1。介绍
多药耐药性的发展已成为一个全球性问题的严重后果致病菌引起的传染病管理(
1]。这主要是因为不加区别的使用抗生素在人类医疗保健、农业和兽医(
2]。最常见的问题耐多药病原体
鲍曼不动杆菌,西文
βL-producing
大肠杆菌,抗
链球菌引起的肺炎,
肺炎克雷伯菌,vancomycin-resistant
肠球菌,耐甲氧西林
金黄色葡萄球菌,广泛耐药
结核分枝杆菌(
3]。西文
βL组
β-lactamases也以惊人的速度发展有能力水解第三代头孢菌素除了aztreonam [
4,
5]。耐甲氧西林
金黄色葡萄球菌(MRSA)的最重要的原因是院内感染与肺炎、血液感染和手术部位感染(
6]。考虑这些问题,研究者们关注的开发或发现小说代理广谱治疗效力。
在最近的过去文献已经证明了金属纳米粒子的潜在作用的抗菌药物。然而,功能性质的金属纳米粒子可以提高通过绿色合成方法。生物合成的纳米粒子正在寻找一个特别的考虑由于环保相比其他纳米粒子合成的路线
7]。尽管能力的物理和化学方法合成纳米粒子的特定的尺寸和形状,使用有害物质和经济上的可行性较小使他们的应用程序限制(
8]。常用的化学和物理方法是化学还原、离子溅射,溶胶凝胶,等,有更高的能源需求,包括浪费的方法进行了净化(
9,
10]。合成纳米材料的稳定性和再现性使首选绿色合成技术在其他方法(
11]。从藻类纳米粒子已经成功地合成
12),放线菌(
13)、细菌(
14,植物
15)、糖(
16),生物可降解聚合物(壳聚糖)
17),从更多的基质。中提到的方法,plant-mediated合成是更快,需要较小的优化(
18]。
九里koenigii(l)是一个小的芳香树,俗称咖喱树,属于芸香科,有许多传统药用用途。这种植物的绿叶已经使用在印度医疗系统。这种植物的叶子也表明抗高血糖药对大鼠糖尿病条件下的影响(
19]。hydroalcoholic提取的
m . koenigii表明抗氧化剂和抗炎活动类似的标准药物吗
在体外研究[
20.]。水叶提取物有高含量的酚类物质和类黄酮物质具有强力的自由基清除活性(
21]。Ningappa和斯孤立35 kDa叫做咖喱叶蛋白质被发现的蛋白质表现出较高的抗氧化活性(
22]。植物化学的表征发现9-formyl-3-methylcarbazole主要生物碱的存在,9-carbethoxy-3-methylcarbazole, 3-methylcarbazole [
23]。茎皮中提取的
m . koenigii含咔唑生物碱和benzoisofuranone衍生品有强大的抗菌活性
黑曲霉,
枯草芽孢杆菌,
金黄色葡萄球菌,
大肠杆菌,
变形杆菌属寻常的,
白色念珠菌(
24]。咖喱叶的抗氧化蛋白有一个强大的人类红细胞DNA损伤的改善作用引起的氧化应激(
25]。
我们有以前的抗氧化和抗诱变剂的潜力进行了探讨
m . koenigii(
26]。考虑到良好的药用价值
m . koenigii和缺乏绿色合成金属纳米颗粒,树叶的
m . koenigii被用于合成的银纳米粒子。合成纳米颗粒的特点,对多种革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌MDR的抗菌功效详细评估。
2。材料和方法
2.1。植物样品的收集和准备的水提取物
九里koenigii(咖喱叶)收集阿里格尔附近的穆斯林大学(12),阿里格尔,并确定了植物学,植物生物学家阿姆河,阿里格尔。树叶是用蒸馏水洗净去除灰尘和微粒,其次是在室温下阴干。树叶被磨细粉使用搅拌机。5克的叶粉在100毫升蒸馏水混合,加热一小时在100°C。提取然后离心10分钟10000 rpm并使用绘画纸过滤器过滤。提取存储在−20°C为进一步使用。
2.2。检测植物化学物质的颜色测试
化学测试进行检测的主要组phytocompounds提取如前所述[
27- - - - - -
29日]。
2.2.1。测试单宁
干提取(500毫克)煮20毫升的水,然后过滤。几滴FeCl3(0.1%)被添加到观察蓝黑色或棕色绿色的颜色。
