叠氮化钠(南₃)和所有其他试剂都是分析纯。所有的玻璃器皿用二次蒸馏水冲净。

观察尿液晶体使用飞利浦XL-30环境扫描电子显微镜(SEM)后20 kV覆盖着一层超薄的黄金。原子力显微镜(AFM)进行接触的模式与空气通过使用商业AFM(美国ThermoMicroscopes AutoProbe CP)。亚硝酸Microfabricated硅悬臂梁(公园科学仪器)。获得的512×512像素的AFM图像使用软件(ThermoMicroscopes Proscan图像处理软件2.1版本)提供的工具,它可以消除低频扫描方向的背景噪音。x射线衍射(XRD)使用D / max -结果 γx射线衍射仪(Rigaku、日本)通过使用Ni-filtered Cu-K _α辐射( λ = 1.54 在扫描速度)2°分钟⁻¹和扫描范围(2 θ)从5°到60°。电动电势决心使用纳米粒子尺寸分析仪从Zetasizer Nano-ZS(英国莫尔文)在以下测试条件:入射光:氦氖激光器( λ= 633.0海里)入射角:90°;温度:25.0±0.1°C。pH值测量使用PHS-3C精密酸度计(上海精密科学仪器有限公司)。

研究的参与者包括30个随机选择的结石患者(18男12女;平均年龄= 53.1年;范围= 21 ~ 73年;都是碎石术中心的暨南大学第一附属医院)和30随机选择健康的人类,没有之前的历史尿路结石(16和14名女性;平均年龄= 37.5年;范围= 22 ~ 56年;他们都来自暨南大学的毕业生和老师)。手术后尿收集石头,用75%的酒精消毒(境级),用蒸馏水冲洗,放置在一个无尘孵化器在40°C到干燥。尿石头被磨成粉的玛瑙研钵,x射线衍射(XRD)表征表明,草酸钙的质量分数的石头是在80%到100%之间,含有少量的钙磷酸盐和尿酸。

在30个病人尿晶体性质的变化(从上面的相同的30例)之前和之后的K₃cit摄入了一周,和K的剂量₃cit(平板电脑)被设定为2.538 g / d。没有一个病人胃不宽容。

收集尿液治疗和尿微晶进行了根据文献报道的方法( 10- - - - - - 14]。早上空腹收集尿液样本。pH值后发现,2%的南₃解决方案(10毫升/ L尿样)被添加到尿液样本作为防腐剂,和电动电势测量。随后,无水酒精添加到尿样(尿液:乙醇= 3:2);然后尿都惊动了,离开安静的半小时使蛋白质撤消归化权和存款。上层清液是直接用于检测尿液中微米大小的晶体通过XRD、AFM、SEM。

XRD检测。大约50 μL的尿液样本放在12毫米 × 12毫米清洁玻璃幻灯片使用微量调节注射器。在烤箱玻璃幻灯片被干50±5°C 2 h尿挥发。这个过程重复了四次。尿晶体被处理根据先前所描述的方法( 15)去除氯化钠和尿素的可溶性分数。即玻璃幻灯片尿晶体慢慢沉浸在双重蒸馏水在倾斜45°角,轻轻地摇动1分钟,和可溶性分数(如氯化钠和尿素)沉淀从尿液在干燥过程中可以被删除。后小心取出玻璃幻灯片,水从边缘的幻灯片是干用吸水纸和幻灯片再干在真空干燥器为一维样品可用于XRD表征。

SEM和AFM检测。大约30 μL的尿液样本放置在10毫米×10毫米清洁玻片或干净的云母板通过使用微型注射器。玻璃幻灯片和云母片然后在真空干燥器干燥。然后一个类似的洗涤过程如上所述进行了移除可溶性微晶。

ζ电位检测。尿液样本直接加工电动电势检测通过使用Zetasizer Nano-ZS纳米粒子尺寸分析仪。

metavanadate-assisted铵催化动力学分光光度法进行测定尿柠檬酸含量( 16),阿尔新蓝比色法用于确定尿笑话内容( 17]。

图 1显示了扫描电镜的图像尿结晶在肾脏结石患者K₃cit摄入一周。水晶萧条显然出现了一些晶体表面的尿液(数字 1(一)来 1 (d))。相比之下,这些洼地很少发生在尿晶体前K₃cit的摄入量。大约三分之一的尿晶体从草酸钙结石患者30 K后凹₃cit的摄入量。

除了水晶晶体表面出现萧条,尿晶体的形态显示其他的变化,比如舍入和平滑的角落和边缘(图 1 (e))。此外,晶体的大小显著减少,比例二水草酸钙(COD)正方双锥体增加(图 1 (f)),减少晶体的聚集。

