由于过度拖船(图 3 (d))。除此之外,我们也评估mir - 141 - 3的表达模式- p细胞后沉默的性格在TUG1和mir - 141 - 3 - p;数据代表,mir - 141水平3 - p组中降低,即sh-TUG1 +反mir - 141 - 3 - p,相比之下,其相应的控制(图 3 (e))。另外,我们观察到的摘要变化sh-TUG1和反- mir - 141 - 3 - p转染到ox-LDL-treated HA-VSMCs。的数据展示,击倒mir - 141 - 3 - p倒沉默的结果TUG1在细胞增殖(图的能力 3 (f)迁移(图) 3 (h)),入侵(图 3(我))和蛋白表达水平(CyclinD1、ki - 67(图 3 (g)), β连环蛋白和波形蛋白(图 3 (j)))。同时,低的监管mir - 141 - 3 - p也逆转。差别TUG1对这些有限的影响综上所述,我们认为mir - 141 - 3 - p是TUG1的microrna的目标。此外,删除mir - 141 - 3 - p。差别TUG1恢复结果对这些

TUG1直接mir - 141 - 3 - p的目标。(一)假定的结合位点mir - 141 - 3 - p和TUG1被母星预测。(b)预测的网站被dual-luciferase记者分析。的ox-LDL-stimulated HA-VSMCs与pcDNA-TUG1转染或消极的控制。(c, d)中存在是用来检测水平TUG1 (c)或mir - 141 - 3 - p在每组(d)。(f j) ox-LDL-administrated HA-VSMCs转染了sh-TUG1 +反- mir - 141 - 3 - p或sh-TUG1 + anti-miR-NC进行进一步的实验。(f) MTT试验进行评估细胞的可行性。(g)的蛋白质含量proliferation-associated ki - 67和CyclinD1经免疫印迹。我(h),细胞迁移和侵袭性能力被transwell试验评估。(j)转移相关蛋白的表达, β连环蛋白和波形蛋白免疫印迹试验检测。 ∗ P < 0.05 。

 3.4。ROR2的目标基因mir - 141 - 3 - p

母星的预测表明,ROR2是一个潜在的目标mir - 141 - 3 p(图 4(一))。然后,cotransfecting mir - 141 - 3 - p或miR-NC ROR2-WT或ROR2-MUT ox-LDL-treated HA-VSMCs。荧光素酶报告实验显示,过度的mir - 141 - 3 - p ROR2-WT的荧光素酶活性降低,但不与ROR2-MUT(图 4 (b))。loss-or-gain实验的目的是通过转染shRNA或过表达质粒分别针对mir - 141 - 3 - p(图 4 (c))。mir - 141 - 3 - p的表达抑制近两个反mir - 141 - 3 - p组,anti-miR-NC组相比,mir - 141 - 3 - p表达式mir - 141 - 3 - p组呈现在高达四倍miR-NC组。此外,反- mir - 141 - 3 - p处理显著增加ROR2表达式,而过度mir - 141 - 3 - p可能显著减少ROR2表达式(图 4 (d))。此外,我们也证实了表达模式在组织和细胞中的表达水平的ROR2 ox-LDL接触不同剂量(处理数据 4 (e)和 4 (f));数据显示ROR2表达式被调节为组织信使rna(图 4 (e)(图)和蛋白质 4 (f))水平和负相关和mir - 141 - 3 - p组织(图 4 (g))。相反,ROR2表情似乎提高了,包括在mRNA(图 4 (h)(图)和蛋白质 4(我)在细胞水平,与ox-LDL剂量的增加呈正相关。

ROR2的目标基因mir - 141 - 3 - p。(一)ROR2预测的母星作为一个潜在的目标mir - 141 - 3 - p。(b)荧光素酶记者进行了试验验证之间的交互mir - 141 - 3 - p和ROR2。(c)的表达mir - 141 - 3 - p得失后实验以ox-LDL-administrated HA-VSMCs使用中存在。(d)的表达ROR2转染后反mir - 141 - 3 - p或者mir - 141 - 3 - p用免疫印迹检测。 ∗ P < 0.05 。(e, f)的相对表达式分析了ROR2存在(e)和免疫印迹(f)患者和健康组织的参与者。(g)之间的交互的表达ROR2和mir - 141 - 3 - p被存在化验。(h i) ROR2在mRNA的表达(h)和蛋白质(我)HA-VSMCs对待ox-LDL增加剂量(0 μg / mL, 25岁 μ50 g / mL, μ克/毫升和75 μ24 h g / mL)进行了测试。 ∗ P < 0.05 。

