1。介绍
鼻咽癌(NPC)是最常见的otorhinolaryngological肿瘤类型起源于上皮细胞(
1 ,
2 ]。2018年,新发病率估计为130000例从最新的全球癌症监测报告
3 ]。人大是众所周知的癌症类型,其特征是不同民族和地区特异性(
4 ]。特有的中国,这个恶性肿瘤代表一个变量发生比率从高发病率(中国南方)到低(北方),虽然它是一种罕见的疾病在高加索人(
4 ]。中国南方(如广东、广西)遭受非常高风险的NPC,发病率的比例远远高于世界(
5 ,
6 ]。Nonkeratinized低分化人大与高度恶性肿瘤临床的主要病理类型(
7 ]。高达60 - 70%的新诊断NPC患者已经开发当地先进的病变(
8 ,
9 ]。随着现代放疗和化疗的发展,最初的治疗反应率目前达到90.9%为这些NPC患者晚期(III和IV阶段)
10 ),五年存活率是-86% - 72.3
11 - - - - - -
13 ]。然而,人大经常复发和远处转移的发生率高,尤其是对于那些晚期患者。对他们来说,五年的发病率是20 - 30% (
14 ,
15 )和十年的发病率是30 - 40% (
16 ]。更糟糕的是,治疗反应率下降65.8 - -66.7% (
17 ,
18 ),平均生存时间是14.0 - -27.2个月(
17 ,
19 ]。这些生物学特性和丰富的外周淋巴组织的参与使人大更容易转移和入侵而其他头颈部肿瘤类型。复发和远处转移是NPC患者治疗失败的原因。因此,大部分患者死于肿瘤转移的影响,而不是主要的病变。更好地促进人大预后和新的治疗方法提供了一个理由,这是绝对必要的发现更有前途的生物标志物的人大和揭示其内在的分子机制。
我们之前开发的高通量蛋白质组学分类系统为人大提供高度精确的和创新的方法检测和诊断(
20. ]。在最近的研究中,从244 NPC患者血浆蛋白(第二阶段:36例;第三阶段:104例;第四阶段:104例)和104名健康捐献者筛选发现潜在的小说人大生物标记使用的技巧等压标签进行相对和绝对定量(iTRAQ)和液相色谱串联质谱(质/ MS)。这些NPC患者未接受任何治疗前诊断和排除如果他们有感染、糖尿病、高血压、自身免疫性炎症,和其他疾病。研究结果表明,S100A8和S100A9这些NPC患者的血浆蛋白水平诊断在任何不同临床阶段明显高于健康的捐赠者,建议S100A8 / A9可能是潜在的人大诊断等离子体生物标志物(
21 ]。
S100A8 (calgranulin MRP8)和S100A9 (calgranulin B, MRP14)是一对的钙结合蛋白在S100蛋白家族,通常形成一个异质二聚体复杂calcium-dependent的方式。他们有氨基末端ef-1和羧基末端ef-2手域与低分子量(14000年和13000年,分别)和显示重要的免疫功能(
22 ,
23 ]。肿瘤微环境(时差)是肿瘤发生和转移密切相关。微环境的可溶性因子之间的相互作用和肿瘤细胞癌症发展中扮演很重要的角色
24 - - - - - -
27 ]。S100A8 / A9是一对可溶性分泌炎症因子。他们的主要功能是驱动一个强大的趋化作用影响聚合,附着力,白细胞的迁移,以及放大局部炎症微环境的影响(
28 ,
29日 ]。到目前为止,S100A8 / A9蛋白质的表达在肿瘤组织和他们的角色在人大的微环境仍然是未知的。
在这项研究中,我们会发现S100A8和S100A9蛋白的表达状况在人大组织,进一步揭示了一种建立在分子理论基础上对NPC细胞增殖的影响,移民,和侵略,这可能提供了一个理由NPC治疗预后和小说。
2。材料和方法
2.1。石蜡组织样本
石蜡包埋组织样本和详细的病理诊断信息收集病理部门的附属第一医院,广西医科大学,从2013年1月到2014年6月,病理部门附属肿瘤医院,广西医科大学,从2012年3月到2013年4月。通过仔细调查医疗记录信息,只有这些人大样本包括认为病人没有收到任何放疗、化疗或靶向治疗前诊断和没有干扰的其他疾病,包括感染、高血压、糖尿病、自身免疫性炎症。全国人大组织专业病理学家证实nonkeratinizing未分化癌,和组织浸润的程度(TI),淋巴结转移(LNM)和临床分期(CS)是基于标准的国际癌症控制联盟(UICC,第8版)。人大组织样本的结构很清晰。相关的研究符合赫尔辛基宣言,和患者知情同意和批准的协议是广西医科大学医学伦理委员会(050312)。
