BCA 生物无机化学与应用 1687 - 479 x 1565 - 3633 Hindawi出版公司 10.1155 / 2015/416751 416751年 研究文章 识别代码ZNF191(243 - 368)及其与DNA的相互作用 赵 Dongxin 1 黄 忠县 2 Pettinari 克劳迪奥。 1 化学和化学工程学院 河南科技大学 郑州450001 中国 haut.edu.cn 2 化学系 复旦大学 上海200433 中国 fudan.edu.cn 2015年 20. 9 2015年 2015年 29日 05年 2015年 02 09年 2015年 20. 9 2015年 2015年 版权©2015 Dongxin赵和忠县黄。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

ZNF191(243 - 368)的c端地区ZNF191包含四个半胱氨酸的假定的dna结合域2他的2锌指图案。在这项研究中,一个融合蛋白的表达载体的ZNF191(243 - 368)与glutathione-S-transferase(销售税)构造和转化 大肠杆菌BL21。融合蛋白GST-ZNF191(243 - 368)是使用这个向量表示调查protein-DNA绑定通过亲和反应选择策略的基础上,结合质量的锌指域。结果表明,ZNF191(243 - 368)能选择性地结合序列与基因含有一个AGGG核心和反应。然而,半胱氨酸的识别机制2他的2锌指蛋白DNA需要进一步调查。

 1。介绍

Kruppel-type (C2H2)锌指无处不在的主题介导sequence-specific识别DNA和广泛存在于真核生物。这种锌指蛋白还可以结合DNA, RNA,或其他蛋白质和承担重要的角色在不同的生物功能,包括细胞分化和胚胎发育( 1- - - - - - 3]。先前的研究探讨了晶体/ NMR结构和dna结合蛋白的锌指蛋白,和一些工作报告预览小说的识别网站的可能性C2H2锌指蛋白序列分析( 4- - - - - - 7]。然而,这些观察不足以确认每一个氨基酸残基的识别代码( 8, 9]。因此,获得锌指蛋白的特定dna序列和了解他们的功能仍然具有挑战性。

一般来说,小说锌指蛋白的DNA结合蛋白序列与未知sequence-specific DNA识别可以由随机寡核苷酸选择或筛选从整个基因组的一个图书馆 10- - - - - - 12]。然而,大量的DNA序列必须确定,和达成共识的DNA序列推测接触典型的蛋白质必须提供由电脑分析。计算结果还必须通过实验来验证。实验的结果可能不符合这些推导氨基酸序列,因为几个因素的影响在一个锌指蛋白的识别代码。

ZNF191基因识别从cDNA图书馆来自人类的肝脏。这个基因位于人类染色体18 q12.1和一些遗传和肿瘤相关疾病( 13, 14]。ZNF191编码368个氨基酸的蛋白质,其中包括一个假定的dna结合域四个半胱氨酸2他的2锌指图案在c端地区。ZNF191(243 - 368),锌指蛋白ZNF191,想必绑定到一个特定的DNA序列作为ZNF191的主要功能区域。一些研究报道的AT-binding倾向ZNF191 (243 - 368)。然而,实际功能和dna结合蛋白的ZNF191(243 - 368)尚不清楚。

本研究旨在阐明ZNF191的功能(243 - 368)在蛋白质水平。我们表达和纯化的融合蛋白glutathione-S-transferase(销售税)和ZNF191(243 - 368),利用特定亲和力的销售税琼脂糖4 b树脂选择特定绑定的DNA。结果表明,ZNF191的共识结合位点(243 - 368)有一个“AGGG”有牵连的核心和半胱氨酸的化学sequence-specific识别规则2他的2DNA应该谨慎使用。

 2。材料和方法 2.1。建筑的融合蛋白表达质粒

cDNA片段编码产生的锌指地区ZNF191被PCR subcloned创建GST融合蛋白。下面的寡核苷酸引物(联合基因公司、上海、中国)被用于PCR克隆:P1 (5′-CGCGGATCCAGAAATCCCTCTCGAAAGAAACAA-3′);P2 (5′-TCCCCCGGGTTAAACTTCCACAACATTCAGAAG-3′)。PCR模板pTSA-ZF向量( 14]。ZNF191(243 - 368)基因放大使用上底漆P1 (Bam嗨介绍网站)和降低底漆P2(我的网站介绍了Sma)。扩增片段菌进行基因和pGEX-4T-2 (Amersham法玛西亚)向量孵化了Bam嗨我Sma,分别由电泳凝胶纯化,然后和结扎混合使用T4连接酶(生物学实验室)。结扎产品转化为BL21宿主菌株。细菌克隆测序,重组向量被任命为pGEX-ZF [ 15]。

