机场核心计划 分析细胞病理学 2210 - 7185 2210 - 7177 Hindawi 10.1155 / 2017/9043134 9043134 研究文章 一个敏感的和快速的方法检测甲醛的大脑组织 悦 Xiangpei 1 张 Yaoyue 2 兴 温 2 陈 宇通 2 μ Chenyang 2 苗族 张ydF4y2Ba 2 通用电气 Peichun 2 http://orcid.org/0000 - 0002 - 0676 - 1340 李 婷婷 2 http://orcid.org/0000 - 0002 - 1087 - 6108 他 Rongqiao 1 3 http://orcid.org/0000 - 0002 - 0511 - 0386 通 Zhiqian 1 Braidy Nady 1 阿尔茨海默病中心 北京理工大学脑部疾病 首都医科大学 北京100069年 中国 ccmu.edu.cn 2 北京12脑与认知科学实验室 北京100071年 中国 3 脑与认知科学国家重点实验室 生物物理研究所 北京100101年 中国 hku.hk 2017年 24 9 2017年 2017年 26 04 2017年 05年 07年 2017年 24 9 2017年 2017年 版权©2017 Xiangpei曰et al。 这是一个开放的文章在知识共享归属许可下发布的,它允许无限制的使用,分布和繁殖在任何媒介,提供最初的工作是正确的引用。

现有的方法检测甲醛(FA)的大脑样本是昂贵的,需要复杂的实验程序。在这里,我们建立了一个高度敏感的和有选择性的分光光度法,基于FA与无色反应试剂的反应4-amino-3-penten-2-one (Fluoral-P)生成黄色化合物,3,5-diacetyl-1, 4-dihydrolutidine (DDL),可在室温下的分光光度计检测到420海里。敏感的响应时间点被发现在第一个小时,和衍生反应pH值的最佳pH值6.0。检测极限(LOD)和量化的限制(定量限)检测FA是0.5 μM和2.5 μM,分别。使用这种方法,发现异常高水平的FA FA-injected老鼠的大脑和解剖海马组织从阿尔茨海默氏症患者。这一发现表明,改性Fluoral-P的FA水平测量方法是有效的大脑。

 CCMU的自然科学基础 2016年js09 2015年zr31 北京理工大学脑部疾病 ZD2015-08 北京市教育委员会 KM201510025014 973年项目 2016年yfc1306302 1。介绍

甲醛(FA)是一种工业化学产品,被广泛用于制造建筑材料、家居用品和释放从几个来源在室内环境中,如刨花板,家居用品,胶合板( 1];因此,大量的工人和居民不可避免地暴露在FA ( 2]。初步研究表明,气足总可能导致致癌和胎儿畸形 3),临床和流行病学调查发现,工作接触FA导致头痛、焦虑、疲劳、睡眠障碍,尤其是认知障碍( 4, 5]。此外,动物实验的结果一直显示气体FA暴露诱导异常行为,包括空间内存赤字( 6- - - - - - 8]。

有趣的是,超出正常水平的内生足总已发现在人类暴露于外源性FA ( 9),以及在老年小鼠和大鼠 10),在健康老年人认知障碍患者( 11),在患有阿尔茨海默病(AD) [ 12]。书面证据表明直接注入超额FA intracerebroventricular成动物模型导致中枢神经系统损伤,特别是明显障碍在内存中( 13- - - - - - 16]。这些数据强烈支持认为海马FA过剩会导致认知障碍。

鉴于FA的神经毒性效应,开发了各种分析方法来检测FA在动物组织。最早的测定方法来衡量FA脑组织(0.16 ~ -0.24毫米)进行了使用气相色谱/质谱(gc - ms) [ 17]。另一个敏感的方法,为足总在肝脏的检测,利用高效液相色谱法与紫外线检测器(HPLC-UV) [ 18, 19]。最近,使用高效液相色谱荧光检测器(HPLC-Fluo),我们发现,有0.25 - -0.32毫米FA在正常成年小鼠和大鼠的海马 20.]。虽然这些现有方法提供一些准确、超灵敏检测的FA检测大脑,一些不足之处,如费用,复杂的实验程序,和有毒分析试剂,限制了它们的实际应用。因此,一个简单的、敏感的和有效的方法在生物样品中微量的FA是必要的。

