拱gydF4y2Ba 古生菌gydF4y2Ba 1472 - 3654gydF4y2Ba 1472 - 3646gydF4y2Ba Hindawi出版公司gydF4y2Ba 285152年gydF4y2Ba 10.1155 / 2012/285152gydF4y2Ba 285152年gydF4y2Ba 研究文章gydF4y2Ba 生长介质的pH值的影响gydF4y2Ba Aeropyrum pernixgydF4y2BaArchaeosomes的结构性能和流动性gydF4y2Ba 在线旅行社gydF4y2Ba AjdagydF4y2Ba 1gydF4y2Ba GmajnergydF4y2Ba 德扬gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ŠentjurcgydF4y2Ba MarjetagydF4y2Ba 2gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba Nataša PoklargydF4y2Ba 1、3gydF4y2Ba 庄gydF4y2Ba 百盛集团gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 食品科学和技术gydF4y2Ba Biotechnical教员gydF4y2Ba 卢布尔雅那大学gydF4y2Ba Jamnikarjeva 101gydF4y2Ba 1000年卢布尔雅那gydF4y2Ba 斯洛文尼亚gydF4y2Ba uni-lj.sigydF4y2Ba 2gydF4y2Ba EPR中心、研究所Jožef斯蒂芬gydF4y2Ba Jamova 39gydF4y2Ba 1000年卢布尔雅那gydF4y2Ba 斯洛文尼亚gydF4y2Ba ijs.sigydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 卓越中心集成方法在化学和生物学的蛋白质(CipKeBiP)gydF4y2Ba Jamova 39gydF4y2Ba 1000年卢布尔雅那gydF4y2Ba 斯洛文尼亚gydF4y2Ba cipkebip.orggydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba 01gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba 03gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba 04gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 2012年gydF4y2Ba 版权©2012 Ajda Ota et al。gydF4y2Ba 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。gydF4y2Ba

pH值的影响(6.0;7.0;8.0)的生长介质gydF4y2Ba Aeropyrum pernixgydF4y2BaK1的结构组织和流动性archaeosomes准备从polar-lipid甲醇分数(PLMF)调查使用荧光各向异性和电子顺磁共振(EPR)谱。荧光各向异性的亲脂性的fluorofore 1 6-diphenyl-1 3 5-hexatriene和实证相关时间的自旋探针methylester 5-doxylpalmitate显示逐步增加温度变化的博士观察了类似的效果使用trimethylammonium-6-diphenyl-1, 3, 5-hexatriene,虽然温度变化小得多。稳态荧光各向异性和获得的经验相关时间直接从EPR谱本身并没有提供详细的结构信息,计算机模拟的EPR谱进行分析。这一分析表明,archaeosome膜组成的异构和几个地区spin-probe运动不同的模式在温度低于70°C。在更高的温度,这些膜变得更加均匀,可以描述只有一个光谱分量。这两种方法都表明,生长介质的pH值gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba不显著影响膜流动性的平均水平。这些结果符合TLC分析孤立的脂质,显示PLMF隔绝之间无显著差异gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在介质具有不同的pH值。gydF4y2Ba

 1。介绍gydF4y2Ba

古生菌生物体的第三域,他们有细胞结构和组件,明显不同于细菌和真核生物。甘油醚脂质是主要功能,区分古生菌的成员从细菌和真核生物gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba]。在细菌和真核生物相比,膜磷脂酰基链的ester-linked到gydF4y2Ba sngydF4y2Ba-glycerol-3-phosphate支架,古细菌脂质组成的支柱gydF4y2Ba sngydF4y2Ba-glycerol-1-phosphate,类异戊二烯组连接gydF4y2Ba 通过gydF4y2Ba醚联系(gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

Aeropyrum pernixgydF4y2BaK1绝对是第一个有氧,hyperthermophilic archaeon是孤立的从肋硫气热发泄在日本(gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba]。的极性脂质gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2BaK1完全由CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archaeol (3-di-sesterpanyl -gydF4y2Ba sngydF4y2Ba甘油),CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidyl (glucosyl)肌醇(AGI)占91摩尔%,和CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidylinositol (AI)占其余9摩尔%(图gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba)。膜等组成的CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba二醚脂质厚度比20%组成的四醚CgydF4y2Ba20、20gydF4y2Baarchaeal-based脂质(gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

新型的结构公式2日—gydF4y2Ba OgydF4y2Ba-sesterpanyl -gydF4y2Ba sngydF4y2Ba-glycerol-1-phospho-myo-inositol (CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidylinositol)(上图:AI)和2,新型双-gydF4y2Ba OgydF4y2Ba-sesterpanyl -gydF4y2Ba sngydF4y2Ba-glycerol-1-phospho-1′- (2′gydF4y2Ba OgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba αgydF4y2Ba-D-glucosyl)肌醇(CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidyl (glucosyl)肌醇)(底:AGI)。gydF4y2Ba

