BCA 生物无机化学与应用 1687 - 479 x 1565 - 3633 Hindawi 10.1155 / 2021/9920890 9920890 研究文章 生物的银纳米粒子 Clinacanthus高寒草场与抗菌抗氧化和细胞毒性的影响 赵 典当荷兰国际集团(Ing) 1 切的心情 格瓦拉Nurul Azieyan 1 穆罕默德Zain 努尔Nadhirah 1 拉玛钱德朗 Muggundha Raoov 2 Yahaya Noorfatimah 1 尼克穆罕默德•卡 尼克努尔Syazni 1 东 围Hau 3 https://orcid.org/0000 - 0002 - 9442 - 7456 勇 轭Keong 4 李 齐川阳Keong 5 https://orcid.org/0000 - 0001 - 5081 - 0982 Lim Vuanghao 1 Ciccarella 朱塞佩 1 结合医学集群 先进的医疗和牙科学院 马来西亚理科大学 成分 13200年Kepala巴塔 槟城 马来西亚 usm.my 2 化学系 理学院 马来亚大学 吉隆坡50603 马来西亚 um.edu.my 3 学院的药店 诺丁汉大学马来西亚 道路Broga Semenyih 43500 马来西亚 nottingham.edu.my 4 的人体解剖学 医学和健康科学学院 马来西亚Putra大学 43400年Serdang 雪兰莪州 马来西亚 upm.edu.my 5 生物处理技术部门 工业技术学院 马来西亚理科大学 Gelugor 11800槟城 马来西亚 usm.my 2021年 15 5 2021年 2021年 9 3 2021年 21 4 2021年 3 5 2021年 15 5 2021年 2021年 版权©2021赵典当Ing et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

银纳米粒子(AgNPs)以前合成使用叶(AgNP-L)和阀杆(AgNP-S)提取的 Clinacanthus高寒草场( c .高寒草场)测试评估抗菌、抗氧化和细胞毒性的活动。AgNPs显示良好的对细菌的抑制作用,但不是真菌。抑制结果显示最高的活动 金黄色葡萄球菌( 金黄色葡萄球菌)与11.35毫米(AgNP-L)和11.52毫米(AgNP-S),同时抑制反对最低 大肠杆菌( 大肠杆菌)与9.22毫米(AgNP-L)和9.25毫米(AgNP-S)阀瓣扩散法。这一趋势的结果指出扩散法。的集成电路50AgNP-L和AgNP-S 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)和2,2′-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic酸)(abt)化验是417.05 μ和434.60克/毫升 μ304.31 g / mL,以及 μ和326.83克/毫升 μ分别g / mL。铁还原能力试验表明,AgNP-L[872.389(捆牢) μmol / L铁(II)]和AgNP-S [612.770 μmol / L铁(II)]表现出显著( p < 0.05)抗氧化活动比叶提取物(CNL) [152.260 μmol / L铁(II)]和茎提取物(CNS) [110.445 μmol / L的铁(II)] c .高寒草场。AgNPs也被证明具有细胞毒性影响乳房(MCF-7),颈(海拉)和结肠(HT-29)癌细胞剂量依赖性的方式。AgNP-S和AgNP-L显示显著( p < 0.05)高细胞毒性对MCF-7 (117.43 μ和HT-29 (78.47 g / mL) μ分别g / mL)。在结论中,生物合成AgNPs从水提取的茎和叶 c .高寒草场已经证明有前途的潜在抗氧化,抗菌,细胞毒性的活动。

 高等教育、马来西亚 1。介绍

AgNPs是众所周知的有效抗菌药物对细菌和真菌( 1- - - - - - 4]。因此,他们一直在研究细菌的应用程序,例如,在医学、化妆品、食品和纺织行业( 5- - - - - - 8]。由病原微生物引起各种皮肤疾病使用抗生素治疗。常用的抗生素包括红霉素、克林霉素、四环素、青霉素和环丙沙星 9]。由于抗生素耐药性的发展,研究人员希望确定替代发展的新的抗菌药物。AgNPs可以克服抗生素抗性的生物合成,降低成本比传统抗生素( 10]。

副作用曾被观察到在丁羟甲苯等合成抗氧化剂(二叔丁基对甲酚)和茴香醚(BHA)。低剂量的测试底部钻具组合似乎有毒的维洛细胞线粒体功能损失基于MTT试验( 11]。几项研究报告重要的抗氧化活性 c .高寒草场提取( 12, 13] 。因此,生物相容性 c .高寒草场派生AgNPs可以代替合成抗氧化剂。AgNPs证明抑制自由基,如活性氧(ROS)产生代谢反应,防止损伤组织或细胞( 14, 15]。一项研究报道,合成AgNPs使用 木香之后水叶提取物表现出较高的抗氧化活性比叶提取只( 16]。AgNPs可能,因此,是一种新的小说/抗氧化剂与合成抗氧化剂所展现出来的能力避免副作用。

