反刍动物衍生产品在饮食和全球经济有重要的作用;因此,能够控制瘤胃微生物生态系统,改善其质量,是畜牧业的根本重要性。本研究的目的是评估膳食补充剂的影响与栗子和白坚木单宁对微生物群落和脂肪酸,奶牛瘤胃液体的母羊。多元PCR-DGGE概要瘤胃微生物群落的分析显示之间的相关性的存在栗色或白坚木饮食、具体<我talic>
丁酸弧菌属
瘤胃微生物生态系统的操作被认为是最重要的畜牧科学提高饲料效率和增加ruminant-derived产品的质量( 最近,许多研究已经试图了解如何增加健康的脂肪酸的浓度(FA) rumenic酸(RA,十八2<我talic>
独联体
实验研究中心的应用生物学、意大利佩鲁贾大学。动物被处理根据意大利法律的指导方针对动物福利的实验动物(意大利卫生部,2014)和佩鲁贾大学的伦理委员会动物使用和护理。三柏加马斯卡舞曲x不会分泌乳汁Appenninica母羊(6岁,60.5±3.4公斤的体重)配备了瘤胃套管的内部直径10厘米(Ankom技术公司,马其顿,纽约,美国)。动物被单独写。实验3×3拉丁方设计。每个母羊饲料三个连续三实验21 d的时期,包括15 d的适应,在每一个。在21天瘤胃白酒取样。3×3拉丁方出现2次,目的是获得更多的复制。在整个实验期间,母羊可以免费获得水和干草,在集中管理每天两次(07:30时和18:30)。运动每天收集一次。
之前测试的实验饮食是相同的<我talic>
在活的有机体内
栗单宁(750克公斤 提取都据伯恩斯(滴定
每天饲料样品收集,储存在−80°C,直到进一步的分析。样本然后地面进行化学分析轧机Cyclotec 1093 (PBI国际米兰,意大利),使用一个毫米的网格大小。浓度的粗蛋白(CP)、醚提取物(EE)和灰分测定采用AOAC公认方法976.06,920.39,和942.05,分别
瘤胃内容从每个采样前母羊早上喂瘤胃从两个不同的网站,经过21天的试验在每个饮食和立即冻结在−80°C,直到进一步的分析。 英足总提取根据Folch et al。
总DNA提取1毫升每个冷冻瘤胃液体,使用快速DNA旋转工具土壤(MP生物医学,圣安娜、钙、美国)做了一些调整。短暂,每个样本解冻和转移到15毫升管,含4.5毫升的缓冲区组成的150毫米氯化钠,10毫米 提取的DNA作为模板用于PCR扩增V6-V8区域的16 s rRNA的总细菌或基因<我talic>
丁酸弧菌属
PCR扩增子被DGGE electrophoretically分离6%聚丙烯酰胺凝胶(丙烯酰胺/ bis 37.5: 1)在1 x TAE缓冲区(40毫米三基地;20毫米冰醋酸;1毫米EDTA)使用50 - 60%变性剂梯度获得100%的变性剂解决方案,v / v去离子的甲酰胺组成的40%,7 M尿素。凝胶是在60°C和75 V 17 Phor-U系统h (Ingeny国际,NL)和电泳运行结束时,凝胶是沾SYBR®黄金(分子探针,尤金或)和凝胶图像数字化使用ChemiDoc XRS装置(Bio-Rad实验室,赫特福德郡,英国)。
16乐队选择的中间部分<我talic>
丁酸弧菌属 构建系统发育系统树图,显示明显的亲缘部分16 s rRNA彼此基因序列和其他等效长度的序列从基因库中检索数据库使用软件ClustalX) (
统计分析了使用SAS的混合过程 最小二乘方法估计报告。所有统计分析、意义被宣布<我nline-formula>
DGGE概要进行了规范化和分析使用GelCompar II软件4.6 v(应用数学、Sint-Martens-Latem、比利时)。乐队(物种丰富度)的数量及其相对丰度作为代理的丰富性和多样性(香农指数,<我nline-formula>
单宁的存在在饮食诱导瘤胃酒足总变化的状况。单宁降低PUFA的黑洞导致亚油酸的积累(LA)、亚麻酸(放大器),及其BH中间体,减少累积的硬脂酸(SA)(表 考虑到奇怪甚至支链脂肪酸,14:0<我talic>