在此,我们报告一个高度敏感的和有选择性的分光光度法检测FA小鼠的大脑中已经建立了在室温下用无色试剂——4-amino-3-penten-2-one (Fluoral-P)有选择地与足总反应生成有色化合物,3,5-diacetyl-1, 4-dihydrolutidine (DDL)。因此,这个修改Fluoral-P方法适用于检测大脑FA和评估FA神经毒性。

 2。材料和方法 2.1。试剂和化学FA的解决方案

37% ( w/ v;美国圣路易斯Sigma-Aldrich);4-amino-3-penten-2-one (Fluoral-P,中科院:1118-66-7。 http://TCIchemicals.com、日本);盐酸(HCl, 1 N, Sigma-Aldrich,圣路易斯,美国);氢氧化钠(氢氧化钠、2 N, Sigma-Aldrich);二甲亚砜(DMSO Sigma-Aldrich,圣路易斯,美国);三氯乙酸(TCA Sigma-Aldrich,圣路易斯,美国);去离子水(Milli-Q水);磷酸盐(PBS, 1毫米,北京化工技术研究所中国);和生理盐水(NS、北京化工技术研究所、中国)被用于这项研究。

 2.2。设备

冰箱(海尔集团,北京);酸度计(PHS-3C上海仪器电气科学仪器有限公司的股份有限公司,上海,中国 );可调高速均质器(FSH-2A Liangyou实验仪器工厂,常州,中国);从微孔模型ZD2011584(加拿大安大略省Nepean);SP-Max multiskan频谱微型板块2300分光光度计(Flash的上海生物科技有限公司,上海,中国;莫里斯和水迷宫(上海Biowill有限公司、上海、中国)被用于这项研究。

 2.3。制备的化学解决方案

FA原液(100毫米,12.3毫升):英足总解决方案(0.1毫升,37%)是用移液器吸取到12.2毫升的PBS(1毫米,pH值为4.0,5.0,6.0,和7.0,分别地)。足总工作解决方案是0.001,0.01,0.1,1和10 mM, pH值为4.0,5.0,6.0,和7.0,分别。Fluoral-P存储解决方案(500毫米):0.05 g是溶解在1毫升DMSO和存储在一个冰箱啊在4°C不超过2个月。Fluoral-P工作解决方案0.5、5、50 mM, pH值为4.0,5.0,6.0,和7.0,分别。三氯乙酸(10%, w/ v)是在PBS(1毫米,pH值6.0),继续在黑暗中。

 2.4。脑组织匀浆和提取

莫里斯水迷宫测试后,所有老鼠与戊巴比妥钠麻醉(10毫克/公斤,腹腔内(i.p。)然后牺牲颈椎错位。大脑组织立即删除了医疗剪刀,在冰冷的PBS冲洗,然后在0.1毫米均质PBS (pH值6.0)的比率1:4之间大脑PBS的重量和体积。脑匀浆加入10%柠檬酸溶液的体积比1:2。最后,混合物在12000×g离心10分钟4°C和上层清液冻结在−80°C,直到进一步的使用。

 2.5。协议的大脑FA分析 2.5.1。最佳pH值和时间导数的反应

确定的最佳pH值导数在室温下反应Fluoral-P和足总之间,五0.1毫升整除的不同浓度的FA标准解决方案(0.001,0.01,0.1,1和10 mM, pH值为4.0,5.0,6.0,和7.0,分别地)被添加到五瓶为了准备一系列的校准标准。此外,0.8毫升的PBS (pH值在4.0、5.0、6.0和7.0,分别地)是用移液器吸取到一个单独的小瓶之后整除0.1毫升5毫米Fluoral-P解决方案(pH值在4.0、5.0、6.0和7.0,分别地)被添加到每个五瓶。这些混合物用移液器吸取到96孔板和孵化为0,在室温下15、30、60、120和180分钟,分别和彩色的强度导数,DDL,量化了分光光度计在420海里。

校准曲线,涵盖了足总浓度范围0.001 - 1毫米的准备。常规分析,如果重复准备日常校准和用于大脑样本的定量计算。

 2.5.2。天和日常的变化

控制大脑样本( n = 9 第一天)分析了DDL强度评估的变化天FA浓度(0)15、30、60、90、120和180分钟。另一组是化验评估日常足总浓度的变化,1天,7,分别和14。