为了进一步研究这些凹晶体,通过AFM观察形态。图 2表明AFM图像草酸钙结石患者的尿晶体前后K₃cit摄取了一个星期,结果显示,水晶萧条。

图 3显示了尿中晶体的x射线衍射模式两个草酸钙结石患者前后K₃cit的摄入量。衍射峰的数量显著减少后K₃cit的摄入量,这表明K后尿晶体的物种减少₃cit的摄入量。衍射峰的强度也显著下降,这是前大约三分之一的K₃cit的摄入量。这一结果表明,K后尿晶体的质量下降₃cit的摄入量。COM的比例后的尿液减少K₃cit的摄入量,而鳕鱼增加。详细,与x射线衍射模式相比之前K₃cit摄入量(图 3(一)和 3(c)), COM的衍射峰 d = 5.93 1.98,3.65,2.97,2.36,(图消失了 3(b)) 18),而鳕鱼的衍射峰 d = 6.18 一个(图 3(b)或(图3.09和2.24 3(d))出现,这表明,K后COM晶体的数量显著下降₃cit的摄入量,而相对的鳕鱼数量增加。这与SEM的结果是一致的数据(图 1 (f))。此外,衍射峰由于尿酸和磷酸钙K后消失或明显削弱₃cit的摄入量。

30石患者、21例(70%)有结晶尿,其中10个病人COM为主要成分,1病人鳕鱼为主要成分,2例都COM和鳕鱼。其他成分是尿酸(UA, 7例)和磷酸氢钙(帽,一个案例)。然而,在K₃cit的摄入量,只有7个患者仍然结晶尿,1病人COM, 4例患者2例有鳕鱼,COM和鳕鱼。另一成分是尿酸盐、尿酸和帽子。

在K₃cit的摄入量,尿液中的柠檬酸含量的草酸钙结石患者 289年 ± 83年 mg / L(图 4(一))和增加到 492年 ± 118年 mg / L ( P < 0.01 K后)₃cit的摄入量,而控制样本 354年 ± 97年 mg / L。K后₃cit的摄入量,增加笑料 10.78 ± 2.31 mg / L ( P < 0.01 ) 6.32 ± 1.13 mg / L在K₃cit摄入量(图 4 (b)),而控制样本 7.30 ± 1.26 mg / L。尿液pH值增加到 6.42 ± 0.45 从 6.01 ± 0.35 在K₃cit的摄入量,而控制样本 6.23 ± 0.36 mg / L(图 4 (c))。

获得的值 与以前的研究一致。例如,Trinchieri et al。 19)发现,患者的尿液中排泄大量的柠檬酸COM和鳕鱼结石 507年 ± 264年 和 487年 ± 247年 分别为毫克/ 24小时(24 h尿量控制在健康个体约1.8 L 2 L,而价值是1.2 L肾脏结石患者)。Srinivasan et al。 20.)发现,尿液中排泄的柠檬酸量的健康控制个人( 601年 ± 84年 毫克/ 24 h)高于尿酸(UA)、草酸钙、磷酸钙(CaP)结石, 415年 ± 43 , 429年 ± 58 , 492年 ± 52 分别毫克/ 24小时。顾et al。 21]252草酸钙结石患者随机分为两组。组后的K₃cit摄入一周,平均尿液pH值从6.81增加到5.88 ( P < 0.001 )和尿柠檬酸含量从1.96增加到0.78更易与24小时( P < 0.001 ),而尿钙含量从4.44下降到7.81更易与24 h。

在K₃cit的摄入量,尿中晶体的电动电势−肾脏结石患者 5.05 ± 3.12 mV,成为− 9.13 ± 3.33 mV ( P < 0.05 K后)₃cit的摄入量,而尿晶体在健康的电动电势控制个人−8.93±4.36 mV(图 4 (d))。

无论是与normocitraturia组曾hypocitraturia或组,病人的尿柠檬酸含量增加后K₃cit的摄入量。但之间没有线性关系的增量柠檬酸尿液排泄和柠檬酸在K₃cit的摄入量。凹尿晶体出现后的尿柠檬酸分泌量高的K₃cit的摄入量。

柠檬酸是一种最丰富的负离子在尿液和钙结石的重要抑制剂( 22]。排泄的柠檬酸小于320毫克/ 24小时(约267 mg / L)被定义为hypocitraturia,这表明形成结石的风险( 23]。

图 4(一)表明,柠檬酸后,尿液排泄K₃cit摄入量一周增加到 492年 ± 118年 mg / L从 289年 ± 83年 mg / L在K₃cit的摄入量。在K₃cit的摄入量,14例研究的30石患者尿柠檬酸水平低于267 mg / L。K后₃cit的摄入量,可他们都没有尿柠檬酸水平低于267 mg / L(最小值为270 mg / L)。健康对照组,仍然6例30人研究尿柠檬酸水平低于267 mg / L。

