APS 药理科学的进步 1687 - 6342 1687 - 6334 Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/3790860 3790860 研究文章 Methanolic提取的 九里koenigiil .抑制Glutamate-Induced疼痛和涉及ATP-Sensitive K+频道作为Antinociceptive机制 Sharmin Ani Nushrat 1 Chakraborty Sudip 1 http://orcid.org/0000 - 0002 - 3905 - 8627 Moniruzzaman 医学博士。 1 Quock 雷蒙德·M。 的药店 斯坦福大学孟加拉国 51 Shiddheswari路 达卡1217 孟加拉国 stamforduniversity.edu.bd 2016年 12 10 2016年 2016年 15 06 2016年 25 09年 2016年 2016年 版权©2016 Nushrat Sharmin Ani et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

九里koenigiil是一种多年生灌木,属于家庭芸香料。传统上,这种植物的叶子是广泛应用于治疗各种疾病和疾病包括疼痛和炎症。尽管研究人员揭示了这种植物的叶子的antinociceptive效应在过去的几年里,这些效应的机制仍然未知。因此,本研究评估一些antinociceptive methanolic提取的机制 m . koenigii(MEMK)叶子连同其antinociceptive潜力使用几个动物模型。MEMK antinociceptive效果的评估使用formalin-induced舔和醋酸段翻滚试验剂量的50,100和200毫克/公斤。此外,我们还合理的可能参与glutamatergic系统和ATP-sensitive钾离子通道在观察到的活动。我们的研究结果表明,MEMK显著( p < 0.01 )抑制福尔马林和醋酸引起的疼痛阈值剂量依赖性的方式。MEMK也显著( p < 0.01 )抑制glutamate-induced疼痛。此外,预处理与格列本脲(ATP-sensitive钾通道阻断剂)在10毫克/公斤显著( p < 0.05 )逆转MEMK-mediated镇痛效应。这些表明MEMK可能有潜力与glutamatergic交互系统和ATP-sensitive钾离子通道antinociceptive活动。因此,我们的研究结果有力地支持antinociceptive的影响 m . koenigii叶子和提供科学依据的镇痛剂使用传统医学。

 1。介绍

九里koenigiil . Sprengel(家庭:芸香料)是一个小而强大的闻多年生灌木,通常生长在东南亚国家和被称为咖喱叶植物。这种植物被广泛种植的叶子具有特色风味和香味,用作调味品和民族食品增味剂( 1, 2]。传统上,这种植物的叶子被用来治疗各种疾病和障碍,如疼痛、炎症、瘙痒,癌症,糖尿病,血液疾病( 1, 3]。以前的植物化学的筛选显示丰富的配置文件的简单酚酸包括高卢,肉桂,单宁,咖啡,阿魏、绿原,香荚兰酸咖喱叶( 1]。在这些叶子包括确定的精油 α蒎烯, β-phellandrene (E)石竹烯, α-selinene、十四酸、棕榈酸、c-eudesmol a-muurolol、金合欢醇(Z, E)和(Z, Z)法尼醇( 4]。树叶也含有单萜派生的碳氢化合物和醇具有抗氧化电位 在体外( 5]。2013年,马中村和孤立的研究小组六个新的咔唑生物碱包括karapinchamines A和B ( 6),N-benzyl carbazole-A, N-benzyl carbazole-B、iso-koenidine和iso-koenigine十四其他已知的咔唑生物碱有王亚南和抗癌特性 7]。

随着这丰富的植物化学的特点,研究还揭示了降血脂药,治疗糖尿病药( 1],王亚南、止泻剂和抗氧化性能( 3咖喱的树叶。尽管他们antinociceptive活动(中描述得很详细 8, 9),行动的机制还没有透露。因此,第一次,我们评估的可能参与glutamatergic系统以及ATP-sensitive K+渠道methanolic提取的 m . koenigii(MEMK)介导的小鼠的镇痛效应。此外,我们还证明MEMK的作用在两个传统的疼痛模型包括醋酸段扭动和formalin-induced舔测试。

