机场核心计划 分析细胞病理学 2210 - 7185 2210 - 7177 Hindawi 10.1155 / 2018/1754085 1754085 研究文章 Staurosporine诱导多倍体的生成巨大的肿瘤细胞在非小细胞肺癌A549细胞 Glassmann 亚历山大 1 Carrillo加西亚 卡门 2 简森 维克多 2 克劳斯 杜米尼克 3 Veit 纳丁 4 冬天 约 5 http://orcid.org/0000 - 0001 - 7671 - 0373 Probstmeier Rainer 4 Wachsmann-Hogiu 塞巴斯蒂安。 1 生命科学Inkubator 波恩 德国 life-science-inkubator.de 2 内科III 血液学和肿瘤学部门 波恩大学 波恩 德国 uni-bonn.de 3 部门的假牙修复术 基础教育 和材料科学 波恩大学 波恩 德国 uni-bonn.de 4 神经,肿瘤细胞生物学 核医学部门 波恩大学 波恩 德国 uni-bonn.de 5 口腔细胞生物学小组 牙周病学部门 手术和预防牙科 波恩大学 波恩 德国 uni-bonn.de 2018年 10 10 2018年 2018年 28 03 2018年 01 08年 2018年 10 10 2018年 2018年 版权©2018年亚历山大Glassmann et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

培养A549肺非小细胞癌(NSCLC)在存在staurosporine (SSP)导致减少或缺乏扩散浓度的方式。增殖的抑制是伴随着多倍体的生成巨大的癌细胞(PGCCs)的特点是细胞压扁,增加细胞大小、多倍体,和polynucleation由结晶紫染色,BrdU和DiI标签,流式细胞术以及视频延时的分析。连续SSP A549细胞的治疗可以保留PGCCs至少两个月处于休息状态。在SSP, A549 PGCCs重启划分和展览扩散模式和细胞形态学和细胞PGCCs最初来自哪里。因此,SSP-treated A549细胞代表一个简单而可靠的可逆代PGCCs实验模型及其随后的实验分析。

 1。介绍

肿瘤细胞通常获得阻力对侮辱,否则将影响这些细胞的增殖或存活潜力。这样一个抵抗抗增殖疗法可以生成,例如,通过多药耐药性的表达泵或降低循环率。特别是肿瘤干细胞是尤其具有长期自我更新、增殖率低,电阻对抗癌药物和辐射 1, 2]。另一个有趣的可能性,导致增殖率下降是发生可逆的肿瘤细胞衰老或多倍体的一代巨人癌细胞(PGCCs)。这些细胞,特点是multinucleation和细胞周期阻滞二十年前的第一个特征( 3, 4]。为肿瘤干细胞,这些细胞对药物有耐药性,干扰肿瘤细胞增殖,如能损伤dna的药物。此外,PGCCs已被证明具有干细胞的特性,形成的球状体体外并生成肿瘤在小鼠 5, 6]。最近,它也被证明PGCCs可能作为blastomere-like干细胞( 7]。因此,PGCCs在肿瘤异质性可能发挥基础作用,具备干细胞,电阻( 6]。

PGCCs和衰老细胞之间的关系仍然是一个问题的讨论,也即一个标准化的术语是失踪。PGCCs已经被描述为:扁平的肿瘤细胞不可逆转地逮捕了在G0 / G1和G2 / M州和表达 β牛乳糖活动( 8, 9]。相反,PGCCs也被描述为不衰老由于缺少 β牛乳糖染色( 10]。此外,亚种群的癌细胞被描述在一个国家被称为“pseudosenescence”重启扩散和具有潜力,结果是,可以反复启动癌症( 11]。

据我们所知,简单处理协议的数量描述的生成和维护PGCCs高收益率也受到限制。的浓缩PGCCs已经出现一个小族群在培养卵巢癌细胞系以及主要癌症已被报道。CoCl2治疗这样的文化,模仿缺氧条件下,导致正常的癌症细胞的死亡,而巨细胞仍然活着( 10]。在结肠癌细胞,CoCl2治疗导致的生成PGCCs干细胞的特征( 12]。

小的激酶抑制剂staurosporine (SSP)是一种生物碱来自细菌 链霉菌属stauroporeus。分子临床关心的并不是由于其广泛的抑制概要文件( 13]。在详细研究中,SSP已被证明与大多数代表人类的激酶激酶组( 14]。在细胞水平上,SSP干扰细胞迁移、增殖、分化、和多方面的方式生存 15, 16]。另外,我们最近表明,SSP介导小细胞肺癌细胞的转化成neuron-like process-bearing表型( 17],SSP-induced效应的广泛模式更受限制的SSP类似物不同,表现出较高的底物特异性 18]。

