1。介绍
药用植物是非常必要的质量控制保证真实性、稳定性和一致性。安全性和有效性的研究以及生物活性提取物的标准化的基础上主动原则或主要化合物(s)作为质量保证参数应开放无限可能性的草药药物治疗学(
1 - - - - - -
3 ]。标准化可以获得化学指纹图谱由/配置文件的一个或多个标记化合物(化学或生物标记)。介绍了植物产品的标准化使用色谱法由世卫组织和被接受作为一个策略来识别和评价植物药的质量(
4 - - - - - -
6 ]。效果已经成为常规分析技术由于其操作成本低的优点,样品处理量高,简单和速度,需要最低样本清理,再现性,准确性和可靠性
7 - - - - - -
10 ]。
Premna mucronata 、家庭马鞭草科,俗称Arni大灌木或小树20到25英尺的高度发现在印度北部,恒河平原,北方邦,比哈尔邦,印度和孟加拉省。此外,还发现在希尔区从Kumaon不丹从海平面到5000英尺的高度(
11 ]。植物具有抗氧化和hypocholesterolemics活动也是以改善消化,充当一个血液净化器,心脏兴奋剂,祛痰剂,也用于皮肤疾病(
11 - - - - - -
13 ]。据报道,该工厂
Premna mucronata 含有类黄酮,毛地黄黄酮,芹黄素、clerodendrin hispidulin, pectolinarigenin。工厂还包含clerodin, clerosterol D-mannitol,棕榈酸、蜡醇,蜡酸。复杂混合物中的这种植物的植物成份,毛地黄黄酮和芹黄素可以作为分析指标的确定它的质量。初步研究了在我们的实验室建立了植物的功效
Premna mucronata 在心脏保护实验由异丙肾上腺素诱导心肌梗死大鼠冠状动脉结扎法(
14 - - - - - -
18 ]。文献调查还表明,类黄酮苷具有抗氧化特性的生化和强劲的清除超氧化物自由基的属性(
19 - - - - - -
22 ]。此外,毛地黄黄酮、黄酮还能够对红外保护心肌损伤,部分介导的差别通过对这些没有自己生产和抗氧化性能(
16 ]。因此,进一步的工作是集中在识别和量化的类黄酮,木樨草素和芹菜甙元
Premna mucronata 。然而,我们所知,没有报告木樨草素的薄层色谱定量分析方法和芹黄素methanolic从全植物提取做好准备
Premna mucronata 。在这里,我们已经开发出效果的定量评估方法木樨草素和芹菜甙元。发达的方法也被验证的系统适用性,特异性,线性,LOD,根据我的指导方针(定量限
23 ]。
2。材料和方法
2.1。设备
Linomat 5涂布(CAMAG、瑞士),双槽室(20×10厘米;第四CAMAG、瑞士)、薄层色谱扫描仪(CAMAG、瑞士),winCATS版本1.4.6软件(CAMAG、瑞士),微量调节注射器(659.0014 Linomat注射器,Hamilton-Bonaduz瑞士,CAMAG,瑞士),紫外线室(CAMAG、瑞士),预镀硅胶60 F254年 铝盘(20×10厘米,100
μ 米厚度;达姆施塔特,德国默克公司)被用于这项研究。
2.2。参考化合物和化学物质
参考标准毛地黄黄酮(L9283-10MG),芹黄素(A3145-5MG)和NP试剂(2-aminoethyl diphenylborinate) (D9754-1G)从西格玛奥德里奇有限公司分析获得年级从SD精细化工溶剂得到。预镀硅胶60 F254年 效果铝盘(10×10厘米,0.2毫米厚)是来自大肠默克有限公司(印度孟买)。
2.3。植物
Premna mucronata 从商业供应商获得阿南德。植物被Geetha K博士识别和验证,理事会的药用和芳香植物研究,Boriavi, Anand,印度古吉拉特邦。
2.4。制备标准木樨草素的解决方案
毛地黄黄酮的股票的解决方案是由溶解5毫克的准确称重木樨草素在甲醇和10毫升甲醇的体积。工作解决毛地黄黄酮(200
μ g / mL)是由适当的稀释股票的解决方案与甲醇。
