JBB 生物医学和生物技术杂志》上 1110 - 7251 1110 - 7243 Hindawi出版公司 326464年 10.1155 / 2008/326464 326464年 研究文章 肽之间的模仿SARS冠状病毒突起蛋白和人类蛋白质与非典型肺炎病人血清反应 华 K.-Y。 1、2、3 4 林 w·M。 3 侯 我。 5 叶 T.-M。 5 霍华德 丹尼尔 1 分子科学与工程系 生物医药产业中心 国立台北科技大学 台北106 台湾 2 高分子科学研究所 国立台湾大学 台北10617 台湾 3 生物医药产业中心 国立台北科技大学 台北106 台湾 4 生物技术研究所 台北医学大学 台北110 台湾 5 部门的医疗科学和生物技术实验室 医学院的 国立成功大学 台南701 台湾 2008年 26 12 2007年 2008年 01 10 2007年 24 12 2007年 2008年 版权©2008 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

分子拟态,定义为类似结构共享由不同的基因或蛋白质分子,是一个通用的策略被病原体感染宿主细胞。严重急性呼吸系统综合症(SARS)是一种新的人类呼吸道传染病引起的SARS冠状病毒(冠)。飙升(S)蛋白质的冠中扮演一个重要的角色在病毒进入细胞。在这项研究中,11 S蛋白的合成肽选择基于其与人类蛋白质序列同源性。的两个肽D07(残留927 - 937)和D08(残留942 - 951)被SARS患者的血清。小鼠超免疫血清对这些肽绑定到人类肺上皮细胞A549的蛋白质。另一个肽D10(残留490 - 502)刺激A549增殖和分泌引发。目前的结果表明,所选的年代蛋白质区域,分享与人类蛋白质序列同源性,可能扮演了一个重要的角色在冠感染。

 1。介绍

严重急性呼吸系统综合症(SARS)是一种新兴传染病,2002年在中国首次报道,2003年世界各地迅速蔓延 1, 2]。这种疾病是通过飞沫和密切接触传播。患者出现持续发热、干咳、胸的进步的影像学改变,一旦感染淋巴细胞减少。尽管治疗,大约10 - 15%的患者会死由于急性呼吸窘迫( 3- - - - - - 6]。一种新型冠状病毒(冠)与SARS患者隔离( 7- - - - - - 9]。冠是一种positive-stranded RNA病毒信封。冠的基因组是大约29727个核苷酸长度。序列是annotatedin硅( 10]。比较基因组研究中使用的硅带注释的蛋白质已经表明,SARS病毒属于一个新组的冠状病毒。

根据冠的基因组序列,据预测,有几种结构蛋白可以由冠包括峰值(S),信封(E),膜(M)和核衣壳。峰值蛋白质绑定和融合是非常重要的冠状病毒的宿主细胞( 11, 12]。冠的S蛋白1255个氨基酸长度和23个潜在N-linked糖基化的网站。冠年代的蛋白质的氨基酸包含一个短1型疏水氨基酸组成的信号序列期间可能删除cotranslational运输通过内质网。羧基末端由跨膜域和胞质尾富含半胱氨酸残基。大多数的蛋白质(残留12 - 1195)在病毒粒子,可分为伴S1和S2羧基末端域。S1域(残留12 - 672)与宿主细胞结合受体,血管紧张素转换酶2 (ACE2), S2域负责膜融合( 13- - - - - - 15]。单克隆抗体S1域可以阻止受体结合并包含有效的中和活动对冠( 16]。然而,肽来源于S2域也可以抑制冠状病毒感染( 12]。

分子拟态,定义为类似结构共享由不同的基因或分子的蛋白质产品,是一个通用的战略提出了病原体感染宿主细胞和作为自身免疫性疾病的发病机理( 17]。因此,识别病原体的分子模拟区域可能有助于理解病原体引起的疾病。目前,尚不清楚分子拟态之间发生冠状蛋白质和肽。我们走近这个问题利用计算机分析冠状的突起蛋白序列和选择区域共享与人类蛋白质序列同源性。潜在的地区包括抗原的选择的标准分析和表面的可访问性。在这项研究中,我们发现几个地区S蛋白与人类分享序列同源性蛋白。合成肽,它代表了其中的一些地区,综合理解他们的角色在冠感染。

