展望 生物化学研究国际 2090 - 2255 2090 - 2247 Hindawi出版公司 10.1155 / 2015/294659 294659年 研究文章 总酚含量和抗氧化活性的不同类型的巧克力,牛奶,半甜的,黑暗,大豆,在大脑皮层、海马和小脑Wistar鼠 da Silva Medeiros Niara 1 Koslowsky马德尔 罗伯塔 1 法瑞斯Wohlenberg 珀尔 1 丰沙尔 克劳迪亚 1 达尼 卡洛琳 1 Daleke 大卫·L。 生物化学系 研究中心 先涛公司大学Metodista音标 90420 - 060阿雷格里港 RS 巴西 metodistadosul.edu.br 2015年 16 11 2015年 2015年 23 07年 2015年 30. 09年 2015年 26 10 2015年 16 11 2015年 2015年 版权©2015 Niara da Silva Medeiros et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

巧克力是全球产品消费,它代表了一个重要的酚类化合物。在这项研究中,总酚含量和抗氧化活性在大脑皮层、海马、小脑的雄性Wistar鼠当使用不同类型的巧克力,包括牛奶,半甜的,黑暗,大豆,是评估。总多酚浓度和体外抗氧化活性的方法DPPH自由基清除在巧克力样品测试进行评估。脂质过氧化(TBARS)、蛋白质氧化(羰基),含巯基的团体,在大脑皮层SOD酶的活性,老鼠的海马和小脑治疗与否与过氧化氢和/或巧克力也被评估。黑巧克力证明酚含量和抗氧化活性较高,其次是半甜的,大豆,牛奶巧克力。的巧克力老鼠的饮食减少脂质过氧化反应和蛋白质氧化引起的过氧化氢。巯基测定,我们观察到的非酶的防御水平只会增加巧克力治疗组织的SOD酶活性是调制治疗巧克力。我们观察到样品的巧克力一个重要的多酚含量和一个重要的抗氧化活性;然而,进一步的研究有不同的巧克力和其他组织等需要进一步的发现。

1。介绍

巧克力可可浆的固体分散,特征是糖、添加剂、可可油、卵磷脂、类黄酮;之间可能存在变异类型;例如,在牛奶巧克力、脂肪、蛋白牛奶,乳糖被添加到配方( 1]。可可应该出现在所有类型的巧克力的配方的比例至少25%。可可著称的丰富的至少三种类型的类黄酮:原花青素,儿茶素,表儿茶素,即使巧克力制造和处理可能会导致损失高达80%的来自可可豆类黄酮( 2, 3]。可可酒的数量用于制造巧克力是直接关系到最终的多酚类物质存在。另一个特点,是由于酒的配方是它的苦味;出于这个原因,含有较高含量的可可酒叫做苦巧克力( 4, 5]。

考虑消费者的关注增加一个更健康的生活方式,食物具有抗氧化特性被广泛研究,因为他们展示一个重要的角色在对抗氧化应激( 6]。在体内氧化应激发生时氧化剂分子之间的不平衡,包括活性氧(ROS)和抗氧化剂,从而生成细胞损伤( 7]。化合物具有抗氧化特性的生化大消费的饮食,我们强调多酚类物质,包括黄酮类化合物存在于许多水果,如葡萄、柑橘类水果和蔬菜,如菠菜和西兰花也大量存在于可可豆和,因此,巧克力( 8, 9]。

临床研究表明,类黄酮可可可能有益在预防心血管疾病通过其影响在降低血压、改善内皮功能、增加一氧化氮,减少血小板聚集和血脂,降低胰岛素抵抗[ 9, 10]。抗诱变剂的和肿瘤细胞的抗增殖作用也连接到巧克力中的类黄酮抗氧化活性的( 11- - - - - - 13]。此外,巧克力通常是消耗在情绪压力,因为它对情绪诱发积极作用[ 14]。

目前在巴西市场,有几种类型的巧克力,根据数量来划分可可酒,黑巧克力是数量最大的一个( 1]。大豆巧克力,而不是牛奶,大豆的成分和它的味道像半甜的巧克力。在这种,可可酒可以不同 1]。然而,这项研究之前没有研究的体外抗氧化活性比较市场上不同类型的巧克力礼物:牛奶、黑暗、半甜的,和大豆巧克力。在这种背景下,本研究旨在建立领先品牌巧克力的比较在一些传统上在巴西市场销售和评价这些巧克力的一些参数的保护作用氧化应激在大脑皮层,Wistar鼠的海马和小脑。