2.5。制备标准芹黄素的解决方案
芹黄素的股票的解决方案是由溶解5毫克的准确称重芹黄素在甲醇和占10毫升甲醇的体积。股票的解决方案是与甲醇给进一步稀释标准溶液芹黄素(50
μ g / mL)。
2.6。色谱条件
色谱条件如下:
固定相:预镀硅胶60 F254年 效果铝盘(10×10厘米,0.2毫米厚)。
流动相:甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:4:0.3)。
饱和时间:15分钟。
波长:366海里。
灯:汞。
执行效果分析在一个空调房间保持在22°C,湿度55%使用预镀硅胶60 F254年 支持铝盘(10×10厘米,0.2毫米层厚度、5 - 6
μ 米粒子大小;默克公司,达姆施塔特,德国)。6
μ L和5
μ L木樨草素和芹菜甙元的标准解决方案被发现使用Linomat 5 autosampler配备了一个100年
μ m汉密尔顿注射器(CAMAG、Muttenz、瑞士)和操作设置一个乐队8毫米的长度;5毫米波段之间的距离;10毫米的板边缘的距离;和距离10毫米的板的底部。板块是80毫米的距离使用甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:4:0.3,v / v)流动相在CAMAG双槽室presaturated流动相。发达板块被风干,CAMAG薄层色谱扫描仪扫描4配备winCATS平面色谱经理(1.4.6版)软件是用来测量微光谱记录和数据处理。吸收/缓解测量模式使用的扫描速度20 mm / s。区木樨草素和芹菜甙元扫描从200年到400海里来记录他们的吸收和荧光光谱,分别。Densitogram被记录在荧光模式中木樨草素和芹菜甙元。
2.7。校准曲线的标准木樨草素
毛地黄黄酮的标准溶液(200 - 1000 ng /乐队)应用效果板一式三份。开发板和扫描按上述色谱条件。的峰面积都被记录下来。校准曲线的毛地黄黄酮是由绘制峰面积与浓度的毛地黄黄酮。
2.8。校准曲线的标准芹黄素
芹黄素的标准溶液(50到250 ng /乐队)一式三份应用效果。开发板和扫描按上述色谱条件。的峰面积都被记录下来。芹黄素准备的校准曲线绘制峰面积与浓度的芹黄素。
2.9。准备Methanolic提取<斜体> Premna mucronata < /斜体> (MEPM)
整个工厂的准确重量10通用粉药物提取15分钟与甲醇(4×25毫升)在水浴回流100°C。methanolic提取是透过绘画纸1号滤纸。滤液合并,集中和转移到50毫升容量瓶,体积是50毫升的甲醇。
2.10。植物提取物的效果分析
methanolic提取的样品
Premna mucronata 透过0.45
μ m过滤,效果进行复合条件下优化的参考。板块在发展干空气和拍照在254海里。盘子被喷洒然后derivatized NP-PEG试剂紧随其后拍摄板块在可见光和荧光扫描模式和366 nm木樨草素和芹菜甙元。植物提取物的木樨草素和芹菜甙元是量化使用校准曲线绘制木樨草素和芹菜甙元。
2.11。方法的验证
该方法根据国际协调会议指南进行验证。
线性研究应用不同的整除的标准储备溶液范围200 - 1000 ng /乐队木樨草素芹黄素和50到250 ng /乐队。校准曲线是由绘制峰面积和浓度。领域的山峰被最小二乘线性回归分析处理。检测的极限(LOD)和量化的限制(定量限)使用以下公式确定:
(1)
LOD
=
3.3
×
标准偏差的
y
拦截
校准曲线的斜率
,
定量限
=
10
×
标准偏差的
y
拦截
校准曲线的斜率
。
中间精度的方法研究了通过分析整除3浓度级别的标准一式三份木樨草素和芹黄素当天盘中精度。这项研究也反复在不同的日子刚做好的样品以确定interday精度。结果表示为相对标准偏差(RSD)。的特异性方法确定通过确定组件的峰纯度覆盖木樨草素的荧光光谱和芹黄素样本中提取的光谱参考标准木樨草素和芹菜甙元开始,中间和结束的位置。方法的准确性取决于恢复研究3水平一式三份。恢复研究已知数量的标准了。
