APS 药理和制药科学的进步 2633 - 4690 2633 - 4682 Hindawi 10.1155 / 2020/3797218 3797218 研究文章 与年龄相关的肝脂肪变性的衰减 杜氏微藻通过氧化还原状态的规定,在衰老大鼠炎性指标,和凋亡生物标记 el - baz Farouk K。 1 https://orcid.org/0000 - 0002 - 5401 - 5422 萨利赫 Dalia O。 2 Abdel Jaleel Gehad。 2 侯赛因 康复了。 3 Natalini Benedetto 1 植物生物化学部门 国家研究中心(NRC) 33 El Buhouth圣(原El解放圣) Dokki 吉萨 12622年以上 埃及 nrc.sci.eg 2 药理学系 国家研究中心(NRC) 33 El Buhouth圣(原El解放圣) Dokki 吉萨 12622年以上 埃及 nrc.sci.eg 3 生药学部门 国家研究中心(NRC) 33 El Buhouth圣(原El解放圣) Dokki 吉萨 12622年以上 埃及 nrc.sci.eg 2020年 1 5 2020年 2020年 22 10 2019年 09年 03 2020年 13 03 2020年 1 5 2020年 2020年 版权©2020 Farouk el - baz et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

背景。肝脂肪变性是最常见的一种慢性肝脏疾病,被认为是一个主要慢性疾病的风险因素。 目的。本研究旨在调查的影响 杜氏,microalga及其对老年性肝脂肪变性的孤立的玉米黄质以及他们下属的机制。 研究设计。与年龄相关的肝脂肪变性是由D-galactose腹腔注射诱导大鼠(200毫克/公斤/天)连续八周。 d .盐水湖生物质(BDS;450毫克/公斤),其极性馏分(PDS;30毫克/公斤),类胡萝卜素分数(CDS;30毫克/公斤),孤立的玉米黄质heneicosylate (ZH型;250年 μ克/公斤)是口头管理D-galactose治疗大鼠两周。 方法。收集血液样本的最后剂量后24小时 d .盐水湖治疗,动物牺牲,和肝脏组织被孤立。血清及肝组织匀浆被用于进一步的调查。肝组织也被用于组织病理学和免疫组织化学检查。计算虚拟对接研究生物活性的候选人进行确认提出的作用机制。 结果。口服治疗D-galactose-injected老鼠在BDS, PDS, cd,或ZH型改善血清肝函数参数以及血清脂联素水平,载脂蛋白B 100,胰岛素。此外, d .盐水湖肝脂质含量减少,氧化还原状态生物标志物,炎性细胞因子,显示凋亡特性。分子对接 β胡萝卜素和玉米黄质在不同受体参与脂肪变性的病理生理级联强调了可能的机制观察治疗效果。 结论。 d .盐水湖类胡萝卜素产生有益影响老年性肝脂肪变性通过氧化还原状态的规定,在衰老大鼠炎性指标,和凋亡生物标记。

 学院的科学研究和技术 1。介绍

非酒精性脂肪肝病(NAFLD),这种疾病是严格与肥胖和胰岛素抵抗(IR),特点是高,高甘油三酯血症,和肝脏脂肪浸润,这被称为肝脂肪变性( 1]。其发病率在老年人群更为普遍,它从简单的肝脏脂肪变性,通过非酒精性脂肪肝(NASH)先进的纤维化、肝硬化和肝细胞癌。这三种病理条件是伴随着心血管疾病和糖尿病的患病率和发病率升高( 2]。之前它已经被提出,老化过程可能通过各种机制诱发肝脂肪变性,最重要的是脂肪组织功能障碍,受损的自噬,和氧化还原状态 3]。

另一方面,细胞衰老是一个永久的细胞循环逮捕与线粒体功能障碍和促炎细胞因子的分泌,有助于与年龄相关的组织变性( 4]。已经观察到肝细胞培养衰老表型在老鼠的寿命( 5)和与年龄相关的人类肝脏疾病( 6]。然而,肝脏脂肪堆积和细胞衰老之间的关系尚不清楚。文中,假设由于脂肪代谢受损细胞衰老导致肝脂肪变性。

