Bergapten (5-methoxypsoralen 5-MOP)是一种植物的furocoumarin与抗炎作用。本研究调查的影响在两个相关的过敏性炎症通路的肥大细胞脱粒。化合物48/80和脂多糖(LPS)被用来激活IgE-independent通路而牛血清白蛋白(BSA)用作IgE-dependent通路过敏原。调节bergapten对肥大细胞脱颗粒的影响,中性粒细胞外渗,蛋白质浓度、肺组织病理学,氧化应激是评估。Bergapten 10点30和100年<我talic>
μ我talic>g / ml 15分钟稳定肥大细胞在大鼠肠系膜组织破坏<我talic>
在体外我talic>当管理<我talic>
在活的有机体内我talic>3、10和30毫克公斤
过敏是一种影响人类的常见疾病,也是负责重要的发病率和死亡率。普遍的过敏性疾病,如过敏性反应、哮喘、鼻炎、过敏性皮炎近年来增加了人口(尽管一般健康改善
过敏性反应。I型超敏反应是一种急性过敏反应引起的释放化学介质从肥大细胞和嗜碱粒细胞激活( 对过敏性疾病目前可用的治疗方法包括使用吸入型皮质类固醇激素如fluticasone,肥大细胞稳定剂的例子nedocromil,白三烯抑制剂与和扎鲁司的例子,和长效<我talic>
β我talic>2
雄性C57BL / 6小鼠(25 - 30 g)和雄性sd大鼠中(250 - 300 g)从野口购买纪念医学研究所,加纳大学Legon,和安置标准实验室条件下(温度25±2°C 12 h光暗周期)动物屋的药理学、药学和制药科学学院KNUST,加纳。实验动物是处理符合动物福利法规(美国农业部1985年;我们的代码,42南加州大学<我talic> §我talic>289 d)和公共卫生服务政策人道关怀和使用实验动物(小灵通2002)。使用实验动物伦理审查委员会批准的药品和制药科学教师,KNUST。
Bergapten (5-methoxypsolaren 5-MOP),化合物48/80 (C2313),脂多糖(LPS);<我talic> 大肠杆菌我talic>血清型(O55: B5)和地塞米松是从Sigma-Aldrich采购(圣路易斯,美国)。牛血清白蛋白(BSA)从PAA购买实验室(德国马尔堡),破伤风白喉百日咳(DPT)疫苗免疫接种单位,获得南Suntreso政府医院(加纳库马西),三氯乙酸(TCA),硫代巴比土酸(稍后通知),重铬酸钾,钠碳酸氢盐,正磷酸盐二氢钠一水合物,氯仿,磷酸氢二钠是从BDH采购化学品(英国英格兰)完整的蛋白酶抑制剂鸡尾酒平板电脑购买从圣克鲁斯生物技术(美国达拉斯,TX)。
凯利和维纳的方法(
我:Ringer-Locke
2:生理盐水(0.9% w / v氯化钠)
第三:色甘酸二钠(10<我talic>
μ我talic>克毫升 IV-VI: bergapten 10、30和100<我talic>
μ我talic>克毫升
样本孵化为15分钟37°C。测试组织除了Ringer-Locke-treated天真的控制是进一步孵化与1 10分钟<我talic> µ我talic>g C48/80。所有组织都沉浸在甲醛溶液(4%)包含甲苯胺蓝(0.1%,pH值2.5)30分钟和传输通过丙酮、二甲苯两次固定和肥大细胞染色,分别。组织被安装在幻灯片和高功率光显微镜下观察(徕卡M DM2500)×40放大。肥大细胞计数和百分比保护从脱粒计算五个随机选择的字段。
全身过敏反应早些时候诱导方法后被崔et al。
组我(天真的控制):生理盐水10毫升公斤
第二组(积极控制):色甘酸二钠50毫克公斤
组III-V(测试组):bergapten 3、10和30毫克公斤
老鼠收到C48/80(8毫克公斤
洛瑞的改性方法(
组我(天真的控制):生理盐水10毫升公斤