2.2。细胞培养和细胞增殖
人类人大细胞系CNE1(高分化),CNE2(低分化),和6-10B(肿瘤发生和转移低)都从细胞湘雅中央银行购买实验室,中国湖南省。所有的细胞系都RPMI 1640培养基培养(HyClone公司,美国)补充10%胎牛血清(Gibco公司、美国),青霉素、链霉素和37°C, 5%的公司2 。CCK8试验进行测试细胞增殖,根据制造商的指示。
2.3。S100A8 / A9解决方案准备
S100A8重组蛋白(美国Amresco人类)和S100A9重组蛋白(美国Amresco人类)在1:混合比和放置在4°C 1 h,形成复杂的(S100A8 / A9)。
2.4。免疫组织化学
S100A8和S100A9人大组织的表达水平和CP通过免疫组织化学方法观察组织(包含IHC)。组织部分(6
μ 米)被用于脱蜡、水化和抗原修复。S100A8单克隆抗体(1:250年,兔子,Abcam,美国)和S100A9单克隆抗体(1:350年,兔子,Abcam,美国)被用于主要抗体孵化;pv - 9000试剂用于二次抗体孵化(北京Zhongshanjinqiao有限公司,中国);民建联的解决方案是用于显色(北京Zhongshanjinqiao有限公司,中国)。部分准备后,一个倒置显微镜(日本奥林巴斯)是用于样本观察。五个领域(200×)被从顶部,下,左,右,和中间,分别为每个样本幻灯片。细胞Sens维度的软件是用来确定阳性染色颜色(褐黄色或棕褐色)和计算的比例在每个视野阳性染色细胞。积极的成像试剂供应商提供的样品作为积极的控制,和PBS代替主要抗体是用作负控制。同样,兔子
β 连环蛋白单克隆抗体(美国Abcam)和兔MMP7多克隆抗体(美国OriGene)也用于蛋白质检测在临床组织。
2.5。Transwell迁移和入侵的实验
的影响S100A8 / A9 NPC细胞的迁移能力被transwell迁移试验测试。CNE1、CNE2 6-10B对数生长期的细胞培养12 h血清饥饿,然后播种的上院transwell (1×105 细胞/)。RPMI 1640中含10%胎牛血清和1
μ g / ml S100A8 A9添加在下议院transwell作为实验组。对照组没有S100A8 / A9每个细胞株蛋白质组。文化24 h后,五个字段(200×,上,下,左,右,和中间,分别)的下表面聚碳酸酯膜拍摄使用倒置显微镜(日本奥林巴斯)。细胞计数和平均价值被统计。
S100A8的影响/ A9 NPC细胞的入侵能力被transwell入侵分析测试。基底膜基质与预冷稀释RPMI 1640培养基比1:6,100
μ l混合物均匀分布在底部的上院transwell室准备基底膜的涂料;随后,基底膜水化使用媒介。以下步骤同上述transwell迁移实验。同样,1
μ g / ml S100A8 A9加入下议院培养基为实验组,而那些没有S100A8 / A9组作为对照组。
2.6。抑制实验p38 MAPK通路和MEK的途径
Transwell试验后进行了p38 MAPK通路封锁使用SB203580检查S100A8的影响/ A9 NPC细胞迁移和入侵。美国SB203580 (CST)溶解在DMSO(美国Amresco)被用于制造10
μ 工作浓度。对数生长期的细胞培养12 h血清饥饿,然后分成两组。实验组:细胞使用SB203580 1 h和培养在RPMI 1640中含10%胎牛血清和1
μ g / ml S100A8 / A9。对照组:细胞使用相同数量的DMSO作为实验组和培养RPMI 1640中含10%胎牛血清和1
μ g / ml S100A8 / A9。Transwell迁移和入侵实验根据上面的实验方法。至于MEK通路封锁,MEK1/2选择性抑制剂AZD6244化合物(美国CST),进行了类似的实验。
2.7。统计数据
所有的实验数据都统计上使用SPSS 16.0软件进行处理。的面积百分比S100A8 S100A9阳性染色细胞被正常和方差齐性检验。他们不符合正态分布,方差是不均匀的。因此,非参数统计方法。不同组之间的比较分析了Mann-Whitney
U 测试。在transwell迁移和入侵实验中,这些测量数据显示为±标准差的意思。这些实验结果符合正态分布。学生的