2。材料和方法 2.1。获得样品

在这项研究中,四个不同的样品中可用的巧克力市场,计价MC(牛奶巧克力),直流(黑巧克力),SMC(半甜的巧克力),和SC(大豆巧克力)。黑暗和半甜的巧克力包含包装信息的可可百分比组成,分别是67%和43%。

2.2。样品制备

样本准备根据文森描述的技术et al。 15由Pimentel)和修改等。 16]。100毫克巧克力整除与己烷提取脱脂通过多个。样本在孵化35°C过夜然后50毫克的混合解决方案由50毫升盐酸(HCl) 1.2的50%含水甲醇。最后的解决方案是在水浴加热在90°C与搅拌2小时每30分钟,过滤提取获得。

2.3。总多酚的测定

文森的提取技术获得的et al。 15)被用于1000年总多酚的分析使用 μL Folin-Ciocalteu试剂,用蒸馏水稀释(1:9),这是添加到100毫升的巧克力提取或蒸馏水,用于控制。样品在室温下了颜色发展了20分钟。作为标准,儿茶素溶液(0.2毫克/毫升的甲醇)是利用紫外可见分光光度计和阅读,750海里。

2.4。清除活动1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl自由基(DPPH)

巧克力的抗氧化活性是评价DPPH自由基清除测试,在200年 μL 800年样本混合 μL Tris-HCl 100毫米溶液pH值7.0。1000年 μL DPPH ethanolic解决方案的混合了250毫米,管保持20分钟免受光;吸光度测量,在紫外可见分光光度计,517海里。Trolox作为积极的控制。水被用来作为消极的控制。DPPH抑制的百分比计算使用以下公式:清除能力(%)= 100−[(−样品吸光度样品空白的吸光度)×100 /(控制)的吸光度−(控制空白的吸光度)]。的集成电路50值计算的图表绘制抑制百分比浓度。IC 50%,这意味着50%的DPPH自由基,是被扫描所需的样本数量。

2.5。组织准备

10 Wistar鼠,10天,被用于这项研究。获得的动物是动物设施的Centro大学Metodista IPA(巴西南部)。进行了化验所描述的Leipnitz et al。 17]。动物没有麻醉被斩首安乐死和大脑很快就被提取。大脑皮层、海马和小脑立即解剖和均质在氯化钾(氯化钾)1.5%,维持细胞的完整性。本研究动物伦理委员会批准的使用(CEUA) Centro Metodista音标大学协议号码004/2011。

2.6。体外试验:治疗和抗氧化活性评价

为进一步分析,720年 μL的匀浆处理提取得到的巧克力(90 μL)。在孵化后30分钟37°C, H2O2(90 μL)被添加到混合样本,然后再次孵化30分钟在水浴37°C。孵化后脂质过氧化水平(TBARS)、蛋白质氧化(羰基),总巯基组(SH组)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。脂质过氧化是进行硫代巴比土酸活性物种的形成(TBARS)在acid-heating反应[ 18]。测定蛋白质的氧化损伤测量的羰基化合物的反应dinitrophenylhydrazine [ 19]。

抗氧化活性是由总巯基水平组和抗氧化活性的酶SOD。总巯基组测定的分析是基于减少5 5-dithiobis (2-nitrobenzoic酸)(DTNB)生成一个黄色的导数,其吸光度测量在412海里(分光光度计 20.]。SOD的抗氧化能力是决定使用分光光度计测量adenocromo催化的抑制480海里(uv - 1700分光光度计模型,日本岛津公司,京都,日本)( 21]。

2.7。统计分析

数据进行方差分析(方差分析)其次是图基的测试后,显著性水平为0.05。变量之间的关系是决定使用皮尔逊相关性。所有的分析使用统计程序进行社会科学统计软件包(SPSS) 17.0版(国际商业机器公司,纽约,纽约,美国)。

3所示。结果

识别的新来源酚类化合物对公众健康的饮食是极大的兴趣由于其抗氧化活性的潜力。众所周知,巧克力是这些化合物的主要来源;然而,并不是所有类型的巧克力是相等的多酚类物质的来源。在我们的研究中,不同类型的巧克力测试显示显著差异( p < 0.05 ):黑巧克力(可可60%)最富有的在这个参数,其次是半甜的巧克力(可可43%)(表 1)。