 2。材料和方法 2.1。肽预测和合成

公开可用的人力和冠状病毒基因组序列在国家生物技术信息中心(美国马里兰州)是用于在silicoprediction。算法预测免疫原性,第二个结构预测,蛋白质拓扑分析和疏水性进行了肽设计测试。免疫原性病毒多肽计算基于算法由Kolaskar和Tongaonkar [ 18]。该算法是基于一个表由氨基酸残基的发生在实验中已知的抗原决定。报告方法的精度约为75% ( 18]。在硅片飙升蛋白质的二级结构分析进行基于博士( 19和捕食者 20.)算法。蛋白质拓扑预测是基于该算法由TMHMM [ 21]。肽的疏水性是基于该算法计算HMOMENT [ 22]。S蛋白之间相似性搜索和人类基因组数据库进行使用BLASTP [ 23BLOSUM 62。添加了额外的氨基酸残基在N -或糖基保持疏水性氨基酸含量低于50%。肽具有高疏水性难以进行生化实验,因为大多数的在体外实验中进行水缓冲。同时,平均而言,一个带电渣添加每五个氨基酸。多个抗原肽合成CytoMol集团(美国加州山景城)。此外,血管舒缓激肽和血管紧张素我(和我)购买的σ(圣路易斯,密苏里州,美国)。

 2.2。非典型肺炎病人血清

SARS患者血清收集疾病控制中心、卫生部(Taipie、台湾)从3月到6月,2003年。非典型肺炎的诊断是基于建立的clinicalcriteria世界卫生组织(世卫组织)。冠患者经实验室方法,包括病毒抗原检测,rt - pcr和血清学的方法。十非典型肺炎病人在恢复期的血清收集阶段(发病后≥20天)被纳入本研究。十个正常健康人的血清作为控制。

 2.3。酶联免疫吸附试验(ELISA)

肽在人体血清抗体检测到固相捕获技术使用单个peptide-coated盘子。ELISA板涂有或没有50 μL肽(100 μ每口井的g / mL)和被1%牛血清白蛋白(BSA)在0.05%的Tween-20磷酸盐(PBS)在室温下1小时。测试血清样本 1 : One hundred. 稀释并添加到板在室温下2小时。孵化后,ELISA板与PBS Tween-20 0.05%洗了三遍。辣根过氧化物酶结合抗体进行检测,(合)共轭反人类的免疫球蛋白抗体(西格玛奥德里奇,圣路易斯,密苏里州,美国)和过氧化物酶底物,三甲(美国威斯康星州麦迪逊Promega,)。吸光度测量使用Vmax标仪(美国加州森尼维尔市分子设备公司,)在450海里。肽在小鼠血清抗体ELISA化验,在人类血清除了HRP-conjugated antimouse免疫球蛋白抗体(西格玛奥德里奇)是用于检测结合抗体。

 2.4。细胞培养

人肺腺癌A549细胞行和维洛细胞在DMEM补充10% heat-inactivated FCS, 2毫米L-glutamate, 50 ng / mL庆大霉素。细胞被孵化有限公司2孵化器在37°C和5%股份有限公司2在湿润的气氛中。immunofluorescent显微镜观测,层的A549细胞培养实验前应在无菌玻璃幻灯片。

 2.5。小鼠免疫

六到八周大的雌性BALB / c小鼠被用于这项研究。这些老鼠最初从杰克逊实验室购买(美国我巴尔港)和饲养实验动物中心,国立成功大学(台南,台湾)。合成肽(1毫克/毫升)和完全弗氏佐剂乳化和腹腔内注入BALB / c小鼠。老鼠增加了相同肽在PBS (50 μg /鼠标)腹腔两周后启动。血清收集的轴向丛小鼠在不同时间间隔和检测抗体的存在通过ELISA如上所述肽。显著增加的抗体效价(大于4折)对immunized-peptide被发现在小鼠超免疫血清与正常血清刺激后。

 2.6。Immunofluorescent污点

老鼠超免疫血清对肽D08孵化与A549细胞在4°C 1小时。与PBS洗涤三次后,细胞孵育1毫升的1 μg / mL FITC-conjugated antimouse免疫球蛋白(杰克逊ImmunoResearch实验室Inc .)、西树林,Pa,美国)4°与PBS C 1小时再洗。immunofluorescent染色观察细胞的荧光显微镜。