 2.6。动物

所有指定的无菌成年雄性C57BL / 6小鼠( n = 36 6周大,18 - 20 g)是由首都医科大学实验动物资源(中国,北京)和安置在标准条件(12 h光暗周期,湿度70% - -80%,25±1°C),并提供了食物和水随意。所有动物实验按照美国国立卫生研究院的指导的护理和使用实验动物,科研管理办公室批准首都医科大学,北京,中国(aeei - 2015 - 032)。

 2.7。足总代谢后足总注入和莫里斯水迷宫测试

十八个老鼠被用来观察足总代谢正常成年小鼠的大脑中管理FA (i.p的腹腔内注射。,0.6毫米,0.5毫升)或生理盐水(0.5毫升)30分钟。此外,18个老鼠用于莫里斯水迷宫测试。九个老鼠注射FA(0.6毫米,0.5毫升;i.p)连续7天,连续30分钟之前每个迷宫评估。控制老鼠( n = 9 )腹腔注射生理盐水(0.5毫升),并进行了同样的实验过程如上所述。所有空间训练和记忆检索实验涉及莫里斯水迷宫进行如前所述[ 12, 13]。

 2.8。尸检样本的人类

海马解剖组织从健康与ApoE年龄组ε3 /ε3,广告ApoE患者ε4 /ε4基因型是由荷兰提供大脑网上银行(NBB)(补充表1 https://doi.org/10.1155/2017/9043134)。组之间没有明显差异对人口数据。

 2.9。统计分析

图生成使用GraphPad棱镜版本5.01 (GraphPad软件公司,圣地亚哥、钙、美国)。运用SPSS软件统计分析进行了版本21.0(美国SPSS Inc .,芝加哥,IL)。在莫里斯水迷宫实验中,费舍尔最显著的差异是用于事后比较,以及不同治疗组之间的差异在每个连续一天用单向方差分析进行了分析。对其他实验,统计显著性是由使用一个单向方差分析图基的事后测试紧随其后。数据表示为平均值±标准误差在三个独立的实验。 P < 0.05 被认为是具有统计学意义。

 3所示。结果 3.1。FA的紫外吸收峰,Fluoral-P和DDL

建议确认机制之间的衍生反应两个无色试剂(FA和Fluoral-P生成有色化合物,DDL ( 21, 22]),我们首先观察颜色的变化之间的混合物Fluoral-P和足总。添加Floural-P后不久,一个黄色的生成DDL(补充图2),并确定紫外吸收峰。结果表明,没有一个明显的吸收峰在420 nm无色Fluoral-P解决方案(图 1(一)),但添加足总解决方案后,明显的峰值在420 nm敏感地发现在几秒钟(数字 1 (b)和 1 (c))。值得注意的是,有一个吸收峰存在剂量依赖的相关性之间的DDL(420海里)形成Fluoral-P(0.5毫米)和足总在不同浓度(图 1 (d))。DDL,这些数据表明,英足总阶导数光度法检测FA候选人。

Fluoral-P摄谱仪(a), DDL (b)和DDL (c)的放大谱。DDL在420纳米的紫外线吸收峰存在剂量依赖的相关性之间的反应来自Fluoral-P(0.5毫米)和FA (d)(0.001, 0.01, 0.1, 1毫米,职责)。

 3.2。FA Derivative-DDL优化的反应条件

获得高灵敏度的方法,我们探索了一些实验参数,如反应pH值、反应时间和反应温度。首先,pH值的影响形成的DDL在衍生反应在不同的时间进行调查。DDL的结果表明,紫外吸收值0,15日和30分钟逐渐减少越来越范围的pH值(pH值4.0 - -7.0)Fluoral-P / FA的混合物在室温(25±1°C)(数据 2(一个), 2 (b), 2 (c))。有趣的是,DDL的吸收值增加到最多0.379在pH值6.0,但在第一个小时(图明显减少 2 (d))。

紫外吸收峰的变化在420纳米以下DDL Fluoral-P之间的反应(0.5毫米)和FA(0.001, 0.01, 0.1, 1毫米),孵化后0分钟(a), 15分钟(b), 30分钟(c),分别和60分钟(d)。

DDL来源于FA的标准曲线(0.001,0.01,0.1,1毫米,pH值6.0)和Fluoral-P(0.5毫米,pH值6.0)(0)15、30、60分钟,分别测定线性( R > 0.999 ),但有一个显著的差异在山坡上的四个回归方程(数字 3(一个)和 3 (b))。这些结果表明,最优条件的衍生反应DDL pH值:6.0;反应时间:1小时;和反应温度:室温。

