1。介绍
多能间充质干细胞/基质细胞(msc)是一组未分化的细胞,与自我更新能力和分化为多个细胞谱系包括脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞(
1 ,
2 ]。他们的特点是CD73的表达,CD90、CD105的表达缺乏造血如CD34、CD45标记(
1 ]。骨髓(BM)居民msc调节造血作用,体内平衡和维护的造血干细胞(hsc)通过分泌细胞,细胞之间的直接接触和监管因素(
3 ,
4 ]。msc的生物学特性,最重要的组件的功能适合肝星状细胞,被认为是改变血液恶性肿瘤(
5 - - - - - -
8 ]。
骨髓增生异常综合征(MDS)是一个复杂的骨髓造血干细胞疾病的特点是外围血球减少,细胞发育异常和功能障碍导致无效造血作用[
6 ,
7 ]。新兴的研究和
在体外 模型表明,这种疾病并不仅仅来源于异常HSC克隆也是有缺陷的组合结果骨髓细胞与造血微环境及其复杂的交互室(
6 ,
7 ]。功能完整性的BM-MSCs MDS和他们的贡献在发病机制和发展MDS是有争议的
5 - - - - - -
12 ]。在一些报道发现基质间MDS是细胞遗传学的功能正常(
10 ,
11 ),其他研究已经表明,msc是细胞遗传学的异常和缺陷在执行其正常功能
5 ,
12 ,
13 ]。的团体要求MDS-MSCs的观点是正常的,已经表明,细胞形态、表面抗原的表达和分化能力MDS-MSCs可比正常msc、并没有染色体畸变(
10 ,
14 ,
15 ]。相比之下,其他一些研究报道改变增殖和分化能力,免疫调节特性、信息交互、信号通路、细胞遗传学资料(
13 ,
16 - - - - - -
20. ]。共存的基因畸变在间充质干细胞和造血隔间被报道之前(
12 ,
21 - - - - - -
23 )和msc的畸变是发现更频繁地出现在患者细胞遗传学的异常肝星状细胞(
21 ]。异常发生在两个隔间一起是否克隆关系或以独立的方式还不清楚(
21 - - - - - -
23 ]。因此有必要进行进一步的研究其表型和细胞遗传学特性解决现有争议和更好地理解这种疾病生物学。
BM的MDS的细胞遗传学特征显示差异西方人相比,亚洲人;7 + 8和德尔(q)是最常见的一种异常在亚洲MDS患者而德尔(5 q)据报道是西方MDS患者中最常见的细胞遗传学异常(
24 - - - - - -
29日 ]。发病的年龄也报道称,在亚洲比在西方国家(年轻
28 ,
29日 ]。大多数研究使用北美和欧洲人口和南亚MDS患者人口稀疏的数据。因此,尽管msc的生物学特性和细胞遗传学资料之前已报告(
9 ,
12 ,
21 - - - - - -
23 )重要的是进一步探索MDS患者的表型和细胞遗传学特性在不同民族由于人口差异在细胞概要文件(
29日 ,
30. ]。进一步,研究比较不同MDS msc的特点来源于亚型是有限的。因此,这项研究是在斯里兰卡主要MDS患者没有报道之前文献中为了更好地理解MDS-MSCs的特点以及填补从南亚上下文数据的缺乏。
在这项研究中,我们分析了形态、immunophenotypes、分化能力,增长,细胞遗传学的BM-MSCs新诊断
新创 MDS患者组在斯里兰卡。我们还比较了msc源自不同亚型的MDS的特征。
2。材料和方法
2.1。病人
二十个病人诊断为
新创 MDS是从3招募三级综合医院(国立医院的斯里兰卡,科伦坡南教学医院和科伦坡北部教学医院)和癌症护理医院(国家癌症研究所,Maharagama)在斯里兰卡。病人报告以上医院从2013年到2015年被招募。MDS的诊断是根据临床表现,外周血,BM愿望,环钻活检报告和BM分析和分为亚型根据2008年世界卫生组织的分类。二级MDS和其它慢性疾病患者被排除在外。五人表明接受骨髓愿望作为的诊断检查的一部分,除了主要/次要骨髓衰竭综合征也参与了这一研究的控制。这项研究是根据赫尔辛基宣言(2008年)。批准的协议是医学院的伦理审查委员会,科伦坡大学(ERC-12-40),和所有必要的许可获得从上述医院招募病人的描述研究。研究骨髓样本得到的初始诊断BM愿望在局部麻醉的情况下。一个信息表,包含的细节研究的目的,持续时间、程序、机密性、潜在风险,危险,不适等等,同意书准备在所有这三个国家的语言在斯里兰卡。信息表给病人骨髓前采样和它的内容是向病人解释,他们的亲属。 It was also explained that their participation is voluntary, that they will not be identified in the reporting of the findings, and that they may withdraw at any point before the results of the study are published with no penalty or effect on medical care or loss of benefits. The participants were invited to ask questions before getting the written consent. Written informed consent for the study was obtained prior to BM sample collection.