 2.7。sds - page及免疫印迹分析

蛋白质在A549细胞溶解产物12% sds - page分离和转移到硝基表如前所述 24]。蛋白质被正常或肽D08超免疫小鼠血清检测使用HRP-conjugated antimouse免疫球蛋白抗体(西格玛奥德里奇)和基质。

 2.8。细胞增殖

维罗E6 ( 4 × 10 4 )和A549细胞( 5 × 10 3 )孵化用不同剂量的合成肽作为72小时表示。细胞增殖检测使用商业XTT试验(罗氏诊断,印第安纳波利斯,印第安纳州,美国)。

 2.9。引发试验

引发的生产是由商业评估ELISA试剂盒(研发系统,明尼阿波利斯,明尼苏达州,美国)根据制造商的指示。简单地说,A549细胞( 1 × 10 5 )培养48小时单独或与不同剂量的肽。文化上层清液收集在孵化后,添加到预镀ELISA板,孵化2小时37°c .盘子都洗四次洗涤缓冲。绑定引发被HRP-conjugated检测抗体和衬底。发达的颜色由Vmax阅读标仪(美国加州分子设备)。引发的浓度是根据标准曲线计算。

 2.10。统计分析

数据表示为平均值±标准偏差(SD)。意义的水平使用学生的团体之间的差异进行了分析 t以及。的值 P< . 05被认为是重要的。

 3所示。结果 3.1。寻找S蛋白分子模拟的地区

整个突起蛋白的氨基酸序列进行了分析,找出潜在的免疫原性区域和区域共享与人类蛋白质序列同源性,它被定义为致病性地区。如图 1,有4个致病性地区。区域1(199 - 254)残留,区域2(658 - 715)残留,地区3(残留物,893 - 951年),和地区4(残留1127 - 1184)与含氧酸氧化酶共享序列同源性,人类高尔基自身抗原,Angrgm-52和pallidin分别。在这些地区,地区3与同源性人类Angrgm-52得分最高(34%身份和48%相似的保守替换)。其序列与angrgm-52如图 2(一个)。此外,由于des-Arg缓激肽和和我是ACE2的基质 25),我们也比较了蛋白质与缓激肽(RPP序列 GFSPFR)和我(DRVYIHPFHL),发现残留490 - 502 ( GYQPYRVVVLSFEE) S的蛋白质显示序列同源性与缓激肽粗体字母,如图所示 2 (b)。身份得分是27%;和保守替换的相似性得分是36%。

蛋白质序列分析的年代。假定的年代蛋白质氨基酸序列分析发现免疫原性区域(黄色区域)和致病性区域(区域共享与人类蛋白质序列同源性,蓝色区域)。紫色区域都是免疫原性和致病性的地区。灰色区域是领导序列和棕色区域是跨膜区域。

序列之间的同源蛋白质,人类Angrgm-52 (a)和(b)缓激肽。峰值蛋白质序列(蛋白质数据库NP_828851)与序列从所有nonredundant基因库cd翻译,PDB, SwissProt, PIR,和脉冲重复频率,通过使用blastp(美国国家卫生研究院NCBI)。对面板(a), BLASTP是用来计算蛋白质和人类Angrgm-52之间的相似性,用矩阵设置在默认。对于一个相同的残渣,一个字母符号两个序列之间的氨基酸显示,对于一个保守的变电站,“+”。面板(b),计算两两对齐基于Smith-Water局部比对与矩阵BLOSUM 45。” ∣ “是相同的带注释的残留物;“:”和”。”类似的残留物。

 3.2。屏幕肽被SARS病人的血清

十一个肽(D01-D11,见表 1),这表示这些致病性地区合成以及缓激肽和我进行测试,看看这些肽可以被SARS病人的血清。肽设计基于算法预测免疫原性,第二个结构,蛋白质拓扑结构和疏水性。我们的目标是选择肽具有高免疫原性,与蛋白质表面的位置和较低的疏水性。设计合成肽序列和测试与SARS患者血清的临床样本。显著增加的SARS患者血清结合肽D01、D07 D08被发现比正常血清的绑定(见图 3)。