除了抗菌和抗氧化特性,植物的AgNPs广泛研究了他们对癌细胞的细胞毒性效应( 17]。癌细胞是由正常细胞转化的阶段。这些可能是基于基因之间的相互作用和外部影响,如物理、化学和生物致癌物质( 18]。甚至可能发生耐药化疗治疗后( 19]。因此,选择生物相容性和具有成本效益的化疗药物是必要的。很明显,植物的AgNPs有可能抑制癌细胞的扩散 20., 21]。此外,细胞毒性AgNPs报道诱导细胞凋亡的肿瘤细胞通过线粒体损伤和氧化应激导致细胞死亡( 22, 23]。因此,这个项目的目的是评估抗菌,抗氧化和细胞毒性性质 c .高寒草场派生AgNPs以前合成( 13]。

 2。材料和方法 2.1。材料

冰乙酸、甲醇和醋酸钠从QReC购买,雪兰莪州,马来西亚。DPPH, 2, 4, 6-tris (2-pyridyl) 1、3, 5-triazine (TPTZ), abt试剂、3 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) 2, 5-diphenyltetrazolium溴化试剂(MTT),铁(II)硫酸盐(FeSO4.7H2从Sigma-Aldrich O)和底部钻具组合得到,密苏里州,美国。穆勒辛顿琼脂(尼古拉斯),穆勒辛顿汤(MHB),马铃薯葡萄糖肉汤(PDB) Sabouraud葡萄糖琼脂(SDA),和商业银纳米粒子(C-AgNP)从默克公司收购德国达姆施塔特。硫酸庆大霉素、制霉菌素和盐酸(HCl)是由Biobasic提供,加拿大安大略省。甘油是获得系统®,雪兰莪州,马来西亚。过硫酸钾是购自穿越有机物,新泽西,美国。penicillin-streptomycin Trypsin-EDTA 0.25%, RPMI 1640年,胎牛血清(的边后卫)、谷酰胺,杜尔贝科的修改鹰介质(DMEM)从Gibco获得®,纽约,美国。5 -氟尿嘧啶(研究者用)从东京购买化工、东京,日本。3 - 5 - (4 5-dimethylthiazol-2-yl) (3-carboxymethoxyphenyl) 2 - (4-sulfophenyl) 2 h-tetrazolium Promega提供的(MTS)工具包,WI,美国。磷酸缓冲盐(PBS)获得表达载体,纽约,美国。

 2.2。合成AgNPs

合成AgNP-S AgNP-L从中枢神经系统和补偿中子测井,分别是根据我们之前发表的工作( 13]。

 2.3。抗菌合成AgNPs活动

抗菌活动进行了测试使用光盘和扩散方法在抑制区域的存在。然后,broth-microdilution方法被用来实现最低抑制浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。

2.3.1。微生物

抗菌测试活动是对革兰氏阴性菌:写明ATCC 27853 (1) 铜绿假单胞菌( 铜绿假单胞菌)和(2)写明ATCC 25922 大肠杆菌;革兰氏阳性细菌:(1)写明ATCC 25923 金黄色葡萄球菌(2)写明ATCC 12228 葡萄球菌epidermidis( 美国epidermidis),写明ATCC 19615 (3) 酿脓链球菌( 链球菌);和真菌:(1)CA 1395 白色念珠菌( 白念珠菌)和(2) 假丝酵母glabrata( c . glabrata)。细菌和真菌的微生物实验室的临床试验获得复杂、先进的医疗和牙科研究所(AMDI),振子结构,Infectomics集群,AMDI,振子结构,分别。菌株被存储在10%甘油−80°C,直到进一步的使用。

 2.3.2。准备的媒体

尼古拉斯是用于细菌培养。尼古拉斯热压处理过的在121°C,持续15分钟。然后,媒体被注入无菌培养皿(美国加州Bio-Rad),这是留给室温固化24 h,以避免污染。相同的协议应用真菌与SDA媒体。盘子被贴上标签并存储在一个密封的塑料袋4°C到进一步的需要和prewarmed孵化器在实验前37°C。

 2.3.3。剂的制备和样品

一个殖民地从股票文化转移到10毫升MHB PDB细菌和真菌,分别。文化孕育了悬挂在37°C 24 h。文化的稀释与MHB或PDB进行对应1 - 2×1080.5麦克法兰CFU /毫升的标准使用紫外可见分光光度计和测量在600海里。吸光度应在0.1相当于108CFU /毫升浓度。每个样本(5毫克)溶解在1毫升蒸馏水(dH2O)。超声发生器(WUC-A10H,明智的干净,声波明智,加利福尼亚,美国)被用来用15分钟的样品。然后,样本无菌过滤前进一步使用。