t 不同群体之间以及用于统计分析。为每个分析三个独立重复实验。的
P
值小于0.05被认为是具有统计学意义的实验。
3所示。结果
3.1。S100A8和S100A9蛋白质经常在临床人大组织
澄清S100A8和S100A9蛋白的表达状况在人大组织,我们进行了免疫组织化学实验观察他们的表情人大49年例慢性咽炎(CP)和20例。有趣的是,我们发现大量的褐黄色染色信号S100A8蛋白质在细胞间隙和肿瘤细胞胞浆的这些人大组织包括阶段II, III和IV,而只有少数褐黄色染色在CP组织(数字
1(一) 和
1 (b) )。同样,大量的褐黄色染色信号S100A9蛋白质也检测到细胞间隙和肿瘤细胞的细胞质的这些人大组织包括阶段II, III和IV,而只有少数褐黄色染色观察S100A9在CP组织(数字
1 (c) 和
1 (d) )。结果表明,丰富S100A8和S100A9蛋白表达在人大组织包括II、III和IV临床阶段,主要分布在柱状上皮间质和NPC细胞的细胞质中。相比之下,只有少数S100A8和S100A9蛋白质存在于CP组织,和他们中的大多数都集中在柱状上皮间质组织。
图1
S100A8和S100A9表情在人大和CP组织免疫组织化学方法检测到的。(a)代表的图像S100A8表达式(褐黄色或棕黄色染色)积极控制(a)(人类宫颈癌组织由Abcam提供),CP组织(b),或人大组织在II期(c),三世(d)、第四(e)(放大200×)。(b)小提琴的情节S100A8阳性染色面积百分比(PSAP) CP和人大组织包括阶段II、III和IV。(c)代表的图像S100A9表达式(褐黄色或棕黄色染色)积极控制(a)(人体脾脏组织由Abcam提供),CP组织(b),或人大组织在II期(c),三世(d)、第四(e)(放大200×)。(d)小提琴的情节S100A8阳性染色面积百分比(PSAP) CP和NPC组织包括阶段II, III和IV。CP,慢性咽炎;全国人大,鼻咽癌。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
(d)
![]()
统计分析结果表明,阳性染色面积百分比(PSAP) S100A8和S100A9 49例NPC组织是11.74(8.08,22.91)和14.97(10.55,21.40),分别是高于0.29(0.07,1.39)和3.21(1.98,3.89),20例CP的组织,显著差异(
z 值−−6.34和5.95,
P
<
0.01
分别)(数据
1 (b) 和
1 (d) 和表
S1 )。
3.2。S100A8和S100A9表达水平与人大临床阶段密切相关
进一步分层分析,阳性染色面积百分比S100A8和S100A9 II, III或IV阶段人大组织都明显高于CP组织(
P
<
0.01
分别)(数据
1 (b) 和
1 (d) 和表
S2 )。此外,积极的染色面积百分比S100A8和S100A9晚期人大(III期或IV期)明显高于早期NPC(第二阶段)(
P
<
0.01
(表分别)
S2 ),而第三阶段和第四阶段并没有统计上的不同(数字
1 (b) 和
1 (d) 和表
S2 )。
重要的是,我们还探讨了相关性阳性染色面积的百分比S100A8和S100A9人大组织和临床特征。我们的数据表明,S100A8和S100A9人大组织的表达水平与性别和年龄无关,组织入侵,和淋巴节转移,但密切相关的临床阶段(
P
<
0.05
(表分别)
S3 )。
3.3。S100A8 / A9刺激促进NPC细胞增殖,迁移和入侵
我们之前发现S100A8 / A9蛋白过表达在NPC细胞,和沉默的内生S100A8 / A9可以显著降低NPC细胞迁移能力(
30. ]。S100A8 / A9一双可溶性分泌炎症因子也检测到细胞间隙中除了这些人大组织的肿瘤细胞细胞质如上表示。探讨外源性S100A8 / A9 NPC细胞增殖的影响,我们对全国人大细胞在不同浓度与S100A8 / A9模仿S100A8 / A9渗透人大微环境和CCK8试验检测细胞增殖。结果表明,所有的三个细胞株CNE1(高分化),CNE2(低分化),和6-10B(低肿瘤发生和转移)已经倾向于增加显著增生的剂量依赖性的方式与S100A8 / A9治疗24小时,虽然仍然没有压倒性的0 - 5的范围内细胞增殖的变化