在过去的五年中,我们调查了一些环境因素的影响膜的结构属性gydF4y2Ba 答:pernix体内gydF4y2Ba利用电子顺磁共振(EPR)和荧光发射光谱法gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba]。这些研究包括pH值和温度的影响在双分子层的理化性质archaeosomes准备从polar-lipid甲醇分数(PLMF)隔绝gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba细胞生长在pH值7.0,92°C的混合脂质体准备从混合物PLMF和1,2-dipalmitoyl -gydF4y2Ba sngydF4y2Ba-glycero-3-phosphoholine (DPPC)在不同的比率gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 13gydF4y2Ba]。主要的结论基于我们的差示扫描量热法(DSC)是archaeosomes不显示凝胶液体结晶相变温度范围从0到100°C (gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

通过这些调查gydF4y2Ba 答:pernix体内gydF4y2Ba,我们已经表明,生长培养基pH影响最初的增长率和细胞密度(gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba]。pH值低于7.0还比不上pH值8.0,并没有增长gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba在pH值5.0。使用EPR和荧光发射测量,改变自旋探针的分布和监控他们的动态特征。这些变化反映了膜域结构随温度的变化,和他们是不同的gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba在pH值6.0比pH值7.0和8.0 (gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba]。Macalady和同事(2004)(gydF4y2Ba 15gydF4y2Ba)建议core-lipid成分之间有很强的相关性和最优生长介质的pH值。gydF4y2Ba

在目前的研究中,我们扩展EPR和荧光发射光谱法探讨生长介质的pH值的影响(6.0;7.0;8.0)的理化性能双层archaeosomes准备从这PLMFgydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba。gydF4y2Ba

 2。材料和方法gydF4y2Ba 2.1。增长的<斜体>。pernix < /斜体> K1gydF4y2Ba

答:pernixgydF4y2BaK1从日本购买的微生物(9820号;Wako-shi、日本)。培养基组成(每升):34.0 g海洋肉汤2216 (Difco Becton,迪金森& Co .,富兰克林湖,新泽西,美国),5.0 g Trypticase胨(Becton, Dickinson和公司、火花、美国),1.0克酵母提取物(Becton, Dickinson和公司、火花、美国)和1.0 g NagydF4y2Ba2gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba2gydF4y2BaOgydF4y2Ba3gydF4y2Ba•5 hgydF4y2Ba2gydF4y2Ba美国圣路易斯O (Sigma-Aldrich)。使用的缓冲系统是20毫米MES [2 - (N-morpholino) ethanesulfonic酸;记述有机物、Geel、比利时)的增长在pH值6.0,和20毫米玫瑰[4 - (2-hydroxyethyl) 1-piperazineethanesulfonic酸;Sigma-Aldrich化学GmbH, Steinheim,德国)的增长在酸碱7.0和8.0。的gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba细胞生长在800毫升1000毫升厚壁的烧瓶内生长介质,磁搅拌热板和强制曝气(0.5 L·分钟gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba在92°C,如前所述gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

 2.2。脂类的分离和纯化gydF4y2Ba

由大约91%的PLMF AGI通讯社和9% AI(平均分子量为1181.42 g·摩尔gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba从lyophilised)准备gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba如前所述(细胞gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。脂类是分次使用吸附色谱法和薄层色谱分析用氯仿/甲醇/醋酸/水(85/30/15/5)溶剂。分析是由0.04毫克PLMF隔绝gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在不同博士TLC板开发,喷洒20% HgydF4y2Ba2gydF4y2Ba所以gydF4y2Ba4gydF4y2Ba。脂质斑点可视化通过加热在180°C 20分钟gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba]。薄层色谱板进行分析使用3.5.3 JustTLC软件(版本。gydF4y2Ba http://www.sweday.com/gydF4y2Ba),两个脂质组件的强度比进行了比较。PLMF隔绝之间没有差异gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba。gydF4y2Ba pernixgydF4y2Ba生长在培养基不同pH值观察(图gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

TLC PLMF从的结果gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在不同的pH值为标志。人工智能和美国国际集团代表CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidylinositol和CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba分别-archetidyl (glucosyl)肌醇。gydF4y2Ba

甲醇分数含有极性脂质(PMLF)是用于进一步分析。这种脂类解决方案被缓慢蒸发干下恒流干氮,其次是真空蒸发的溶剂残留。gydF4y2Ba

 2.3。制备ArchaeosomesgydF4y2Ba

适当的权重干PLMF都溶解在氯仿和转移到玻璃圆底烧瓶,溶剂蒸发的减压(mbar 17日)。的脂质干电影被水化水缓冲的解决方案。如上所示,以下20毫米缓冲区的解决方案是使用:MES对pH值6.0和消息灵通的pH值7.0和8.0。的最终浓度脂质是10毫克gydF4y2Ba ·gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba。Multilamellar囊泡(mlv)是由涡流的脂质停赛10分钟。mlv被进一步转化为小单膜囊泡(suv) 30分钟声波降解法与10 s开关周期50%幅度Vibracell超声粉碎机VCX 750(美国纽镇超音速和材料)。分离后的残骸suv sonification,样品离心10分钟14.000 rpm(埃普多夫离心机5415 c)。gydF4y2Ba