当柠檬酸排泄增加,草酸钙结石的形成可能通过以下机制抑制。柠檬酸是一个酸离解常数的三羧酸(pKa)为2.9,4.3和5.6 ( 24]。柠檬酸可以用Ca复杂^{2 +}离子形成一个五或六元环螯合物,稳定常数为4.79×10⁴( 24)和良好的溶解性。因此,增加柠檬酸排泄尿液可以与钙螯合柠檬酸^{2 +}草酸钙晶体的离子表面上。螯合晶体慢慢溶解,导致凹晶体(数据的出现 1(一)来 1 (d))。因此,凹晶体的出现是直接证明柠檬酸与钙螯合物^{2 +}离子溶解草酸钙晶体,从而抑制草酸钙结石的形成。

30石病人研究的9个病人尿微晶后与凹面K₃cit的摄入量。他们的柠檬酸分泌量在该地区从510年到725 mg / L与平均为631 mg / L,高于平均值的柠檬酸后排泄大量K₃cit摄入量(492 mg / L)。

(1)K₃cit使结晶轮的技巧和光滑。

柠檬酸能保持与Ca complexation-dissociation平衡^{2 +}离子在尿液中草酸钙晶体的表面,特别是周围和草酸钙晶体的技巧。这些晶体不断溶解,因为与柠檬酸络合。同时,溶解在水中的Ca^{2 +}离子不断沉积在草酸钙晶体的表面。这种不断dissolution-deposition引起晶体的形态更圆润,钝后K₃cit摄入量(图 1 (e))。

(2)K₃cit抑制尿晶体的聚集。

后晶体的技巧和边缘变得光滑,晶体聚合的趋势是减少。此外,电动电势的增加绝对值尿晶体后表面的K₃cit摄入量(图 4 (d))之间的排斥力也有利于提高晶体和抑制尿晶体的聚集。抑制聚合会影响颗粒大小,从而可以防止插头的形成。

(3)K₃cit可以减少尿晶体的大小。

排泄大量的柠檬酸(图 4(一)(图)和粘多糖(笑话) 4 (b))在尿液增加K₃cit的摄入量。柠檬酸和笑料都可以与钙螯合物^{2 +}离子;柠檬酸与钙螯合物^{2 +}形成1:1复合物,1 μ摩尔二糖单位硫酸软骨素(笑料之一)可以用0.757复杂 μ摩尔Ca^{2 +}( 25]。这些螯合化合物溶性;因此,Ca^{2 +}浓度和尿液中草酸钙饱和度降低,草酸钙晶体的生长被抑制。因此,K后尿晶体的大小减少₃cit的摄入量。

(4)此外,柠檬酸是活跃在草酸钙的成核阶段,并对晶体形态的形成产生深远的影响( 26]。它在高浓度阻碍成核。因此,它可以解释数量减少的晶体图 1。

(5)K₃cit抑制UA晶体的形成,降低COM晶体的异相成核过程。可以找到很多UA晶体尿中晶体。XRD谱(图 3K后)表明,UA质量明显下降₃cit的摄入量。例如,与x射线衍射模式相比之前K₃cit的摄入量,分配下来的衍射峰( 2 - - - - - - 11)和UA的(020)面 d = 3.93 和2.79明显削弱。因此,UA尿液中微晶的质量明显下降。这个结果是由于柠檬酸分泌尿液,碱化尿液(图 4 (c))。因此,尿液pH值增加。此外,大多数UA变成尿酸盐晶体,更可溶的物种,从而减少UA尿液中的内容。UA晶体的尿量减少后,UA引起的COM晶体的异相成核过程也减少,从而抑制草酸钙结石的形成。

(6)K₃cit将COM晶体转换为COD晶体。扫描电镜的数据(图 1 (f))和x射线衍射分析(数据 3(一), 3(b))显示COM在尿晶体K的内容₃cit摄入量高于后K₃cit的摄入量,而鳕鱼K后的内容₃cit摄入量明显高于前K₃cit的摄入量。这个结果是由于高亲和力的柠檬酸COM,这很大程度上抑制了COM的发展( 27- - - - - - 29日]。角( 26柠檬酸)报道,更多地从棺材型经典COM晶体形态学通过圆形COM晶体,最后转化为专门COD晶体。Wierzbicki et al。 30.]研究了柠檬酸COM晶体的结合使用柠檬酸分子的键能模型和计算COM晶体不同的面孔,从而表明柠檬酸可以用Ca更好地协调^{2 +}在一个( 1 - - - - - - 01 COM)飞机。草酸钙结石主要存在于COM和鳕鱼的形式,但鳕鱼是容易从人体尿液中撤离比COM ( 31日]。因此,如果更多的COD晶体可以诱导或COM鳕鱼可以提升的变换,肾可预防结石的形成及其复发可以推迟。