2.2.2。测试类黄酮
采用比色检测方法的类黄酮(
27,
29日]。稀氨水(5毫升)与水混合的滤液提取、和集中H2所以4是补充道。黄色的发展表明黄酮类化合物的存在,消失在站。一百毫升的NH3解决方案(1%)被添加到滤液的一部分。黄色颜色再次出现,这一指标类黄酮的存在。
2.2.3。测试苷
少量的植物提取物溶解在水中。1毫升的%添加氢氧化钠的解决方案。外观的黄色颜色确认的存在苷(
30.]。
2.2.4。测试Salkowski萜类化合物的测试
水提物(5毫升)在2毫升氯仿混合,和3毫升的浓缩的。H2所以4增加了通过试管的墙壁仔细。开发接口的红棕色颜色显示萜类化合物的存在。
2.2.5。试验检测的心脏苷Keller-Kiliani测试
水提物(5毫升)是用冰醋酸包含一滴FeCl(2毫升)3解决方案,其次是增加1毫升的浓缩的。H2所以4。棕色环在接口的发展表明deoxysugar强心甾的特征。
2.3。银纳米粒子的合成(AgNPs)水提取物
AgNPs合成,1毫米硝酸银水溶液(AgNO3)准备。首先,AgNO 20毫升3解决方案(1毫米)被添加到0.5,1.0,2.0,和4.0毫升的整除
m . koenigii水提取物。反应被允许发生在50毫升容量的玻璃瓶在室温下,在电磁搅拌器和解决方案保持有力的混合优化AgNO的减少3由植物提取物。最后,结合0.5毫升
m . koenigii提取和20毫升硝酸银水溶液(1毫米)被发现最佳;因此,这个浓度进一步用于这项研究。减少AgNO3对Ag)+证实了离子深棕色的外观,最后变黑。AgNPs形成的
m . koenigii(MK-AgNPs)在11000转离心收获而25分钟25°C。获得的颗粒在烤箱干60°C。0.5毫升的水提物的组合和1毫米AgNO 20毫升3被发现最佳,AgNPs合成组合被用于所有进一步的实验。
2.4。表征纳米粒子合成的植物提取物
采用标准程序的描述MK-AgNPs如前所述[
31日]。
2.4.1。紫外可见光谱分析
使用紫外可见分光光度计MK-AgNPs是初步特征。银纳米粒子的合成减少银离子被记录的紫外可见光谱监测解决方案后一小时间隔,直到没有发现吸光度的变化。的吸光度光谱(300 - 600 nm) AgNP解决方案监控使用Cintra还是10
e分光光度计(GBC科学设备有限公司)和蒸馏水被用于基线校正。
2.4.2。x射线衍射分析
银纳米粒子获得被x射线衍射仪以粉末形式特征。使用CuK获得的衍射模式
α辐射(
λ= 1.54060)和镍单色仪从20°- 80°。晶体的平均尺寸的纳米粒子计算使用谢勒的方程:
(1)
D
=
K
λ
β
因为
θ
,
在哪里
D是纳米颗粒的平均晶粒大小,
λ是x射线源的波长(1.54060),
β是衍射峰的宽度最大值的一半,和K是粉末方程的常数的值从0.9到1.0不等。
2.4.3。红外光谱
红外光谱是一个重要的技术鉴定和表征提供有价值的信息关于一个分子的转动和振动模式。MK-AgNPs被离心水洗三次去离子水摆脱释放或松散连接蛋白质/酶或其他phytocompounds从银纳米粒子的表面。粉MK-AgNPs稀释了KBr(1: 100),和透过率光谱被记录。红外光谱测量进行漫反射率的模式在4厘米−1光谱分辨率使用PerkinElmer傅立叶变换红外光谱仪(两个,PerkinElmer生活和分析科学,CT,美国)。
2.4.4。透射电子显微镜(TEM)
网格是由放置水中悬浮体的MK-AgNPs TEM网格。它被允许在成像之前风干一夜之间。单独的图片在200千伏和放大20000 x 100000 x大学精密仪器设备(USIF),阿姆河,阿里格尔,用透射电子显微镜(乔尔- 2100,东京,日本)。
2.4.5。扫描电子显微镜(SEM)
SEM分析,细粉MK-AgNPs使用。使用房子的图片记录- 6510 lv扫描电子显微镜(JEOL、东京、日本)的加速电压20 kV大学精密仪器设备(USIF),阿姆河,阿里格尔。分析元素成分MK-AgNPs都使用了INCAx-sight EDAX能谱仪(牛津仪器)配备一个扫描电镜。