总多酚和DPPH自由基清除活性的不同类型的巧克力。

样品 总多酚 DPPH集成电路50
( μ摩尔儿茶素/ g) ( μg / mL)
牛奶巧克力 28.44±1.68 一个 49.18±2.47 一个
大豆巧克力 35.18±0.53 一个 23.69±1.50 b
半甜的巧克力 45.67±2.95 b 32.60±2.07 b
黑巧克力 106.81±3.28 c 10.43±1.39 c
Trolox 9.71±2.13 c

集成电路50=浓度,抑制50%的DPPH自由基的初始浓度。

不同的字母显示统计差异( p < 0.05 )。

巧克力的抗氧化活性在DPPH IC50(表 1黑巧克力),显示抗氧化活性最高,其次是大豆和半甜的巧克力。黑巧克力显示相同的抗氧化活性积极控制(Trolox)。我们观察DPPH IC之间的负相关50和多酚含量( R 0914年=− p < 0.01 ),分析了巧克力。

脂质过氧化水平(TBARS)增加大脑皮层在大豆和黑巧克力,但这种增长是低于H2O2, p < 0.05 (图 1(一))。海马组织提出的增加TBARS水平的H2O2和这个增加是预防治疗和巧克力( p < 0.05 )。然而,在海马体TBARS值时,巧克力,牛奶,大豆,能够提高这些水平相当于价值发现的组织当H2O2添加(图 1 (b))。最后,在小脑,无统计差异(图中观察到该参数 1 (c))。

脂质过氧化水平(TBARS)大脑皮层(a),小脑海马体(b)和(c) Wistar鼠的处理不同的巧克力类型有或没有过氧化氢。不同的字母显示统计差异( p < 0.05 )。

对于水平的蛋白质氧化,我们观察到H2O2在大脑皮层并非诱导氧化损伤(图的能力 2(一个))。然而,在海马体中,H2O2在蛋白质诱导氧化损伤,但牛奶,大豆,黑巧克力阻止破坏(图 2 (b))。在小脑,H2O2能够导致增加的羰基相比来控制水平。牛奶、大豆和黑巧克力就没有增加此参数水平。然而,巧克力与H2O2没能阻止氧化损伤蛋白在这个组织(图 2 (c))。

水平的蛋白质氧化(羰基)大脑皮层(a),小脑海马体(b)和(c) Wistar鼠的处理不同的巧克力类型有或没有过氧化氢。不同的字母显示统计差异( p < 0.05 )。

巯基测定(SH组),在大脑皮层中,我们观察到增加水平只有在与黑巧克力中添加治疗H2O2( p < 0.05 ),没有重大改变的其他疗法(图 3(一个))。在海马体中,巯基分组的内容增加组织中只有黑巧克力补充道。相反的观察当H2O2被加入到组织的巧克力,显示这些水平的降低(图 3 (b))。然而,在小脑,治疗组只有大豆和半甜的巧克力能够增加巯基的水平(图 3 (c))。

抗氧化活性巯基团体在大脑皮层(a)、小脑海马体(b)和(c) Wistar鼠的处理不同的巧克力类型有或没有过氧化氢。不同的字母显示统计差异( p < 0.05 )。

SOD酶的活性如图 4。我们观察到的H2O2大脑皮层的组织SOD活性降低,减少维护的所有的巧克力,除了大豆巧克力我们证据这种酶,相当于控制。这减少草皮也观察到所有的治疗与组织不同的巧克力被添加(图 4(一))。在海马体,SOD活性增加大豆巧克力放在组织;增加也观察到在黑暗的存在和半甜的巧克力在组织暴露于H2O2(图 4 (b))。当观察小脑,SOD的活性增加治疗组只有大豆和半甜的巧克力;同样的证据是观察到治疗组和半甜的黑巧克力和H2O2(图 4 (c))。

SOD酶的抗氧化活性大脑皮层(a),小脑海马体(b)和(c) Wistar鼠的处理不同的巧克力类型有或没有过氧化氢。不同的字母显示统计差异( p < 0.05 )。