因此,当前的研究的目的是调查的影响 杜氏;单细胞海洋浮游植物,属于门绿藻门,最富有的天然类胡萝卜素生产商之一 β胡萝卜素和玉米黄质,与年龄相关的肝脂肪变性。同样,当前调查旨在揭开底层机制 d .盐水湖和主要类胡萝卜素对他们的行动。此外,对接研究进行了定义的亲和力 β胡萝卜素和玉米黄质向该转录因子目标确认一个体内研究实现在老年人肝脂肪变性诱导大鼠模型。

 2。材料和方法 2.1。类胡萝卜素的栽培和制备分数从<斜体> D。赛利娜< /斜体> 2.1.1。培养<斜体> D。赛利娜Photobioreactor < /斜体>

藻类物种( 杜氏)隔绝在Al-Fayoum盐池使用大胆的营养生长媒体含有氯化钠浓度为100 g / L分离纯化藻( 7]。在不断增长 d .盐水湖十天在实验室条件下,然后转移到一个垂直photobioreactor容量为4000 L。水库(1000升)tank-associated管道工程专有的清管系统被用于去除所有的生物膜。此外,10 L篮离心机收获是连接到系统。海藻连接数据采集系统用于在线测量。自来水是PBR用于藻类的培养。水消毒使用次氯酸盐,之后,硫代硫酸钠添加删除多余的次氯酸盐。氯测试执行,以确保没有余氯。营养液的大胆的用于种植 d .盐水湖。

一毫升每升的微量营养素的解决方案是添加到培养基中。保险文化的纯洁性,样品是定期和显微镜下检查。二氧化碳注入文化作为碳源。文化是留给成长直到生物量达到最大(2 - 2.5通用/ L)。藻类生物量收获使用篮离心机在2000 rpm,用水洗了两次,干在阳光下干燥器的温度达到约45°C,然后脚踏实地到均匀细粉。

 2.1.2。制备的类胡萝卜素分数<斜体> D。赛利娜< /斜体>

的干生物量 d .盐水湖是广泛研磨,以确保细胞膜的破裂。藻类生物量是先后提取。最初,非极性溶剂混合物(正己烷、乙酸乙酯(80:20))被用于提取浸渍在昏暗的条件下,直到疲惫的目标类胡萝卜素含量。carotenoid-rich分数是过滤和干燥在减压下旋转蒸发器装置在温度不超过40°C,直到完全干燥干分数一直在黑暗的小瓶子在冰箱温度小于4°C进行进一步分析。microalgal生物量的残渣可以干,进一步提取70%的甲醇,直到疲惫呈现极地分数过滤和干燥在相同条件下类胡萝卜素的分数。类胡萝卜素分数受到重复的色谱分析的分离和净化玉米黄质其heneicosylate酯之前报道的形式( 8]。

 22。对接研究 2.2.1。计算方法

对接的计算进行了使用DockingServer [ 9]。MMFF94力场是用于配体分子的能量最小化( β使用DockingServer胡萝卜素和玉米黄质)。Gasteiger部分指控被添加到配体原子。极性的氢原子被合并,可旋转的债券被定义。NF -对接进行了计算 κB和Nrf2蛋白质模型。重要的氢原子,Kollman联合原子类型指控,和溶解参数被添加的帮助下AutoDock工具( 10]。亲和力(网格)的地图网格20×20×20分和0.375间距生成使用Autogrid程序。AutoDock参数集和军事介电函数被用于计算范德瓦耳斯和静电条件,分别。使用拉马克的对接模拟进行遗传算法(LGA)和索利斯和湿胎本地搜索方法( 11]。初始位置、方向和扭转的配体分子随机设置。每个对接实验是来自10个不同的运行后,将终止最多250000年能源评估。人口规模是设置为150。在搜索期间,转化步骤0.2和四元数和扭转步骤5。

 2.3。药理研究 2.3.1。动物

男性西星白化大鼠体重130 - 150克从动物屋群获得国家研究中心,包含木屑安置在塑料笼子,在常规条件下保存。老鼠被提供了一个基础饮食和水随意和允许适应实验室环境在实验开始前7天。实验项目依照道德程序批准由国家研究中心(Dokki,吉萨金字塔,埃及)医疗研究伦理委员会使用动物主题。