 2.4。荧光各向异性测量gydF4y2Ba

荧光各向异性测量1,6-diphenyl-1 3 5-hexatriene(衰变时)和trimethylammonium-6-phenyl-1, 3, 5-hexatriene (TMA-DPH)(图gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba)PLMF archaeosomes进行在一个10 mm-path-length试管使用卡里Eclipse荧光分光光度计(瓦里安,Mulgrave,澳大利亚),在温度范围从20°C到90°C,和pH值的范围从6.0到8.0在相关缓冲区的解决方案。瓦里安autopolarizers被使用,狭缝宽度的名义带通5 nm激发和发射。在这里,十gydF4y2Ba μgydF4y2BaL衰变时或者TMA-DPH (Sigma-Aldrich化学GmbH, Steinheim,德国)在二甲亚砜(默克公司,达姆施塔特,德国)添加到2.5毫升100gydF4y2Ba μgydF4y2BaM方案从PLMF suv的准备gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba在相关的缓冲区,达到最终浓度为0.5gydF4y2Ba μgydF4y2Ba1.0 M衰变时,gydF4y2Ba μgydF4y2BaM TMA-DPH。衰变时和TMA-DPH荧光各向异性测量激发波长358 nm,面向与激发偏振器在垂直位置,而垂直和水平极化发射光的组件通过单色仪记录探测器在410海里。的发射荧光衰变时和TMA-DPH水溶液是微不足道的。各向异性(gydF4y2Ba rgydF4y2Ba )是计算使用仪器的内置软件(gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba):gydF4y2Ba (1)gydF4y2Ba rgydF4y2Ba =gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba |gydF4y2Ba |gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ⊥gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba |gydF4y2Ba |gydF4y2Ba +gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ⊥gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 在那里,gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba |gydF4y2Ba |gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba ⊥gydF4y2Ba 分别是平行和垂直发射强度。g因子的值的比例(垂直的敏感性检测系统(gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba HgydF4y2Ba VgydF4y2Ba )和横向偏振光(gydF4y2Ba 我gydF4y2Ba HgydF4y2Ba HgydF4y2Ba )分别为每个样品测定。gydF4y2Ba

结构公式1,6-diphenyl-1 3 5-hexatriene(衰变时),trimethylammonium-6-phenyl-1, 3, 5-hexatriene (TMA-DPH)和methylester 5-doxyl软脂酸(MeFASL (10, 3)]。gydF4y2Ba

lipid-order参数gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 从各向异性计算使用的解析表达式(gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba 16gydF4y2Ba]:gydF4y2Ba (2)gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba =gydF4y2Ba (gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba (gydF4y2Ba rgydF4y2Ba /gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba )gydF4y2Ba +gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba (gydF4y2Ba rgydF4y2Ba /gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba )gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba ]gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba /gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba +gydF4y2Ba rgydF4y2Ba /gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba (gydF4y2Ba rgydF4y2Ba /gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba )gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 在哪里gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 荧光各向异性的衰变时没有任何旋转运动的调查。的理论价值gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 衰变时是0.4,而实验值gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 躺在0.362和0.394之间(gydF4y2Ba 16gydF4y2Ba]。在我们的计算中,实验的价值gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba =gydF4y2Ba 0.370gydF4y2Ba 和gydF4y2Ba rgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba =gydF4y2Ba 0.369gydF4y2Ba 衰变时和TMA-DPH DPPC在5°C,分别。gydF4y2Ba

 2.5。电子顺磁共振测量gydF4y2Ba

EPR的测量,PLMF suv的methylester spin-labelled 5-doxyl软脂酸(MeFASL(10, 3)](图gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba),EPR谱记录力量ESP 300 x波段光谱仪(力量Analytische Messtechnik, Rheinstein,德国)。MeFASL(10, 3)亲脂性的探针被选膜由于其温和的稳定和相对高分辨率能力为当地膜分类和动态。溶解在磷脂双分子层与硝基氧集团位于上部的层。gydF4y2Ba

MeFASL(10, 3)电影干墙上的玻璃管,50gydF4y2Ba μgydF4y2BaL 10毫克gydF4y2Ba ·gydF4y2Ba毫升gydF4y2Ba−1gydF4y2BaPLMF suv在相关的缓冲区添加,和样本漩涡,持续15分钟。这是专为最后的摩尔比率MeFASL(10, 3):脂质(1):250。样品被转移到毛细管(75毫米;Euroglas、斯洛文尼亚),EPR谱记录使用以下参数:中心,332吨;扫描范围,10吨;微波功率20.05千瓦;微波频率,9.32 GHz;调制频率、100千赫;调制振幅,0.2吨;温度范围; 5°C to 95°C. Each spectrum was the average of 10 scans, to improve the signal-to-noise ratio. From the EPR spectra, the mean empirical correlation time (gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba )gydF4y2Ba 计算使用(gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba)[gydF4y2Ba 17gydF4y2Ba]:gydF4y2Ba (3)gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba =gydF4y2Ba kgydF4y2Ba ΔgydF4y2Ba HgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba (gydF4y2Ba (gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba /gydF4y2Ba hgydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba )gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba /gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba ]gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba

线宽(gydF4y2Ba ΔgydF4y2Ba HgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba ;在中场位置(mT)和高度gydF4y2Ba hgydF4y2Ba 0gydF4y2Ba )和轨迹(gydF4y2Ba hgydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba )线路从EPR谱(图获得gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba);gydF4y2Ba kgydF4y2Ba 是一个常数典型的自旋探针,是什么gydF4y2Ba 5.9387gydF4y2Ba ×gydF4y2Ba 10gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba 太gydF4y2Ba−1gydF4y2Ba3 MeFASL(10日)(gydF4y2Ba 17gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

 2.6。电子顺磁共振谱的计算机模拟gydF4y2Ba

为更精确的描述膜的特点,计算机模拟的EPR谱线的形状进行使用EPRSIM计划(JanezŠtrancar, 1996 - 2003,gydF4y2Ba http://www2.ijs.si/ ~ jstrancar / software.htmgydF4y2Ba)。一般来说,描述的EPR谱旋转标签,使用随机刘维尔方程(gydF4y2Ba 18gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba 20.gydF4y2Ba]。然而,在膜系统与脂肪酸自旋探针标记,当地的旋转运动对EPR的时间尺度。建模的光谱被限制在生理温度因此简化运动快速起动的政权。因为其他地方(讨论的基本方法已经gydF4y2Ba 21gydF4y2Ba,gydF4y2Ba 22gydF4y2Ba),这里只是总结。模型考虑到膜是异构的,并且是由几个不同地区流动特征。因此,EPR谱是由几个光谱成分,反映了不同的模式限制旋转运动的自旋探针分子膜在不同的环境中。每个光谱组件是由一组光谱参数描述,定义了线的形状。这些是订单参数(gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba )gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba旋转相关时间(gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba ),线宽调整(gydF4y2Ba WgydF4y2Ba )和极性调整电磁张量的因素gydF4y2Ba ggydF4y2Ba 和gydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba (gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ggydF4y2Ba 和gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 、职责)。的gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 描述了磷脂烷基链的定向排列顺序在膜领域,gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba =gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 为完美有序的连锁店和gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba =gydF4y2Ba 0gydF4y2Ba 各向同性排列的链。膜域更流体的特点是一个更小的gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 。gydF4y2Ba的gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba 描述了烷基链的动态运动,与gydF4y2Ba WgydF4y2Ba 由于没有解决氢superhyperfine交互,和来自其他顺磁性杂质(如氧气、外部磁场)非均质性。的gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ggydF4y2Ba 和gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 极性修正因素来自于环境的极性的自旋探针硝基氧组(gydF4y2Ba pgydF4y2Ba ggydF4y2Ba 和gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 下面的更多的极地环境和大的疏水区域的1)。这些参数,旁边的线形状EPR谱定义为每个光谱的相对比例组件(gydF4y2Ba dgydF4y2Ba ),它描述了自旋探针与特定的相对数量动态模式,这取决于分布的自旋探针之间的共存域具有不同的流动性特点。的分区MeFASL(10, 3)被发现不同类型的域之间的近似等于胆固醇/磷脂囊泡(gydF4y2Ba 23gydF4y2Ba),我们假设是有效的也为这些PLMF脂质体。gydF4y2Ba

应该强调,自旋探针的横向运动缓慢的时间尺度EPR谱(gydF4y2Ba 24gydF4y2Ba]。因此,EPR谱描述只有最近的环境的属性的自旋探针纳米规模。所有的地区自旋探针的膜具有类似模式运动导致同一个光谱分量。因此,每个光谱分量反映了某种类型的膜的流动性特征nanodomain(维数海里)(gydF4y2Ba 25gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

获得最适合的calculated-to-experimental光谱、随机和以人群为基础的遗传算法和单纯形的优化方法结合到进化优化方法(HEO),它不需要特殊的起点和没有用户干预gydF4y2Ba 26gydF4y2Ba]。为了得到一个合理的描述仍然定义谱组件在应用优化之前的数量。要解决这个问题多道HEO优化一起使用新开发的幽灵凝结过程。根据这个方法,200年独立HEO每个EPR谱模拟运行应用,考虑到四种不同的自旋探针动态模式(23光谱参数),在分辨率极限的EPR硝基氧实验。从这些只运行参数的设置,对应于最适合。200年获得的所有参数的最佳设置优化评价根据适合的善(gydF4y2Ba χgydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 过滤器),根据相似性最适合的参数值(密度滤光片)。最适合的参数提出了通过三个二维截面图使用四谱参数:参数gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 、旋转相关时间gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba ,谱线增宽gydF4y2Ba WgydF4y2Ba 和极性校正因子gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba (gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba WgydF4y2Ba ,gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba - - - - - -gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba )。组的解决方案,代表自旋探针的动态模式特别是周围和这可能对应于不同的膜区域,既可以解决图形在鬼鬼图或数值凝结。起始值谱组件的参数定义使用的平均参数取自幽灵图(gydF4y2Ba 27gydF4y2Ba]。从这些情节的信息动态模式,定义了gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba ,gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba ,gydF4y2Ba WgydF4y2Ba ,gydF4y2Ba pgydF4y2Ba 一个gydF4y2Ba 在不同的膜区域可以获得。这样,自旋探针动态模式的变化在不同的膜区域,由于膜之间的相互作用与生物活性化合物,由于温度、pH值、和膜成分的变化,可以研究。gydF4y2Ba