 2。材料和方法 2.1。植物材料和提取

m . koenigii收集叶子从贝利,达卡,孟加拉国,2015年4月。样本然后被布斯拉汗原理科学官孟加拉国家植物标本,DACB的凭证号码:41516。粉干叶子(300克)和500毫升的甲醇浸软偶尔搅拌为72小时 25 ± 2 °C的温度。然后收集滤液干用旋转蒸发器和正常的气流,分别导致提取的16.50 g(收益率:5.50%)。这个粗提物进一步用于急性毒性和antinociceptive活动分析。

 2.2。药品和试剂

双氯芬酸钠和格列本脲从广场购买制药有限公司(达卡,孟加拉国)。99%甲醇,二甲亚砜(DMSO), l-glutamic酸、醋酸、福尔马林从默克公司采购(达姆施塔特,德国)。

 2.3。植物化学的筛选

原油methanolic提取的 m . koenigii定性测试来检测生物碱的存在,苷、丹宁酸,碳水化合物,还原糖,根据标准协议类黄酮和皂苷( 10]。

 2.4。动物

男性瑞士白化小鼠体重20 - 25 g收集动物研究分支的国际腹泻病研究中心,孟加拉国(位于)。动物是维持在标准实验室条件下(维持12 h光/暗周期, 25 ± 2 °C室温,55 - 65%的相对湿度)和位于B标准制定提供饮食和干净的水 随意。动物们保持实验室环境的前14天实验,实验前禁食过夜。所有实验动物伦理原则和指导方针后治疗动物科学实验(1995年)由瑞士医学科学院和制定瑞士科学院。协议在本研究进行的都是斯坦福大学的机构伦理委员会批准的孟加拉国(子/ IAEC / 15.07)。

 2.5。药物和治疗

双氯芬酸钠(10毫克/公斤)是腹腔内接种(i.p) 15分钟前疼痛的刺激。在所有的实验中,DMSO(车,0.1毫升/鼠标)或MEMK(50, 100,和200毫克/公斤)是口服药物诱导痛觉前30分钟。此外,格列本脲在10毫克/公斤的剂量是给定的标准药物前15分钟除了MEMK证明K参与的可能性+通道。

 2.6。急性毒性试验

动物被分成的组,每组包含五到七的动物。MEMK管理动物的剂量1000,2000和3000毫克/公斤以上规格和动物观察任何过敏反应或死亡率下72 h。与此同时,他们被允许免费的食物和水 随意( 11]。

 2.7。Formalin-Induced伤害感受

使用的过程类似于之前所描述的桑托斯和卡利斯托 12]。为每个组动物被随机选择和使用药物或MEMK标准。药物MEMK后60分钟,30分钟后,20 μL胸腔内注入2.5%福尔马林的腹侧表面的后爪老鼠。的动物被观察和数字舔、咬爪子被注入0-5th min(神经源性或早期阶段)和15-30th分钟注射福尔马林之后(炎症或晚期阶段)。

 2.8。醋酸段翻滚测试

伤害感受就可以诱导小鼠腹腔内注射0.6%醋酸(10毫升/公斤)药物后15分钟,30分钟后MEMK治疗。5分钟后醋酸注入,小鼠观察和苦难的总数(后肢的腹部收缩和伸展)为30分钟数( 13]。

 2.9。Glutamate-Induced伤害感受

在谷氨酸测试中,老鼠提取或标准治疗药物如前所述。30分钟后提取和药物后15分钟,20 μL谷氨酸(10 μ米/爪)注入subplantar地区的正确的后爪的老鼠。老鼠然后观察15分钟和数字的舔咬注入爪子都算作得分的痛觉过敏( 14]。

 2.10。参与ATP-Sensitive K <一口> + < /一口>渠道通路

可能参与ATP-sensitive K+频道MEMK-mediated antinociceptive效果评估使用先前描述的方法和穆罕默德等人Perimal et al。 15, 16]。15分钟前治疗MEMK(200毫克/公斤),动物服用格列苯脲(10毫克/公斤)。MEMK管理30分钟后,动物是挑战与ip立即注射0.6%醋酸和放置在一个室。然后记录了30分钟的苦难,从注射后5分钟。