μ 我们测试了(g / ml S100A8 A9浓度补充图
S1 )。
除了癌症细胞增殖、迁移和入侵,根本在人大转移性传播是关键的临床问题。目前的临床研究表明人大预后与S100A8 / A9蛋白表达丰度显著相关。进一步探索的影响S100A8 / A9蛋白质刺激人大迁移和入侵,我们transwell迁移和入侵进行实验使用这些NPC细胞培养模型。有趣的是,结果表明,低至1
μ g / ml S100A8 A9添加到下议院培养基可能已经大大推动迁移和入侵S100A8 / A9刺激等三个人大细胞系CNE1、CNE2, 6-10B(数字
2(一个) - - - - - -
2 (c) )。此外,我们的受体,可以与S100A8 / A9细胞膜上蛋白质人大使用生物信息学和实验验证。结果表明,愤怒或潜在的受体TLR4 S100A8 / A9,愤怒的封锁或TLR4可能显著影响S100A8 / A9影响人大迁移和入侵(补充图
S2 )。总的来说,这些发现表明,S100A8 / A9刺激促进细胞增殖,迁移和入侵,可能通过受体的愤怒或者TLR4在人大。
图2
外生S100A8 / A9刺激对细胞迁移和入侵NPC细胞包括CNE1、CNE2, 6-10B。下议院是培养基有或没有S100A8 / A9蛋白质(1
μ g / ml)探索NPC细胞的迁移和入侵能力包括(a) CNE1、CNE2 (b)和(c) 6-10B。左面板是代表图像和右面板是量化的。
n = 3,
∗
∗
P
<
0.01
。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
![]()
3.4。S100A8 / A9刺激促进迁移和入侵NPC细胞通过p38 MAPK通路
增殖蛋白激酶(MAPK)途径通常对细胞外刺激和癌症转移。S100A8 / A9促进胃癌的迁移和入侵p38 MAPK通路(
31日 ]。洞察机制如何S100A8 / A9调节人大迁移和入侵和探讨p38激酶是否也参与到这个过程中,一个特定的p - 38抑制剂SB203580被用来阻止p38 MAPK通路。的影响S100A8 / A9 NPC细胞的迁移和入侵能力再次被transwell实验测试。重要的是,结果表明,p38 MAPK通路抑制SB203580预处理后显著降低这些NPC细胞的迁移和入侵能力甚至直接培养在中包含1
μ g / ml S100A8 / A9 (
P
<
0.05
和
P
<
0.01
分别(图
3(一个) - - - - - -
3 (d) ))。然而,我们测试了另一个AZD6244 MAPKs抑制剂,这是一个强有力的,选择性MEK1/2抑制剂控制。结果表明,AZD6244治疗(MEK / ERK通路抑制)不能减少迁移和入侵能力S100A8 / A9刺激所引起的所有三个人大细胞系(补充图
S3 )。这些发现表明S100A8 / S100A9可能促进NPC细胞的迁移和入侵至少通过p38 MAPK通路。
图3
影响外生S100A8 / A9 p38 MAPK通路在NPC细胞刺激。(a)代表图像的影响S100A8 / A9蛋白质人大p38 MAPK抑制剂预处理后的细胞迁移(放大200×)。(b)量化S100A8 / A9蛋白质影响人大p38 MAPK抑制剂预处理后的细胞迁移。
n = 3,
∗
∗
P
<
0.01
。(c)代表图像的影响S100A8 / A9蛋白质p38 MAPK抑制剂预处理后入侵NPC细胞(放大200×)。(d)量化S100A8 / A9蛋白质影响入侵p38 MAPK抑制剂预处理后的NPC细胞。
n = 3,
∗
P
<
0.05
和
∗
∗
P
<
0.01
。
(一)
![]()
(b)
![]()
(c)
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(d)
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3.5。肿瘤侵袭和迁移相关蛋白质<斜体>β< /斜体>连环蛋白和MMP7高架在临床人大组织
我们之前发现S100A8和S100A9击倒可以显著降低基质金属蛋白酶的表达基质金属蛋白酶在人大癌细胞(