 2.3.2。化学物质

从Sigma-Aldrich D-Galactose购买(圣路易斯,密苏里州,美国)。所有其他的化学物质从标准购买商业供应商和质量均为分析纯。

 2.3.3。实验设计

与年龄相关的肝脂肪变性是由D-galactose腹腔注射诱导大鼠(200毫克/公斤/天)连续八周。三十个白化病老鼠分为五组;每组包含六大鼠。组我收到生理盐水作为阴性对照组,和组II收到D-galactose八周,作为一个积极的控制;此外,团体III、IV, V和VI收到D-galactose连续八周注射 d .盐水湖生物质(BDS;450毫克/公斤;po),其极性馏分(PDS;30毫克/公斤;po),类胡萝卜素分数(cd;30毫克/公斤;po),其孤立的玉米黄质(ZH型;250年 μ克/公斤;分别po),连续两周。剂量计算根据分数的收益率和孤立的化合物,ZH型。

收集血液样本的最后剂量后24小时 d .盐水湖治疗,动物牺牲,肝脏是孤立的。血清是用来测量肝脏功能参数。肝组织匀浆用于进一步进行生化分析。肝组织固定在10%福尔马林进一步组织病理学和免疫组织化学检查。

(1)生物化学评估。血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)测定的方法莱特曼和弗兰克尔 12]。吸光度测量在510 nm,血清的结果表示在单位每毫升。血清胰岛素、脂联素、载脂蛋白B (Apo B)使用ELISA测定,与测试试剂盒(EIAab)。

肝甘油三酯(TG)测定colorimetrically在505海里(492 - 550纳米) 13]。同样,肝脏总胆固醇(TC)是由酶比色法估计在505海里(492 - 550纳米) 14]。

过氧化氢酶(CAT)和glutathione-S-transferase(销售税)化验的方法魏和弗伦克尔 15)和Wilce和帕克( 16]。白细胞介素- 6 (il - 6)的组织水平也决定使用一个测试与ELISA试剂盒(Immuno-Biological实验室)根据法拉利的方法等。 17]。组织的细胞因子水平调制器核转录因子(NF -κB κ核因子B),如2 (Nrf2)、髓过氧化物酶(MPO)和半胱天冬酶使用ELISA测定,与测试试剂盒(EIAab)。

 2.3.4。组织病理学和免疫组织化学评估

肝脏样本切割,每组实验动物的切除,与生理盐水、10%福尔马林固定,加工后石蜡包埋切片机技术。部分是在5 μ米厚度,alcohol-xylene系列加工中,alum-haematoxylin和伊红染色。40岁以下的部分进行显微镜下评估x放大组织病理学变化。

部分(5 μ米)准备和安装在poly-l-lysine-coated幻灯片。deparaffinization后,抗原检索应用使用柠檬酸缓冲(0.1米,pH值:6.0)。过氧化氢(3%)被用于抑制过氧化物酶活动。bcl - 2主要抗体(Santa Cruz)用于固定组织抗原检测,探索二次合工具包提供的抗体(Labvision)。3-Amino-9-ethylcarbazole (AEC) (Labvision)作为发色体复染色幻灯片,这是评估在光学显微镜(尼康Eclipse e - 600)。4.0 immunopositive细胞计数、NIS尼康是利用图像分析软件。immunopositive细胞在四个不同的目标地区数低于100 x放大。

 2.3.5。统计分析

数据意味着+ SE。统计分析的数据进行了使用单向方差分析(方差分析)其次是图基的多重比较检验来判断不同群体之间的差异。统计学意义是可以接受的水平 P < 0.05 。数据分析是使用软件完成GraPad棱镜(第5版)。

 3所示。结果 3.1。对接研究 3.1.1。在Nrf2对接

都显示高亲和力配体(−9千卡每摩尔和−6.59千卡每摩尔 β胡萝卜素和玉米黄质,分别对受体虽然)频率为100% β胡萝卜素显示更高的抑制常数(IC50;252.98和14.89 nM β胡萝卜素和玉米黄质,分别),反映了更高的稳定性(表中的复杂 1和图 1)。

对接的 β胡萝卜素和玉米黄质在活跃的网站不同的目标蛋白质。

化合物 网站 亲和力(千卡每摩尔) 频率(%)
β-胡萝卜素 Nrf2 −9.00 One hundred.
NF - κB −2.26 60
玉米黄质 Nrf2 −6.59 One hundred.
NF - κB 0.03 20.