2.2。隔离和msc的扩张
BM样本(5 - 10毫升)被收集到肝素化管时骨髓抽样首次MDS的诊断。隔离BM msc是使用粘附协议由切割器等。
31日 ]。单核细胞(跨国公司)使用聚蔗糖梯度从骨髓中分离得到。孤立的细胞培养在T-25烧瓶的密度(康宁)106 细胞/毫升DMEM-KO(淘汰赛)(Gibco)补充10%的边后卫(Gibco), 2毫米谷氨酰胺(Gibco),和1%的抗生素(Penicillin-Streptomycin Gibco) (MSC完成媒体)和孵化37°C调湿大气中5%的有限公司2 过夜。4天后,不依从细胞在细胞培养基培养瓶被丢弃,用PBS洗净,受到总介质变化的出现直到80%汇合的粘附细胞层。msc的形态学检查每日倒置显微镜下。从瓶的底部分离细胞,细胞被孵化prewarmed 0.05%胰蛋白酶- 0.53毫米EDTA和倒置显微镜下观察细胞分离每30秒。90%的细胞分离时完全培养基添加中和胰蛋白酶,细胞被离心机,小球在prewarmed resuspended完成生长介质。一个整除被送往确定可行的细胞和细胞的总数亚文化在T75 2×10的密度血压得到较好的控制6 细胞/厘米2 。孤立的间充质细胞产生
在体外 文化被低温贮藏对未来的分析。从控制隔离了相同程序msc。
2.3。形态和分化分析
培养的msc的形态是相衬显微镜下观察每3天。形态与BM的msc隔离控制。
分化研究进行段落2 - 4 msc。细胞生长在间充质完成媒体confluency,直到他们达到100%。诱导成骨分化,分化成骨的媒体(DMEM-HG, 10%的边后卫,100 nM地塞米松,10毫米
β 添加了甘油磷酸盐和0.2毫米抗坏血酸盐)和孵化21天。媒体改变了每3天。茜素S染色发现成骨分化的钙沉积。细胞被固定为10%福尔马林(Sigma-Aldrich) 15分钟,用蒸馏水洗净,染色茜素红S 45分钟。
诱导脂肪形成的分化,细胞与脂肪形成的媒体(孵化DMED-HG,地塞米松1毫米,0.5毫米3-isobutyl-1-methyl-xanthine, 10
μ g / mL重组人胰岛素,100毫米消炎痛,10%的边后卫)15天。脂肪形成的分化的观察证实了中性lipid-vacuoles。细胞被固定为10%福尔马林和沾油红O (Sigma-Aldrich) 15分钟。
2.4。Immunophenotype msc扩张后的分析
2通过msc获得MDS患者和控制使胰蛋白酶化和分析通过流式细胞术使用CD34-phycoerythrin (PE), CD73-fluorescein异硫氰酸酯(FITC) CD90-PE, CD105-FITC, CD45-FITC(美国BD)。10000标记细胞获得和分析使用FACScalibur流式细胞分析仪(美国BD)。抗体组合使用如下:CD34-PE CD73-FITC, CD90-PE CD45-FITC, CD105-FITC。表达积极的CD标记分析了根据MDS亚型,RCUD (
n
=
6
),RCMD (
n
=
4
),RAEB (
n
=
3
)和控制(
n
=
3
)。
2.5。扩散的模式MDS-MSCs
2.5.1。生长曲线和人口翻倍
MDS和控制通道3的msc在对数生长阶段被播种在12-well盘子0.5×104 细胞/厘米2 MSC完成媒体和增长了14天。从每个样本重复文化和控制在一个固定的时间收获每2天14天,活细胞计数被台盼蓝排斥法测量使用血细胞计数器。为控制msc(生长曲线绘制
n
=
4