 2.2。生产过剩和锌指融合蛋白纯化

包含100 LB培养基(50 mL) μg / mL氨苄青霉素接种一个新鲜采摘的殖民地其中包含表达质粒pGEX-ZF然后孵化一夜之间在37°C。隔夜文化稀释100倍在500毫升的2次中,然后在37°C OD600年= 0.6。Isopropylthio - β -D-galactoside随后添加到最后一个0.5毫米的浓度,和细胞诱导3 h在30°C。细胞被离心收获(6000 rpm和4°C),在100毫升resuspended冰冷PBS (pH值7.4)与10毫米 β巯基乙醇,然后细胞溶解,溶菌酶在4°C约30分钟。混合物添加1% Triton x - 100, 1毫米PMSF和5 U /毫升DNase我(桑戈语公司、上海、中国)与搅拌30分钟在4°C帮助蛋白质溶液化然后在15000 rpm离心机在4°C 30分钟。上层清液的混合10毫升的谷胱甘肽琼脂糖4 b浆(Amersham法玛西亚生物技术),然后动摇了30分钟。关联矩阵是广泛用PBS直到OD280年< 0.02,然后GST融合蛋白中筛选了一种洗脱缓冲(50毫米三,100毫米减少谷胱甘肽,pH值8.0)。筛选了解决方案集中使用Amicon YM-10(微孔),通过交联葡聚糖G75列。纯化的融合蛋白与树脂混合后绑定的实验。

 2.3。锌指Protein-DNA-Binding化验

绑定的DNA ZNF191(243 - 368)获得了使用一个随机寡核苷酸池。一个60-base寡核苷酸单链DNA包含18个随机基地的核心区域两侧21-base地区定义序列作为模板合成了一系列5′-ATTCAGATCTTAAACACAGGA…N18…GTGATGCTCGGTACCCTAAAG-3′。以下引物被用于PCR: A1 (5′-CGCGGATCCATTCAGATCTTAAACA-3′)和A2 (5′-TTCCCCGGGCTTTAGGGTACCG-3′)。双链DNA片段的混合物是通过空斑形成单位聚合酶(生物学实验室)通过10周期的变性(94°C, 1分钟),退火(56°C, 1分钟),和扩展(72°C, 1分钟)。PCR产品最初处理苯酚/ CHCl3然后用乙醇沉淀。这些dna与GST-ZNF191孵化(243 - 368)融合蛋白绑定到谷胱甘肽琼脂糖4 b(如前所述)准备在4°C的30分钟绑定缓冲(0.2毫克/毫升保利(dI-dC)(σ),0.2毫克/毫升BSA(生物学实验室),25毫米玫瑰(pH值7.5),100毫米氯化钾,0.1毫米ZnSO410毫米MgCl2,0.1%诺乃清洁剂p 40, 1毫米德勤,5%甘油][ 11]。树脂珠子是离心机和洗四次绑定缓冲。绑定寡核苷酸从珠子使用筛选了洗脱缓冲,然后煮10分钟的H2o .离心后,上清液用于PCR扩增引物P1和P2。经过三轮的选择放大,PCR产品消化和Bam嗨Sma我和克隆到pGEX-4T-2向量。重组载体转化成 大肠杆菌,殖民地测序获得的。

 2.4。紫外可见吸收光谱

的紫外光谱GST-ZNF191(243 - 368)融合蛋白,销售税,ZNF191(243 - 368)被记录在一个惠普8453二极管阵列分光光度计(美国)。蛋白质溶液的浓度(pH值7.5)与10毫米Tris-HCl通过布拉德福德的检测方法,这是1 μ摩尔·L−1。

 2.5。圆二色性(CD)光谱

圆二色性光谱GST-ZNF191(243 - 368)融合蛋白,销售税,ZNF191(243 - 368)记录在190年和250 nm J720 Jasco分光偏振计。的光学路径长度是10毫米,蛋白质溶液的浓度(pH值7.5)与10毫米Tris-HCl是1 μ摩尔·L−1。录音在25°C。