绑定的亲和力是表示为估计能源千卡每摩尔。

对接的 β胡萝卜素和玉米黄质Nrf2 (a和b)和NF - κB (c和d)。

 3.1.2。对接NF -κ<斜体> < /斜体> B

玉米黄质显示低亲和力(0.03千卡每摩尔),而 β胡萝卜素显示适度的亲和力(−2.26千卡/摩尔60%频率)对受体(表 1和图 1)。

 3.2。药理研究 3.2.1之上。血清肝函数参数

注入D-galactose(200毫克/公斤;连续八周I.P)导致显著增加血清肝函数参数,表现出高度的血清ALT和AST水平的2.6和1.6倍,分别。治疗D-galactose-injected老鼠与BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)血清ALT水平显著降低了34%,39%,49%,和55%,血清AST水平降低了10%,20%,26%,和36%,分别与未经处理的大鼠相比(表 2)。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝生化参数与年龄相关性肝脂肪变性。

组 参数
血清ALT (U /毫升) 血清AST (U /毫升) 血清胰岛素(ng / ml /) 血清脂联素( μg / ml) 血清飞机观测100 ( μg / ml) 肝脏TG(毫克/克组织) 肝TC(毫克/克组织)
正常的 47.85±0.62 89.08±4.08 1.125±0.129 7.04±0.728 10.16±0.508 136.68±5.43 36.27±2.70
D-GAL 123.56±10.66 ∗ 142.3±6.09 ∗ 6.06±0.61 ∗ 1.575±0.226 ∗ 38.59±2.202 ∗ 747.69±22.35 ∗ 135.08±13.23 ∗
D-GAL + BDS 81.15±4.08 ∗ @ 126.7±4.02 ∗ 2.95±0.22 ∗ @ 5.74±0.285@ 27.07±1.897 ∗ @ 611.05±14.58 ∗ @ 118.425±9.19 ∗ @
D-GAL + PDS 75.06±4.68 ∗ @ 114.02±5.28 ∗ @ 2.01±0.17@ 5.27±1.129@ 19.03±2.103 ∗ @ 458.22±14.62 ∗ @ 103.10±9.78 ∗ @
D-GAL + cd 63.59±6.26@ 105.87±6.2@ 3.25±0.33 ∗ @ 5.375±0.324@ 19.73±2.601 ∗ @ 401.49±15.99 ∗ @ 79.00±6.67 ∗ @
D-GAL + ZH型 54.32±5.22@ 93.10±6.88@ 2.06±0.02@ 6.5±0.599@ 20.25±0.871 ∗ @ 374.26±11.14 ∗ @ 58.83±5.15@

与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤ip)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,血液样本被收集和血清ALT和AST测量。老鼠是牺牲和均质,和组织匀浆用于TG, TC测量。数据表示为均值±SEM的正常价值。统计分析是由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer测试多个比较。 ∗ 明显不同于正常对照组 P ≤ 0.05 。@显著不同于D-galactose控制 P ≤ 0.05 。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝氧化还原状态生物标志物与老年性肝脂肪变性。

组 参数
过氧化氢酶(U / g组织) 肝销售税(U / g组织) 肝MPO (U / g组织)
正常的 0.98±0.08 7.21±0.29 3.15±0.29
D-GAL 0.25±0.016 ∗ 3.12±0.16 ∗ 10.71±0.39 ∗
D-GAL + BDS 0.48±0.045 ∗ @ 5.84±0.07 ∗ @ 7.60±0.70 ∗ @
D-GAL + PDS 0.56±0.034 ∗ @ 6.22±0.10 ∗ @ 6.71±0.16 ∗ @
D-GAL + cd 0.65±0.02 ∗ @ 6.72±0.22@ 5.89±0.57@
D-GAL + ZH型 0.78±0.049 ∗ @ 7.24±0.31@ 4.18±0.31 ∗ @