 2.3.4。纸片扩散法

这个过程是根据临床和实验室标准协会(CLSI) (M02-A11)。短暂,准备剂溶液擦洗到尼古拉斯和SDA无菌棉拭子。接下来,无菌绘画纸滤纸(6毫米)(英国梅德斯通)增加了20倍 μL的测试样本。积极的控制是庆大霉素和制霉菌素。光盘轻轻按压在琼脂和孵化与细菌和真菌在37°C和30°C 24和48 h,分别。一个清晰的抑菌圈测量,在毫米(mm)表示。

 2.3.5。好扩散法

6毫米直径的井使用无菌吸管技巧被刺破。然后,培养液的解决方案是在琼脂用无菌棉拭子擦洗。接下来,20 μL的样本添加到每个。积极的控制是庆大霉素和制霉菌素。另一方面,dH -控制2o .样品到琼脂扩散进行1 h。然后,细菌培养板上37°C和真菌在30°C。抑制区得到24 h细菌和48 h后真菌( 24]。

 2.3.6。Broth-Microdilution化验

broth-microdilution试验是利用麦克风和MBC进行评估。描述的方法的临床和实验室标准协会(CLSI) (M07-A9)使用,某些修改。串行稀释(7.8125 μ克/毫升到1000 μg / mL)的样本准备在96 -孔板平底。每个也包含一个示例(20 μL)和培养液悬挂(180 μL)。积极的和消极的控制是庆大霉素和dH2分别啊。板是孵化24小时37°C。每一个在PBS溶液用移液器吸取了MTT (50 μL, 0.5毫克/毫升)孵化后的时间。在那之后,30分钟的板是孵化。深紫色的外观颜色表示活细菌的存在。确定MBC值,10 μL从井没有紫色的彩色条纹在尼古拉斯和孵化24小时37°C。24小时后,MBC评估区分杀菌(没有细菌的生长板)和抑菌(细菌生长板)代理从样品 25]。

 2.4。抗氧化活动

的抗氧化活性测定采用DPPH, abt和收紧化验。连续稀释的双重的进行(31.25,62.5,125、250和500 μg / mL)为每个样本股票的解决方案(1000 μg / mL)。

2.4.1。DPPH自由基清除实验

抗氧化活性的自由基清除DPPH方法适应了一些修改( 26, 27]。简单地说,在96孔板中,样本(50 μL)和甲醇(150 0.2毫米DPPH μL)补充道。盘子在黑暗中孕育了30分钟,然后吸光度是测量在517纳米微型板块的读者。抗氧化活性的计算是基于 (1) DPPH自由基清除 % = Ab 控制 − Ab 样本 Ab 控制 × One hundred. , 在Ab控制DPPH溶液吸光度,Ab吗样本与样品吸光度DPPH的解决方案。

 2.4.2。abt自由基清除实验

一些修改,abt自由基清除实验是改编自 28]。短暂,abt阳离子自由基的工作解决方案是由混合7毫米abt解决方案和2.45毫米过硫酸钾在1:1的比例,这是保持在室温16 h在黑暗中。工作的解决方案是用乙醇稀释,734海里的吸光度测量使用标。每一个用移液器吸取了样例(20 μ(180 L)和abt工作的解决方案 μL)。在黑暗中,这种混合物在室温下孵化6分钟,和吸光度测量的波长734纳米。作为阳性对照,样本而底部钻具组合。abt自由基清除的计算是基于 (2) abt自由基清除 % = OD 控制 − OD 样本 OD 控制 × One hundred. , abt的吸光度与乙醇试剂OD工作吗控制和abt工作试剂与样品的吸光度OD样本。

 2.4.3。收紧化验

随着一些变化,收紧测试修改根据( 29日]。总之,醋酸缓冲(0.3 M, pH值3.6)是由混合46.3毫升的乙酸钠(0.3米),3.7毫升的醋酸(0.3米),和dH的50毫升2o .然后,0.010米的混合物TPTZ盐酸溶液在0.040,0.020 FeCl3的比例,醋酸缓冲1:1:10 (v / v / v)准备收紧试剂。执行的测试是使用96孔板,和20 μL样本混合在黑暗中与180年在环境温度 μL收紧试剂。30分钟后,样品的吸光度测量使用标在593海里。的FeSO4.7H2O建立了标准曲线在2000到31.25的范围 μmol / L,收紧活动计算 μ摩尔亚铁当量/ μ克干提取( μ摩尔菲(II) / μg样本)。

 2.5。细胞毒性研究

细胞毒性测试对MCF-7 HT-29,海拉癌症细胞系的基础上进行了治疗后生存能力的百分比。

2.5.1。细胞系和文化媒体

细胞系HT-29,海拉,MCF-7从美国获得类型文化集合(写明ATCC)。在DMEM,海拉细胞被维护,而HT-29和MCF-7维护RPMI 1640。1% (v / v)谷酰胺,10% (v / v)的边后卫,1% (v / v) penicillin-streptomycin既适用于媒体37°C的二氧化碳(有限公司2)孵化器(美国马萨诸塞州贺利氏BB15,热科学)。