合成肽氨基酸序列的11*额外的氨基酸残基斜体表示的信件被添加或N -糖基疏水性降低。

肽 氨基酸的位置 氨基酸序列 不。氨基酸的
D01 199 - 210 GYQPIDVVRDL G 12
D02 658 - 669 ASYHTVSLLRST SQK 15
D03 733 - 744 脑电图描记器NLLLQYGSFCTQ 15
D04 745 - 753 EELNRALSGIAAGQ 13
D05 763 - 770 VFAQVKQM 8
D06 911 - 919 KAISQIQES 猛虎组织 13
D07 927 - 937 GLGKLQDVVNQN 通用电气 14
D08 942 - 951 一个LNTLVKQLSSN 12
D09 1154 - 1162 INASVVNIQ K 10
D10 490 - 502 GYQPYRVVVLSFEE 14
这里 306 - 317 GFRVVPSGDVVR F 13

SARS患者血清抗体绑定活动不同的肽。血清SARS患者恢复期的阶段以及正常对照组收集节中描述 2。抗体绑定到不同的肽被节中描述ELISA检测 2。BK代表缓激肽。“*”表示 P< . 05。

 3.3。超免疫血清对D08 Crossreacted A549细胞

测试是否合成肽D01、D07 D08可以诱导抗体crossreacted与人类蛋白质,我们用这些肽免疫小鼠产生超免疫血清对这些肽。我们发现超免疫血清对D08可以绑定到人类A549细胞的胞质地区immunofluorescent污渍(参见图做了演示 4)。用免疫印迹分析,超免疫血清对D08可以识别更多的乐队在A549细胞溶解产物比正常小鼠血清(见图 5)。此外,针对D07超免疫血清,但不是D01,显示类似crossreactivity A549细胞超免疫血清对D08(数据未显示)。

Immunofluorescent老鼠超免疫血清对A549细胞的染色。A549细胞生长在幻灯片和沾染了二级抗体(a)或鼠标超免疫血清对D08肽(b)中描述的部分 2。

老鼠超免疫血清对D08肽识别蛋白质的A549细胞溶解产物。蛋白质在A549细胞的细胞溶解产物分离通过sds - page和转移到膜节中描述 2。西方的屁股在这种膜使用正常小鼠血清(a)或超免疫血清对D08 (b)所示。

 3.4。超免疫血清对D10 Crossreacted缓激肽

测试是否合成肽D10,实际上,可以诱导抗体crossreactive缓激肽和和我,我们与D10肽免疫小鼠产生超免疫血清对这种肽。显著增加D10超免疫血清的抗体D10被发现,这可能crossreact缓激肽,但不是Ang I-coated板(见图 6)。

D10的crossreactivity抗体与缓激肽和从D10 Ang。超免疫血清免疫小鼠( ▪ )或正常小鼠血清( ▴ )被稀释为表示与D10 -反应,血管舒缓激肽或盎I-coated ELISA板表示。结合抗体检测中描述的部分 2。数据代表了一式三份的平均数±标准差。

D10

缓激肽

血管紧张素我

 3.5。肽D10引发诱导A549细胞的分泌和细胞增殖

理解D10是否有类似的生物活性和我,我们孵化与D10维洛细胞和肺上皮A549细胞,和1,或控制肽这里。维罗和A549细胞诱导增殖D10的存在,和我但不是控制肽(见图 7)。此外,D10和和我也可以诱导A549细胞的趋化因子引发生产(见图 8)。

D10肽引起的细胞增殖和Ang。维罗A549细胞孵化与不同剂量的肽。细胞增殖检测后72小时的孵化XTT化验节中描述 2。数据代表了一式三份的平均数±标准差。

引发生产A549细胞诱导D10肽和Ang i A549细胞( 1 × 10 5 )孵化有或没有肽48小时。引发文化上层清液的水平是化验中描述的部分 2。数据代表了一式三份的平均数±标准差。