 2.6。荧光测量

两个合成和纯化DNA DNA结合活性的工器被用来探测ZNF191利用荧光光谱(243 - 368)。DNA包含一个序列获得GGAGGGTGGTTA (DNA1),另一个包含12个bp主题GAAATAATGTTA (DNA2),根据先前的报道( 8]。

dna结合蛋白研究中执行一个缓冲区(pH值8.0)包含50 mM Tris-HCl氯化钠和10毫米。滴定过程进行了通过添加蛋白原液,GST-ZNF191(243 - 368),或销售税1毫升的缓冲区包含500 nmol·L−112个基点的寡核苷酸双工和1 μ摩尔·L−1溴化乙锭(EB)。

荧光发射光谱得到在卡里Eclipse荧光光谱仪(瓦里安公司)在550 - 700海里的激发波长540 nm 1厘米×0.5厘米荧光试管在20°C。所有荧光测量的入口和出口缝保持在10纳米。

 3所示。结果与讨论 3.1。构建质粒和融合蛋白的表达

DNA序列的重组质粒pGEX-ZF, ZNF191的n端(243 - 368)基因与糖基的GST基因。因此,这种融合基因表达了40 kDa蛋白质包含四个C2H2类型串联锌指图案融合蛋白的糖基。细菌表达GST-ZNF191(243 - 368)被谷胱甘肽琼脂糖4 b和交联葡聚糖提纯G75列按照先前所描述的方法。利用sds - page分析纯化后的蛋白显示了预期大小的著名乐队融合蛋白(图 1)。纯化的融合蛋白绑定到树脂后,混合物被用于以下实验有约束力。

sds - page GST-ZNF191(243 - 368)融合蛋白。G75巷1:蛋白质纯化,巷2:蛋白质标记,和巷3:蛋白质亲和树脂纯化。

 3.2。Affinity-Based选择dna结合蛋白

预测结构的四个C2H2锌指域和基因本地化表明ZNF191(243 - 368)是一种dna结合蛋白。确定dna结合蛋白的ZNF191(243 - 368),我们使用了随机寡核苷酸绑定选择策略如前所述。两个关联过程参与选拔程序,即GST-ZNF191的绑定(243 - 368)矩阵的蹩脚谷胱甘肽琼脂糖4 b和绑定的随机寡核苷酸锌指蛋白(图 2)。类似的绑定实验的随机寡核苷酸消费税蛋白质进行控制。

DNA的示意图表示选择的GST-ZNF191 (243 - 368)。谷胱甘肽琼脂糖4 b受GST融合蛋白。与此同时,锌指蛋白DNA识别序列结合,从而固定在谷胱甘肽琼脂糖4 b DNA。

基于关联,我们获得的dna结合网站ZNF191(243 - 368)通过一系列的洗涤和放大过程。我们终于转移这些DNA序列到pGEX向量,然后这个质粒测序。DNA序列得到了强烈结合蛋白质(图 3)。

对齐寡核苷酸绑定到ZNF191评选出来的69年(243 - 368)。有51个序列(74%)包含AGGG主题或类似AGGA, AGGT AGGC主题和内容的GC其他人高。

 3.3。dna结合活性

选中的dna序列的网站GST-ZNF191(243 - 368)进行了比较。在69年克隆,38例(55%)有一个AGGG序列,和类似的序列AGGC AGGT, 7 AGGA在场,4,分别和2克隆。因此,51例(74%)产生的克隆被发现含有一种“gg”的核心。虽然“gg”核心是剩余序列外,几个序列相似的序列AGCG和ACGG。此外,GC含量高。这些结果表明,GST-ZF结合更强烈AGGG序列比另一个序列。

在比较这些序列含有AGGG和计算的概率基地AGGG之前和之后,我们认为绑定序列(G) (G) AGGG (G)(表 1)。

推导的ZNF191结合位点(243 - 368)的共识。

基地选择 百分比(%) 结合位点
G C 一个 T G C 一个 T 5′3′
20. 7 8 9 45 16 18 20. G
24 9 4 7 55 20. 9 16 G
0 0 44 0 0 0 One hundred. 0 一个
44 0 0 0 One hundred. 0 0 0 G
44 0 0 0 One hundred. 0 0 0 G
44 0 0 0 One hundred. 0 0 0 G
23 4 11 6 52 9 25 14 G
14 11 9 10 32 25 20. 23 G / C / A / T

绑定序列的基地在结合位点指定1到8列。比较这些序列包含AGGG有时出现两次在一个序列,基地选择的列中的数字表明每个基地的频率出现在1 - 8的位置。比例列中的每个数字显示的百分比包含在指定的位置,基地选择的寡核苷酸。