在这里,我们描述连续SSP治疗提供了一个简单的程序的生成和维护大量的可逆growth-arrested PGCC非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞。

 2。材料和方法 2.1。细胞系和文化条件

非小细胞肺癌A549细胞在DMEM 10%胎牛血清(FCS)。

 2.2。细胞增殖和可行性分析

决定细胞生存和增殖,结晶紫和LDH进行了分析:结晶紫的试验,在96孔板的细胞被播种,孵化一夜之间在正常培养基,然后进一步培养DMEM含有1% FCS在没有或实验化合物的存在。细胞然后用甲醛固定,结晶紫染色1 h和0.05% Aqua桌子,洗净,晾干。150年 μL的甲醇添加好,光学密度在540纳米测量。LDH测定是如前所述的“LDH细胞毒性分析工具包”从罗氏 19]。

 2.3。BrdU标记

溴脱氧尿苷(BrdU)标签,附着A549细胞孵育10 μM BrdU(σ)在DMEM 10% FCS为4 h在37°C有限公司2孵化器。细胞被洗了三次磷酸盐(PBS)和固定在PBS包含10分钟4%甲醛在室温下(RT)。细胞被洗两次在PBS和孵化4 n HCl含有1% Triton x - 100 10分钟在rt与PBS洗涤后,细胞被封锁2%牛血清白蛋白(BSA)在PBS 10分钟。细胞培养与anti-BrdU抗体(σ)在PBS稀释,0.2% BSA在RT 30分钟,用PBS,孵化与anti-mouse IgG-Cy3(σ)30分钟在RT在黑暗中,再次清洗,和嵌入式荧光显微镜分析。

 2.4。DiI标签

Vybrant DiI的标签(热费希尔)悬浮液的A549细胞(1×106细胞在无血清DMEM / 5毫升)和DiI孵化的最终浓度10 μM为30分钟37°C。细胞在DMEM然后洗了三次,终于在DMEM 10% FCS播种到培养皿,一夜之间,允许遵守之前的化合物。

 2.5。流仪结果

流式细胞术进行BD FACSCanto II仪器,并与FlowJo软件的数据进行了分析。分析了细胞周期状态已经描述( 17, 18]。短暂,A549细胞使胰蛋白酶化,收集在PBS,固定和permeabilised BD BrdU流设备制造商的指令后,孵化与反Ki67 FITC共轭抗体(BD Pharmingen)和复染色DAPI排除碎片和坏死细胞。

 2.6。视频延时分析

细胞被应用于24-well盘子和一夜之间可以遵循。一小时延时分析之前,SSP是添加到最后一个50 nM,浓度和分析进行了描述( 20.]。简而言之,盘子被转移到激烈的(37°C),加油(5%股份有限公司2/空气)和湿润室安装在倒置显微镜(徕卡DM IRE2 HC氟)机动cross-stage。图像记录每10分钟24小时。

 2.7。细胞大小分析

A549细胞在DMEM培养10% (FCS)没有或50 nM SSP的存在。显微照片,和最大的帮助下细胞直径测定ImageJ ( http://www.imagescience.org/)。

 3所示。结果 3.1。Staurosporine抑制A549细胞的增殖

A549细胞,培养一到六天的staurosporine不同浓度显示浓度降低他们的增殖活动。不同批次的A549细胞变化的敏感性对SSP-induced生长抑制,但一般来说,一个几乎完全抑制在50 nM SSP的存在。一个典型的实验如图 1,在细胞培养6天。在这种类型的实验,没有变化的培养基进行;增殖率下降后长时间的月经也当没有或低浓度SSP。排除主要细胞毒性效应,lactodehydrogenase (LDH)进行了分析。当细胞治疗24 h和200 nM SSP,没有观察到细胞毒性的影响。

SSP的A549细胞的增殖。A549细胞培养显示浓度的SSP的2、3或6天96 -孔板。细胞与结晶紫染色在材料与方法中指定。吸光度的细胞在第0天被设定为1.0,和其他值相应调整。列代表平均值+标准偏差(SD)。