确定优化响应时间的pH值6.0 (a), DDL在不同时期的不同标准曲线(b),在1 h (c),标准曲线定量限和LOD的分光光度法测定1 h (d)。

 3.3。足总检测的极限

接下来,我们确定的上限FA从这个方法检测结果表明420海里被发现时的吸光度Fluoral-P(0.5毫米,pH值6.0)被添加到解决方案(pH值6.0)或等于10毫米FA 1 h。任何浓度高于10毫米(在最优条件下)足总没有产生一个线性的紫外吸光度变化在第一个小时420海里(数字 3(一个)和 3 (b)),从而表明FA的上限使用这种方法检测10毫米。

FA pH值在6.0内的实际浓度标准曲线1 h分别为0.001,0.01,0.1,和1毫米。校准曲线的回归方程 y = 0.067 和 x与线性回归系数(+ 0.283 R(图0.999) 3 (c))。在常规分析,如果重复校准可以代替校准曲线,但是一项新的校准曲线准备检查仪器系统的任何偏差。检测极限(LOD)和量化的限制(定量限)计算置信区间的回归线的刻度线以下的方法如前所述 23- - - - - - 25]。LOD方法的定量限分别为0.5和2.5 μ分别为M(图 3 (d))。

 3.4。该方法的重复性和稳定性

九复制控制大脑的样本分析在一天的不同时间点对天变化进行评估。上面的相同样品的脑匀浆也在不同的日子里进行分析,以评估日常变化。天总结在表的数据的变化 1。这些数据表明,没有差别在大脑在一天内样品浓度的FA(平均水平:0.2705±0.0045毫米; P > 0.05 )。日常的变化的结果表明,平均相对标准偏差小于5%(表 2)。这些数据表明,该方法可以精确地确定浓度的FA大脑中的样本。

老鼠的大脑在一天内甲醛浓度在不同的时间点。

数字 0分钟 15分钟 30分钟 1 h 1.5 h 2 h 3 h
示例1 0.273 0.274 0.275 0.276 0.276 0.277 0.281
示例2 0.256 0.258 0.258 0.257 0.256 0.258 0.26
示例3 0.266 0.267 0.268 0.267 0.266 0.267 0.271
示例4 0.268 0.269 0.269 0.269 0.268 0.269 0.271
示例5 0.27 0.272 0.272 0.272 0.272 0.272 0.274
示例6 0.261 0.261 0.261 0.262 0.262 0.262 0.265
示例7 0.252 0.251 0.251 0.253 0.253 0.252 0.255
示例8 0.261 0.261 0.26 0.261 0.26 0.26 0.263
示例9 0.318 0.319 0.319 0.317 0.315 0.316 0.318
均值±道。 0.2694±0.0064 0.2702±0.0065 0.2703±0.0065 0.2704±0.0063 0.2698±0.0061 0.2703±0.0063 0.2731±0.0061

数据的手段( n = 9 )。在一天内的值之间的差异并不大( P > 0.05 )。

甲醛(FA)浓度的变化在不同天C57小鼠的大脑中。

天 1 d 7 d 14 d 的意思是 堡。 相对标准偏差/ %
脑FA(毫米) 0.2746 0.2787 0.2704 0.2746 0.0041 1.511

数据的手段( n = 9 )。无显著差异值在不同的日子(中 P > 0.05 )。

 3.5。大脑FA和FA神经毒性的评估分析

最后,研究这种方法是否可以评估FA水平变化在不同大脑样本,我们发现FA内容FA-injected小鼠腹腔内注射后的大脑中FA 30分钟( n = 9 ),这些广告患者尸检海马组织( n = 9 )和年龄组( n = 8 )。结果表明,在大脑FA水平有明显提升的FA-injected老鼠比控制老鼠(con组:0.279±0.012毫米;足总组:0.395±0.017毫米; p < 0.01 )(图 4(一))。更重要的是,这些老鼠FA-injected与更高水平的足总表现出更多的记忆行为方面的严重障碍,莫里斯比控制小鼠水迷宫(补充图1)。此外,足协在AD患者的尸检样本浓度显著高于年龄组(con组:0.286±0.021毫米;广告组:0.420±0.013毫米; p < 0.01 )(图 4 (b))。这些结果表明,我们的小说新分光光度法适用于检测大脑和足总浓度确实表明FA过剩引起的认知障碍。