 3.5。击倒mir - 141 - 3 - p倒ROR2删除功能的影响在ox-LDL-Stimulated HA-VSMCs体外<斜体> < /斜体>

为了更好地探索之间的功能关系mir - 141 - 3 p和ROR2 sh-ROR2和反- mir - 141 - 3 - p cotransfected进ox-LDL-treated HA-VSMCs作为实验组。首先,低mir - 141 - 3 - p的表达中存在和免疫印迹分析证实了sh-ROR2组(数字 5(一个)和 5 (b))。此后,细胞生存能力有限sh-ROR2 + anti-miR-NC后显著增加删除mir - 141 - 3 - p治疗细胞(图 5 (c))。然后,免疫印迹分析表明,CyclinD1和ki - 67的表达显著恢复细胞cotransfected sh-ROR2和anti-miR-NC(图 5 (d))。与此同时,mir - 141 - 3 - p沉默也促进了迁移和入侵能力从ROR2删除(数字 5 (e)和 5 (f))。更重要的是,mir - 141 - 3 - p击倒促进了低转移相关蛋白的表达( β或从差别连环蛋白和波形蛋白)对这些基因沉默的TUG1 ox-LDL-treated HA-VSMCs(图 5 (g))。这些结果表明,减少mir - 141 - 3的表达- p倒sh-ROR2的摘要介绍影响生产和推广metastasis-related蛋白的表达在ox-LDL-treated HA-VSMCs 在体外。

击倒mir - 141 - 3 - p倒ROR2删除功能的影响在ox-LDL-stimulated HA-VSMCs 在体外。sh-NC、sh-ROR2 sh-ROR2 + anti-miR-NC, sh-ROR2 +反- mir - 141 - 3 - p被转染进ox-LDL-stimulated HA-VSMCs,另行规定。(a, b)的可拆卸的效率ROR2证实了存在(a)和免疫印迹试验(b)。(c)细胞的可行性进行了分析通过MTT测定在规定时间(24小时、48小时和72小时)在ox-LDL-stimulated HA-VSMCs。(d)免疫印迹是用来证实CyclinD1和ki - 67细胞的水平。(e, f)迁移和入侵被transwell试验评估。(g)的水平metastasis-related蛋白( β用免疫印迹连环蛋白和波形蛋白)进行了评估。 ∗ P < 0.05 。

 3.6。TUG1监管ROR2表达式通过骗取mir - 141 - 3 - p <斜体>体外< /斜体>

sh-NC、sh-TUG1 sh-TUG1 + anti-miR-NC, sh-TUG1 +反- mir - 141 - 3 - p转染到细胞,分别。我们检查表达式ROR2 ox-LDL-treated HA-VSMCs存在和免疫印迹分析。数据显示的水平ROR2后显著增加细胞转染sh-TUG1和反- mir - 141 - 3 - p,而细胞转染和sh-TUG1 anti-miR-NC(数字 6(一)和 6 (b))。结果表明,TUG1介导ROR2表达式通过调节mir - 141 - 3 - p ox-LDL-treated HA-VSMCs。

TUG1监管ROR2表达式通过骗取mir - 141 - 3 - p 在体外。mir - 141 - 3 - p的表达和TUG1撞倒在ox-LDL-induced HA-VSMCs。(a)中存在被用来确认的ROR2水平击倒mir - 141 - 3 - p和TUG1 ox-LDL-induced HA-VSMCs。(b)免疫印迹时用来证实ROR2水平沉默mir - 141 - 3 - p和TUG1 ox-LDL-induced HA-VSMCs。 ∗ P < 0.05 。

 4所示。讨论

LncRNAs参与已报告的进展( 20., 21]。在最近的三年里,一些小说lncRNAs异常表达式被定义在[ 22- - - - - - 24]。姚等人报道,00113年lncRNA表达显著调节的血清样本,与健康对照组相比( 25]。赵等人发现,沉默的lncRNA NONMMUT002434表达式可以废除的迁移和扩散VSMCs [ 26]。然而,lncRNAs作为进展的分子机制尚未完全阐明。