与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤I.P)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠被牺牲,肝组织是孤立和均质,和组织匀浆用于肝过氧化氢酶,销售税,MPO测量。数据表示为均值±SEM的正常价值。统计分析是由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer测试多个比较。 ∗ 明显不同于正常对照组 P≤0.05。@显著不同于D-galactose控制 P≤0.05。

 3.2.2。肝脂肪变性的指标

D-Galactose注射导致肝脂肪变性预测突出的畸变,通过降低血清脂联素水平以及海拔约78%的血清Apo B100达到3.8倍。空腹血清胰岛素水平也提高了5.4倍。此外,肝组织隔绝D-galactose治疗大鼠显示肝TC和TG含量的增加了4.4和5.4倍,分别(表 2)。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝Nrf2水平与老年性肝脂肪变性。与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(300毫克/公斤I.P) 5天/周6周。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠被牺牲和肝组织均质。组织匀浆用于Nrf2测量。数据表示为均值±SEM的正常价值。统计分析是由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer测试多个比较。 ∗ 明显不同于正常对照组 P ≥ 0.05 。@显著不同于D-galactose控制 P ≥ 0.05 。

口服治疗老年性肝脂肪变性与BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤)、cd(30毫克/公斤)或ZH型(250 μ克/公斤)调节血清脂联素的水平,Apo B100,胰岛素,而脂联素水平升高了2.6,2.3,2.4,和3.1倍,分别。Apo B和胰岛素水平下降了约30%,51%,49%,和48%,分别为51%,67%,46%,和66%,分别与对照组相比。此外,BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)显示调节肝脂质含量影响显著的肝TC和TG降低了约29%,36%,51%,63%,18%,39%,46%,和50%,分别比D-galactose治疗老鼠(表 2)。

 3.2.3。肝氧化还原状态的生物标志物

肝脂肪变性肝生物标志物是伴随着海拔的氧化还原状态显示肝过氧化氢酶和销售税水平显著下降了75%和57%,分别伴随着增加肝MPO水平的3.4倍。治疗肝脂肪变性的BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)调制肝过氧化氢酶1,1.3,1.7,2折的海拔分别;和肝的销售税约0.8,1,海拔分别1.2和1.3折”。他们还显示肝的MPO水平下降了29%,37%,45%,和61%,分别比D-galactose治疗老鼠(表 3)。

受Nrf2内源性抗氧化防御机制,一个关键氧化还原内稳态控制器,强烈的删节了老年性肝脂肪变性的感应D-galactose(200毫克/公斤I.P)连续八周。Nrf2显示下降约47% (91.1±3.9 pg / ml和194.9±6.7 pg / ml)。

治疗肝脂肪变性的BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)肝Nrf2水平增长了约56%,40%,45%,和76% (142.3±10.7,127.8±3.8,132.8±10.1,160.4±9.1 pg / ml和91.1±3.9 pg / ml),分别为(图 2)。

 3.2.4。肝脏炎症指标

肝脂肪变性是类似与一个明显的上升肝NF -炎症指标体现了这一点 κB和il - 6约4.2折(253.2±17.1 pg / ml和59.6±1.6 pg / ml)和2.3折(784.6±12.23 pg / ml和329.6±7.2 pg / ml),分别。治疗BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)降低了肝NF - ΚB约13%、25%、50%和54% (218.53±8.6,189.4±11.2,124.27±5.5,117.19±5.9 pg / ml和253.2±17.1 pg / ml),分别和降低肝il - 6 13%, 21%,和48%,(639.5±24.2,421.3±23.5,464.33±5.9,384.16±38.5 pg / ml和784.6±12.23 pg / ml),分别与对照组相比(图 3)。