2.12。统计分析
统计分析是使用Microsoft Excel 2007执行。
3所示。结果与讨论
不同比例的甲苯和乙酸乙酯为流动相在硅胶效果盘子和一个比例(6:4 v / v)给良好的分辨率。好解决对称乐队木樨草素和芹菜甙元提取得到优化条件下使用预镀效果板和0.2毫米厚度,5 - 6毫米粒度,和移动阶段甲苯:乙酸乙酯:甲酸(6:4:0.3)。木樨草素和芹菜甙元与NP-PEG衍生化试剂(天然产物聚乙二醇试剂)出现橙色可见模式(数据
1(一) 和
1 (b) )和鹦鹉给了明亮的黄色和绿色荧光的荧光模式(数据
2(一个) 和
2 (b) )[
24 ]。标准毛地黄黄酮(
R
f
0.45)和标准芹黄素(
R
f
0.49)显示,效果色谱单峰值(数字
3 和
4 )。校准曲线的木樨草素和芹菜甙元是由策划木樨草素的浓度与峰的面积和芹黄素的浓度与峰的面积,分别为(数字
5 和
6 )。
图1
((a)和(b))可见模式与NP-PEG试剂喷洒后,附近地区:毛地黄黄酮标准Api:芹黄素标准,和MEPM: methanolic提取
Premna mucronata 。
(一)
板1
![]()
(b)
板2
![]()
图2
((a)和(b))荧光模式与NP-PEG试剂喷洒后,附近地区:毛地黄黄酮标准Api:芹黄素标准,和MEPM: methanolic提取
Premna mucronata 。
(一)
板1
![]()
(b)
板2
![]()
图3
毛地黄黄酮标准的色谱图。
![]()
图4
芹黄素标准的色谱图。
![]()
图5
毛地黄黄酮标准的校准曲线。
![]()
图6
芹黄素标准的校准曲线。
![]()
3.1。确定提取的标记
methanolic提取的
Premna mucronata 被发现含有10.2毫克/克%木樨草素和0.165毫克/克%芹黄素。此外,methanolic提取的
Premna mucronata 显示了相同的色谱峰
R
f
值作为毛地黄黄酮(0.45)标准和芹黄素(0.49)标准(图
7 )。
图7
methanolic提取物的色谱图
Premna mucronata Roxb。显示的毛地黄黄酮(
R
f
0.45)和芹黄素(
R
f
0.5)。
![]()
3.2。线性
毛地黄黄酮和芹黄素显示良好的相关系数为0.9942和0.9917,分别解决了乐队的峰面积绘制时对浓度,从而表现出良好的浓度和峰面积的线性关系。表
1 总结了啤酒的法律限制,线性回归方程,相关系数的方法。
表1
方法验证参数估计的木樨草素和芹菜甙元。
参数
毛地黄黄酮
芹黄素
波长,纳米
366年
366年
线性范围、ng /乐队
200 - 1000
50 - 250
回归方程
y
=
7.950
x
- - - - - -
81.70
2.768
x
+
252.7
相关系数
0.9942
0.9917
检测极限,ng /乐队
42.6
7.97
量化的限制,ng /乐队
129.08
24.155
特异性
具体的
具体的
3.3。精度
该方法被发现精确的中间精密度研究表示为百分数盘中相对标准偏差(相对标准偏差)和interday变化如表所示
2 和
3 。
表2
中间精密度毛地黄黄酮的研究。
浓度
浓度
一个
盘中
b
浓度
一个
Interday
b
(ng /乐队)
(ng /乐队)
(%相对标准偏差)
(ng /乐队)
(%相对标准偏差)
400年
402.3
1.08
403.69
1.32
600年
604.3
0.57
606.71
0.65
800年
798.8
0.38
799.20
0.43
一个
的三个决定;
b
% RSD-relative标准差。
表3
中间精密度研究芹黄素。
浓度
浓度
一个
盘中
b
浓度
一个
Interday
b
(ng /乐队)
(ng /乐队)
(%相对标准偏差)
(ng /乐队)
(%相对标准偏差)
One hundred.