大脑的变化足总浓度的FA-injected解剖老鼠(a)和海马组织从AD患者(b)。

 4所示。讨论

几十年前,无色试剂、Fluoral-P被证实属于衍生试剂快速检测废水中FA,室内空气和酒 22, 26, 27),但据我们所知,从来没有用来测量FA的大脑组织。在目前的研究中,一个高度选择性使用Fluoral-P分光光度法,选择性地与足总反应产生敏感的彩色compound-DDL FA大脑样本,测定。与GC / MS和高效液相色谱方法相比,反应的样品制备过程和导数方法相对简单明了。在此,这分光光度法是一种很有前途的和潜在的实际应用的检测FA的大脑。

大量的证据表明,气足总能引起认知障碍在动物和人类 5, 8]。在老化,长期积累内生足总被认为是零星的老年性痴呆的一个危险因素( 10, 28]。此外,足总被发现导致过剩的病理聚合淀粉样蛋白碎片和τhyperphosphorylation在正常成年小鼠和猴子 29日, 30.]。更重要的是,直接注入超额FA intracerebroventricular成动物模型导致记忆下降( 13- - - - - - 15]。因此,有必要确定内生FA的浓度在生物组织。

到目前为止,开发了各种分析方法来检测内源性足总。例如,使用一个足总检测设备,增加了1/2 FA(0.016毫米)的水平被发现脑脊液的猴子给intracerebroventricular注入甲醇( 31日)引起的认知障碍,广告淀粉样斑块,τhyperphosphorylation [ 30.]。使用HPLC-Fluo内生FA在人类血液和尿液的浓度大约是0.08和0.03毫米,分别为( 12, 32]。同样,使用HPLC-UV确定水平的2,4-dinitrophenylhydrazine,衍生剂,表明FA的尿液浓度正常Sprague-Dawley老鼠和人类大约0.01毫米( 33]。顶部空间气相色谱的方法显示FA在人类尿液的浓度在0.019和0.048毫米 34]。此外,控制老鼠的大脑内源性FA浓度样本中发现当前研究大约0.27毫米,这与先前的报道是一致的使用HPLC-Fluo [ 20.],HPLC-UV [ 19gc - ms [], 17]。

 5。结论

使用这个修改Fluoral-P方法,异常高水平的FA中检测出大脑FA-injected老鼠(补充图3)样品。综上所述,目前使用Fluoral-P作为衍生试剂分光光度法测量足总在大脑样本组成一个简单的、敏感的和可行的替代的方法来确定大脑FA和评估神经毒性的过剩。

 的利益冲突

作者声明没有竞争的经济利益。

 作者的贡献

张Yaoyue Xiangpei曰,温家宝兴的贡献同样这项工作。

 确认

这项工作是支持由973 -项目(2016 yfc1306302),科研常见的北京市教育局项目(KM201510025014),脑部疾病研究所北京市重大项目基金(ZD2015-08),和自然科学基础的CCMU (2015 zr31和2016 js09)。