iso
DGGE条带配置文件获得总细菌(补充材料 ANOSIM测试应用于16 s rDNA PCR-DGGE资料表明,不同的饮食方案明显分离的瘤胃细菌社区和细菌带概要文件的复制动物样本(6×3饮食)为每个饮食更相似(ANOSIM全球测试<我nline-formula>
规范总细菌或之间进行对应分析<我talic>
丁酸弧菌属 典范对应分析(CCA)瘤胃的分类图<我talic>
丁酸弧菌属 总细菌和<我talic>
丁酸弧菌属
多元CCA分析产生的数据<我talic>
丁酸弧菌属 确定所选聚合酶链反应变性梯度凝胶电泳(16 s rDNA PCR-DGGE)碎片。 公认的分类识别DNA的乐队与洛杉矶,LNA、RA, VA透露,他们是属<我talic>
Hungatella 系统发育分析<我talic>
丁酸弧菌属
PCR-DGGE 最近的比赛 相对分类学分类
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非保密Lachnospiraceae
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非保密Lachnospiraceae
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非保密Lachnospiraceae
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饮食PUFA的BH过程强烈降低单宁酸的饮食,无论丹宁酸的类型。然而,结果表明,单宁有更强的能力支持BH-intermediate的积累,如弗吉尼亚州和RA,降低瘤胃SA浓度的酒,如果到CHT单宁相比。最近,我们发现了类似的结果通过与饮食喂养哺乳期乳制品母羊包含豆油补充与否与栗子和白坚木单宁( 浓缩单宁的存在,饮食诱导15:0的增加<我talic>
赌注 至于整个瘤胃细菌群落的组成、多样性指数并没有改变。因此,BH模式的变化可能是由于细菌的重组。事实上,丹宁酸的毒性作用在特定菌株可以通过增加补偿单宁抗药性细菌总数。这些数据是按照先前发现的选择性抑制植物提取物含有单宁在特定菌种的生长和活动的代表瘤胃微生物种群( 细菌参与黑洞的过程被归类为传统上分为两个不同的组:那些属于集团PUFA拉或放大器转换成和那些属于B组加氢,VA到SA ( 多元统计允许选择DGGE乐队的代表<我talic>
丁酸弧菌属 我们的研究也证明,这两种类型的丹宁酸诱导增加洛杉矶,LNA、RA和VA和第18章第2节<我talic>
反式
使用栗色和白坚木单宁乳制品母羊的饮食水平低于2% DM减少瘤胃BH过程的程度,降低SA浓度和提高的百分比,LNA、VA, RA和其他18:1同分异构体。变化在足总概要与总细菌和变化有着紧密的联系<我talic>
丁酸弧菌属
酸性洗涤纤维
Biohydrogenation
共轭亚麻酸
栗单宁
干物质
粗蛋白
乙醚萃取物
脂肪酸
脂肪酸甲基酯
亚油酸
亚麻酸
代谢能
净能量为泌乳
中性洗涤剂纤维
多不饱和脂肪酸
白坚木单宁
Rumenic酸
硬脂酸
Vaccenic酸
Vaccelenic酸。
作者宣称没有利益冲突。
阿里安娜Buccioni和葛拉齐亚Pallara是平等的贡献者。
作者要感谢以下人员佛罗伦萨大学的:弗朗西斯卡Decorosi,多利亚Benvenuti,和安东尼奥Pezzati技术援助。这项工作已经由佛罗伦萨大学的金融支持手段(Fondi di Ricerca di Ateneo 2013/2014/2015)和Gruppo毛罗。萨维奥拉Srl Radicofani,锡耶纳,意大利。
补充材料1:DGGE的16 s rDNA PCR产品从DNA提取瘤胃酒使用底漆的总细菌(f968gc - 1401 r)。CTR,控制饮食(84 g公斤