30. ]。在目前的研究中,我们进一步探讨了下游信号通路和评估的
β 连环蛋白和MMP7表达水平在临床人大组织和慢性咽炎(CP)的组织,这是两个重要的蛋白在肿瘤细胞入侵和迁移。在这里,组织临床结果表明,丰富
β 连环蛋白和MMP7蛋白表达在人大组织包括II, III, IV临床阶段。相比之下,只有少数
β 连环蛋白和MMP7蛋白质存在于CP组织(数字
4(一) 和
4 (b) 。统计分析结果表明,阳性染色面积百分比(PSAP)
β 连环蛋白和MMP7 42例NPC组织是13.4(9.23,18.52)和19.6(11.44,26.75),分别是高于4.65(2.57,7.19)和0.8(0.32,1.95),9例CP组织,显著差异(
z 值−−3.83和4.59,
P
<
0.01
(表分别)
S4 )。
图4
β 连环蛋白和MMP7表情在人大和CP组织免疫组织化学方法检测到的。(一)代表的图像
β 连环蛋白表达(褐黄色或棕黄色染色)在CP组织或人大组织分阶段II, III, IV(放大200×)。(b)的代表图像MMP7表达式(褐黄色或棕黄色染色)在CP组织或人大组织分阶段II, III, IV(放大200×)。CP,慢性咽炎;全国人大,鼻咽癌。
(一)
![]()
(b)
![]()
重要的是,积极的彩色面积百分比
β 连环蛋白和MMP7 II、III或IV阶段人大组织都明显高于CP组织(
P
<
0.01
(表分别)
S4 )。在进一步分层分析,阳性染色面积的百分比
β 连环蛋白和MMP7晚期人大(III期或IV期)明显高于早期NPC(第二阶段)(
P
<
0.05
和
P
<
0.01
分别),第三阶段和第四阶段并没有统计上的不同(表
S5 )。
4所示。讨论
的表达S100A8 / S100A9和他们的角色在人大组织仍然不是很清楚到当下。在过去的十年里,程等人发现了一些蛋白质包括S100A8和人大组织的S100A9高于正常鼻咽上皮组织(NNET)质谱(MS) (
32 ]。李等人也独立地发现S100A9蛋白质在人大的四倍NNET [
33 ]。其他实验包括免疫印迹随后开展提供更多证据,S100A9可能是一个潜在的生物标志物在人大组织,和S100A9水平显著相关的临床类型人大(
34 ]。然而,目前还不清楚这些S100A8 / A9蛋白质和CP之间的关系,这是人大的早期病变之前,因为这种疾病阶段可能会影响这些小说人大的特异性生物标志物。此外,分子机制由S100A8 / A9蛋白质在人大迁移和入侵目前还不清楚。
在过去的研究中,我们发现血清S100A8 / A9蛋白质大致评估在NPC患者潜在的生物标记物,这是高度与人大相关临床阶段。在目前的研究中,我们进一步发现细胞内和细胞外S100A8 / A9蛋白质在人大组织和CP组织。也观察到类似的结果按照先前的血清的研究。这些S100A8 / A9蛋白质的细胞间隙人大组织和肿瘤细胞的细胞质是明显高于CP的组织。与此同时,我们提供更坚实的证据提取近五十NPC患者S100A8 / A9水平密切相关的临床阶段,和晚期明显高于这些人大组织的早期阶段。以上证据支持的结论是,S100A8 / A9人大组织的表达水平显著升高,临床阶段密切相关。
到目前为止,过表达S100A8 / S100A9蛋白质已经被观察到多种癌症类型包括乳腺癌[
35 ,
36 ),前列腺癌(
37 ,
38 ),膀胱癌(
39 ,
40 ),和结肠癌
41 ,
42 ]。S100A8 / S100A9蛋白质扮演了一个重要的角色在促进癌症扩散和增强他们的转移。我们先前的研究显示,沉默的内生S100A8 / A9可以明显抑制NPC细胞的迁移
30. ]。众所周知,病理刺激鼻咽组织,由细菌/病毒感染或炎症引起,是人大的风险因素(
43 ]。人大癌症细胞和间质细胞之间的交互或免疫细胞包括分泌细胞因子在肿瘤发生[领域扮演重要角色
44 ]。在这里,我们使用外源性S100A8 / A9蛋白质刺激模仿S100A8 / A9渗透人大微环境,在可溶性分泌炎症因子S100A8 / A9蛋白质在细胞间隙和这些人大组织的肿瘤细胞胞浆。有趣的是,我们的研究结果表明,低至0 - 5
μ 克/毫升的浓度S100A8 / A9蛋白质已经倾向于促进NPC细胞增殖。此外,迁移和入侵能力明显增强,低至1