 2.5.2。制备细胞浓度和亚文化

在使用的细胞达到80%汇合的。用移液器吸取了旧媒体和冲洗5毫升的PBS。然后,0.5毫升的0.25% Trypsin-EDTA应用和孵化有限公司2孵化器3分钟。15毫升离心管是用来控制解决方案。5毫升的新媒体应用,混合物在1000转离心5分钟(热科学贺利氏Megafuge 16日,马萨诸塞州,美国)。上层清液被删除了,小球resuspended 1毫升的完整的媒体。50 μL暂停添加到50 μL(台盼蓝并放在幻灯片计数器使用一个自动化的细胞计数器TC10 (Bio-Rad,里士满,加州)总细胞数。1×10的浓度4细胞/ (HT-29), 5×103细胞/ (MCF-7),和1×104细胞/(海拉),细胞被播种。剩余悬挂是亚文化到一个新瓶,孵化为进一步使用37°C有限公司2孵化器。

 2.5.3。利用MTS试验细胞生存能力

在96孔板中,HT-29 (1×104细胞/),MCF-7 (5×103细胞/),海拉(1×104细胞/)被播种。用移液器吸取了旧媒体24 h后,取而代之的是试样中媒体(12.5,25、50、100和200 μg / mL)。未经处理的细胞被用作控制。样品使用AgNP-L, AgNP-S,补偿中子测井,中枢神经系统,C-AgNP,研究者用积极的控制。72 h的孵化时间之后,MTS试剂(20 μL)被添加到每个。板块中进一步培养4 h有限公司2孵化器。标仪是用来测量吸光度在490海里。细胞生存能力(%)计算使用 (3) 细胞生存能力 % = OD 样本 OD 控制 × One hundred. , 在OD样本的样品吸光度是细胞治疗,和OD吗控制未经处理的细胞的吸光度。

 2.6。统计分析

上述所有实验一式三份,表示为平均值±标准偏差(SD)。单向方差分析(方差分析)和图基的诚实的显著差异(HSD) / Dunnett t以及用于统计分析。被认为是显著的区别 p < 0.05。

 3所示。结果与讨论 3.1。抗菌活动

革兰氏阳性菌( 葡萄球菌epidermidis(SE), 金黄色葡萄球菌(SA), 酿脓链球菌(SE),革兰氏阴性菌( 铜绿假单胞菌(PA)和 大肠杆菌(EC))和真菌( 假丝酵母glabrata(CG)和 白色念珠菌(CA))被用来评估AgNPs的抗菌活性。筛选抗菌活性的存在,阀瓣和扩散法。那时的采用微量肉汤进行获取麦克风和MBC的值。 葡萄球菌和 链球菌常见细菌属存在在人类皮肤 30.),而 美国epidermidis, 金黄色葡萄球菌,和 铜绿假单胞菌在正常人体皮肤上细菌的“居民”。皮肤疾病可能发生当居民转变为致病微生物形式在一定条件下( 31日, 32]。 金黄色葡萄球菌的主要病原菌之一,可引起各种疾病从轻微皮肤感染危及生命的疾病。 铜绿假单胞菌会导致皮炎和更深的软组织感染( 33]。 白念珠菌是最致命的其他吗 假丝酵母物种( 34]。

AgNPs对病原微生物的抑制区如表所示 1和 2。实验中使用的浓度固定所有样本1000人 μ克/毫升。表 1总结了使用纸片扩散法对微生物的抗菌活性。样品AgNP-L AgNP-S显示,抗菌活性相比,植物提取物的存在抑制区域孵化24小时后。根据阀瓣扩散法的结果,AgNP-L AgNP-S显示最高的活动 金黄色葡萄球菌分别用11.35毫米和11.52毫米。然而,AgNPs演示活动水平最低 大肠杆菌抑制区在9.22毫米(AgNP-L)和9.25毫米(AgNP-S)。的抑制区AgNPs (AgNP-L和AgNP-S)均明显高于植物提取物(CNL和中枢神经系统)。有趣的是,这两个对AgNPs显示最高的活动 金黄色葡萄球菌抑制区为18.29毫米(AgNP-L)和17.24毫米(AgNP-S)扩散法(表 2)。巧合的是,这两个也显示最低的活动 大肠杆菌抑制区为12.83毫米和13.41毫米,分别。没有抑制区指出样本中使用水植物提取物(CNL和中枢神经系统)。尽管表现出较高的抗菌活性与病原微生物,AgNPs显示显著的抗菌活性抑制病原微生物的生长。然而,没有观察到当AgNPs活动和植物提取物对真菌进行了测试( 白念珠菌和 c . glabrata)。

抑制区(mm)的生物合成银纳米粒子对微生物使用纸片扩散法(平均数±标准差, n= 3);平均值明显不同( p < 0.05)之间的测试样本在每个特定细菌/真菌不同小写字母上标字母a, b, c和d。