 3.2。Staurosporine诱发PGCC的形成

分析形态变化,A549细胞最初播种在没有或低密度和培育的50 nM SSP 21天。显微分析这样的文化显示肿瘤细胞持续增殖的SSP的缺失导致的形成大岛4天后汇合的细胞层。未经处理的A549细胞平均直径约为45 μm表现出圆形的球体形状和包庇小流程当存在孤立的细胞(图 2(一个))。相比之下,SSP-treated A549细胞表现出相当大的细胞已经压扁2 h后药物补充。细胞表面积的增加更明显在头两天但仍在一个较低的程度上21天(最新的时间点,分析了数字 2 (b))。细胞表现出一个至少三倍大的直径比未经处理的细胞被定义为PGCCs。根据这一标准,SSP治疗2天后,可以指定为PGCCs A549细胞的50%,之后再治疗,也就是说,8、14和21天,几乎无一例外的是,可以指定为PGCCs A549细胞的100%。SSP的21天治疗后,A549细胞显示230年的平均直径 μ米,大约5倍的平均直径未经处理的细胞(图 2 (b))。也偶尔,细胞直径在400超过500人 μ观察。在这些细胞群,细胞分裂几乎没有,视频显示尤其的延时分析。

显微图(a) (b)和尺寸分析A549细胞培养在没有或SSP的存在。A549细胞被播种在培养皿的低密度和治疗长达8 (a)或(b) 21天没有或50 nM SSP。在(b),至少20个细胞为每个时间点进行了分析。d:天(s)。

进一步强调缺乏细胞分裂的情况下,A549细胞都贴上了DiI(图 3)或BrdU(图 4)。在未经处理的细胞中,DiI标签在单个细胞减少文化随着时间的推移,由于广泛的细胞增殖,而变得更加保守nonproliferative SSP-treated PGCCs(图 3)。必须指出的是,标签就会随时间均匀分布在文化、独立的现象,是治疗。此外,与BrdU标记实验显示几乎取消了扩散SSP-treated A549细胞(图 4)。没有扩散和快速代夷为平地PGCCs SSP治疗也可以记录在视频延时的分析。我们也试图验证 β牛乳糖活动SSP-treated A549细胞,但只能检测剩余的活动,不能大幅可视化在显微照片。

的显微图DiI-labelled A549细胞种植在没有或SSP的存在。DiI A549细胞被标记,播种在培养皿的低密度,和治疗21天没有或50 nM SSP。荧光显微图显示和相应的阶段。

在A549细胞SSP-dependent BrdU合并。细胞被播种在高密度24-well板块和培育进一步3天没有或50 nM SSP的存在。细胞然后用BrdU脉冲4 h。BrdU结合可视化anti-BrdU抗体和二次荧光标记的抗体。荧光显微图显示和相应的阶段。

 3.3。SSP诱导多倍体的形成和Polynucleated A549细胞

生长特性的进一步分析SSP-treated A549细胞,我们进行了流式细胞仪分析(图 5)。当A549细胞被serum-starved 32小时,预期的观察积累细胞G0 / G1期细胞相比,种植的10% FCS(数字 5(一个)和 5 (b))。A549细胞治疗32小时20更加明显和50 nM SSP导致的积累在G2 / M期细胞(数字 5(一个)和 5 (b)),没有迹象显示凋亡细胞死亡所揭示的膜联蛋白V染色(没有显示)。主要,流式细胞仪的细胞治疗50 nM SSP提示polyploidal效应的存在,表示向右的明显位移概要文件部分的图(数字 5(一个)和 5 (b))。的显微图DAPI-stained A549细胞显示存在的一个重要部分polynucleated PGCCs SSP-treated但不是在未经处理的文化(图 5 (c)),即polynucleated PGCCs更长的文化期之后变得更加明显。

SSP诱发多倍体和polynucleation A549细胞。(a, b)流式细胞仪分析A549细胞在正常生长培养基培养(控制)或没有(−血清)10% FCS或生长培养基的10% FCS包含20或50 nM SSP。流式细胞仪图所示(一个),而在(b),各自的相对细胞显微图的数字代表部分(a)上 y设在。(c) DAPI染色的核形态A549细胞培养的缺乏或存在50 nM SSP 7和21天。显微图给出相应的阶段。此外,21天对A549细胞的较低的放大显示在正确的底部(c)展示一个更大的细胞数量。