μ g / ml S100A8 A9蛋白质在各种人大细胞系包括low-differentiated CNE2以及high-differentiated CNE1甚至低转移性6-10B。同样,S100A8 / A9浓度相对较低(≤25
μ g / ml)据报道,促进增殖、迁移和入侵乳腺癌细胞(
45 ]。S100A8 / A9蛋白质低至0.4 - 2
μ g / ml也发现促进迁移和入侵能力在结肠直肠癌的一项研究[
46 ]。综上所述,显然从目前发现S100A8 / A9蛋白质刺激可以促进增殖、迁移和入侵NPC细胞处于低浓度水平。
此外,我们还研究了细胞内的通路是否参与S100A8 / A9-stimulated人大迁移和入侵。我们的研究结果表明,这个过程可能涉及到p38 MAPK通路。p38 MAPK通路抑制时,NPC细胞的迁移和入侵能力刺激S100A8 / A9减弱。符合S100A8 / A9人大临床组织中过度表达,肿瘤侵袭和迁移相关的蛋白质
β 连环蛋白和MMP7也提高在这些临床人大组织。因此,这里我们假设中S100A8 / A9可溶性分泌炎症因子在肿瘤微环境可能增强的活动/磷酸化p38 MAPK通路在肿瘤细胞,随后激活转录因子和肿瘤细胞入侵和迁移蛋白表达升高(如MMP7)最后提升NPC细胞增殖,迁移和入侵(图
5 )。众所周知,p38 MAPK途径广泛涉及到肿瘤生长、发展、扩散、入侵、迁移、转移、分化等生理过程。异常或过度激活MAPK信号通路中扮演重要的角色在细胞恶性转化和演变。值得注意的是,类似的机制被瓦解,激活p38 MAPK通路的刺激下外生S100A8 / A9可能加强在乳腺癌细胞增殖
45 )在胃癌或促进细胞迁移和入侵
31日 ]。此外,临床肿瘤转移和入侵/迁移主要是依赖于蛋白质的活动family-matrix金属蛋白酶(mmp),涉及到流程的Wnt /
β 连环蛋白和EMT信号通路
47 ]。最近,S100A8/9被报道在内膜的增生发挥重要作用,促进细胞生长和血管生成通过愤怒信号(
48 ]。荒木等人也为先进的糖化结束产品说明受体(愤怒)的一个主要S100A8 / A9受体,导致NF的激活
κ B (
49 ]。此外,生物的影响通过愤怒和TLR4 S100A8/9造血干细胞血液中促炎细胞因子的分泌过程(
50 ]。此外,S100A8和S100A9诱导激活p38 MAPK信号被toll样受体4 (TLR4)抑制剂
51 ]。这些引用都是我们目前的发现一致。然而,很少有信息来阐明细胞内和细胞外的机制之间的差异受S100A8 / A9蛋白质。尽管如此,在目前的研究中,我们发现细胞内和细胞外S100A8 / A9显示癌症促进角色在人大,和在未来需要进一步的机制探索。
图5
之间的关系的假说SA100A8 / A9蛋白质和人大。
![]()
缩写:
CP:
慢性咽炎
iTRAQ:
等压标签进行相对和绝对定量
质/女士:
液体chromatography-tandem质谱
女士:
质谱分析
时差:
肿瘤微环境
TI:
组织渗透
LNM:
淋巴结转移
CS:
临床阶段
包含IHC:
免疫组织化学
PSAP:
阳性染色面积百分比
MAPK:
增殖蛋白激酶
NNET:
正常鼻咽上皮组织。
数据可用性
和/或使用的数据集分析在当前研究可从相应的作者。
伦理批准
报告涉及人体组织的研究在目前的手稿包括伦理批准和同意的声明,包括道德委员会批准了这项研究的名称和委员会的参考号码。相关的研究符合赫尔辛基宣言,协议是广西医科大学医学伦理委员会批准(050312号)。
同意
协议是通过病人的知情同意。
信息披露
早期的手稿是在研究广场< 10.21203 / rs.3。rs - 127785 / v1 >预印本。
的利益冲突
作者宣称没有利益冲突。
作者的贡献