的影响 d .盐水湖肝NF - ΚB (a)和il - 6 (B)水平与老年性白化大鼠肝脏脂肪变性。与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤I.P)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠被牺牲和肝组织均质。组织匀浆用于il - 6和NF - ΚB测量。数据表示为均值±SEM的正常价值。统计分析是由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer测试多个比较。 ∗ 明显不同于正常对照组 P ≥ 0.05 。@显著不同于D-galactose控制 P ≥ 0.05 。

此外,脂肪变性肝caspase-3伴随着显著升高;一个标记细胞凋亡的1.7折(1.14±0.02 ng / ml和0.65±0.03 ng / ml)。然而,BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),和古银(250 μ克/公斤)发挥了调节作用caspase-3表明凋亡活动上述化合物通过降低caspase-3约37%,22%,29%,和30% (0.72±0.005,0.89±0.03,0.81±0.2,0.79±0.01 ng / ml和1.14±0.02 ng / ml),分别与D-galactose-injected老鼠(图 4)。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝caspase-3内容与老年性肝脂肪变性。与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤I.P)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠被牺牲和肝组织均质。组织匀浆用于半胱天冬酶评估。数据表示为均值±SEM的正常价值。统计分析是由单向方差分析(方差分析)其次是Tukey-Kramer测试多个比较。 ∗ 明显不同于正常对照组 P ≤ 0.05 。@显著不同于D-galactose控制 P ≤ 0.05 。

 3.2.5。肝组织病理学检查

感应的老年性肝脂肪变性D-galactose(200毫克/公斤I.P)进行为期八周的组织病理学显示显著的变化架构显示中央静脉扩张和拥挤的炎性细胞浸润在几个区域除了闭塞的正弦曲线,肝细胞的坏死,胞质空泡形成。

分离大鼠肝部分处理BDS(450毫克/公斤)显示扩张拥挤的中央静脉用最小的炎性细胞浸润几乎保留肝小叶和部分分离大鼠治疗PDS(30毫克/公斤)揭示细胞质空泡形成区域三个层面的主要血管扩张充血,noncongested中央静脉炎症细胞浸润的门户地带。

同样,cd(30毫克/公斤)展出几乎正常肝小叶中央静脉平均大小的,而ZH型(250 μ克/公斤)显示厚壁的血管保存肝结构如图 5。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝组织病理学变化与年龄相关的肝脂肪变性。与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤I.P)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠都牺牲了,肝组织被隔离和10%的福尔马林固定的组织病理学检查(40 x放大,他走时)。

 3.2.6。免疫组织化学肝bcl - 2评估

免疫组织化学bcl - 2评估肝脏的部分有老年性肝脂肪变性的老鼠显示显著减少bcl - 2内容;然而,从大鼠肝脏部分隔离治疗BDS(450毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),和古银(250 μ克/公斤)表示高度的积极性揭示改进。另一方面,PDS(30毫克/公斤)显示弱分散染色这意味着感情以最小的改进,如图 6。

的影响 d .盐水湖在白化大鼠肝bcl - 2的表达与年龄相关的肝脂肪变性。与年龄相关的肝脂肪变性是由注射诱导大鼠D-galactose(200毫克/公斤I.P)八个星期。老鼠注射口服D-galactose两周服用BDS(450毫克/公斤),PDS(30毫克/公斤),cd(30毫克/公斤),或ZH型(250 μ克/公斤)。24小时后,最后一个剂量的治疗,老鼠牺牲和肝脏组织分离和10%的福尔马林固定的组织病理学检查(100 x放大)。

 4所示。讨论

肝脂肪变性已被证明在本研究升高血清肝功能生物标志物,ALT和AST水平和增加肝脏TG, TC内容以及扭曲的血清胰岛素水平、脂联素和Apo B100。脂肪组织中起着举足轻重的作用作为一个内分泌器官,导致能量平衡,葡萄糖体内平衡,和炎症( 18]。这种关系见图 7。口服治疗D-galactose-treated老鼠 d .盐水湖生物量、类胡萝卜素和极地分数以及它孤立的玉米黄质2周显示监管作用的肝脂质含量明显减轻肝TC和TG,比D-galactose-treated老鼠。 β脂溶性抗氧化剂丰富的胡萝卜素 d .盐水湖,主要作为维生素a的前体,因此它有一个直接影响胆固醇合成( 19, 20.]。摄入后,40碳原子类胡萝卜素裂解C15 retionol,维生素A,这是进一步氧化成视黄酸。后者是轮流负责的规定在许多代谢过程中相关基因的表达( 21]。