样品 抑菌圈(毫米)
革兰氏阳性细菌 革兰氏阴性细菌 真菌
SA SE SP 电子商务 巴勒斯坦权力机构 CA CG
补偿中子测井 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
中枢神经系统 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
AgNP-L 11.350±0.243b 11.597±0.311b 10.260±0.125b 9.220±0.433b 10.073±0.280b 0.000一个 0.000一个
AgNP-S 11.517±0.519b 10.153±0.232c 10.493±0.345b 9.247±0.081b 10.000±0.305b 0.000b 0.000一个
C-AgNP 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000b 0.000一个
dH2O 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000b 0.000一个
庆大霉素 21.957±0.486c 25.543±0.440d 22.967±0.799c 21.840±0.155c 17.530±0.521c ND ND
制霉菌素 ND ND ND ND ND 17.367±0.136c 21.200±0.200b

ND =不确定。

抑制区(mm)的生物合成银纳米粒子对微生物测试使用扩散法(平均数±标准差, n= 3);平均值明显不同( p < 0.05)之间的测试样本在每个特定细菌/真菌不同小写字母上标字母a, b, c和d。

样品 抑制区(毫米)
革兰氏阳性细菌 革兰氏阴性细菌 真菌
SA SE SP 电子商务 巴勒斯坦权力机构 CA CG
补偿中子测井 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
中枢神经系统 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
AgNaP-L 18.290±0.303b 16.987±0.652b 13.913±0.311b 12.830±0.607b 14.160±0.436b 0.000一个 0.000一个
AgNaP-S 17.237±0.123c 17.000±0.146b 13.730±0.191b 13.413±4.500b 14.140±4.500b 0.000一个 0.000一个
C-AgNaPs 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
庆大霉素 27.81±0.206d 31.84±0.138c 26.42±0.678c 24.45±0.116c 26.78±0.102c ND ND
dH2O 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个 0.000一个
制霉菌素 ND ND ND ND ND 26.267±4.500b 31.285±5.511b

ND =不确定。

 3.1.1。Broth-Microdilution化验

基于使用光盘的抗菌活性和扩散方法,产生抑制的样本区(AgNP-L、AgNP-S和庆大霉素)进一步用于broth-microdilution试验来确定麦克风和MBC。基于MBC的结果,样品的杀菌和抑菌性能与病原微生物可以确定。杀菌是指能够杀死微生物,而抑菌剂能够抑制微生物。板没有细菌的增长表明杀菌性能,同时板与细菌增长表明抑菌能力( 25]。表 3显示了AgNPs麦克风和MBC值。确定抗菌活性,纸片扩散法,因为它是一个简单而可靠的方法以最低的成本( 35]。然而,麦克风无法确定,因为它需要一个浓度范围大,不经济相比,阀瓣或扩散。因此,确定麦克风的价值观,broth-microdilution化验。

麦克风和MBC测试样本的微生物。

样品 麦克风( μg / mL) MBC ( μg / mL)
SA SE SP 巴勒斯坦权力机构 电子商务 SA SE SP 巴勒斯坦权力机构 电子商务
AgNP-L 250年 250年 250年 250年 125年 250年 250年 250年 250年 125年
AgNP-S 250年 250年 250年 125年 125年 250年 250年 250年 125年 125年
庆大霉素 31.25 62.5 31.25 62.5 125年 31.25 31.25 31.25 62.5 125年

麦克风是在96孔板和孵化24小时37°C。MTT试剂使用24小时后作为一个指示器。颜色从紫色到黄色的变化是细菌死亡的象征 25]。的麦克风AgNP-L报道在250 g / mL的浓度 金黄色葡萄球菌, 美国epidermidis, 链球菌, 铜绿假单胞菌125年,据报道 μg / mL反对 大肠杆菌。至于 金黄色葡萄球菌, 美国epidermidis, 链球菌AgNP-S麦克风的报道,在250年的浓度 μg / mL,据报道在125年 μ克/毫升 大肠杆菌和 铜绿假单胞菌。AgNP-L MBC是一样的杀菌麦克风由于缺乏细菌生长在250 μg / mL反对 金黄色葡萄球菌, 美国epidermidis, 链球菌, 铜绿假单胞菌125年,据报道 μg / mL反对 大肠杆菌。在麦克风,MBC AgNP-S还演示了相同的浓度。没有麦克风和MBC真菌,因为没有抑制区域使用光盘或扩散的方法。

从结果表 1和 2,AgNP-L AgNP-S显示抑制区相比,植物提取物(CNL和中枢神经系统)。植物提取物在1000 μg / mL没有显示出抑制区。先前的研究已经调查的抗菌活性 高寒草场。然而,结果显示无关紧要的活动对acne-inducing细菌即使在高浓度(5毫克/毫升) 36]。的 c .高寒草场叶提取物显示重要的抗菌效果 大肠杆菌和 金黄色葡萄球菌,MIC值为12.5毫克/毫升( 37] 。