X.Y.,Y。H。,w . L。,和一个。J。conceptualized the study; N.X., X.Y., Y.C. Q. H., and Z.H. developed methodology; N.X., X.H., X.Y., Y.C., Q.H., and Z.H. validated the study; N.X., Y.C., and Q.H. performed data curation; N.X., B.Z., and Y.H. wrote the original draft of the manuscript; N.X., B.Z., and W.L. wrote, reviewed, and edited the manuscript; X.H. supervised the study, Y.H. and A.J. administered the project and acquired fund. All authors have read and agreed to the published version of the manuscript. Ning Xu, Bei-Bei Zhang, and Xia-Ning Huang contributed equally to this work.
确认
作者感谢梁Zhen-Qiang博士和Jian-chun黄博士的建设性的建议和帮助的项目。这项研究是由科技部的项目广西壮族自治区、中国(Guike AB19110052),广西自然科学基金,中国(2015 gxnsfaa139215)和中国国家自然科学基金(81260405)。
补充材料
补充材料
补充图S1。影响外生S100A8 / A9刺激细胞增殖的NPC细胞包括CNE1、CNE2, 6-10B。细胞治疗与S100A8 / A9在不同浓度的24小时内,分别。
n = 9;
∗
P
<
0.05
;
∗
∗
P
<
0.01
。补充图S2。影响外源S100A8 / A9与受体相关刺激的愤怒和对NPC细胞TLR4包括CNE1、CNE2, 6-10B。(一)生物信息学预测表示愤怒和TLR4的可能的受体S100A8 / A9刺激;(b)实验验证可能的受体包括愤怒(预处理50 nM抑制剂FPS-ZM1 1 h)和TLR4(预处理100 ug / ul抗体阻断1 h) S100A8 / A9 NPC细胞的刺激。补充图S3。影响外生S100A8 / A9刺激另一个NPC细胞MAPK通路(MEK1/2)。(一)代表图像的影响S100A8 / A9蛋白质在NPC细胞迁移MEK1/2抑制剂(AZD6244)预处理;(b)量化S100A8 / A9蛋白质对NPC细胞迁移的影响后MEK1/2抑制剂(AZD6244)预处理。
n = 3;n。,not significant; (c) representative images for the effects of S100A8/A9 proteins on invasion of NPC cells after MEK1/2 inhibitor (AZD6244) pretreatment; (d) quantifications of S100A8/A9 protein effects on invasion of NPC cells after MEK1/2 inhibitor (AZD6244) pretreatment.
n = 3;n。,not significant. Table S1. Comparison of positive staining area percentage (PSAP) of S100A8 and S100A9 in NPC and CP tissues. Table S2. Comparison of positive staining area percentage of S100A8 and S100A9 in NPC at different clinical stages and CP tissues. Table S3. Correlation between positive staining area percentage of S100A8 and S100A9 in NPC tissues and clinical features. Table S4. Comparison of positive staining area percentage (PSAP) of
β 连环蛋白和MMP7人大和CP组织。表S5。比较积极的染色面积的百分比
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