第二组(疾病控制):生理盐水10毫升公斤
第三组(积极控制):地塞米松10毫克公斤
组IV-VI: bergapten 3、10和30毫克公斤
测试老鼠挑战与有限合伙人(<我talic>
大肠杆菌我talic>O55: B5, 0.5毫克毫升 气管小心地通过中线切口,公开和肺洗3×1毫升的冷生理盐水避免污染腔的内容与血液和肺组织损伤。气管插管,支气管肺泡灌洗液(BALF)收集的愿望与巴斯德吸管进埃普多夫管,用于中性粒细胞计数、和蛋白质含量估计如下:
左叶的肺是仔细并立即删除缓冲福尔马林固定在10%。肺组织是在一个自动处理组织处理器(TP 1020年徕卡生物系统,位于德国),连续在乙醇脱水,二甲苯清除,嵌入在1160年使用徕卡如石蜡包埋机(徕卡生物系统,位于德国)。横向部分3<我talic>
µ我talic>2155是用切片机(RM RTS,徕卡生物系统,位于德国)。组织被苏木精和伊红染色()),安装在幻灯片和数字光显微镜下看(DM 750年徕卡微系统公司,位于德国)配备数码相机(ICC 50高清,徕卡微系统公司位于德国)。组织病理学观察发现蒙蔽的方式。定量分析与执行ImageJ分析工具(版本1.50)。一种方法被Zare et al。
系统性炎症和LPS诱导C57BL / 6小鼠采用洛瑞的改性方法( Sinha的方法( 超氧化物歧化酶的活性决定后Misra和Fridovich[描述的方法 SOD活性在单位每毫克蛋白表达,酶活性的1单位所需的酶量防止肾上腺素的自动氧化计算25°C以下方程: 希斯描述的方法和封隔器
在这个分析,描述的方法Gohil et al。
组我(天真的控制):生理盐水10毫升公斤
第二组(积极控制):强的松10毫克公斤
组III-V(测试组):bergapten 3、10和30毫克公斤
老鼠与250年的挑战<我talic>
µ我talic>l BSA毫升(0.5毫克
数据分析使用GraphPad棱镜为Windows版本6.01(美国圣地亚哥GraphPad棱镜软件)。结果的平均值±标准误差(SEM),和统计差异治疗组相比,使用单向方差分析(方差分析),其次是Dunnett事后测试多个比较,95%的置信区间。log-rank (Mantel-Cox)测试是用于分析Kaplan-Maier生存曲线。<我nline-formula>
微观的实地观察和随后的部分大鼠肠系膜组织的肥大细胞计数显示紫色染色完好无损(1)和脱粒(2)肥大细胞(数字
Anti-anaphylactic bergapten活动使用复合48/80-induced全身过敏反应模型进行了研究。C48/80腹腔注射诱导小鼠100%的致命冲击控制在10分钟(图 bergapten对C48/80-induced系统性过敏反应。C57BL / 6小鼠接受要么盐水10毫升公斤
与有限合伙人烟雾化之后,有一个增加中性粒细胞的外渗到支气管肺泡灌洗液(BALF)。中性粒细胞水平显著升高到10.83±0.83×10 bergapten对中性粒细胞外渗的影响和BALF中总蛋白LPS-induced肺部炎症。C57BL / 6小鼠与生理盐水治疗10毫升公斤
LPS-induced肺部炎症导致泄漏的增加蛋白质在支气管肺泡灌洗液。总蛋白质BALF显著升高到4.23±0.23 g l
肺组织病理学分析来评估在LPS-elicited bergapten肺部炎症的影响。正常的肺中可观察到架构saline-treated天真的对照组。肺泡空间与很少或没有明显的积累细胞细支气管周围(图 bergapten对肺损伤的影响在LPS-induced肺部炎症。C57BL / 6小鼠分组和作为天真的控制,盐水10毫升公斤