 3.4。SSP-Induced PGCC的增殖抑制A549细胞是可逆的

A549细胞治疗和SSP生成PGCCs重启增殖SSP移除。然而,动力学不同依赖于以前的SSP孵化的持续时间。在A549细胞,治疗SSP 24 h,扩散重启在接下来的48 h(图 6(一))。相反,在A549细胞在SSP-containing培养基培养了三个星期,深刻reproliferation SSP移除开始大约两到三周后,通常,快速增殖细胞克隆仍然依稀可见,位于一层扁平细胞(部分数据 6(一)和 6 (b))。然而,详细的视频延时的分析表明,一些细胞分裂(≤3%)已经SSP 48 h后删除。

SSP-induced停止扩散是可逆的。(一)短期和长期的文化A549细胞缺乏或50 nM SSP的存在。A549细胞培养在指定的时间点有或没有50 nM SSP与DAPI染色,细胞数量在选定地区是显微镜下决定。细胞数天零(0)被设置为100%,和其他值相应调整。(b) A549细胞培养在50 nM SSP的存在三个星期在缺乏SSP为进一步培养三个星期。一群细胞分裂的黎明更扁平细胞用箭头指示。荧光显微图显示(DAPI标记)和相应的阶段。

 4所示。讨论

变得清晰。过去几年,PGCCs参与基本在肿瘤的形成和发展过程。因此,似乎有必要癌细胞获得更多的关注,这群在癌症生物学和治疗的不同方面。对于这样一个目的,需要简单的模型系统,使这些细胞的详细调查。在目前的研究中,我们已经表明,SSP-treated A549细胞可以作为这样一个模型系统。作为SSP-treated A549 PGCCs亚文化,但保留其PGCC表型,他们可以很容易地处理,如果需要更改格式的板块由实验的原因造成的。此外,损耗的SSP允许分裂细胞的再生,可以再次变成PGCCs SSP的另一个持续增加。

我们的研究不允许识别的精确机制如何PGCCs SSP消耗和恢复增殖活动,此外,如果所有PGCCs都能够这样做。A549细胞包含一个人口,包括细胞总数的24%人口拥有干细胞属性( 21]。ABC转运蛋白过表达,因为这群可以这样提出的细胞有不同的反应SSP切除相比nonside人口A549细胞。PGCCs,提出了不同寻常的不对称的细胞分裂,使depolyploidization不同程度( 6, 10]。通过流式细胞仪分析我们发现,在SSP-depleted文化A549细胞的多倍体的数量减少,但潜在的细胞机制还有待阐明。它也会感兴趣的评估期间如果depolyploidization异质细胞积累可以开发不同therapy-relevant属性,如灵敏度对药物或辐照( 22]。

在高浓度时,SSP几乎是一个一般的细胞凋亡的诱导物,无论细胞的类型,因为它已被证明会引起细胞死亡的机关文化在卵细胞在卵裂球,即使蛋白质合成受到抑制( 23]。在较低的浓度,它会导致细胞周期阻滞,往往伴随着改变细胞状态。这些变化依赖于细胞密度,SSP浓度,和SSP的动力学的应用程序。A549细胞,例如,它已经表明,孵化和SSP (i)在1到100海里最大48 h浓度会导致减少增殖细胞周期阻滞于G2 / M细胞舍入和细胞凋亡在100 nM SSP的迹象 24),但(ii)的浓度5 nM长达4天会导致细胞周期阻滞于G0 / G1,相当大的细胞毒性效应只观察到10 SSP的浓度 μ米( 25]。这些数据可能显示不同的SSP的影响在特定激酶在不同浓度和用于变量时时间( 14]。在初步实验中,我们发现在连续SSP,一些神经胶质瘤细胞系分化成PGCCs,尽管多数细胞系只表达一个高度支化细胞形态与neurite-like流程,我们之前报道的SCLC和PC12细胞( 17, 26]。

 5。结论

PGCCs一个相关的目标是在癌症治疗的背景下解决。然而,有条不紊的曲目产生和培育这些细胞是有限的。SSP-mediated代PGCCs A549肿瘤细胞系中这里有记录的提供了一个简单的方法,可以快速生成的PGCCs可逆的方式在高收益率,从而允许一个详细的分析所需的参数在不同的格式。然而,这仍有待确定这种方法是否能被转移到代表数量的其他主要的人类肿瘤细胞系来源于实体。