 4所示。讨论

在这项研究中,我们已经确定了四冠S蛋白致病地区分享与不同的人类蛋白质序列同源性。其中,致病性地区3(残留物,893 - 941年),加入与Angrgm-52共享序列同源性(基因库。AAL62340),一种新的基因调节在人类的系膜细胞刺激血管紧张素ⅱ,可能值得进一步调查。肽D07和本地区的D08被非典型肺炎病人的血清,表明这个地区是免疫原性,可以被免疫系统在冠感染。小鼠超免疫血清对肽D07或D08能够绑定到重组S2但不是S1域S蛋白(数据未显示)。此外,超免疫血清对D07或D08也有界A549细胞的胞质区和公认的一些蛋白质A549细胞溶解产物。这些结果表明,地区代表D07和D08免疫原性,并可能诱发自身抗体。然而,进一步的研究是需要了解这些地区的生物功能和作用的抗体在冠状病毒感染的发病机制。

除了D07和D08肽,我们也注意到,D10肽代表残留490 - 502 S1域包含了一些有趣的活动。D10肽,共享与缓激肽序列同源性,能够产生抗体crossreactive缓激肽。此外,D10肽可以刺激A549产生引发和扩散和我一样。这些结果表明,该地区D10的蛋白质可能会致盲和我受体,ACE2,可能参与绑定ACE2的冠。这和以前的报告是一致的,这表明残留318 - 510 S1域名可以绑定ACE2 [ 25),类似于受体结合域的hcov - 229 e,这是在一个片段包含残留407 - 547 ( 26]。因此,区域490 - 502 S1域可能参与受体结合域的冠。

总之,我们的研究结果表明,分子拟态之间发生冠状和宿主蛋白质。主题分享与宿主蛋白质序列同源性冠状可能参与冠状的绑定和融合宿主细胞。抗体对这些主题可能包含中和活动对冠冠引起的感染或参与免疫发病机理。此前报道,冠状,像流感一样,可以抑制宿主的皮质类固醇应激反应通过分子模仿策略 27]。模仿主题的年代我们研究蛋白质,参与了病毒,条目可以提供替代方法来破坏冠的感染,类似于先前的研究在病毒进入 28, 29日]。

