APM 预防医学的进步 2090 - 3499 2090 - 3480 Hindawi出版公司 10.1155 / 2016/6028989 6028989 研究文章 的抑制作用 石榴水果提取物对血管紧张素ⅱ1型受体和血栓素B2在等离子体引起的内皮细胞从Preeclamptic病人 Kusumawati Widya 1、2 Keman Kusnarman 3 Soeharto Setyawati 4 不在义务分担 Gerardo E。 1 佛法Husada助产学院 道路Penanggungan 41 Kelurahan Lirboyo Kecamatan Mojoroto Kediri 64117年东爪哇 印尼 2 助产学硕士研究项目 医学院 Brawijaya大学 道路经验丰富 Kecamatan Lowokwaru 玛琅 65145年东爪哇 印尼 ub.ac.id 3 产科和Ginecology实验室 赛弗安华综合医院 医学院 Brawijaya大学 杰克沙道路Agung Suprapto 2号 玛琅 65122年东爪哇 印尼 ub.ac.id 4 药理学实验室 医学院 Brawijaya大学 道路经验丰富 Kecamatan Lowokwaru 玛琅 65145年东爪哇 印尼 ub.ac.id 2016年 18 2 2016年 2016年 05年 09年 2015年 16 11 2015年 20. 12 2015年 2016年 版权©2016 Widya Kusumawati et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

本研究旨在评估是否 石榴水果提取物调节血管紧张素ⅱ1型受体(AT1-R)和血栓素B2水平引起的内皮细胞血浆从preeclamptic病人。内皮细胞是来自人类脐带血管内皮细胞。在融合,内皮细胞被分成五个组,其中包括内皮细胞暴露于等离子体2%正常怀孕(NP),内皮细胞暴露于2%血浆从preeclamptic患者(PP),和内皮细胞暴露于PP的ethanolic提取的 石榴(PP + PG)在以下三个剂量:14;28日;和56个ppm。AT1-R的表达是由免疫组织化学技术,观察和血栓素B2水平是由免疫测定技术。血浆从页显著增加AT1-R表达式和血栓素B2水平相比,细胞治疗正常怀孕等离子体。AT1-R表达显著增加( P < 0.05 )减毒的高剂量治疗 石榴提取。此外,血栓素B2水平显著的增加( P < 0.05 )减毒的最低剂量治疗 石榴提取。我们进一步得出结论, 石榴水果保护,抑制内皮细胞的敏感性血浆从preeclamptic病人由于抑制AT1-R表达式(56 ppm)和血栓素B2水平降低(ppm) 14日。

 1。介绍

子痫前期是一种乳障碍表现为集体增加血压、蛋白尿等症状。这个复杂的综合征导致孕产妇和胎儿的发病率和死亡率。这种综合症的病理生理机制仍不清楚。预先处理人口、遗传和环境危险因素参与胎盘的缺陷。有缺陷的胎座式和滋养层入侵子宫肌层不当导致减少子宫胎盘灌注压力刺激的释放复杂循环生物活性因子( 1- - - - - - 5]。

在子痫前期发现的血管系统的功能障碍是与生产相关的内皮细胞的血管活性的因素。一个通路参与这个障碍是肾素血管紧张素醛固酮系统。低灵敏度的血管收缩的血管紧张素ⅱ(Ang-II)被发现在正常怀孕,但这种敏感性增加在子痫前期的临床发病前疾病( 6- - - - - - 9]。Ang-II施加其影响通过两种受体及其绑定Ang-II I型受体(AT1-R)诱发收缩 7]。

子痫前期也与血清不相称的有关因素,包括凝血恶烷和环前列腺素和未定义的这个版本机制。凝血恶烷水平发现只在重度子痫前期大幅增加。凝血恶烷的比率大大增加在严重的情况下( 10, 11]。此外,血清是来自子痫前期还包含细胞毒性因素损伤内皮细胞。所以这pathomechanism必须减少或抑制的药物或其他药物。 石榴印尼是一个古老的水果,主要是多酚化合物和碳水化合物( 12),可以作为另一种草药治疗子痫前期治疗( 13- - - - - - 16]。据我们所知,没有先前的研究评估的影响 石榴AT1-R和血栓素B2水平引起的内皮preeclamptic等离子体,所以这pathomechanism必须减少或抑制的药物或其他药物。因此,本研究的目的是调查是否 石榴水果提取物调节AT1-R和血栓素B2水平从preeclamptic患者内皮细胞受到等离子体。