 3所示。结果与讨论gydF4y2Ba 3.1。荧光各向异性测量gydF4y2Ba

荧光探针已经广泛应用于生物膜的结构和动态的研究(gydF4y2Ba 28gydF4y2Ba]。他们的物理属性是影响物理化学探针的微环境的变化。两种探针研究膜性能衰变时,其阳离子TMA-DPH导数。由于衰变时是一个疏水探针,纳入内部无极的核心在不同的位置沿膜,而极性基团地区lipid-water TMA-DPH保持稳定的接口与烃链进入膜的脂质膜的一部分。徐和伦敦(gydF4y2Ba 29日gydF4y2Ba]表明,各向异性值最高的凝胶状态,liquid-disordered最低状态,中间liquid-ordered州。衰变时,TMA-DPHgydF4y2Ba rgydF4y2Ba 依赖程度的分子膜链和包装可以与订单相关参数gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 。流动性可以定义为相互的脂质参数gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba (gydF4y2Ba 30.gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

秩序的水平组成的suv PLMF隔绝gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba在pH值6.0,pH值7.0,pH值8.0和测量在同一小灵通或pH值7.0计算各向异性测量衰变时(数据gydF4y2Ba 4(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba 4 (b)gydF4y2Ba)和TMA-DPH(数字gydF4y2Ba 5(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba 5 (b)gydF4y2Ba),分别。无显著差异的顺序参数archaeosomes观察的生长介质无关gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba细胞或测量pH值的测试温度范围。订单参数取决于应用衰变时这些archaeosomes稳步随温度增加而降低,这表明在膜流动性逐渐增加(数据gydF4y2Ba 4(一)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba 4 (b)gydF4y2Ba)。以前,我们也显示通过应用DSC,范围从0°C到100°C, archaeosomes不接受gel-to-liquid晶体相变(gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。订单的初始值参数衰变时20°C: pH值6.0,gydF4y2Ba 0.72gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba ;pH值7.0,gydF4y2Ba 0.72gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba ;pH值8.0,gydF4y2Ba 0.73gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba 。同样的,我们没有发现显著差异的顺序参数取决于应用TMA-DPH archaeosomes不管增长或测量pH值。有序参数的初始值TMA-DPH衰变时相比,在古细菌脂质在相同的温度和pH值更高:pH值6.0,gydF4y2Ba 0.93gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba ;pH值7.0,gydF4y2Ba 0.91gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba ;pH值8.0,gydF4y2Ba 0.91gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 0.1gydF4y2Ba 。另一个观察,应该强调的是,改变参数的顺序由TMA-DPH温度敏感(数据gydF4y2Ba 5(一个)gydF4y2Ba和gydF4y2Ba 5 (b)gydF4y2Ba)。这也许不足为奇,因为TMA-DPH阳离子探针位于lipid-water界面膜和archaeosomes (SUV)电动电势−50 mV (gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。archaeosomes电动电势(爱)是与pH值没有改变pH值的范围从5.0到10.0 (gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba]。很可能在研究了pH值的范围从6.0到8.0的电动电势SUV archaeosomes也没有改变,这与没有观察到的变化与pH值TMA-DPH各向异性。gydF4y2Ba

的温度依赖性的PLMF lipid-order参数gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在培养基和不同的pH值(■pH值6.0;○pH值7.0;ΔpH值8.0)决定通过测量衰变时的各向异性。线表示非线性曲线拟合的数据点。(一)pH值测量样本是一样的生长介质的pH值;在pH值为7.0 (b)进行了实验。gydF4y2Ba

的温度依赖性的脂质参数PLMF的秩序gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在培养基和不同的pH值(■pH值6.0;○pH值7.0;ΔpH值8.0)决定通过测量TMA-DPH的各向异性。线表示非线性曲线拟合的数据点。(一)pH值测量样本是一样的生长介质的pH值;在pH值为7.0 (b)进行了实验。gydF4y2Ba

代表EPR谱MeFASL(10, 3)膜的SUV archaeosomes pH值7.0准备从PLMF孤立gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba在pH值为7.0。gydF4y2Ba