 承认

这项工作是支持的批准号nsc92 - 2751 - b006 - y从美国国家科学委员会,台北,台湾。

 基督教 m D。 Poutanen s M。 Loutfy m·R。 穆勒 m P。 低 d E。 严重急性呼吸系统综合症 临床感染疾病 2004年 38 1420年 1427年 10.1086/420743 Kuiken T。 Fouchier r . a . M。 Schutten M。 新发现的冠状病毒是严重急性呼吸系统综合症的主要原因 《柳叶刀》 2003年 362年 9380年 263年 270年 10.1016 / s0140 - 6736 (03) 13967 - 0 李 N。 回族 D。 吴 一个。 主要在香港爆发的严重急性呼吸系统综合症 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1986年 1994年 10.1056 / NEJMoa030685 Poutanen s M。 低 d E。 亨利 B。 严重急性呼吸系统综合症在加拿大的识别 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1995年 2005年 10.1056 / NEJMoa030634 曾荫权 k W。 何 p . L。 Ooi认为 g . C。 一个集群的严重急性呼吸系统综合症病例在香港 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1977年 1985年 10.1056 / NEJMoa030666 文策尔 r P。 埃德蒙 m B。 非典在管理的不确定性 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1947年 1948年 10.1056 / NEJMp030072 Drosten C。 冈瑟 年代。 价格 W。 识别一种新的冠状病毒的严重急性呼吸系统综合症患者 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1967年 1976年 10.1056 / NEJMoa030747 Ksiazek t·G。 Erdman D。 戈德史密斯 c·S。 一种新型冠状病毒与严重急性呼吸系统综合症有关 新英格兰医学杂志》上 2003年 348年 20. 1953年 1966年 10.1056 / NEJMoa030781 轮值表 p。 Oberste m . S。 梦露 美国年代。 描述一种新的冠状病毒与严重急性呼吸系统综合症有关 科学 2003年 300年 5624年 1394年 1399年 10.1126 / science.1085952 马拉 m·A。 琼斯 s . j . M。 阿斯苔来说 c·R。 SARS-associated冠状病毒的基因组序列 科学 2003年 300年 5624年 1399年 1404年 10.1126 / science.1085953 Bonavia 一个。 Zelus b D。 温特沃斯 d E。 托尔伯特 p . J。 福尔摩斯 k V。 识别人类冠状病毒的糖蛋白受体结合域的飙升hcov - 229 e 病毒学杂志 2003年 77年 4 2530年 2538年 10.1128 / jvi.77.4.2530 - 2538.2003 博世 b . J。 玛蒂娜 b E。 van der Zee R。 严重急性呼吸系统综合症冠状病毒(冠)感染抑制使用峰值蛋白质七个repeat-derived肽 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 2004年 101年 22 8455年 8460年 10.1073 / pnas.0400576101 他 Y。 周 Y。 吴 H。 识别immunodominant网站突起蛋白严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒:暗示开发SARS诊断和疫苗 免疫学杂志 2004年 173年 6 4050年 4057年 李 W。 摩尔 m·J。 Vasllieva N。 血管紧张素转换酶2是一个功能性的SARS冠状病毒的受体 自然 2003年 426年 6965年 450年 454年 10.1038 / nature02145 黄 美国K。 李 W。 摩尔 m·J。 崔书记 H。 的大学生 M。 193 -氨基酸片段的SARS冠状病毒S蛋白有效结合血管紧张素转换酶2 生物化学杂志 2004年 279年 5 3197年 3201年 10.1074 / jbc.C300520200 隋 J。 李 W。 村上 一个。 有效中和严重急性呼吸道综合征(SARS)冠状病毒的人类马伯S1蛋白受体协会 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 2004年 101年 8 2536年 2541年 10.1073 / pnas.0307140101 Oldstone m . b。 分子模拟和免疫介导的疾病 美国实验生物学学会联合会杂志 1998年 12 13 1255年 1265年 Kolaskar 答:S。 Tongaonkar p C。 一种半经验方法预测蛋白质抗原的抗原决定因素 2月的信 1990年 276年 1 - 2 172年 174年 10.1016 / 0014 - 5793 (90)80535 - q 罗斯特 B。 Yachdav G。 刘 J。 预测蛋白质的服务器 核酸的研究 2004年 32、Web服务器的问题 321年 326年 10.1093 / nar / gkh377 Frishman D。 阿哥斯 P。 结合远程交互的二级结构预测算法 蛋白质工程 1996年 9 2 133年 142年 10.1093 /蛋白质/ 9.2.133 克罗 一个。 拉赫松 B。 冯Heijne G。 Sonnhammer e . L . L。 隐马尔可夫模型预测跨膜蛋白拓扑:应用程序完整的基因组 分子生物学杂志 2001年 305年 3 567年 580年 10.1006 / jmbi.2000.4315 艾森伯格 D。 维斯 r·M。 Terwilliger t . C。 蛋白质疏水性的疏水力矩检测周期 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 1984年 81年 1 140年 144年 10.1073 / pnas.81.1.140 吉什 W。 州 d . J。 识别的蛋白质编码区域通过数据库相似性搜索 自然遗传学 1993年 3 3 266年 272年 10.1038 / ng0393 - 266 叶 t M。 常 h . C。 梁 C . C。 吴 J·J。 刘 m F。 Deoxyribonuclease-inhibtory抗体在系统性红斑狼疮 生物医学科学杂志 2003年 10 5 544年 551年 10.1007 / BF02256116 黄 美国K。 李 W。 摩尔 m·J。 崔书记 H。 的大学生 M。 193 -氨基酸片段的SARS冠状病毒S蛋白有效结合血管紧张素转换酶2 生物化学杂志 2004年 279年 5 3197年 3201年 10.1074 / jbc.C300520200 布雷斯林 J·J。 莫克 我。 史密斯 m·K。 人类冠状病毒229 e:受体结合域和中和的可溶性受体 37 ∘ C 病毒学杂志 2003年 77年 7 4435年 4438年 10.1128 / jvi.77.7.4435 - 4438.2003 小麦地 R。 分子拟态ACTH在SARS-implications皮质类固醇治疗和预防 医学假说 2004年 63年 5 855年 862年 10.1016 / j.mehy.2004.04.009 花王 r . Y。 徐 w·H。 李 t·S。 识别的新型小分子抑制剂严重急性呼吸道syndrome-associated冠状病毒的化学基因 化学和生物学 2004年 11 9 1293年 1299年 10.1016 / j.chembiol.2004.07.013 汉 d . P。 Penn-Nicholson 一个。 赵 m·W。 识别关键因素ACE2冠进入和发展的一个强有力的抑制剂 病毒学 2006年 350年 1 15 25 10.1016 / j.virol.2006.01.029