的作用机制 d .盐水湖微藻在缓解老年性肝streatosis。是:抗氧化反应元素;猫:过氧化氢酶;FFA:游离脂肪酸;销售税:glutathione-S-transferase;il - 6:白细胞介素- 6;NF - κ核因子B: kappaβ;2 Nrf2: NF-E2-related因素;ROS:活性氧;TG:甘油三酯。

100年飞机观测,血脂异常标志和脂肪变性预测( 22),已经在D-galactose治疗大鼠显著升高。同样,脂联素最丰富adipose-specific adipokine,减少肝脏炎症和纤维化。脂联素预测脂肪变性年级和肝脂肪变性的严重程度直接影响或与之相关的存在更严重的红外,随后导致hyperinsulineamia [ 23]。

肝streatosis肝IR的也是一个重要因素,证明在目前研究高。几个临床试验相关的存在与更严重的血脂异常,肝脂肪变性高,脂肪组织和肝脏中红外肥胖T2糖尿病患者。最近的一项研究表明,肝steatosis-associated红外诱导慢性炎症和红外通过改变蛋白质分泌概要文件( 2]。口腔治疗的老鼠与老年性肝脂肪变性 β类胡萝卜素和古银 d .盐水湖类胡萝卜素分数为2周增加血清脂联素水平和降低血清Apo B和胰岛素水平与对照组相比。同样的, d .盐水湖生物量和极地分数也引起类似的效果虽然温和的效能。之前显示 β胡萝卜素和玉米黄质是强有力的抗氧化剂可以作为抑制对红外光谱的发展( 24];因此,它有能力减少空腹血清胰岛素水平。

强大的几项研究提供的证据是与年龄相关的肝脂肪变性的主要原因是线粒体自由基的积累导致氧化还原状态的增加和抗氧化防御机制( 25, 26]。此外,这个不平衡引发各种疾病包括慢性肝功能衰竭,肝纤维化,老化 27]。氧化代谢D-galactose在当前的研究中导致生成大量的活性氧(ROS)在大鼠( 28]。这些副产品积聚在细胞并导致渗透压力以及提高氧化还原状态,从而导致加速衰老和衰老。

然而,连续暴露于氧化还原状态减少这种能力导致慢性疾病的发生。,正常情况下,氧化还原内稳态的关键控制器Nrf2,转录因子,负责生产的内源性抗氧化剂,克服这一病理状态( 29日- - - - - - 31日]。在老化,不幸的是,Nrf2蛋白质不是保持生活的时候解毒的必要性时有效地增长,导致许多慢性疾病的发生( 32]。事实上,之前的调查在我们的实验室实施表明显著下降的总肝内容Nrf2在随后的减少老龄大鼠肝过氧化氢酶和销售税和MPO水平升高 33)这是依照这个研究和其他( 34, 35]。

简单地说,类胡萝卜素的一部分 d .盐水湖ZH型显示以及孤立突出的效果适得其反,肝脂肪变性与衰老有关。这是由于类胡萝卜素的含量高特别是玉米黄质也以其高的抗氧化能力。视黄醇和类胡萝卜素,特别是 β胡萝卜素具有强大的抗氧化能力,因此,防止肝组织损伤。考虑的强有力的作用 β胡萝卜素的前体维生素a,一种强有力的抗氧化剂在打击ROS ( 36),可能通过调节能力Nrf2 /路径,如图 7。