脂多糖诱导氧化应激在实验动物就是明证抗氧化剂酶的水平测量。猫的活动组织上层清液明显减少到5.67±0.63亩/毫克蛋白saline-treated LPS-challenged疾病控制相比,16.75±0.60亩/毫克蛋白saline-treated天真的控制(图 bergapten对氧化应激的影响标记LPS-induced肺部炎症。C57BL / 6小鼠与生理盐水治疗10毫升公斤
在上层清液SOD活性降低到6.62±1.70 U /毫克蛋白saline-treated有限合伙人要求疾病控制相比30.25±1.23 U /毫克蛋白在天真的控制(图
与猫的活动减少和SOD, MDA水平有显著增加到68.79±2.48 nmol /毫克蛋白saline-treated LPS-challenged疾病控制相比,12.38±1.70 nmol /毫克蛋白saline-treated天真的控制(图
腹腔内的牛血清白蛋白(BSA)敏化和挑战诱发小鼠过敏性休克,死亡率100% saline-treated天真控制老鼠(表 bergapten对三重antigen-induced活跃的过敏反应。
C57BL / 6小鼠致敏的单一政府的500年<我talic>
µ我talic>l BSA毫升(0.5毫克
治疗
不。的死亡
%的死亡率
生存比例(%)
盐水控制(10毫升公斤 5
One hundred.
0.00
强的松(3毫克公斤 1
20.
80.00
Bergapten(毫克公斤
3.0
3
60
40.00
10.0
1
20.
80.00
30.0
0
0
100.00
我们探索bergapten的影响(5-MOP)在两个相关的过敏性炎症通路的肥大细胞脱粒:一个IgE-independent途径,分别复合48/80和脂多糖(LPS)被用来诱导炎症和IgE-dependent通路中牛血清白蛋白(BSA)作为过敏原的来源。前者是由相互作用的免疫球蛋白与巨噬细胞和嗜碱粒细胞的主要途径,而后者是引发聚合的IgE绑定到高亲和力受体(Fc<我talic>
ε我talic>RI)表面的肥大细胞和嗜碱粒细胞(
48/80的机械化、复合刺激肥大细胞和启动信号转导通路的激活导致的渗透率增加柱状细胞的脂质双分子层膜,导致扰动。化合物48/80刺激磷脂酶C (PLC)的释放,最终导致水解磷脂酰肌醇4日5-biphospahte (PIP)
LPS-induced炎症是一个标准化的模型,主要用于炎症通路的活化机理的研究在系统性炎症反应。正如预期的那样,在我们的研究中,有限合伙人中蛋白质含量增加,中性粒细胞外渗进BALF saline-treated LPS-challenged组相比,生理盐水对照组。LPS-induced肺部炎症造成渗漏与后续的招募中性粒细胞和巨噬细胞激活的蛋白质进入间质和肺泡
LPS-induced系统性炎症和氧化应激之间的显著相关性建立了(
的参与IgE-dependent肥大细胞脱粒也调查活动过敏模型。活跃的三重抗原引起的过敏反应与牛血清白蛋白(BSA)是一个关键的模型研究I型过敏的症状效果。在该测试中,bergapten产生40 - 100%的生存比例对活跃小鼠过敏性抗原致敏和挑战。BSA的球蛋白分数作为触发过敏反应的过敏原。鼠标积极敏化BSA的过敏反应是由免疫球蛋白G(免疫球蛋白)介导短延迟反应和免疫球蛋白E (IgE)介导长延迟反应(
综上所述,本研究揭示了bergapten管理的潜在好处过敏性炎症条件下证明了其能力减弱过敏airway-induced过敏性炎症的小鼠模型。
数据源自于这个研究包含在手稿。所有数据已经沉积的研究库恩克鲁玛科技大学,加纳库马西,。访问这些数据将被作者要求。
作者宣称没有利益冲突。
作者感谢整个部门的技术人员药理学、药学和制药科学学院,健康科学学院,恩克鲁玛科技大学,加纳库马西,。本研究形式bergapten研究的一部分,导致一位哲学大师的奖项,硕士研究生。