 Salthammer T。 Mentese 年代。 Marutzky R。 室内环境中的甲醛 化学评论 2010年 110年 2536年 2572年 10.1021 / cr800399g 2 - s2.0 - 77951207316 唐 X。 白 Y。 Duong 一个。 史密斯 m . T。 李 l 张 l 在中国甲醛:生产、消费、暴露水平和健康的影响 国际环境 2009年 35 1210年 1224年 19589601 10.1016 / j.envint.2009.06.002 2 - s2.0 - 70349435943 Krzyzanowski M。 世界卫生组织空气质量指南的欧洲 《毒理学和环境卫生,部分 2008年 71年 47 50 吉尔伯恩 k . H。 Warshaw r·H。 在组织学技术人员神经行为的影响甲醛和溶剂:重复测试跨越时间 环境研究 1992年 58 134年 146年 1511669 吉尔伯恩 k . H。 Warshaw r·H。 桑顿 j . C。 甲醛会损害记忆、平衡和灵活性在组织学技术人员:影响持续几天后接触的 环境健康档案 1987年 42 117年 120年 3579365 10.1080 / 00039896.1987.9935806 2 - s2.0 - 0023263997 Usanmaz s E。 Akarsu 大肠。 Vural N。 毒害神经的急性和亚急性甲醛暴露对小鼠的影响 环境毒理学和药理学 2002年 11 93年 One hundred. 21782590 刘 Y。 叶 Z。 罗 H。 太阳 M。 李 M。 风扇 D。 崔 D。 Inhalative甲醛暴露提高攻击行为和扰乱类,在雄性大鼠额叶皮质突触体 神经学字母 2009年 464年 113年 116年 19545605 10.1016 / j.neulet.2009.06.037 2 - s2.0 - 69749093172 陆 Z。 李 c . M。 乔 Y。 杨ydF4y2Ba Y。 杨 X。 吸入甲醛对小鼠的学习和记忆的影响 室内空气 2008年 18 77年 83年 18333987 10.1111 / j.1600-0668.2008.00524.x 2 - s2.0 - 40549085390 Taranenko n。 公司 n V。 甲醛的生物监测尿从伊尔库茨克地区儿科人口样本 Gigiena我Sanitariia 2007年 73年 75年 17726955 通 Z。 汉 C。 罗 W。 王 X。 李 H。 罗 H。 周 J。 气 J。 他 R。 积累了海马甲醛诱发年龄相关性记忆衰退 年龄(荷兰多德雷赫特) 2013年 35 583年 596年 22382760 10.1007 / s11357 - 012 - 9388 - 8 2 - s2.0 - 84879265725 余 J。 苏 T。 周 T。 他 Y。 陆 J。 李 J。 他 R。 尿酸甲醛水平负相关健康的老年人的认知能力 神经科学通报 2014年 30. 172年 184年 24733650 10.1007 / s12264 - 013 - 1416 - x 2 - s2.0 - 84899687000 通 z Q。 张 J。 罗 w·H。 王 w·S。 李 f . X。 李 H。 罗 h·J。 陆 J。 周 j·L。 王ydF4y2Ba Y。 他 r . Q。 尿液甲醛水平呈负相关,迷你精神状态考试分数在老年性痴呆 神经生物学衰老的 2011年 32 31日 42 19879019 10.1016 / j.neurobiolaging.2009.07.013 2 - s2.0 - 78449301205 梅 Y。 江 C。 王ydF4y2Ba Y。 Lv J。 贾 J。 王 X。 杨 X。 通 Z。 Aging-associated formaldehyde-induced去甲肾上腺素的缺乏导致与年龄有关的记忆衰退 衰老细胞 2015年 14 659年 668年 25866202 10.1111 / acel.12345 2 - s2.0 - 84927546001 Songur 一个。 欧 o . A。 Sarsilmaz M。 甲醛对神经系统的毒性作用 环境污染和毒理学评价 2010年 203年 105年 118年 19957118 10.1007 / 978 - 1 - 4419 - 1352 - 4 _3 2 - s2.0 - 72049128580 Gurel 一个。 Coskun O。 Armutcu F。 肯特 M。 欧 o . A。 维生素E对氧化损伤造成的甲醛在额叶皮层和海马:生化和组织学研究 化学神经解剖学杂志 2005年 29日 173年 178年 15820619 10.1016 / j.jchemneu.2005.01.001 2 - s2.0 - 17044407187 通 Z。 汉 C。 羌族 M。 王 W。 Lv J。 张 年代。 罗 W。 李 H。 罗 H。 周 J。 吴 B。 与年龄相关的甲醛干扰DNA甲基转移酶的功能,导致阿尔茨海默病记忆丧失 神经生物学衰老的 2015年 36 One hundred. 110年 25282336 10.1016 / j.neurobiolaging.2014.07.018 2 - s2.0 - 84920493178 真见鬼 h . D。 白色的 E。 Casanova-Schmitz M。 