同样,Nrf2不仅是一个氧化还原监管机构还在连接细胞反应中起着重要作用,大量的促炎的侮辱。另一方面,在动物模型中,高脂肪饮食和肥胖已被证明激活肝脏炎性介质,NF - κB,导致肝脏炎症通过增加局部炎性细胞因子il - 6。治疗老年性肝脂肪变性 d .盐水湖微藻及其在衰老小鼠表现出孤立的玉米黄质抵消对肝的il - 6水平的影响及其调制器NF - κb .另一方面,脂联素水平升高的治疗组是消极与炎症介质有关,即,il - 6,主要产自枯氏细胞和肝星状细胞,部分肝细胞发炎。促炎细胞因子生产的衰减由脂联素介导的衰减NF -的易位 κB核( 37]。

对接的研究也进行了描述的亲和力 β胡萝卜素和玉米黄质向关键管理因素。这些因素应该是参与调节的影响 β胡萝卜素和玉米黄质肝脂肪变性,即Nrf2和NF - κB,以确保建议的机制的作用 d .盐水湖衰减的肝脂肪变性。之间的高亲和力 β胡萝卜素的类胡萝卜素分数 d .盐水湖和孤立的玉米黄质Nrf2表示负能量的绑定。这给建议可能的直接交流,这是通过复杂的离解Nrf2 /拦截释放自由Nrf2。因此,它增加了表达的内源性抗氧化剂,克服不平衡的氧化还原状态。另一方面,高之间的亲和力 β胡萝卜素和NF - κB和玉米黄质和NF -之间在一个较低的程度上 κ证实的抗炎活性 d .盐水湖这使它能够减少抗炎细胞因子il - 6等。

此外,过度凋亡已被确定在肝脏老化,肝脂肪变性和急性和慢性病毒性肝炎对抗衰老。然而,持续的细胞凋亡也一直与肝纤维化的发展。在目前的调查,与年龄相关的肝脂肪变性肝caspase-3显示海拔,一个著名的细胞凋亡的标志。然而, d .盐水湖表现出凋亡活动比未经处理的老鼠衰老。此外,bcl - 2蛋白表达免疫组织化学检测证实了这一发现,而肝脏部分孤立的处理显示凋亡反应更少。

所有这些结果已经证实的肝组织病理学检查膨胀和拥塞检测中心以及门户与炎症细胞浸润血管门户区和变性肝细胞实质。这些发现是按照 38, 38]。治疗 d .盐水湖类胡萝卜素的组织病理学检查显示,改进的肝组织表现出几乎平均大小的正常肝小叶中央静脉,而玉米黄质显示厚壁血管减毒与保留肝架构比出现部分隔绝老鼠极地对待分数。

 5。结论

从以前的结果,可以得出结论 d .盐水湖微藻与年龄相关的改善衰老大鼠肝脂肪变性。这些影响归因于的抑制性影响 d .盐水湖微藻及其主要成分,即 β胡萝卜素和玉米黄质,在氧化还原状态通过调制Nrf2通路,和炎症指标通过对炎性介质的影响、NF - κB,并最终在代谢体内平衡进而缓解凋亡生物标记。

 缩写: ALT:

丙氨酸转氨酶

 方差分析:

单向方差分析

 是:

抗氧化反应的元素

 AST:

天冬氨酸转氨酶

 BDS:

杜氏生物质

 猫:

过氧化氢酶

 cd:

杜氏类胡萝卜素的分数

 销售税:

Glutathione-S-transferase

 il - 6:

白细胞介素- 6

 红外光谱:

胰岛素抵抗

 MPO:

髓过氧物酶

 非酒精性脂肪肝:

非酒精性脂肪肝病

 纳什:

非酒精性脂肪肝炎

 NF - κB:

核因子k B

 Nrf2:

核因子如2

 PDS:

杜氏极地分数

 TC:

总胆固醇

 ROS:

活性氧

 TG:

甘油三酸酯

 ZH型:

玉米黄质。

 数据可用性

用于支持本研究的所有数据将从相应的作者。

 的利益冲突

所有作者声明没有利益冲突与这篇文章的出版有关。

 确认

这项工作是支持的联盟题为“综合医药联盟(IPA)”。这个联盟由学院“埃及下的科学研究和技术研究和技术联盟(EG-KTA)计划。”作者也感激Rofanda m·伯克尔博士病理学系以往大学埃及,对她的支持,组织病理学检查。

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