 3.4。真核生物启动子数据库

ZNF191广泛表达于人体器官和可能是相关的一些遗传疾病和癌症。因此,基因含有AGGGG核心的目标基因可能ZNF191 (243 - 368)。我们搜查了基因在真核生物启动子数据库包含GGAGGGG [ 16]。许多基因启动子控制的结合位点ZNF191(243 - 368),如AHSA1 NOSIP,ρ,和HIVEP2与转移性前列腺癌,神经元NOS活性,视紫红质变性、和免疫缺陷( 17- - - - - - 20.]。否则许多染色体开放阅读框架,对接蛋白质,转录因子,锌指蛋白也包含这个序列( 21- - - - - - 24]。这些表明ZNF191广泛表达于人体器官可能与许多生理过程和疾病有关。

基因含有ZF-binding网站可能与ZNF191反应(243 - 368)。然而,我们不能排除另一种可能性,DNA序列没有这种蛋白质的生物结合位点。除了锌指蛋白领域影响dna结合特性,一些残留在锌指域也参与识别。此外,已知的化学规则基于锌指主题应该谨慎使用。进一步研究ZNF191锌指蛋白与DNA正在进行。

 3.5。紫外可见吸收光谱

不同的紫外光谱GST-ZNF191(243 - 368)融合蛋白的紫外光谱和销售税是通过减去销售税的GST-ZNF191(243 - 368)(图 4)。结果表明ZNF191(243 - 368)融合蛋白保持其结构的芳香族氨基酸残基的吸收在260 nm - 280 nm的吸收Zn-S债券约230海里( 25, 26]。此外,几个发色团的吸收销售税超出线性范围不能完全从光谱推断,从而导致在200 nm的显著差异。

不同的紫外光谱GST-ZNF191(243 - 368)和销售税。实线是紫外光谱ZNF191(243 - 368),虚线是不同的紫外光谱GST-ZNF191(243 - 368)和销售税。

 3.6。CD光谱测量

不同的CD谱GST-ZNF191(243 - 368)和销售税表明ZNF191(243 - 368)的融合蛋白也有两个负峰值约210和220海里和积极的在大约190海里的高峰 α螺旋(图 5)。因此,ZNF191(243 - 368)的融合蛋白还维护一个第二结构( 27- - - - - - 30.]。

不同的CD谱GST-ZNF191(243 - 368)和销售税。实线是CD谱ZNF191(243 - 368),虚线是不同的CD谱GST-ZNF191(243 - 368)和销售税。

 3.7。Protein-DNA复合物的结合常数

荧光光谱被广泛用于探测protein-DNA交互。绑定曲线可以生成蛋白质溶液滴定到DNA的解决方案,和离解常数( K d )可以得到分析结果曲线。的EB成DNA的解决方案提高了荧光强度的变化。

EB和ZNF191(243 - 368)与DNA结合三分量的竞争系统Scatchard方程的基础上: r / c = K ( n - - - - - - r ) ( 31日- - - - - - 33]。关联可以被描述为 (1) r E c E = n - - - - - - r E K E 1 + K P c P , (2) r P c P = n - - - - - - r P K P 1 + K E c E , 在哪里 r E 和 r P 是绑定的比率EB DNA或蛋白质浓度的总浓度; c E 和 c P 分别自由EB的浓度和蛋白质; n 在每个绑定号码是寡核苷酸;和 K E 和 K P 是EB的协会常数与DNA和蛋白质,分别。

从( 1)和( 2),( 3)可以获得如下: (3) n - - - - - - r E K E c E r E - - - - - - 1 = r P 1 + K E c E n - - - - - - r P 和 c E = ( ( F 0 - - - - - - F ) / ( F 0 - - - - - - F ∞ ) ] c E 0 ,在这 F 0 和 F 的荧光强度EB-DNA系统没有和蛋白质,分别和 c E 0 EB的总浓度,这是一个已知的数量。因此,只有 r P 是未知的( 3)。根据这个公式 c P = c P 0 - - - - - - r P c D 0 ,我们可以计算和替代 r P 到( 2)获取绑定常量 K P 的蛋白质和DNA。

图 6显示了融合蛋白和DNA的荧光光谱。在此系统中, n和 K E 0.2和5.0×10吗7L·摩尔−1分别为( 34, 35]。因此,协会常数 K P GST-ZNF191(243 - 368)与DNA可以计算方程。结果如表所示 2。

的价值 K P ZNF191(243 - 368)和DNA。

K P (L /摩尔)
GST-ZNF191 (243 - 368) / DNA1 3所示。8 × 107
GST-ZNF191 (243 - 368) / DNA2 5.4 × 106
I323W 一个 3.2 × 106
R327W 一个 3.6 × 106