)和MDS-MSCs (
n
=
16
为每个亚型)和(RCUD;
n
=
7
RCMD;
n
=
5
RAEB;
n
=
3
和德尔(5问);
n
=
1
)。对每个样本细胞复制的井被收获,平均每2天。每个数据点的曲线代表每组的均值。德尔(5 q) (
n
=
1
)每一个数据点是意味着细胞数量的两个独立的井。
倍增时间计算如下(
32 ]:
(1)
P
D
T
=
t
- - - - - -
t
0
lg
2
lg
N
t
- - - - - -
lg
N
0
,
在哪里
t
0
是文化的起始时间,
t
是文化的终止时间,
N
0
是文化的初始细胞数量,
N
t
文化的终极细胞数量。
2.5.2。CFU-F化验
CFU-F化验进行如前所述[
33 ]。通道2 MSC的MDS患者和控制(100细胞/盘)镀在35毫米组织culture-treated菜一式三份完整的MSC介质用抗生素和培养14天。中每3天了。14天的尽头,殖民地与PBS洗,用甲醇固定,沾染了赖特染色。> 50个细胞克隆CFU-F得分。
2.6。核型分析和荧光原位<斜体> < /斜体>杂交(鱼)化验
G-banding技术用于核型culture-expanded msc。msc在1×10通道3被播种6 细胞/厘米2 RPMI媒体补充10%的边后卫和2毫米谷氨酰胺生长,直到它们汇合的70 - 80%。两个独立的文化。秋水仙胺®(10毫克/毫升)被添加到每个瓶最终稀释0.05
μ g / mL,然后孵化一夜之间在37°C(12 - 14小时)。孵化时间与秋水仙胺时间为我们的实验室条件下进行优化。优化培养条件孵化2小时和5小时,隔夜后(12 - 14小时)秋水仙胺和细胞准备细胞遗传学分析。一夜之间文化与秋水仙胺孵化产生最多的可分析的中期和被认为是作为msc在我们实验室条件下的最优。细胞收获0.05% Trypsin-EDTA,孵化出了37°C 0.075 M氯化钾为30分钟,与刚做好的固定剂固定(甲醇:乙酸3:1 v / v)。染色体价差进行分析是由删除幻灯片上的细胞悬液在76 - 82%湿度和GTL条带。至少20中期进行了分析。
分析是根据2013年的国际体系对人类细胞遗传学命名(ISCN)指南
34 ]。存在异常克隆被观察确定两个以上中期传播拥有相同的数值或结构异常。对获得的染色体和染色体损失这是≥2和≥3中期利差,分别。
鱼进行BM-MSCs证实德尔(5 q)患者使用探针XL 5 q31.2/5q33 (d - 5042 - 100 - og,元系统,美国)根据生产的协议。至少200个细胞被两个人统计独立,被设置为截止≥95%。
2.7。统计分析
标准统计软件是用于统计分析。的
t 以及或非参数Mann-Whitney
U 测试是用于数值比较。
3所示。结果
3.1。人口统计数据和诊断
MDS患者的年龄范围从31到75年的平均年龄64.5岁。多数(65%)是女性和男性MDS患者的男女比例是7:13。研究小组由11(55%)耐火血球减少患者unilineage发育不良(RCUD), 3(15%)难治性贫血患者过度爆炸(RAEB), 5例(25%)患者与耐火血球减少multilineage发育不良(RCMD)和1 (5%)MDS患者与孤立的德尔(5 q)(表
1 )。
表1
细胞遗传学研究MDS患者骨髓msc。
患者ID
MDS亚型
年龄
性
细胞遗传学的BM
细胞遗传学的msc
14 - 020
RCMD
68年
F
46,XX
46,XX, der (3)
8 ]
14 - 058