 数据可用性

使用的数据来支持本研究的发现可以从相应的作者。

 的利益冲突

没有利益冲突。

 巴特列 E。 聪明的 H。 癌症干细胞重新审视 自然医学 2017年 23 10 1124年 1134年 10.1038 / nm.4409 2 - s2.0 - 85030772818 陈 K。 黄 y . H。 陈 j·L。 理解和针对癌症干细胞:治疗的影响和挑战 Pharmacologica学报 2013年 34 6 732年 740年 10.1038 / aps.2013.27 2 - s2.0 - 84881453720 惠特利 D。 越来越多的证据表明,肿瘤退化的重新分工的巨大细胞 细胞生物学国际 2008年 32 9 1029年 1030年 10.1016 / j.cellbi.2008.06.001 2 - s2.0 - 49949106622 Erenpreisa J。 克拉格 m . S。 金属氧化物半导体,非整倍性和倍性的肿瘤细胞周期 致癌基因 2010年 29日 40 5447年 5451年 10.1038 / onc.2010.310 2 - s2.0 - 77957764817 Weihua Z。 林 Q。 的缘故 a·J。 风扇 D。 费德勒 i . J。 由一个多核形成实体肿瘤癌症细胞 癌症 2011年 117年 17 4092年 4099年 10.1002 / cncr.26021 2 - s2.0 - 80051930829 张 D。 王 Y。 张 年代。 不对称细胞分裂在多倍体巨大的癌细胞和较低的真核细胞 生物医学研究的国际 2014年 2014年 8 432652年 10.1155 / 2014/432652 2 - s2.0 - 84904215921 妞妞 N。 Mercado-Uribe 我。 刘 J。 去分化成blastomere-like癌症干细胞通过多倍体的形成巨大的癌细胞 致癌基因 2017年 36 34 4887年 4900年 10.1038 / onc.2017.72 2 - s2.0 - 85027986491 Horbay R。 Stoika R。 巨细胞的形成:去细胞死亡和细胞生存的路吗? 打开生命科学 2011年 6 5 675年 684年 10.2478 / s11535 - 011 - 0058 - 0 2 - s2.0 - 80052282707 Sliwinska m·A。 Mosieniak G。 Wolanin K。 Babik 一个。 Piwocka K。 Magalska 一个。 Szczepanowska J。 Fronk J。 Sikora E。 与阿霉素诱导衰老导致基因组不稳定性的增加HCT116细胞 衰老的机制和发展 2009年 130年 1 - 2 24 32 10.1016 / j.mad.2008.04.011 2 - s2.0 - 58149327460 张 年代。 Mercado-Uribe 我。 兴 Z。 唱ydF4y2Ba B。 旷 J。 刘 J。 代的癌症干细胞样细胞通过多倍体的形成巨大的癌细胞 致癌基因 2014年 33 1 116年 128年 10.1038 / onc.2013.96 2 - s2.0 - 84891746639 23524583 洛亚 N。 Demaria M。 细胞衰老和肿瘤推广:老龄化关键? Biochimica et Biophysica学报(BBA)——评论癌症 2016年 1865年 2 155年 167年 10.1016 / j.bbcan.2016.01.007 2 - s2.0 - 84960892584 26845683 Lopez-Sanchez l . M。 吉梅内斯 C。 瓦尔韦德 一个。 埃尔南德斯 V。 Penarando J。 马丁内斯 一个。 Lopez-Pedrera C。 Munoz-Castaneda j . R。 De la Haba-Rodriguez j . R。 阿兰达 E。 Rodriguez-Ariza 一个。 CoCl2,缺氧的模仿,诱发多倍体的形成巨细胞结肠癌干细胞的特征 《公共科学图书馆•综合》 2014年 9 6条e99143 10.1371 / journal.pone.0099143 2 - s2.0 - 84903209196 托莱多 l . M。 莱登 n . B。 Elbaum D。 的小设计ATP-site指导蛋白质激酶抑制剂 当前药物化学 1999年 6 9 775年 805年 10495352 Karaman m·W。 Herrgard 年代。 Treiber d·K。 勇敢的 P。 Atteridge c, E。 坎贝尔 b . T。 陈 k W。 Ciceri P。 戴维斯 m . I。 Edeen p . T。 Faraoni R。 弗洛伊德 M。 亨特 j . P。 洛克哈特 d . J。 触 z V。 莫里森 m·J。 Pallares G。 帕特尔 h·K。 普里查德 年代。 Wodicka l . M。 Zarrinkar P P。 