 2.11。统计分析

表示为均值±SEM的结果。统计分析使用单向方差分析(方差分析)Dunnett的紧随其后 事后使用SPSS软件进行测试。艾德50值计算使用GraphPad棱镜和数字使用SigmaPlot软件。

 3所示。结果与讨论

本研究评估MEMK的行为在不同的动物模型的疼痛formalin-induced舔和醋酸等段时间翻滚测试。这项研究还显示可能的潜在机制包括glutamatergic系统的参与以及ATP-sensitive K+MEMK antinociceptive活动的渠道。此外,我们的研究表明,口服MEMK 1000 - 3000毫克/公斤剂量没有产生任何过敏反应,异常行为,和死亡的动物在72 h的观察期间,揭示其无毒的形象在我们的测试实验剂量高达3000毫克/公斤。

良好,神经源性疼痛在福尔马林的第一阶段测试是通过激活P物质和血管舒缓激肽介导的。另一方面,一些胺包括组胺和5 -羟色胺、缓激肽、前列腺素据报道在后期阶段起到了关键的作用产生炎性疼痛( 12]。我们的研究结果表明,急性MEMK显著管理局( p < 0.01 )抑制动物的舔行为在福尔马林试验的两个阶段。舔禁忌的百分比计算为15.66,40.38,和59.06在第一阶段,10.90,53.90,和80.27在后期阶段的剂量50,100和200毫克/公斤,分别(数字 1(一)和 1 (b))。艾德50值也被计算为146.40毫克/公斤第一阶段和后期阶段100.70毫克/公斤。先前发表的工作报告的古普塔et al。 17)支持这些发现,他们发现的水提物 m . koenigii400和800毫克/公斤的剂量抑制formalin-induced小鼠的疼痛。此外,腹腔内注射醋酸引起的不平衡pH值和腹膜居民的激活细胞(巨噬细胞和肥大细胞)。这影响一个高架释放多种炎症介质如前列腺素E2和TNF - α ( 13]。如图 2,结果表明,所有剂量的MEMK显著( p < 0.01 与ED)抑制醋酸段扭动50值为77.85毫克/公斤。扭动压抑的百分比计算为33.85,60.22,78.68,50岁,100年,分别和剂量200毫克/公斤。此外,石油醚提取的生物碱部分 m . koenigii离开之前也曾盘绕抑制动物的属性( 9, 18]。因此,我们的研究结果和之前报道的作品强烈支持这一事实MEMK具有formalin-induced和乙酸段疼痛抑制特性。

响应频率的后爪注射2.5%福尔马林在早期阶段在后期阶段(a)和(b)的福尔马林试验。每组代表均值±SEM ( n = 5 - 7)。执行统计分析使用单向方差分析Dunnett的紧随其后 事后测试。 p ∗ < 0.01 而控制。

影响伤害感受的MEMK 0.6%醋酸引起的小鼠。每组代表均值±SEM ( n = 5 - 7)。执行统计分析使用单向方差分析Dunnett的紧随其后 事后测试。 p ∗ < 0.01 而控制。