RCUD
73年
F
46,XX
46,XX
14 - 066
RCUD
31日
F
随机的染色体
ND
14 - 069
RCUD
73年
F
46,XX
46,XX
14 - 072
RAEB二世
55
米
失败的
46,XY,德尔(6)(q23q26) [
5 ]
14 - 079
RAEB二世
75年
米
失败的
46,XY
14 - 080
RCMD
74年
米
46,XY
38 ~ 43,XY,德尔(7)(p21p22) [
3 ]
14 - 081
德尔(5问)
67年
F
46,XX,德尔(5)(q12q34) [
5 ),46,XX。伊什德尔(5)(q31.2q33) (RPS14 EGR1 CDC25C——————)
46,XX
14 - 083
RCUD
54
F
46,XX
46,XX
14 - 086
RCMD
49
F
46,XX,德尔(12)(p12) [
3 ]
46,XX
14 - 089
RCUD
70年
米
失败的
31 ~ 46,XY
14 - 090
RCUD
59
F
46,XX,德尔(11)(q22q24) [
7 ]
46,XX
15 - 001
RCMD
65年
F
46,XX
46,XX
15 - 015
RAEB我
66年
米
46,XY
46,XY
15 - 017
RCMD
50
米
46,XY, + 19
33 ~ 46,XY
15 - 018
RCUD
62年
米
46,XY
46,XY
RCUD:耐火血球减少unilineage发育不良,RAEB:难治性贫血过剩的爆炸,RCMD:耐火血球减少multilineage发育不良,和ND:没有可分析的中期。
3.2。形态和分化MDS-MSCs的潜力
Culture-expanded MDS-MSCs MDS的亚型和控制显示,呈纺锤状细胞形态(图
1(一) )。控制和MDS-MSCs证明去证实了脂质空泡的形成沾油红O后15天。从第五天开始观察脂质空泡形成后的脂肪形成的媒体。所有msc显示成骨分化后21天,经染色茜素S钙沉积(图
1 (b) )。msc隔绝所有亚型的MDS患者能够分化成脂肪形成的和成骨分化的细胞谱系。
图1
形态和分化的msc与控制和MDS患者隔离能力。(一)形态控制,MDS-MSCs。P3细胞(i)的控制,(2)RCUD, (iii) RCMD RAEB (iv), (v) MDS德尔(5 q)在第四天文化(20 x)。(b) (i)未分化P3 msc。(2)及(iv)茜素红染色成骨细胞的控制和MDS患者(14 - 080)(4倍)。(3)和(v)分化控制msc和MDS-MSCs对脂肪形成的细胞(40 x)沾油红O。
(一)
![]()
(b)
![]()
3.3。MSC Immunophenotype扩张后
msc的病人和对照组阳性CD90 (≥95%), CD73(≥80%),和CD105(≥75%)和负CD34、CD45(< 2%)(补充数据
1
和
2
(在网上补充材料
http://dx.doi.org/10.1155/2016/8012716 流式细胞仪)代表情节)。表达积极的标记分析了根据MDS亚型和每个亚型的表达谱分类如下:-:0 - 2%,低:3 - 20%,中等21 - 50%,中等高:51 - 80%,和高:> 80%(图
2 )。所有msc与控件和MDS亚型显示高积极性CD90平均阳性细胞比例> 95%(控制:
99.6
±
0.2
%,RCUD:
99.3
±
0.5
%,RCMD:
99.6
±