 2。材料和方法 2.1。内皮细胞隔离和文化

人类脐静脉内皮细胞的收集。这个脐静脉使用以下特点:从孕妇获得健康、到期怀孕(怀孕38周),血红蛋白水平 ≥ 10 g / dL,进行了部分剖腹产。立即产后,10厘米的脐带是插入缓冲(100毫升汉克的平衡盐溶液(hbs)、庆大霉素(GENTA、默克公司、德国),氢钠碳酸氢盐,4毫升红苯酚,2毫升消息灵通的解决方案,和去离子水)和在运输过程中针对实验室冷藏。为了得到最好的结果,执行隔离在12小时后脐带采集( 17]。

当脐带在干净的条件下,套管插入(±1.5厘米)在一个边缘的静脉,并确保严格使用缝合。之后,静脉与PBS轻轻洗,然后关闭紧密的远端边缘插管。洗后,胶原酶(σ,HA型,c - 6885)(5毫克/ 10毫升;10毫升)是由10毫升注射器注入静脉然后孵化37°C 8分钟。细胞颗粒悬浮在4毫升199培养基(σ,m - 5017,美国),补充了一个鸡尾酒(庆大霉素,碳酸氢盐酚红,20%胎牛血清(GIBCO)和20毫升新生牛血清(σ,n - 4637,美国)。这个细胞悬浮培养成井被涂上一层凝胶(σ,G1393)。细胞被允许实现confluency 37°C和5%股份有限公司2。

 2.2。隔离的等离子体Preeclamptic病人

血液采集,正常妊娠和preeclamptic病人都给了知情同意。书面知情同意应完成卫生研究的伦理委员会,医学院,Brawijaya大学玛琅,印度尼西亚东爪哇。的临床体征preeclamptic患者收缩压( ≥ 160毫米汞柱)和舒张压( ≥ 110毫米汞柱)在两个测量(4 - 6小时之间测量)和蛋白尿( ≥ 尺2 +)。等离子体是孤立的从2毫升的枸橼酸抗凝全血。血液是离心机在1000 g, 10分钟−40°C。使用等离子体在细胞培养实验中在以下部分中详细( 17]。

 2.3。细胞治疗

一旦汇合的,细胞治疗被分成5复制实验包括内皮细胞暴露于等离子体2%正常怀孕(NP);细胞治疗2%等离子preeclamptic患者(PP);PP + ethanolic提取物 石榴(PG)水果几剂,包括14个ppm;28 ppm;和56个ppm。

 2.4。<斜体>石榴< /斜体>提取

石榴,在干燥的条件是获得Bandungan村,一直以来,印度尼西亚爪哇岛中部。提取是由磨削的肉 石榴果使用400目磨床。随后,浸渍上执行100克粉(70%乙醇(1:3比率)2 × 24小时)。在那之后,多酚提取分离 石榴沉积。这多酚提取被真空干燥箱干燥8 - 9小时45 - 50°C。这个过程收益率25克 石榴提取。

 2.5。分析AT1-R表达式

AT1-R内皮细胞的表达是通过免疫组织化学技术来衡量的。方法的细节解释以前[ 18]。我们用兔多克隆抗体Anti-Angiotensin-II 1型受体(bios抗体,目录bs - 0630 r,沃本,麻萨诸塞州,美国)。

 2.6。血栓素B2水平分析

血栓素B2的水平测定使用ELISA技术(研发系统;目录KGE011,明尼阿波利斯,美国)。执行的过程是根据制造商的指示。

 2.7。统计分析

数据提出了均值±标准差和群体之间的差异进行了分析使用单向方差分析软件使用SPSS 17.0统计软件包。事后测试用于检查治疗之间的显著差异( P < 0.05 被认为是统计学意义)。

 3所示。结果

表 1和数字 1和 2现在AT1-R表达内皮细胞从每组。AT1-R表达明显高于在PP组相比NP组( P < 0.05 )。最高剂量的 石榴增加水果提取显著预防PP-induced AT1-R表达式( P < 0.05 )达到类似水平的NP组( P > 0.05 )。

内皮细胞的血管紧张素ⅱ1型受体水平引起的等离子体preeclamptic病人。

表达式 NP 页 PP + 石榴
14 ppm 28 ppm 56个ppm
AT1-R细胞(%) 6.72±2.91 42.19±15.63 一个 39.78±5.67 一个 25.33±7.57 ab 11.25±3.31 公元前

注:值提出了平均数±标准差; 一个 P < 0.05 相比与NP组; b P < 0.05 相比与PP组; c P < 0.05 相比与第一剂量(ppm) 14日 石榴集团;NP:血浆从正常怀孕;PP:血浆从preeclamptic病人;ppm:百分率。