至于AgNPs,表中的结果 1和 2表明,革兰氏阳性细菌具有更好的抑制区相比,革兰氏阴性细菌。也发现类似的结果( 38), 金黄色葡萄球菌抑制区高于 大肠杆菌的吸收和积累,从而表明AgNPs细胞壁。然而,无关紧要的抑制区发生对抗 白念珠菌和 c . glabrata。AgNPs合成 马樱丹属卡马拉l .叶子,革兰氏阳性( 金黄色葡萄球菌;28毫米)细菌有抑菌圈比革兰氏阴性细菌( 铜绿假单胞菌21毫米;和 大肠杆菌,22毫米)使用扩散法。

另一种机制是由于AgNPs的大小。AgNPs小尺寸的结果在一个大的表面积与体积比,这是重要的对病原菌抗菌活性。AgNPs都能够轻松地连接和穿透微生物相比,更大的粒子( 10]。在比较研究中,size-controlled AgNPs 5 nm显示最低的最低抑制浓度相比100海里 E。coli, B. subtilis, 金黄色葡萄球菌( 39]。

前的一项研究提出,细胞死亡是由高浓度的积极的钾(K+)在细胞外离子液体由于细菌细胞损伤AgNPs [ 40]。研究还报道,蛋白质释放的细菌细胞的数量增加而AgNPs的浓度。另一项研究报道,银离子中断所需的酶和蛋白质三磷酸腺苷(ATP)生产,从而干扰细胞的生命周期,导致细胞死亡( 41]。另一方面,一项研究[ 42)报道,细胞死亡可能是由于银与蛋白质之间的相互作用。AgNPs与加压反应与丰富的加压法蛋白质氨基酸细菌细胞内外,从而影响细菌细胞的生存能力。此外,银离子的纳米颗粒与磷脱氧核糖核酸(DNA),导致DNA复制的抑制酶的失活函数( 43, 44]。透射电子显微镜(TEM)分析显示一个大的细胞质和细胞壁之间的差距 大肠杆菌治疗后用银,从而确认磷作为主要成分的存在在DNA分子( 45]。

 3.2。抗氧化活动

活性氧(ROS)发布超过在人体代谢反应导致细胞损伤( 46]。ROS可能导致癌症的发展,心血管疾病、炎症、衰老和神经系统疾病( 47]。抗氧化剂作为自由基活性氧引起的食腐动物,减少慢性疾病的风险( 48]。抗氧化活性的分析了AgNPs系列浓度的31.25,62.5,125年、250年和500年 μ克/毫升用DPPH、abt和收紧化验。这三个化验是简单和便宜,而且能快速得到结果。

3.2.1之上。DPPH、abt和收紧化验

图 1(一)显示了补偿中子测井的自由基清除活性的效果,中枢神经系统,C-AgNP AgNP-L, AgNP-S与标准抗氧化剂叔丁基羟基茴香醚。抑制活动对DPPH自由基的样品检查。确定half-maximal抑制浓度(IC50补偿中子测井和中枢神经系统> 500)值 μ417.05 g / mL, μ434.60克/毫升(AgNP-L) μ40.97克/毫升(AgNP-S), μ克/毫升(BHA)。结果表明,控制(BHA)表现出更高的价值,而C-AgNP显示显著降低集成电路50比补偿中子测井值,中枢神经系统、AgNP-L AgNP-S。基于底部钻具组合的顺序> AgNP-L > AgNP-S > CNL中枢神经系统> > C-AgNP,样品在自由基DPPH的清除效果下降。

(一)DPPH、abt (b)和(c)收紧化验。样品用不同的小写字母上标显著差异( p < 0.05)他们之间(平均数±标准差, n= 3)。

发现每个样本清除自由基的能力和增加剂量依赖性的方式不同。因此,样本之间的交互形式和浓度有显著影响的补偿中子测井,中枢神经系统,C-AgNP和控制(BHA)。没有明显差异CNL浓度和中枢神经系统。这同样适用于AgNP-L和AgNP-S。然而,有一个重要的区别植物提取物(CNL和中枢神经系统)和AgNPs (AgNP-L和AgNP-S)。比C-AgNP AgNPs都显著提高。这表明AgNPs抗氧化制剂相比,更有效 c .高寒草场植物提取物浓度。

先前的研究表明,合成AgNPs使用 Cleistanthus collinus叶提取物抑制DPPH 43.5%在1000年 μ克/毫升( 49]。当前合成AgNPs显示,51.39% (AgNP-L)和49.94% (AgNP-S) 500 μ克/毫升。以前的研究报道,AgNPs显示,51%的DPPH抑制,享年200岁 μg / mL AgNPs合成 桂皮托叶提取物( 50)和抑制在100年的80% μg / mL AgNPs叶提取物的合成 巴豆bonplandianum( 51]。