我们没有确定任何显著差异在两个荧光探针的行为不管生长介质的pH值gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba表明,脂质成分是研究不改变pH值范围的增长(pH值从6.0到8.0)或在测量pH值从6.0到8.0不等。这句话得到了TLC PLMF的结果gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在不同的小灵通(图gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba)。两个主要的脂质成分之间的比例gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba膜CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidylinositol (AI)和CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archetidyl (glucosyl)肌醇(AGI)在增长pH值6.0和7.0:gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba %gydF4y2Ba 人工智能和gydF4y2Ba 91年gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba %gydF4y2Ba 美国国际集团和增长的pH值8.0:gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba %gydF4y2Ba 人工智能和gydF4y2Ba 92年gydF4y2Ba ±gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba %gydF4y2Ba 美国国际集团。gydF4y2Ba

 3.2。电子顺磁共振测量gydF4y2Ba

经验相关的MeFASL(10, 3)在这些脂质体PLMF隔绝的准备gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba直接从EPR谱测量(图gydF4y2Ba 6gydF4y2Ba)。这些与温度逐渐下降,没有显示显著差异对生长介质的pH值(图gydF4y2Ba 7gydF4y2Ba)。实证相关时间平均反映磷脂烷基链的顺序和动态spin-probe硝基氧组周围和逆与膜流动性。数据关联与荧光各向异性测量衰变时纳入archaeosomes,这表明,膜流动性随温度增加,但平均来说它不依赖生长介质的pH值。类似的结果也出现在archaeosomes组成的双相四醚脂质(gydF4y2Ba 31日gydF4y2Ba]。gydF4y2Ba

依赖于温度的经验关联时间(gydF4y2Ba τgydF4y2Ba cgydF4y2Ba )MeFASL (10, 3) SUV archaeosomes准备从PLMF油脂分离gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在培养基和不同的pH值(■pH值6.0;○pH值7.0;ΔpH值8.0)和测量在同一小灵通在pH值为7.0 (a)和(b)。实证相关时间直接从EPR谱计算根据方程(gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

获得更详细的信息可能影响膜结构特点上的不同的生长介质的pH值和温度变化,电子顺磁共振光谱进行了计算机模拟。在温度低于70°C,好符合实验光谱得到考虑,至少有三个光谱的光谱是由组件。这表明archaeosome膜组成的异构和spin-probe运动的几个地区有不同的模式。所有的地区相同的膜流动性特征描述由一个光谱分量。相应的EPR参数确定自旋探针的动态模式,无论其位置的膜。较小的区域相同的物理特性不能区别几大地区。这也意味着EPR不一定直接反映薄膜的宏观性质或大型膜领域,但也反映了膜纳米规模的上层建筑。自旋探针观察到的三个动态模式可能是由于双组分膜的脂质成分(AI和AGI)。此外,一些磷脂或垂直运动的动态波动膜内的自旋探针可以检测到一个特定的自旋探针的动态模式。这些动态模式可以改变如果膜受到一些外部扰动或如果膜成分发生了变化。 At higher temperatures, the membranes become more homogeneous and can be described by only one spectral component. The changes in the order parameters of the different membrane regions and their proportions with temperature are shown in the form of bubble diagrams in Figure 8gydF4y2Ba的维度,每个符号代表自旋探针的比例在相应的膜区域。随着温度增加,订单参数最有序的区域减少,其比例减少和消失的温度55°C和65°C之间的地区。不要求地区的比例增加而增加温度,和70°C以上这些保持不变。计算订单参数样本种植在不同的酸度和以7.0计算的范围的不确定性。gydF4y2Ba

依赖于温度的参数(gydF4y2Ba 年代gydF4y2Ba 3)和比例的MeFASL(10日)在膜区域的SUV archaeosomes从PLMF做好准备gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在pH值6.0(黑色圆圈)和7.0(灰色圆圈)(a),在pH值7.0(灰色圆圈)和8.0 (b)(黑眼圈)。直径的符号显示每个区域的比例。D1、D2和D3表示最高的区域,中间值和最低参数,分别。实验在pH值7.0。gydF4y2Ba

荧光测量获得的参数(数字gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba和gydF4y2Ba 5gydF4y2Ba),通过计算机模拟得到的EPR谱(图gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba)不能直接而自三个探针(图gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba),它的明显区别在于其形状和尺寸导致周围不同的扰动和显示器的属性在不同深度膜。衰变时是高度疏水性和反映了属性的无极的核心在不同的位置沿膜,TMA-DPH锚定在water-lipid接口,而MeFASL(10, 3)与硝基氧集团5日C原子(计数甲酯集团)显示器属性上磷脂层的一部分,但也表现出一些膜内的平移运动。除了通过荧光偏振测量平均订单参数膜,而计算机模拟的EPR谱顺序参数是杰出的旋转速度和反映环境均在较低温度下自旋探针,这可能是由于膜之间的异质性分布产生的膜的AI和AGI通讯社但也可以结果的波动或垂直运动的自旋探针在双分子层中,这似乎是受温度的影响。gydF4y2Ba