TUG1一直在最初观察到小鼠视网膜细胞发展( 27]。随后,TUG1普遍研究在多种癌症,如骨肉瘤( 28),膀胱癌( 29日非小细胞肺癌),( 30.),结肠直肠癌( 31日),食管鳞状细胞癌( 32]。一些研究表明,TUG1参与心脏疾病(不良反应的过程 33]。张等人报道,异位表达TUG1导致细胞生长,引发炎症因子表达,抑制细胞凋亡在ox-LDL-administrated RAW264.7 MOVAS细胞( 11]。先前的研究证明,upregulation TUG1抹去扭转效应的tanshinol ox-LDL-induced内皮细胞凋亡( 34]。此外,一些证据表明,TUG1超表达显著促进增殖,迁移,和HUVECs以及细胞周期调节蛋白的表达 β连环蛋白和原癌基因 13]。此外,先前的研究表明,mir - 141 - 3 - p属于mir - 200家庭,由五种microrna和分为两个集群在一条染色体 35]。有趣的是,一项研究发现,ox-LDL可以抑制mir - 141的表达,mir - 141的差别,对这些增加的扩散VSMCs [ 15]。

我们的数据也表明,高表达的TUG1作为组织和ox-LDL-treated HA-VSMCs,这是符合报告文献[ 12]。MTT试验表明,细胞的生存能力被显著地抑制TUG1击倒。transwell试验证明,sh-TUG1抑制了迁徙和侵入性能力比消极的控制 在体外。与此同时,相同的结果还可以看到在内皮细胞( 13]。此外,减少TUG1有限扩散或转移相关蛋白的表达水平。dual-luciferase记者试验还证实mir - 141 - 3 - p TUG1的潜在目标。同时,功能化验显示,mir - 141 - 3 - p击倒逆转监管效果从TUG1沉默细胞。以上这些结果表明TUG1可能在扩散起着关键作用,迁移,入侵,进展和转移 在体外通过针对mir - 141 - 3 - p。

ROR2,酪氨酸激酶受体家族的一员,作为受体Wnt5a [ 36]。Wnt5a / ROR2主要信号通路激活的经典之中Wnt通路独立 β连环蛋白,从而调节细胞增殖和运动 37, 38]。崔等人的一项研究报道,促进lncRNA 430945在加速增殖和迁移的biofunction VSMCs通过激活ROR2 / rhoa信号通路。

在我们的研究中,我们发现,ROR2被调节为组织和ox-LDL-treated HA-VSMCs;类似的结果在ROR2作为记录在前面研究[ 39]。有趣的是,这也是一个潜在的目标,mir - 141 - 3 - p dual-luciferase记者证实了试验。免疫印迹显示减少的表达ROR2可以看到在ox-LDL-treated HA-VSMCs转染mir - 141 - 3 - p,而相反的结果后可以观察到mir - 141 - 3 - p击倒。生物功能由ROR2沉默可以倒。差别mir - 141 - 3 - p对这些与此同时,生物标志物蛋白的低表达在扩散和转移可以恢复。更重要的是,ROR2蛋白质表达调节ox-LDL-treated HA-VSMCs沉默对待TUG1和mir - 141 - 3 - p相比,TUG1完全击倒 在体外。也就是说,TUG1可以作为海绵mir - 141 - 3 - p增加ROR2表达ox-LDL-treated HA-VSMCs。

这项研究有一些局限性;首先,mir - 141 - 3 - p之间的交互和TUG1 ROR2最初dual-luciferase记者分析,检测到的,它应经免疫沉淀反应或RNA RNA下拉。除此之外,使用商业细胞系获得的结果和结论不能完全代表了实际情况 在活的有机体内。因此,作为模型进行进一步的动物实验。

 5。结论

,总之,我们的研究发现,TUG1致癌基因,促进细胞增殖,迁移,入侵和转移通过瞄准mir - 141 - 3 - p进展 在体外。此外,本文还揭示了一种新型轴mir - 141 - 3 - p / ROR2,为治疗提供一种新的治疗方法。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

 附加分

突出了。(1)TUG1升高是组织和ox-LDL-treated HA-VSMCs。(2)TUG1沉默抑制队伍 在体外。(3)TUG1调节ROR2表达式骗取mir - 141 - 3 - p。(4)TUG1加速发展通过mir - 141 - 3 - p / ROR2轴 在体外。

 的利益冲突

作者宣称没有利益上的冲突。

 作者的贡献

于唐手稿进行了统计学分析和准备。京胡锦涛和判断中负责数据收集。于唐宋选手王设计研究和修订后的手稿出版方面也是如此。所有作者阅读和批准最后的手稿。

 确认

这项工作被批准由中国国家自然科学基金:“分子机制mir - 497 - 5 - p的旁分泌作用于骨髓间充质干细胞通过Wnt - β/连环蛋白信号通路和参与修复心肌梗死”(81760053)。

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