一个 从pTSA / BL21 (DE3)系统;的突变体ZNF191(243 - 368),并使用DNA序列DNA2相似。

荧光光谱的EB-DNA1滴定ZNF191 (243 - 368)。 C D N 一个 = 0.5 μ摩尔·L−1, C E B = 1 μ摩尔·L−1,从上到下来, C p r o t e 我 n / C D N 一个 = 0,0.1,0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7,0.8,0.9,1.0,分别。

锌指蛋白更强烈结合DNA1 DNA2。此外,绑定DNA2接近以前的研究的结果,两种突变体蛋白的ZNF191(243 - 368)从pTSA净化/ BL21 (DE3)系统( 15]。因此,融合蛋白可以用来研究protein-DNA三分量的荧光方法系统交互的高度敏感和选择性EB荧光探针。此外,锌指蛋白之间的结合常数和DNA1从实验获得3.8×107L·摩尔−1,这是近一个数量级高于锌指蛋白和DNA2,和非常接近其他锌指蛋白和DNA ( 36, 37]。因此,我们推断ZNF191之间的强相互作用(243 - 368)和GGAGGG,可提供有用的信息对于理解的功能ZNF191 (243 - 368)。

然而,这个结果与报道的不同于et al。这种差异可以归因于几个因素的影响对锌指蛋白的识别DNA。例如,其他地区的临界残留(s) ZNF191可以诱导DNA弯曲,这促进了容易绑定的锌指蛋白 38- - - - - - 40]。扫描框位于前ZNF191(243 - 368)在DNA识别(也有重要作用 41, 42]。此外,合作互动的各种蛋白质组件是一个因素 43, 44]。

 4所示。结论

ZNF191(243 - 368)能选择性地结合序列与基因含有一个AGGG核心和反应。但是蛋白质的锌指域并不是唯一的因素影响dna结合特性;一些残留在锌指域也参与了认可。已知的化学规则基于序列的锌指基序应该谨慎使用。进一步研究ZNF191锌指蛋白与DNA正在进行。