 4所示。结论gydF4y2Ba

荧光各向异性测量衰变时和TMA-DPH这里除了EPR谱显示稳定减少参数的顺序的热点脂质随着温度增加,无论古生菌的pH值的增长或测量博士这表明膜流动性逐渐增加在所有这些样本,尽管没有显著差异的影响gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长培养基博士TMA-DPH靠近water-lipid界面显示相比更少的温度依赖性的衰变时或者MeFASL (10, 3)。更详细的分析使用EPR谱的计算机模拟显示膜异质性在温度低于55°C,消失在更高的温度。但EPR谱的参数计算archaeosomes从PLMF获得gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在不同的酸度和以7.0的范围仍在计算的不确定性。通过TLC分析结果支持孤立的脂质,显示PLMF隔绝之间没有显著差异gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba生长在介质具有不同的小灵通。gydF4y2Ba

总而言之,目前的数据表明,细胞生长pH值对膜性能没有影响被检查。前面的gydF4y2Ba 在活的有机体内gydF4y2Ba研究[gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba)表明,细胞生长随介质极性脂质以来博士这种差异很有趣gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2BaK1完全由CgydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archeaol,这并没有改变经济增长的pH值根据我们的资料。以前,我们已经报道的最大细胞密度gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2Ba增长pH值7.0和8.0条件相似,而获得了最大的细胞密度明显降低pH值在6.0和5.0没有增长的pH值(gydF4y2Ba 14gydF4y2Ba]。很可能在小灵通低于6.0中性的膜gydF4y2Ba 答:pernixgydF4y2BaC组成的gydF4y2Ba25日,25gydF4y2Ba-archaeol成为质子渗透性,渗透率不是由脂质成分。gydF4y2Ba