0.1
%,RAEB:
96.7
±
3所示。2
%)和高荧光强度(4日对数十年)(补充图
2
)。CD73,意思是表达频率控制
96.1
±
1。3
%,RCMD
80.6
±
9.5
%,RCUD
96.2
±
0.9
%,RAEB
97.7
±
0.6
%。在RCMD阳性细胞的百分比很低比其他亚型和显示表达水平变化的CD73强度(101 -10年4 强度单位)。CD105表达高RCMD(> 92.6±1.2%)比控制(
77.8
±
2。5
%),RCUD (
75.9
±
6.1
%),RAEB (
77.3
±
10.2
%)(图
2 )。
图2
表达积极的CD的标记culture-expanded P2 msc通过流式细胞术分析。结果分析根据亚型:RCUD (
n
=
6
),RCMD (
n
=
4
),RAEB (
n
=
3
)和控制(
n
=
3
)。酒吧图表代表阳性细胞的平均百分比误差±标准。表达谱分类如下:-:0 - 2%,低:3 - 20%,中等21 - 50%,中等高:51 - 80%,和高:> 80%。所有msc与控件和MDS亚型CD90显示很高的积极性。控制:
99.6
±
0.2
%,RCUD:
99.3
±
0.5
%,RCMD:
99.6
±
0.1
%,RAEB:
96.7
±
3所示。2
%。CD73表达RCMD很低(
80.6
±
9.5
%)比控制,RCUD, RAEB患者(
96.1
±
1。3
%,
96.2
±
0.9
%,
97.7
±
0.6
%,职责)。CD105表达高RCMD(> 92.6±1.2%)比控制(
77.8
±
2。5
%)和RCUD (
75.9
±
6.1
%)和RAEB (
77.3
±
10.2
%)。
![]()
3.4。扩散的模式MDS-MSCs
MDS-MSCs和控制msc的增长曲线显示1 - 2天的滞后期文化和达成指数增长在2 - 10天,后跟一个固定相(图10 - 14天
3(一个) )。人口翻倍(PDT)
45.50
±
2.94
为控制和小时(h)
43.15
±
1.77
MDS-MSCs h (
p
=
0.48
)。pdt RCUD每个亚型
40.29
±
1.88
h, RCMD
46.68
±
1.20
h, RAEB
43.47
±
2.48
h和德尔(5问)
44.43
±
5.32
h(图
3 (b) )。获得的PDT对MDS亚型PDT获得控件(没有显著不同
p
>
0.05
)。意味着CFU-F MDS-MSCs频率
19.63
±
4.91
/ 100个细胞(范围:7-41;
n
=
16
)和控制
17.93
±
4.25
/ 100个细胞(范围:8-35;
n
=
5
)(补充图
3
)。CFU-F MDS-MSCs频率没有显著不同于控制msc (
p
>
0.05
)。
图3
MDS-MSCs的扩散模式。(a)的增长曲线间充质干细胞与MDS患者隔离和控制msc。(我)比较控制msc (
n
=
4
)和MDS-MSCs (
n
=
16
)。(2)比较RCUD之间的增长(
n
=
7
),RCMD (
n
=
5
),RAEB (
n
=
3
)、德尔(5 q) (
n
=
1
),和控制msc。对于每一个样本,细胞复制井是收获在定期的时间,平均每2天。每个数据点代表每组的均值±SEM。德尔(5 q) (
n
=
1