 利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 承认

这项工作是由中国国家自然科学基金(没有。21301050)。

 伯格 j . M。 史 Y。 生物学的电镀:对锌的作用越来越大 科学 1996年 271年 5252年 1081年 1085年 10.1126 / science.271.5252.1081 2 - s2.0 - 0029866646 Razin s V。 Borunova 诉V。 Maksimenko o . G。 Kantidze o . L。 半胱氨酸2他的2锌指蛋白家族:分类、功能和主要成员 生物化学 2012年 77年 3 217年 226年 10.1134 / s0006297912030017 2 - s2.0 - 84862653087 克鲁格 一个。 锌指的发现及其发展为实际应用在基因调控和基因操作 生物物理学的季度评估 2010年 43 1 1 21 10.1017 / s0033583510000089 2 - s2.0 - 77952280117 Greisman h·A。 Pabo c . O。 总体战略选择多样化的高亲和性锌指蛋白DNA目标站点 科学 1997年 275年 5300年 657年 661年 10.1126 / science.275.5300.657 2 - s2.0 - 0031053362 乌尔夫 美国一个。 Nekludova l Pabo c . O。 DNA识别由半胱氨酸2他的2锌指蛋白 年度回顾的生物物理学和生物分子结构 2000年 29日 183年 212年 10.1146 / annurev.biophys.29.1.183 2 - s2.0 - 0033624684 布朗 r S。 锌指蛋白:控制RNA 当前结构生物学的观点 2005年 15 1 94年 98年 10.1016 / j.sbi.2005.01.006 2 - s2.0 - 13844297911 里索 答:一个。 萨勒诺 p E。 Bezsonova 我。 Korzhnev d . M。 人类的核磁共振结构Rad18锌指与泛素定义了一类复杂UBZ域蛋白质与DNA损伤反应 生物化学 2014年 53 37 5895年 5906年 10.1021 / bi500823h 周 J。 刘 y Q。 唐 l . M。 腾 x C。 唐 N。 黄 z . X。 荧光光谱的ZNF191(243 - 368)突变体I323W R327W寡核苷酸 科学在中国系列B:化学 2003年 46 1 64年 74年 Persikov 答:V。 辛格 M。 从头预测半胱氨酸的dna结合蛋白特异性2他的2锌指蛋白 核酸的研究 2014年 42 1 97年 108年 10.1093 / nar / gkt890 2 - s2.0 - 84891757744 Swirnoff a . H。 米尔 J。 dna结合蛋白特异性的ngfi - a和锌指转录因子有关 分子和细胞生物学 1995年 15 4 2275年 2287年 2 - s2.0 - 0028900074 Zweidler-Mckay p。 格里姆斯 h·L。 Flubacher M . M。 Tsichlis p . N。 Gfi-1编码核锌指蛋白结合DNA转录抑制因子和功能 分子和细胞生物学 1996年 16 8 4024年 4034年 2 - s2.0 - 0029897536 从事 k W。 福格斯坦 B。 GLI基因编码一个核蛋白质结合特定的序列在人类基因组中 分子和细胞生物学 1990年 10 2 634年 642年 2 - s2.0 - 0025156778 刘 g . Y。 江 s M。 王 c·J。 江 W。 刘 z L。 刘 C。 Saiyin H。 杨 X。 沈 年代。 江 D。 周 P。 汉 D。 胡 X。 易 Q。 余 l 191年锌指转录因子,直接绑定 β连环蛋白启动子,促进肝细胞癌的细胞增殖 肝脏病学 2012年 55 6 1830年 1839年 10.1002 / hep.25564 2 - s2.0 - 84861544445 刘 y Q。 余 l 余 w·H。 锌指蛋白表达和纯化的小说 中国科学:系列B 1999年 29日 5 475年 480年 赵 D.-X。 腾 X.-C。 丁 Z.-C。 黄 Z.-X。 表达和纯化ZNF191(243 - 368)在三个表达系统 中国化学杂志 2007年 25 11 1739年 1742年 10.1002 / cjoc.200790321 2 - s2.0 - 37049031929 斐瑞尔 r . C。 Praz V。 Junier T。 博纳尔 C。 机械舞 P。 真核生物启动子数据库(环保署) 核酸的研究 2000年 28 1 302年 303年 10.1093 / nar / 28.1.302 2 - s2.0 - 0343776188 卡马乔 l Meca-Cortes O。 很糟 j·L。 加西亚 年代。 卢比奥 N。 迪亚兹 一个。 Celia-Terrassa T。 Cingolani F。 Bermudo R。 费尔南德斯 p . L。 布兰科 J。 戴尔嘎多 一个。 卡萨斯 J。 Fabrias G。 汤姆森 t M。 酸ceramidase作为转移性前列腺癌的治疗目标 脂质研究期刊》的研究 2013年 54 5 1207年 1220年 10.1194 / jlr.M032375 2 - s2.0 - 84876797558 德雷尔 J。 施莱歇尔 M。 Tappe 一个。 先令 K。 库恩 T。 Kusumawidijaja G。 muller - esterl W。 海洋能 年代。 库恩 R。 一氧化氮合酶(NOS)相互作用的蛋白质与神经元NOS和调节其分布和交互活动 《神经科学杂志》上 2004年 24 46 10454年 10465年 10.1523 / jneurosci.2265 - 04.2004 杜塔 一个。 