 确认gydF4y2Ba

作者想表达他们的感谢斯洛文尼亚的金融支持研究机构通过p4 - 0121研究计划和j2 - 3639项目。答:Ota部分是由欧盟的欧洲社会基金。gydF4y2Ba

 伍斯gydF4y2Ba c·R。gydF4y2Ba KandlergydF4y2Ba O。gydF4y2Ba WheelisgydF4y2Ba m . L。gydF4y2Ba 对生物的自然系统:建议域古生菌,细菌和真核生物gydF4y2Ba 美国国家科学院院刊》上的美利坚合众国gydF4y2Ba 1990年gydF4y2Ba 87年gydF4y2Ba 12gydF4y2Ba 4576年gydF4y2Ba 4579年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0025300402gydF4y2Ba 10.1073 / pnas.87.12.4576gydF4y2Ba PakchunggydF4y2Ba 答:a . H。gydF4y2Ba 辛普森gydF4y2Ba p . j . L。gydF4y2Ba 科德gydF4y2Ba R。gydF4y2Ba 地球上的生命。极端微生物继续目标职位gydF4y2Ba 环境化学gydF4y2Ba 2006年gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 77年gydF4y2Ba 93年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 33646504126gydF4y2Ba 10.1071 / EN05093gydF4y2Ba PeretogydF4y2Ba J。gydF4y2Ba 洛佩斯-加西亚gydF4y2Ba P。gydF4y2Ba MoreiragydF4y2Ba D。gydF4y2Ba 祖先的脂质生物合成和膜早期进化gydF4y2Ba 生化科学趋势gydF4y2Ba 2004年gydF4y2Ba 29日gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba 469年gydF4y2Ba 477年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 4344618574gydF4y2Ba 10.1016 / j.tibs.2004.07.002gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba GmajnergydF4y2Ba D。gydF4y2Ba RasporgydF4y2Ba P。gydF4y2Ba 结构和理化性质的极性脂质嗜热古菌gydF4y2Ba 应用微生物学和生物技术gydF4y2Ba 2009年gydF4y2Ba 84年gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 249年gydF4y2Ba 260年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 68749096893gydF4y2Ba 10.1007 / s00253 - 009 - 2102 - 9gydF4y2Ba 四郎gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba MoriigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 醚脂质结构研究的最新进展古生菌包括比较和生理方面gydF4y2Ba 生物科学、生物技术和生物化学gydF4y2Ba 2005年gydF4y2Ba 69年gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba 2019年gydF4y2Ba 2034年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 28244438390gydF4y2Ba 10.1271 / bbb.69.2019gydF4y2Ba 四郎gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba MoriigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba ether-type极性脂类的生物合成古生菌和进化方面的考虑gydF4y2Ba 微生物学和分子生物学的评论gydF4y2Ba 2007年gydF4y2Ba 71年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 97年gydF4y2Ba 120年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 33947425547gydF4y2Ba 10.1128 / MMBR.00033-06gydF4y2Ba CambacortagydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba TrinconegydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba NicolausgydF4y2Ba B。gydF4y2Ba 喇嘛gydF4y2Ba lgydF4y2Ba 德罗萨gydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 特色古生菌的脂质gydF4y2Ba 系统和应用微生物学gydF4y2Ba 1994年gydF4y2Ba 16gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 518年gydF4y2Ba 527年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0028349895gydF4y2Ba SakogydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba 野村证券gydF4y2Ba N。gydF4y2Ba 田gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba 石田gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba MoriigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 四郎gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba HoakigydF4y2Ba T。gydF4y2Ba MaruyamagydF4y2Ba T。gydF4y2Ba sp. Aeropyrum pernix将军11月,11月,小说有氧hyperthermophilic archaeon温度的速度增长gydF4y2Ba One hundred.gydF4y2Ba °gydF4y2Ba CgydF4y2Ba 国际期刊的细菌学gydF4y2Ba 1996年gydF4y2Ba 46gydF4y2Ba 4gydF4y2Ba 1070年gydF4y2Ba 1077年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0029826916gydF4y2Ba MoriigydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 八木天线gydF4y2Ba H。gydF4y2Ba AkutsugydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 野村证券gydF4y2Ba N。gydF4y2Ba SakogydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba 四郎gydF4y2Ba Y。gydF4y2Ba 小说phosphoglycolipid archaetidyl (glucosyl)肌醇的两个sesterterpanyl链有氧hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix K1gydF4y2Ba Biochimica et Biophysica学报gydF4y2Ba 1999年gydF4y2Ba 1436年gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 426年gydF4y2Ba 436年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0033521692gydF4y2Ba 10.1016 / s0005 - 2760 (98) 00157 - xgydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba AdamljegydF4y2Ba U。gydF4y2Ba NemecgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba ŠentjurcgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba 温度和pH-induced结构性变化的膜hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix K1gydF4y2Ba 膜生物学》杂志上gydF4y2Ba 2007年gydF4y2Ba 219年gydF4y2Ba 1 - 3gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 8gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 36649036954gydF4y2Ba 10.1007 / s00232 - 007 - 9061 - 9gydF4y2Ba GmajnergydF4y2Ba D。gydF4y2Ba 在线旅行社gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba ŠentjurcgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba 稳定的二醚这件,25岁的脂质体hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix K1gydF4y2Ba 化学和物理的脂质gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 164年gydF4y2Ba 3gydF4y2Ba 236年gydF4y2Ba 245年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79952704525gydF4y2Ba 10.1016 / j.chemphyslip.2011.01.005gydF4y2Ba GmajnergydF4y2Ba D。gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba 向温的相行为的混合脂质体的热点二醚和传统的二元酸酯脂质gydF4y2Ba 热分析和量热法杂志》上gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 106年gydF4y2Ba 1gydF4y2Ba 255年gydF4y2Ba 260年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79955145381gydF4y2Ba 10.1007 / s10973 - 011 - 1596 - 4gydF4y2Ba GmajnergydF4y2Ba D。gydF4y2Ba GrabnargydF4y2Ba p。gydF4y2Ba ŽnidaričgydF4y2Ba m . T。gydF4y2Ba ŠtrusgydF4y2Ba J。gydF4y2Ba ŠentjurcgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba 脂质体的结构特征由二醚热点脂质和dipalmitoyl-L -gydF4y2Ba αgydF4y2Ba磷脂酰胆碱gydF4y2Ba 生物物理化学gydF4y2Ba 2011年gydF4y2Ba 158年gydF4y2Ba 2 - 3gydF4y2Ba 150年gydF4y2Ba 156年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 79960746711gydF4y2Ba 10.1016 / j.bpc.2011.06.014gydF4y2Ba MilekgydF4y2Ba 我。gydF4y2Ba CigićgydF4y2Ba B。gydF4y2Ba SkrtgydF4y2Ba M。gydF4y2Ba KaletuncgydF4y2Ba G。gydF4y2Ba UlrihgydF4y2Ba n P。gydF4y2Ba 优化发展的hyperthermophilic archaeon Aeropyrum pernix在小批量的规模gydF4y2Ba 加拿大《微生物学gydF4y2Ba 2005年gydF4y2Ba 51gydF4y2Ba 9gydF4y2Ba 805年gydF4y2Ba 809年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 30344444775gydF4y2Ba 10.1139 / w05 - 060gydF4y2Ba MacaladygydF4y2Ba j·L。gydF4y2Ba VestlinggydF4y2Ba M . 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H。gydF4y2Ba Nonlinear-least-squares慢动作EPR谱分析在一个和两个维度使用修改后的levenberg-marquardt算法gydF4y2Ba 磁Resonance-Series杂志》上gydF4y2Ba 1996年gydF4y2Ba 120年gydF4y2Ba 2gydF4y2Ba 155年gydF4y2Ba 189年gydF4y2Ba 2 - s2.0 - 0000326938gydF4y2Ba 罗宾逊gydF4y2Ba B。gydF4y2Ba ThomanngydF4y2Ba H。gydF4y2Ba 贝丝gydF4y2Ba 一个。gydF4y2Ba 道尔顿gydF4y2Ba l R。gydF4y2Ba 道尔顿gydF4y2Ba l R。gydF4y2Ba 磁共振现象:理论方面的考虑gydF4y2Ba EPR生物系统和先进的电子顺磁共振研究gydF4y2Ba 1985年gydF4y2Ba 美国佛罗里达州波卡拉顿gydF4y2Ba CRC的新闻gydF4y2Ba 11gydF4y2Ba 110年gydF4y2Ba 施耐德gydF4y2Ba d . J。gydF4y2Ba 释放gydF4y2Ba j . H。gydF4y2Ba 柏林gydF4y2Ba l . 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