激酶抑制剂选择性的定量分析 自然生物技术 2008年 26 1 127年 132年 10.1038 / nbt1358 2 - s2.0 - 38049018155 阿根廷 C。 梅内德斯 j . C。 医学化学抗癌药物 第九章:药物抑制信号通路对肿瘤细胞生长和增殖 2008年 1日 爱思唯尔 251年 305年 10.1016 / b978 - 0 - 444 - 52824 - 7.00009 - 3所示 公园 b S。 Abdel-Azeem 答:Z。 巨额 M . M。 柳 k . H。 Tae j·S。 李 s . H。 Staurosporine从微生物和合成类似物源及其生物活性 当前药物化学 2013年 20. 31日 3872年 3902年 10.2174 / 09298673113209990176 2 - s2.0 - 84887922218 Murmann T。 Carrillo-Garcia C。 Veit N。 法院 C。 Glassmann 一个。 简森 V。 Madea B。 Reinartz M。 Harzen 一个。 诺瓦克 M。 佩尔奈 年代。 冬天 J。 Probstmeier R。 Staurosporine和细胞外基质蛋白调节小细胞肺癌细胞的转化成neuron-like表型 《公共科学图书馆•综合》 2014年 9 2、文章e86910 10.1371 / journal.pone.0086910 2 - s2.0 - 84896505630 Gallala H。 冬天 J。 Veit N。 诺瓦克 M。 佩尔奈 年代。 法院 C。 克劳斯 D。 简森 V。 Probstmeier R。 Staurosporine类似物促进不同模式的过程和在小细胞肺癌中多倍体细胞产物 肿瘤生物学 2015年 36 4 2725年 2735年 10.1007 / s13277 - 014 - 2897 - 6 2 - s2.0 - 84936750971 Lobastova l 克劳斯 D。 Glassmann 一个。 汗 D。 steinhaus指出 C。 沃尔夫 C。 Veit N。 冬天 J。 Probstmeier R。 集体甲状腺癌的细胞的细胞迁移:有益的能力覆盖不利的基质 肿瘤细胞 2017年 40 1 63年 76年 10.1007 / s13402 - 016 - 0305 - 5 2 - s2.0 - 84994408718 Glassmann 一个。 Reichmann K。 Scheffler B。 格拉斯 M。 Veit N。 Probstmeier R。 药理目标的持续激活MEK / MAPK-dependent神经胶质瘤细胞信号通路抑制细胞增殖和迁移 国际肿瘤学杂志 2011年 39 6 1567年 1575年 10.3892 / ijo.2011.1165 2 - s2.0 - 80054829310 唱 j . M。 赵 h·J。 易 H。 李 c . H。 金 h·S。 金 d·K。 Abd El-Aty a . M。 金 j·S。 Landowski c·P。 《 m·A。 胫骨 h . C。 对肺癌A549细胞的干细胞数量 生物化学和生物物理研究通信 2008年 371年 1 163年 167年 10.1016 / j.bbrc.2008.04.038 2 - s2.0 - 42749084961 懦夫 J。 哈丁 一个。 大小很重要:为什么多倍体肿瘤细胞对癌症药物靶点在战争中至关重要 在肿瘤领域 2014年 4 123年 10.3389 / fonc.2014.00123 2 - s2.0 - 84904691794 威尔 M。 雅各布森 m D。 芸苔属植物 h·S。 戴维斯 t·J。 加德纳 r . L。 拉夫 k·D。 拉夫 m . C。 组成型表达的程序性细胞死亡的机制 细胞生物学杂志 1996年 133年 5 1053年 1059年 10.1083 / jcb.133.5.1053 2 - s2.0 - 0029894485 8655578 王 Y。 杨 H。 刘 H。 黄 J。 首歌 X。 staurosporine对肺腺癌A549细胞的迁移和侵袭性:体外研究 BMC癌症 2009年 9 1 174年 10.1186 / 1471-2407-9-174 2 - s2.0 - 67650078930 勇气 C。 斯诺登 R。 gesch 一个。 微分staurosporine类似物对细胞周期的影响,在A549细胞生长和生存能力 英国癌症杂志》 1996年 74年 8 1199年 1205年 10.1038 / bjc.1996.517 2 - s2.0 - 0029851176 Kuklinski 年代。 Vladimirova V。 Waha 一个。 Kamata H。 Pesheva P。 Probstmeier R。 神经元分化PC12细胞中表达galectin-3监管通过Ras / MAPK-dependent和独立的信号通路 神经化学杂志 2003年 87年 5 1112年 1124年 10.1046 / j.1471-4159.2003.02060.x 2 - s2.0 - 0344011642