Altenbach C。 Mangahas 年代。 Yanamala N。 加德纳 E。 哈贝尔 w . L。 Klein-Seetharaman J。 胞外和胞质域的微分动力学变性视紫红质 生物化学 2014年 53 46 7160年 7169年 10.1021 / bi401557e 2 - s2.0 - 84913597681 吴 Y。 高 H。 李 H。 Tabara Y。 Nakatochi M。 赵 Y.-F。 公园 e . J。 温 W。 阿黛尔 l S。 周岁以下 j·B。 蔡 Q。 常 研究。 陈 P。 Croteau-Chonka d . C。 福格蒂 m P。 氮化镓 W。 他 C.-T。 胸 c。 胡 C.-M。 Ichihara 年代。 Igase M。 乔 J。 加藤 N。 川 R。 库扎瓦 c·W。 李 j·j·M。 刘 J。 陆 l 麦克达德 t·W。 大泽生 H。 张文雄 w·h。 张志贤 Y。 Vadlamudi 年代。 面包车大坝 r·M。 王 Y。 香 Y.-B。 山本 K。 叶 X。 年轻的 t . L。 郑 W。 朱 J。 蜀 X.-O。 胫骨 C。 Jee s . H。 壮族 L.-M。 杨爱瑾 T。 横田 M。 林 X。 Mohlke k . L。 大 大肠。 全基因组关联研究的荟萃分析脂联素水平在东亚人识别WDR11-FGFR2附近一个新颖的轨迹 人类分子遗传学 2014年 23 4 1108年 1119年 10.1093 /物流/ ddt488 2 - s2.0 - 84893008349 范·休伊特 r·a·C。 Estrada-Cuzcano 一个。 Banin E。 Rotenstreich Y。 Hipp 年代。 科尔 年代。 Hoyng c . B。 窝荷兰人 答:我。 科林 r·w·J。 Klevering b . J。 临床特点的视杆细胞和视锥感光C8orf37基因的突变患者营养不良 调查眼科及视觉科学 2013年 54 7 4683年 4690年 10.1167 / iovs.12 - 11439 2 - s2.0 - 84880094238 伯杰 a . H。 妮基 M。 Morotti 一个。 泰勒 b S。 Socci n D。 Viale 一个。 布伦南 C。 Szoke J。 Motoi N。 罗斯曼 p . B。 Teruya-Feldstein J。 杰拉尔德 w . L。 Ladanyi M。 Pandolfi P P。 识别的辩经肺肿瘤抑制基因 自然遗传学 2010年 42 3 216年 223年 10.1038 / ng.527 2 - s2.0 - 77649191497 格兰特 t·J。 主教 j . A。 Christadore b . M。 巴洛特 G。 下巴 h·G。 伍德森 年代。 Kavouris J。 Siddiq 一个。 Gredler R。 沈 X.-N。 谢尔曼 J。 他不 T。 菲茨杰拉德 K。 普拉丹 年代。 布里格斯 l。 安德鲁斯 w·H。 Sarkar D。 范围内 s E。 汉森 U。 抗增殖小分子抑制剂转录因子LSF揭示LSF在肝细胞癌癌基因依赖 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国 2012年 109年 12 4503年 4508年 10.1073 / pnas.1121601109 2 - s2.0 - 84858692193 叶 c·G。 陈 G·G。 何 r·l·K。 商人 j·L。 他 >。 赖 p·b·S。 贝克的表观遗传upregulation理- 89抑制肝细胞癌的生长 Biochimica et Biophysica学报 2013年 1833年 12 2970年 2979年 10.1016 / j.bbamcr.2013.08.001 2 - s2.0 - 84883351025 Besold a . N。 李 美国J。 米歇尔 s . l . J。 苏 n . L。 Cymet h·J。 功能描述iron-substituted神经锌指因素1:金属和DNA结合 生物无机化学》杂志上 2010年 15 4 583年 590年 10.1007 / s00775 - 010 - 0626 - 1 2 - s2.0 - 77953346318 赵 D.-X。 丁 Z.-C。 刘 Y.-Q。 黄 Z.-X。 超表达和纯化单一锌指人类ZNF191锌指蛋白的多肽 蛋白表达和纯化 2007年 53 1 232年 237年 10.1016 / j.pep.2006.12.009 2 - s2.0 - 33847156758 Cerpa R。 科恩 f·E。 王桂萍 i D。 在设计肽构象转换:螺旋/表过渡 折叠和设计 1996年 1 2 91年 101年 10.1016 / s1359 - 0278 (96) 00018 - 1 2 - s2.0 - 0030342681 Trindade d . M。 席尔瓦 j . C。 纳瓦罗 m . S。 Torriani i . C。 Kobarg J。 人类Stanniocalcin-1低分辨率的结构的研究 BMC结构生物学 2009年 9日,第五十七条 10.1186 / 1472-6807-9-57 2 - s2.0 - 70349934950 Brkljača Z。 Čondić-Jurkić K。 史密斯 其子a.s.。 史密斯 d . M。 计算的CD谱肽构象的相空间:Met-enkephalin及其不自然的情况下模拟 理论和计算化学杂志》上 2012年 8 5 1694年 1705年 10.1021 / ct200868y 2 - s2.0 - 84860746721 Carneiro f·r·G。 