为了阐明antinociceptive MEMK的作用机制,谷氨酸的intraplantar注入引起的痛觉过敏测试。谷氨酸是一种兴奋性氨基酸广为人知在痛苦中扮演主要的角色认知通过外围表演,脊髓和脊椎上的站点的操作使用n -甲基- d (NMDA)和non-NMDA受体( 14]。此外,谷氨酸也报道引起的合成和释放一些促炎介质包括一氧化氮(NO)和NO-related和花生四烯酸acid-related物质在中央和周边神经系统( 19]。我们发现MEMK显著( p < 0.01 )抑制谷氨酸引起的有害刺激剂量依赖性的方式。禁忌的估计百分比是48.44,69.53,85.94,50岁,100年,和剂量200毫克/公斤(ED50:52.76毫克/公斤)。此外,参考药物双氯芬酸钠也显著( p < 0.01 )减少动物的痛苦行为占79.30%的舔抑制(图 3)。考虑上面的结果,可想而知,MEMK的组件可能有潜力与glutamatergic系统交互演示antinociceptive活动。此外,它也被发现,政府的格列本脲(ATP-sensitive钾通道拮抗剂)仅在10毫克/公斤没有改变扭动注入0.6%醋酸诱发的。然而,鉴于一起提取、格列本脲显著( p < 0.05 逆转antinociceptive MEMK的影响(图) 4)。大量科学报告显示,格列本脲特别块只有ATP-sensitive K+但不影响其他类型像Ca渠道2 +激活和电压门控钾+渠道( 15]。因此,结果可能表明MEMK涉及ATP-sensitive钾离子通道的开放,允许K的流出+离子,导致膜的复极化或超极化,从而降低细胞膜兴奋性( 16]。

MEMK glutamate-induced痛觉在小鼠的影响。每组代表均值±SEM ( n = 5 - 7)。执行统计分析使用单向方差分析Dunnett的紧随其后 事后测试。 p ∗ < 0.01 而控制。

MEMK-mediated镇痛效应逆转的影响格列本脲。每组代表均值±SEM ( n = 5 - 7)。执行统计分析使用单向方差分析Dunnett的紧随其后 事后测试。 p ∗ < 0.01 相对于控制和 p # < 0.05 相比MEMK 200毫克/公斤。

我们初步的植物化学成分分析发现生物碱的存在,苷、丹宁酸,碳水化合物,还原糖,黄酮类化合物在MEMK(表 1)。据报道,咔唑生物碱以及咖喱叶黄酮类化合物分离具有强大的抗氧化性能( 1, 20., 21]。此外,该化合物具有抗氧化特性的一般都知道减轻疼痛通过脂质过氧化反应的预防以及不同的合成和释放炎症介质( 22]。因此,可想而知,植物化学物质中提取至少参与MEMK的观察活动的一部分。

植物化学物质在MEMK确认。

植物化学物质 测试的名字 预期的变化 结果
生物碱 迈耶的测试 黄颜色浅黄色沉淀 +
海格的测试 黄色晶形沉淀 +
瓦格纳的测试 棕色或深棕色沉淀 −
Dragendorff的测试 橙色或黄褐色的沉淀 +
丹宁酸测试 迷色沉淀 −
丹宁酸 氯化铁测试 蓝色绿色 +
碱性试剂测试 黄色,红色沉淀 +
配糖体 普通考试 黄色 +
测试配糖体 生产红砖色的降水 +
碳水化合物 莫氏利施的测试 红色或红紫色戒指形成两层交界处,震动形成一个深紫色的解决方案 −
巴福德试验(单糖普通考试) 红色沉淀 +
费林的测试 一个红色或砖红色沉淀 +
测试还原糖 一个红砖色的沉淀 +
类黄酮 盐酸还原试验 红色 +
皂苷 发泡测试 形成稳定的泡沫 −
4所示。结论

总之,本研究的结果证明了antinociceptive methanolic提取的行动 m . koenigii叶子和提供了科学证据关于传统使用作为止痛剂。这项研究也发现的可能参与glutamatergic系统以及ATP-sensitive MEMK-mediated镇痛效应钾离子通道。

 信息披露

当前地址。Moniruzzaman疼痛研究中心,分子生物科学研究所,昆士兰大学,布里斯班,澳大利亚昆士兰4072,。

 相互竞争的利益

作者希望确认没有已知的相互竞争的利益与此相关刊物和没有重大金融支持这项工作,可能影响其结果。

 作者的贡献

Nushrat Sharmin Ani和Sudip Chakraborty贡献同样这项工作。

 确认

作者感谢教授Bidyut Kanti达塔,主席,斯坦福大学孟加拉国、许可使用实验室设备。

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