DPPH向抗氧化剂的反应发生在一个氢原子捐赠者和电子转移 52]。合成的AgNPs将丰富的氢后添加自由基(DPPH)。因此,颜色从紫色黄色是由于自由基DPPH•转换(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl激进)自由激进DPPH-H (2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazine)。这是由于氢的转移从AgNPs自由基在发展中稳定的产品 51]。biocompounds银离子的结合引起了DPPH自由基清除( 53]。因此,生物合成AgNPs作为抗氧化药物的潜力。尽管DPPH实验是简单和容易的,它有其局限性。样品与过氧化氢自由基可以反应,反应迅速对DPPH(缓慢或者根本不 52]。因此,样本进一步分析使用abt和收紧化验。

图 1 (b)展示了抗氧化活性依赖于abt自由基清除实验。AgNPs与集成电路50304.31抗氧化活性 μ326.83克/毫升(AgNP-L)和 μ克/毫升(AgNP-S)低于CNL和中枢神经系统集成电路50(> 500 μg / mL)。的集成电路50底部钻具组合是小于31.25 μg / mL, C-AgNP,记录为341.81 μ克/毫升。所有测试样品的abt自由基清除抑制显示剂量依赖性的方式。减少自由基是在较高的浓度显著增加。然而,结果还表明,减少样本的abt•+显著低于底部钻具组合( p < 0.05)。基于数据,CNL有更高的活动对于每个浓度和显著不同( p < 0.05)从中枢神经系统。AgNP-L AgNP-S也表现出明显不同( p < 0.05)结果在每一集中,AgNP-L AgNP-S相比具有更高活性的abt扫气。

abt分析定义了如何高效抗氧化剂清除abt和形成abt激进的2,2′-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline-6-sulphonic酸(abt•+)。抗氧化剂作为捐赠代理氢。蓝/绿颜色的abt•+产生反应的abt强氧化剂(过硫酸钾)产生自由基阳离子 54]。

从校准曲线( y= 0.0017 x+ 0.0451; R2= 0.9992),收紧值进行计算,并表示为毫米铁(II) μg的样本( μmol / L铁(II) / μg样本)。使用(FeSO校准曲线确定4.7H2O)。 1 (c)显示了基于收紧测定抗氧化活性的结果。所有测试样品的收紧活动增加剂量依赖性的方式。没有显著差异( p < 0.05)之间的补偿中子测井和中枢神经系统。然而,植物提取物的区别和AgNPs (AgNP-L和AgNP-S)是重要的( p < 0.05),AgNP-L AgNP-S相比表现出更高的活动。在最高浓度AgNPs (500 μg / mL), 872.389 AgNP-L被发现的抗氧化活性 μmol / L铁(II)和AgNP-S [612.770 μmol / L铁(II)]与110.445相比,植物提取物 μmol / L铁(II) (CNL)和152.260 μmol / L铁(II)(中枢神经系统)。

收紧的分析是基于减少铁的抗氧化剂的原则2,4,6-tripyridyltriazine(铁(III) -TPTZ)黑色(铁(II) -TPTZ)复合物。抗氧化剂作为电子给体。最终产品的颜色(Fe (II) -TPTZ)是蓝色的,和抗氧化能力成正比的色彩强度( 55, 56]。

 3.3。细胞毒性的活动

图 2(一个)治疗后显示了MCF-7可行性的比例不同的样本。所有样本显示减少可行的细胞样品的浓度增加。的集成电路50观察到117.43 μg / mL AgNP-S而价值超过200 μ对补偿中子测井g / mL,中枢神经系统,AgNP-L, C-AgNP。当最大样本浓度(200 μg / mL),细胞生存能力使用植物提取更高:补偿中子测井(77.05%)和中枢神经系统(72.10%)相比,合成AgNPs;AgNP-L(57.24%)和AgNP-S (26.47%)。AgNP-L AgNP-S显示,降低细胞生存能力相比C-AgNP (83.27%)。所有样品测试显示显著差异从未经处理的细胞(控制)( p 在100年和200年< 0.05) μ克/毫升浓度。AgNP-L和AgNP-S演示了一个实质性的差异从控制在最低浓度(12.5 μg / mL)。AgNP-S显示最低的细胞生存能力比其他样本(CNL、中枢神经系统、AgNP-L和C-AgNP)。

细胞生存能力72 h后不同浓度(12.5 -200 μ(一)MCF-7 g / mL), (b) HT-29,海拉(c)。的 ∗ 符号( p < 0.05)代表样本和控制之间的显著差异(未经处理的细胞)(平均数±标准差, n= 3)。

图 2 (b)显示比例的可行性HT-29后治疗。所有样本显示浓度增加时降低细胞生存能力。的集成电路50AgNP-L是78.47 μ中枢神经系统g / mL,补偿中子测井,AgNP-S, C-AgNP超过200人 μ克/毫升。的集成电路50研究者用不到12.5 μ克/毫升。最大浓度(200 μg / mL),异常AgNP-L(22.44%)和AgNP-S(74.00%)高于补偿中子测井的植物提取物(73.91%)和中枢神经系统(78.82%)。AgNP-L和AgNP-S显示低可行性C-AgNP相比(65.61%)。所有的样品检查显示显著差异( p < 0.05)的浓度控制在50岁,100年和200年 μ克/毫升。AgNP-L显示更高的灵敏度相对于AgNP-S AgNP-L显示一个很大的区别比控制在最低浓度(12.5 μg / mL)。