席尔瓦 t·c·L。 阿尔维斯 a . C。 Haline-Vaz T。 Gozzo f . C。 Zanchin n i T。 光谱特征的肿瘤抗原NY-REN-21和识别与SCAND1异质二聚体的形成 生物化学和生物物理研究通信 2006年 343年 1 260年 268年 10.1016 / j.bbrc.2006.02.140 2 - s2.0 - 33645102971 Keppler j·K。 Stuhldreier m . C。 临时工 F。 施瓦兹 K。 数学模型和修正的影响因素结合茶多酚和维生素a的结果 β乳球蛋白测定荧光猝灭 食品生物物理学 2014年 9 2 158年 168年 10.1007 / s11483 - 013 - 9328 - x 2 - s2.0 - 84901038631 他 t . X。 梁 问:L。 罗 T . T。 王 y . M。 罗 g。 研究酚酸药物与牛血清白蛋白的相互作用通过毛细管电泳和荧光光谱 溶液化学杂志 2010年 39 11 1653年 1664年 10.1007 / s10953 - 010 - 9608 - 8 2 - s2.0 - 78650102886 Smyk B。 荧光的研究芥子酸与牛血清白蛋白和卵清蛋白的交互 杂志的荧光 2003年 13 4 349年 356年 10.1023 /:1025334029406 2 - s2.0 - 0345829110 Howe-Grant M。 吴 k . C。 鲍尔 w·R。 Lippard 美国J。 绑定的铂和钯metallointercalation试剂和抗肿瘤药物封闭和开放的dna 生物化学 1976年 15 19 4339年 4346年 10.1021 / bi00664a031 2 - s2.0 - 0017102167 李 Y。 杨 Z.-Y。 王 M.-F。 合成、表征、DNA结合特性、荧光研究和抗氧化活性的过渡金属配合物与Hesperetin-2-hydroxy苯甲酰腙 杂志的荧光 2010年 20. 4 891年 905年 10.1007 / s10895 - 010 - 0635 - z 2 - s2.0 - 77955662609 刘 j·L。 小溪 P。 窦 S.-X。 王 P.-Y。 习 x G。 大肠杆菌的锌指基序RecQ与DNA结合和蛋白质折叠 生物化学杂志 2004年 279年 41 42794年 42802年 10.1074 / jbc.M405008200 2 - s2.0 - 5644256922 唱 一个。 Kraemer-Pecore c . M。 Watkin R。 Kneale这样 G·G。 附件的组氨酸标签的最小的锌指蛋白曲霉菌nidulans基因调控蛋白区域引起dna结合蛋白的构象变化 蛋白表达和纯化 2005年 39 2 152年 159年 10.1016 / j.pep.2004.10.017 2 - s2.0 - 11844272620 长冈 M。 野村证券 W。 受伤 Y。 Sugiura Y。 显著影响的链接器在DNA序列识别multi-zinc手指蛋白质 生物化学和生物物理研究通信 2001年 282年 4 1001年 1007年 10.1006 / bbrc.2001.4672 2 - s2.0 - 0034805083 刘 j·L。 小溪 P。 窦 S.-X。 王 P.-Y。 习 x G。 的锌指基序 大肠杆菌RecQ与DNA结合和蛋白质折叠 《生物化学》杂志上 2004年 279年 41 42794年 42802年 10.1074 / jbc.m405008200 2 - s2.0 - 5644256922 Nunez N。 克利夫顿 m·m·K。 战绩 a·p·W。 Artuz C。 Hallal 年代。 昆兰 k·g·R。 字体 J。 Vandevenne M。 Setiyaputra 年代。 皮尔森 r . c . M。 麦凯 j . P。 克罗斯利 M。 multi-zinc手指蛋白质ZNF217联系人DNA通过双指域 《生物化学》杂志上 2011年 286年 44 38190年 38201年 10.1074 / jbc.m111.301234 2 - s2.0 - 80055099277 舒马赫 C。 王 H。 搪磨机 C。 丁 W。 科恩 J。 劳伦斯 Q。 多尼 c . M。 王 L . L。 博林格 D。 博文 b R。 瓦格纳 年代。 扫描域调节选择性齐聚 生物化学杂志 2000年 275年 22 17173年 17179年 10.1074 / jbc.m000119200 2 - s2.0 - 0034596019 梁 Y。 惠美香港 F。 Ganesan P。 江 年代。 Jauch R。 斯坦顿 l·W。 Kolatkar p R。 结构分析和二聚概要文件的扫描域Zfp206多能性因素 核酸的研究 2012年 40 17 8721年 8732年 10.1093 / nar / gks611 2 - s2.0 - 84866918106 卡尔德隆 m·R。 Verway M。 Benslama r . O。 Birlea M。 Bouttier M。 季米特洛夫 V。 马德尔 年代。 白色的 j . H。 Ligand-dependent辅阻遏物导致转录镇压由C2H2锌指转录因子通过与KRAB-associated ZBRK1蛋白1 核酸的研究 2014年 42 11 7012年 7027年 10.1093 / nar / gku413 2 - s2.0 - 84903197990 Yanover C。 布拉德利 P。 大量的蛋白质和DNA采样提高基于结构的特异性预测C支柱2H2锌指 核酸的研究 2011年 39 11 4564年 4576年 10.1093 / nar / gkr048 2 - s2.0 - 79959389606