2.5。评估MK-AgNPs的抗菌活性
2.5.1。菌株
银纳米粒子的合成提取(MK-AgNPs)对三个革兰氏阳性菌株进行抗菌活性检测和四个革兰氏阴性菌株。在革兰氏阳性菌株中,有一个耐甲氧西林
金黄色葡萄球菌(MRSA)和两个methicillin-sensitive
金黄色葡萄球菌(MSSA1和MSSA2)。在革兰氏阴性菌株,三个extended-spectrum
β-lactamase-producing
大肠杆菌(电子商务
βL1,电子商务
βL2和电子商务
βL3)和一个敏感
大肠杆菌(ECS)用于本研究。
2.5.2。琼脂扩散试验
初步MK-AgNPs抗菌活性的评估使用琼脂扩散试验如前所述[
31日]。细菌测试生物都生长在营养肉汤一夜之间获得的克隆形成单位(CFU)∼106每毫升。一百毫升每个Luria-Bertani文化传播的细菌的琼脂板上。琼脂井(8°毫米)是穿孔的帮助下消毒微量吸液管技巧和含有双重蒸馏水,AgNO3解决方案和MK-AgNPs。盘子被孵化18 h在37°C,和直径的抑制区被记录在毫米(mm)。
2.5.3。确定最低抑制浓度(MIC)
麦克风对测试细菌MK-AgNPs决心以96 - microtitre板使用TTC (2、3、5-triphenyl四唑氯)如前所述[
32]。两倍稀释的MK-AgNPs(256 - 08年
μg / ml)热压处理过的媒体取得96 - microtitre板。十毫升overnight-grown文化是每个好,接种和对照组没有包含MK-AgNPs。文化被允许种植在细菌学上的孵化器。指出存在的细菌细胞新陈代谢活跃,30分钟后观察颜色的存在增加10
μ信用证的TTC(2毫克/毫升)。的浓度没有变化的颜色是指出作为麦克风。
2.5.4。确定最低杀菌浓度(MBC)
MBC MK-AgNPs对测试细菌病原体被描述的macrobroth稀释试验评估通过与一些修改(安萨里等人
33]。包含MK-AgNPs细菌培养都生长在媒体,和集团与MK-AgNPs被控制。两个不同浓度的稀释(256 - 16
μg / ml)是确定MBC选择治疗。overnight-grown文化被飞速琼脂板从每个浓度来确定MBC治疗。
2.5.5。生长曲线分析
MK-AgNPs在生长动力学的影响
大肠杆菌和
金黄色葡萄球菌隔离是由光密度测量监控
34]。两倍稀释的银纳米粒子从256年
μ8 g / ml
μ克/毫升无菌取得96 - microtitre板在营养肉汤。十毫升overnight-grown文化(∼106CFU /毫升)接种在含有不同浓度的MK-AgNPs每个好。井只包含媒体作为对照组,并且每个浓度三复制了。所有治疗和治疗样品盘子孵化20 h在37°C。的OD620海里记录每隔2 h使用标(热科学Multiskan前,裁判51118170,中国)。平均三个复制被送往阴谋每个文化的生长曲线在每个纳米颗粒的浓度。
4所示。结论
在这项研究中,一个环保的方法来合成纳米颗粒水提物的使用
m . koenigii是发达国家。表征MK-AgNPs显示粒子球状的形状和粒度分布范围的5 - 20纳米银含量为60.86%。MK-AgNPs有效抑制测试病原体的生长在营养琼脂板上不同区域的抑制。不同菌株的麦克风
金黄色葡萄球菌是32
μ克/毫升,而不同的菌株
大肠杆菌显示不同范围的麦克风(16 - 64
μg / ml)。有大约90%的增长为所有菌株的抑制作用
金黄色葡萄球菌32岁
μMK-AgNPs g / ml。这个发现显示,MK-AgNPs表现出更广泛的活动对革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌耐多药。绿色合成银纳米粒子的方法,特别是对于抗菌目的反对人类病原体,打开一个抗菌药物发现的新路径。这项研究清楚地揭示了一个令人鼓舞的
在体外MK-AgNPs的功效,可用于局部应用对MDR细菌经过仔细
在活的有机体内调查。