101.43
0.67
101.3
0.60
150年
150.3
0.43
150.3
0.41
200年
201.1
0.27
201.15
0.18
一个
的三个决定;
b
% RSD-relative标准差。
3.4。精度
该方法用于定量的标志与标准提供恢复木樨草素和芹菜甙元飙升后在96.67% - -102.92%和97.72% - -99.29%的范围,分别在三个浓度水平如表所示
4 和
5 。
表4
复苏毛地黄黄酮的研究。
毛地黄黄酮量样本(ng)
标准木樨草素添加量(ng)
的毛地黄黄酮总量(ng)
发现的毛地黄黄酮总量(ng)
复苏的百分比
一个
(%)
454.89
200年
654.89
633.13
96.67±1.20
454.89
400年
854.89
842.58
98.56±0.69
454.89
600年
1054.89
1085.66
102.92±0.85
一个
意思是三个决定±%相对标准偏差。
表5
芹黄素复苏的研究。
芹黄素的样本(ng)
量标准芹黄素添加(ng)
芹黄素采取总额(ng)
芹黄素发现总额(ng)
复苏的百分比
一个
(%)
131.57
One hundred.
231.57
229.91
99.29±1.22
131.57
200年
331.57
328.23
98.99±1.21
131.57
300年
431.57
421.77
97.72±0.82
一个
意思是三个决定±%相对标准偏差。
3.5。极限检测和量化的极限
毛地黄黄酮和芹黄素的极限检测被发现42.6 ng /乐队和7.97 ng /乐队而定量的极限是129.08 ng /乐队和24.155 ng /带,分别。
3.6。特异性
乐队的身份在样本提取比较证实了
R
f
、吸收光谱和荧光光谱和覆盖与各自的标准使用CAMAG薄层色谱扫描仪4。没有植物成分的干扰点
R
f
值的标记。标准标记木樨草素的吸收光谱(
R
f
0.45)和芹黄素(
R
f
0.49)和相应的现货中提取准确匹配,表示不干涉其他植物成分(人物
8 和
9 )。乐队由于木樨草素的纯度和芹黄素样本提取吸收和荧光光谱证实了覆盖的记录开始,中间和结束位置带的样品跟踪,分别(数字
10 和
11 )。
图8
TLC densitograms甲醇提取物的比较
Premna mucronata Roxb。参考标准,毛地黄黄酮在366海里。标准毛地黄黄酮(显示峰值
R
f
0.45),甲醇提取(显示峰值
R
f
0.45)。
![]()
图9
TLC densitograms甲醇提取物的比较
Premna mucronata Roxb。参考标准,芹黄素在366海里。标准芹黄素(显示峰值
R
f
0.49),甲醇提取(显示峰值
R
f
0.49)。
![]()
图10
表面UV光谱峰值的254 nm木樨草素的纯度。
![]()
图11
表面荧光光谱的峰纯度在366 nm芹黄素。
![]()
4所示。结论
拟议的效果方法被发现快速,简单,准确的定量评估木樨草素和芹菜甙元。经济复苏的木樨草素和芹菜甙元整体的一部分
Premna mucronata 被发现96.67% -99.29%,-102.92%和97.72%,分别揭示开发方法的准确性,因此可以适用于提取和常规分析植物作为一个整体。此外,效果由co-TLC概要文件可以用于指纹识别从而提供标准化和质量的保证。和效果有不同优势的低运营成本、样品处理量高,简单性和最小样本清理的必要性。在未来,随着植物显示良好的心血管活动、剂型可以制定相同的指纹识别和量化的化学标记将被使用。