内皮血管紧张素ⅱ1型受体的表达是通过免疫组织化学技术来衡量的。数据代表5复制实验(平均值±SD), P 一个 < 0.05 与血浆内皮细胞暴露于2%相比正常怀孕(NP)组; P b < 0.05 与血浆内皮细胞暴露于2%相比preeclamptic病人(PP)组; P c < 0.05 相比与第一剂量(ppm) 14日 石榴组。

代表显微照片的血管紧张素ⅱ1型受体(黑色箭头)内皮细胞诱导等离子preeclamptic病人。血浆内皮细胞暴露于2%正常妊娠(a),内皮细胞暴露于2%血浆从preeclamptic患者(b)和内皮细胞暴露于PP的ethanolic提取的 石榴(PP + PG)在以下三个剂量:14 (c);28日(d);56 ppm (e)。

表 2和图 3目前在中血栓素B2水平从每个实验组的内皮细胞。血栓素B2水平大大增强PP组相比NP组( P < 0.05 )。14 ppm, 28 ppm, 56个ppm的提取,只有最低剂量的 石榴水果提取显著预防PP-induced增加血栓素B2水平( P < 0.05 )达到类似水平的NP组( P > 0.05 )。

血栓素B2水平引起的内皮细胞浆preeclamptic病人。

水平 NP 页 PP + 石榴
14 ppm 28 ppm 56个ppm
TXB2(pg / mL) 0.00096±0.0002 0.00110±0.0001 一个 0.00072±0.0002 b 0.00065±0.0002 ab 0.00065±0.0001 ab

注:值提出了平均数±标准差;TXB2:血栓素B2; 一个 P < 0.05 相比与NP组; b P < 0.05 相比与PP组;ppm:百分率;pg / mL:沙克/毫升。

血栓素B2水平每个实验组的内皮细胞。值作为平均数±标准差; P 一个 < 0.05 与血浆内皮细胞暴露于2%相比正常怀孕(NP)组; P b < 0.05 与血浆内皮细胞暴露于2%相比preeclamptic病人(PP)组;PP + G1:首次剂量 石榴管理组;PP + G2:注射第二针 石榴管理组;PP + G3:注射第三针 石榴管理组;pg / mL:沙克/毫升。

 4所示。讨论

子痫前期的女性,另一方面,没有显示这个抗血管紧张素ⅱ,已经可以观察到早在10周的妊娠,因此在临床上明显的发病症状。增加灵敏度还是现在怀孕8个月后( 19]。有几个原因可以解释这种敏感性的增加。首先,子痫前期患者的脂肪组织显示AT1-R升高。增加AT1-R表达式也可以出现在其他组织( 20.]。在这项研究中,这是第一个报告,发现AT1-R表达明显高于PP组相比NP组( P < 0.05 )。本研究表明,内皮细胞调节AT1-R表达式来自暴露于preeclamptic等离子体。最高剂量的 石榴增加水果提取物显著预防PP-induced AT1-R表达式( P < 0.05 )达到类似水平控制(NP)组( P > 0.05 )。我们的发现表明, 石榴水果提取物抑制内皮细胞的信号AT1-R表达式。

在这项研究中,血栓素B2水平是大大增强PP组相比NP组( P < 0.05 )。这一发现表明,等离子体从病人preeclamptic包含激活环氧酶酶的生物活性因子。磷脂酶A2活性作用的水解催化膜磷脂sn-2债券产生花生四烯酸酯,环氧酶的底物。这种酶能把花生四烯酸转化为凝血恶烷。事实上,孕产妇水平升高的可溶性磷脂酶A2和花生四烯酸在子痫前期的女性已报告( 21, 22]。此外,从preeclamptic胎盘滋养层细胞分泌的更高层次的磷脂酶A2与正常胎盘。增加磷脂酶A2活性呈正相关的更高层次的凝血恶烷( 22, 23]。14 ppm, 28 ppm, 56个ppm的提取,只有最低剂量的 石榴水果提取显著预防PP-induced增加血栓素B2级( P < 0.05 )达到类似水平与NP组( P > 0.05 )。我们假设 石榴水果提取物抑制环氧酶酶凝血恶烷生产。一些报告显示, 石榴水果提取物作为环氧酶抑制剂( 24, 25]。

总之, 石榴水果提取物保护,抑制内皮细胞的敏感性血浆从preeclamptic病人由于抑制AT1-R表达式(56 ppm)和血栓素B2水平降低(ppm) 14日。

 道德

本研究经伦理委员会批准的卫生研究,医学院,Brawijaya大学玛琅,印度尼西亚东爪哇。

 利益冲突

作者宣称没有利益冲突有关的出版。

 承认

作者承认所有技术人员来自生物医学和生理学实验室的分子来帮助这个实验。

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