),每个数据点代表的意思是细胞数量的两个独立的威尔斯±SE。(b)意味着人口倍增时间(PDT)。(我)意味着PDT±SE的控制和MDS-MSCs。(2)意味着PDT±SE控制,RCUD, RCMD, RAEB,德尔(5 q)。意味着PDT值之间没有显著的控制和MDS-MSCs以及患者亚组中(
p
>
0.05
)。
(一)
![]()
(b)
![]()
3.5。细胞遗传学分析培养MDS-MSCs
正常核型形成中63%(11/16)的患者msc。31%(5/16)的患者msc显示异常分析(表
1 ),包括随机的染色体的损失。三个5 RCMD病人(60%),1/6(16.7%)的RCUD, 1/3(33.3%)的RAEB患者这些异常在msc。16个样本核型一种文化的msc RCUD病人未能产生任何可分析的中期利差。
畸变染色体3中所示,6、7(图
4(一) )。两个RCMD和一个RAEB患者显示结构异常。一个病人被诊断为RCMD位于3号染色体的导数核型,46,XX, der 8利差(3)。msc RCMD的另一个病人被发现在7号染色体的短臂缺失(38 ~ 43,XY,德尔(7)(p21p22))除了观察随机缺失染色体在大多数中期利差。RAEB患者异常核型46,XY,德尔(6)(q23q26)。这些病人没有显示在BM核型形成染色体畸变。四个MDS患者异常BM分析并没有显示出相同或任何结构异常的msc除了随机的染色体在一个病人(15 - 017)。msc的核型del 5问病人(BM核型和鱼是积极的,删除5 q)是正常的(46,XX)和msc的发现证实了鱼分析有两个红色和两个绿色信号(图
4 (b) )。观察染色体物质损失大部分的MSC利差。Culture-expanded msc的控件显示正常的分析。
图4
细胞遗传学研究MDS的派生msc。(一)MDS-MSCs染色体异常。独特的染色体异常在三个患者被发现:46,XX, der 14 - 020, (3) 46, XY,德尔(6)(q23q26) 14 - 072和38 ~ 43,XY,德尔(7)(p21p22) 14 - 080。(b)鱼分析骨髓(i)和msc (ii)德尔(5 q)病人(14 - 081)。骨髓中含有两个克隆;正常细胞显示两个红色和两个绿色信号和异常的细胞克隆显示一个红色,一个绿色的信号。这个病人的msc显示两个红色和两个绿色信号指示没有德尔(5)(q31.2q33)。
(一)
![]()
(b)
![]()
4所示。讨论
BM-MSCs关键部件在骨髓微环境调节功能细分的造血干细胞通过直接的分泌细胞相互作用和监管因素(
2 - - - - - -
4 ]。一些研究表明,来自MDS骨髓基质细胞层是正常而其他人则宣布他们无法维持正常造血作用[
10 - - - - - -
16 ,
35 - - - - - -
38 ]。进一步变化疾病生物学和基因不同种族之间的配置文件已报告(
24 - - - - - -
28 ]。因此重要的是要进一步研究MDS骨髓msc的是否正常。研究生物学特性MDS-MSCs肯定来自不同人群扩大我们目前的知识复杂MDS的骨髓基质及其在病理生理学作用。因此,阐明的主要目的表型和细胞遗传学特征BM-MSCs来源于MDS和比较不同MDS亚型msc的这些特点,我们进行了本研究一群新诊断
新创 MDS患者。本研究在南亚MDS组,斯里兰卡主要MDS患者没有以前的文献报道。因此研究有助于全球对msc的理解通过提供但未报告的人口数据。
已报告六十九MDS患者在斯里兰卡在2007年根据最新出版国家卫生部公布的癌症登记处,斯里兰卡(
39 ]。研究做了一个代表性样本(
n
=
20.