图 2 (c)显示治疗后可行的海拉的百分比。的集成电路50AgNP-L是175.35 μ在IC g / mL50补偿中子测井、中枢神经系统、AgNP-S, C-AgNP超过200人 μ12.5 g / mL,研究者用不到 μ克/毫升。在最高浓度的样品(200使用 μg / mL)的细胞毒性效应AgNP-L(43.87%)和AgNP-S(54.33%)高于补偿中子测井的植物提取物(87.72%)和中枢神经系统(90.23%)。AgNP-L和AgNP-S显示高细胞毒性活动C-AgNP相比(79.75%)。所有的样品分析显示巨大的变化在100年和200年的浓度 μ克/毫升。相对于AgNP-S AgNP-L表现出显著差异,并没有显著的12.5的最低浓度 μ克/毫升。

MTS试验被用来确定肿瘤细胞的生存能力(MCF-7 HT-29,和海拉)治疗后样品。MTS的解决方案是基于四唑盐措施可行的细胞的线粒体脱氢酶活性。细胞产生一个暗紫色甲瓒产品当四唑盐是由活跃的线粒体。因此,它可用于测量细胞的生存能力因为反应只发生在活细胞活跃。如果细胞死亡,他们失去了MTS转换成甲瓒的能力( 57]。确定值的形成是基于颜色和直接可行的细胞的数量成正比。

根据调查结果显示,AgNP-L和AgNP-S产生更高的细胞毒性效应相比,植物提取物(CNL和中枢神经系统)。抗增殖活动分为四组根据IC的值50:≤20 μ克/毫升(活动),> 20 - 100 μ克/毫升(适度活跃),> 100 - 1000 μ克/毫升(弱活动),> 1000 μ克/毫升(不活跃) 58]。根据美国国家癌症研究所(NCI),抗癌活性的粗提物被认为是活跃的,如果有一个集成电路50不到20 μ克/毫升( 59]。因此,AgNPs组中的弱活跃IC50AgNP-L价值超过200 μ78.47克/毫升(MCF-7) μHT-29 g / mL, 173.35 μ海拉克/毫升。同时,集成电路50AgNP-S是117.43 μ克/毫升(MCF-7)和超过200人 μ克/毫升(HT-29和海拉)。此外,在以前的实验中,发现3 t3-l1 AgNPs没有细胞毒性,正常小鼠胚胎成纤维细胞( 22]。

线粒体呼吸链的中断AgNPs增加活性氧的产生和DNA损伤由于ATP合成的中断 60]。ROS不断地生成和消除生物系统。癌细胞的死亡提出基于ROS的过度生产(凋亡) 61年, 62年]。诱发细胞凋亡导致的氧化应激损伤细胞的细胞组件( 63年]。此外,积极的银(Ag)+)发布的离子解散AgNPs引起细胞毒性的影响。Ag)+反应的硫醇基抗氧化剂谷胱甘肽和超氧化物歧化酶等,从而导致脂质过氧化,氧化应激,DNA损伤和细胞死亡 64年]。最后,结果表明,AgNPs有细胞毒性影响的癌症细胞系MCF-7, HT-29,海拉。

 4所示。结论

革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌都被AgNP-L AgNP-S,但真菌反应是负面的。此外,AgNP-L和AgNP-S显示最高的抑制 金黄色葡萄球菌和最低抑制 大肠杆菌。这些抗菌活动的结果证明了AgNPs有潜力成为抗菌药物。在DPPH、abt和收紧化验,AgNP-L和AgNP-S表现出显著更大的抗氧化能力( p < 0.05)比植物提取物(CNL和中枢神经系统),这显示潜力的AgNPs抗氧化剂代理。治疗MCF-7 HT-29,海拉,AgNP-L和AgNP-S证明高毒性比补偿中子测井和中枢神经系统类似的浓度。此外,AgNPs拥有显著( p < 0.05)相比,在所有肿瘤细胞毒性控制。最后,AgNPs展示了潜在的抗癌药物。然而,更多的研究是nseeded支持人类癌症治疗的潜力。从研究到目前为止,生物合成AgNPs c .高寒草场简单,环保,有很大的潜在应用纳米药物。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的结果包括在本文中。

 的利益冲突

作者宣称没有利益冲突。

 确认

本研究支持的基础研究资助计划(德意志联邦共和国,参考代码:德意志联邦共和国/ 1/2018 / STG07 /振子结构/ 02/9,帐户代码:203. cippt.6711684)的高等教育,马来西亚。典当Ing赵想表达他的感谢为他提供超声电机振子结构奖学金计划。

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