4所示。讨论

巧克力是一个突出的产品提供一个重要的酚类化合物,与值高于红葡萄酒中的多酚物质,例如[ 8]。随着巧克力中的多酚含量的主要影响因素,我们可以引用其内容可可酒( 16样品分析在我们的研究中。黑巧克力有67%的可可酒成分和半甜的巧克力要高出43%的酒比牛奶和大豆巧克力。这些数据证实了这项研究由米勒et al。 5)与不同的巧克力样品商业化在美国,在黑巧克力中的多酚含量也高。地理起源、植物品种、气候、土壤类型和种植地区的因素可以影响的内容在可可多酚( 22]。变换的各种处理步骤在巧克力中可可也可以改变的酚醛内容最终产品( 22]。

酚类化合物由于其认可获得可见性的抗氧化能力,延缓氧化的速率通过等机制的抑制ROS和金属络合 23]。某些化合物的抗氧化活性是衡量电子供体氢的反应和取代或稳定一个不成对电子的能力( 24]。在我们的研究中,巧克力的抗氧化活性表达在DPPH IC50,黑巧克力的抗氧化活性最高,其次是半甜的,大豆,牛奶巧克力。确凿的发现黑巧克力的抗氧化活性高,我们有赫尔曼等的研究。 25)黑巧克力的消费增加引起的血浆抗氧化能力伴随年轻吸烟者的改善血管舒张,从而确认巧克力类黄酮减少活性氧的作用。

此外,我们的研究表明,大豆巧克力显示更少数量的总多酚相比,半甜的巧克力;然而,获得相同的抗氧化活性。大豆产品异黄酮(染料木素和大豆苷)的重要内容;这些抗氧化剂高功率要求更少的量有很好的抗氧化电位( 26]。

此外,研究文学属性不同产品的抗氧化活性酚醛成分( 27, 28]。在我们的研究中,这一事实也观察到之间的负相关的总多酚和DPPH IC50观察,因为酚醛含量越高,越低DPPH集成电路吗50换句话说,抗氧化活性越高。像黑巧克力了总多酚的浓度最高,它显示最低的DPPH IC50(表 1),这意味着一个更小的样本数量是需要扫描的50% D P P H 比其他类型的巧克力的数量分析。抗氧化活性较低的牛奶巧克力,巧克力类型测试,可以解释因为这巧克力是有更大数量的糖的准备。糖在抗氧化活性的负面影响在因特网的研究等。 29日)与高糖橙汁,汁显示减少的能力清除超氧化物阴离子以及降低脂质过氧化作用。

在我们的研究中,几乎所有分析的H2O2组织诱导氧化损伤,证明在TBARS和羰基。这是因为虽然H2O2不是一个自由基,这是一个代谢物的氧气极其有害的寿命长,能够跨越脂质层,它可以与细胞膜和蛋白质反应,主要是铁吗+ +,引发重大损害 30.]。损坏是逆转的各种治疗巧克力,保护了我们的研究支持了弗拉格的发现等。 31日],证明有一个减少氧化应激的标记的年轻足球运动员食用105克的牛奶巧克力14天。

在这个研究中,调制巧克力对SOD酶的活性的影响是证明。发现活动减少的H2O2,这是由于增加氧化应激引起的这类化合物;SOD的减少是由于不可逆失活,其产品H2O2( 32]。然而,巧克力都无法扭转这种减少H2O2在大脑皮层。关于增加SOD酶活性在治疗与大豆巧克力和H2O2在相同的组织,这可能是由于异黄酮显著存在的这种类型的巧克力。这种酶活动的增加可能是由这些化合物的存在,因为它是在进行的一项研究证实愣et al。 33),异黄酮抗氧化活性增加大鼠非酒精性脂肪肝炎的肝。SOD活性也下降的H2O2在海马和小脑,我们观察到主要的黑暗和半甜的巧克力可以预防减少电感造成的损害。

5。结论

在这项研究中获得的数据显示一个重要的总多酚的浓度和巧克力的重要的抗氧化活性进行了分析。这些结果是相关的,因为巧克力是一种食品一般消费在日常饮食的世界人口,因为它喜欢的适口性。然而,更多的研究有不同的巧克力,以及评估不同的组织,需要证实我们的发现。

利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

确认

作者承认Centro Metodista大学的支持,异丙醇,Coordenacao de Aperfeicoamento de Pessoal de含量比(披肩)。

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