测定甲醛在生物组织通过气相色谱/质谱分析 生物医学质谱 1982年 9 347年 353年 7126766 10.1002 / bms.1200090808 2 - s2.0 - 0020409221 Sardi E。 Tyihak E。 简单双甲酮加合物形式在生物样品中甲醛测定高效液相色谱法 生物色谱法 1994年 8 313年 314年 7888737 10.1002 / bmc.1130080614 2 - s2.0 - 0028126632 Yilmaz B。 子囊 一个。 Kucukoglu K。 Albayrak M。 简单的高效液相色谱法对甲醛测定人体组织通过与2,衍生4-dinitrophenylhydrazine 分离科学杂志》 2016年 39 2963年 2969年 27291155 10.1002 / jssc.201600345 2 - s2.0 - 84982899246 通 Z。 汉 C。 罗 W。 李 H。 罗 H。 羌族 M。 苏 T。 吴 B。 刘 Y。 杨 X。 王ydF4y2Ba Y。 Aging-associated过量甲醛导致空间记忆赤字 科学报告 2013年 3 1807年 23657727 10.1038 / srep01807 2 - s2.0 - 84877751657 铃木 Y。 Nakano N。 铃木 K。 便携式病态房子综合症气体监测系统基于小说比色试剂检测甲醛非常挑剔和敏感 环境科学与技术 2003年 37 5695年 5700年 14717182 纳什 T。 汉栖的比色甲醛通过估计反应 生物化学杂志 1953年 55 416年 421年 13105648 迈耶 C。 Zund F。 统计方法在分析化学 Wiley-Interscience:纽约 2000年 第二版 424年 Shrivastava 一个。 古普塔 B。 方法检测极限的确定和限制的定量分析方法 的年轻科学家 2011年 2 21 25 10.4103 / 2229 - 5186.79345 Uhrovcik J。 战略确定的LOD和定量限values-some基本方面 Talanta 2014年 119年 178年 180年 24401401 10.1016 / j.talanta.2013.10.061 2 - s2.0 - 84888388667 特谢拉 l S。 里昂 大肠。 Dantas本人交出密码 答:F。 ibsen Pinheiro h·L。 科斯塔 a . C。 德安德拉德 j·B。 测定甲醛在巴西酒精燃料流动注射固相分光光度法 Talanta 2004年 64年 711年 715年 18969663 10.1016 / j.talanta.2004.03.047 2 - s2.0 - 4544380412 Khanmohammadi M。 Dalali N。 Karami F。 Garmarudi 答:B。 Nemati H。 定量测定甲醛的分光光度法利用多元曲线分辨率 《化学学会的埃塞俄比亚 2012年 26 299年 304年 Rizak j . D。 马 Y。 胡 X。 是甲醛AD病理的缺失的环节?淀粉样β蛋白的微分聚合APOE亚型体外 目前老年痴呆症研究 2014年 11 461年 468年 24766729 杨 M。 陆 J。 苗族 J。 Rizak J。 杨 J。 翟 R。 周 J。 曲 J。 王 J。 杨 年代。 马 Y。 阿尔茨海默氏症和甲醇毒性(第1部分):慢性甲醇喂养导致记忆障碍和τhyperphosphorylation老鼠 阿尔茨海默氏症期刊》上 2014年 41 1117年 1129年 24787915 10.3233 / jad - 131529 2 - s2.0 - 84908168155 杨 M。 苗族 J。 Rizak J。 翟 R。 王 Z。 安瓦尔 t·H。 李 T。 郑 N。 吴 年代。 郑 Y。 风扇 X。 阿尔茨海默氏症和甲醇毒性(第2部分):四个教训恒河猴(解剖)长期甲醇 阿尔茨海默氏症期刊》上 2014年 41 1131年 1147年 24787917 10.3233 / jad - 131532 2 - s2.0 - 84922350647 翟 R。 郑 N。 Rizak J。 胡 X。 证据转化甲醇甲醛在非人灵长类动物大脑 分析细胞病理学(阿姆斯特丹) 2016年 2016年 5 4598454 27066393 10.1155 / 2016/4598454 2 - s2.0 - 84962669147 罗 W。 李 H。 张 Y。 盎 c . Y。 的高效液相色谱测定甲醛的血浆和荧光检测 色谱法杂志》上。B、生物医学科学和应用程序 2001年 753年 253年 257年 11334338 邓 Y。 余 p . H。 同时测定尿中的甲醛和丙酮醛:参与semicarbazide-sensitive胺oxidase-mediated脱氨基作用在糖尿病并发症 色谱科学杂志》 1999年 37 317年 322年 10497785 竹内 一个。 Takigawa T。 安倍 M。 卡瓦依 T。 Endo Y。 Yasugi T。 Endo G。 荻野 K。 由顶部空间气相色谱法测定尿液中甲醛 环境污染和毒理学的公告 2007年 79年 1 4 17618393 10.1007 / s00128 - 007 - 9172 - 0 2 - s2.0 - 34548119485