斯里兰卡的
新创 MDS患者据报道,四个主要医院在科伦坡地区2013 - 2015年期间。
孤立MDS-MSCs msc和控制msc评估特征作为细胞治疗的定义为国际社会(ISCT) [
1 ]。Culture-expanded MDS-MSCs显示塑料和纤维母细胞像纺锤形细胞形态学的坚持。符合出版文学细胞形态学MDS-MSCs类似于控制msc和形态在文献[
1 ,
2 ,
31日 ]。此外,msc源自MDS亚型和控制能够分化成成骨、脂肪形成的血统。结果表明MDS-MSCs与控制对细胞形态和分化能力和符合先前的研究在其他人群(
9 ,
12 ,
14 ,
15 ]。是不可能维持的两个主要文化(病人数字13 - 014和14 - 054)被污染后4 - 5天,其他两个文化(病人数字13 - 001和14 - 050,其形态学评估和分化研究)将污染通道2和排除在进一步的实验。
MDS派生的数据可以在功能特性msc是矛盾的。一些研究表明,MSC层来自MDS患者能够支持造血祖细胞单核细胞的生长或至少好几个星期在文化
10 ,
12 ,
15 ]。Flores-Figueroa等人在2008年显示MDS派生的msc可以有效地维持造血细胞的生长和发育正常的msc明显的髓细胞的生产在他们的文化时期(
15 ]。相比之下,其他一些研究表明,msc MDS造血支持能力相比,表现出有缺陷的健康的msc (
13 ,
37 ,
40 ]。很多研究显示缺乏生长特性相比,MDS派生msc的健康细胞(
14 ,
37 ,
40 - - - - - -
42 ]。msc与MDS患者以前显示生长和增殖能力下降与人口倍增时间增加与增加细胞凋亡和增殖率低(
35 - - - - - -
38 ]。相反,在我们的研究中MDS-MSCs的生长特性类似于msc的增长率和pdt的控制。MDS-MSCs之间无显著差异观察和控制msc (
p
>
0.05
)。此外,msc来自所有亚型坚持瓶15至48小时后播种P3细胞在记录阶段,显示指数增长从第二天到第十天。我们没有观察到显著的变化
在体外 生长特性的msc源自MDS亚型(RAEB RCUD, RCMD,德尔(5 q)的pdt (
p
>
0.05
)。此外,CFU-F P2 MDS-MSCs频率没有显著不同于控制msc (
p
>
0.05
)。
CD标记显示在血液紊乱是重要的
19 ]。研究报道的不同表达表面CD msc在疾病状态的标志
19 ,
20. ]。研究已经确定了可能CD73参与通过A2AR MSC分化(
一个
2
一个
腺苷受体)信号
43 ]。CD105糖蛋白具有血管生成作用,具有较强的相互作用及信号,因此作用在癌症发展
44 ]。这些标记物的表达模式疾病状况值得关注,由于其监管角色在癌症发展和可能在癌症治疗中使用
45 ]。尽管一些研究表明MDS-MSCs CD73表达正常水平,CD90、CD105 [
14 ,
15 )一些研究人员观察MDS-MSCs CD90和CD105的表达水平下降(
19 ,
20. ]。冠军等人在2006年报道,培养BM-MSCs血液恶性肿瘤患者表达CD90和CD105在较低的频率比正常BM-MSCs [
19 )在另一项研究,他们提出,低CD90表情BM-MSCs可能与免疫调节特性的缺乏msc在T细胞增殖
20. ]。然而在我们的研究中,细胞的百分比的P2 MDS-MSCs表达CD90非常高(> 95%),并与控制。此外,所表达的平均荧光强度对CD90 MDS-MSCs也很高(4日对数十年)。RCMD-MSCs证明低CD73和高CD105表达频率与表达水平的变化(101 -10年4 相比强度单位)控制msc和其他msc MDS的亚型。表达模式的变化观察到阳性标记可能MDS的发病机制的临床意义。然而,这些发现与更高的病人需要验证数据。MSC immunophenotypic概要报告文学的不一致可能是由于不同的文化条件包括文化媒体使用不同的实验室或可能是由于MDS患者的异质性。
识别细胞遗传学的msc在MDS是重要的决定导致MDS骨髓基质的功能差异。在这里,我们分析了的culture-expanded MDS-MSCs。优化的核型分析协议msc,我们测试了不同秋水仙胺曝光时间:2小时,5人力资源,一夜之间(12 - 14小时)。隔夜(12 - 14小时)孵化与秋水仙胺产生最多的可分析的中期利差和被认为是作为msc在我们实验室条件下的最优。这个结果也支持Muntion等人的研究结果,他们发现,15小时秋水仙胺的最佳曝光时间MSC核型分析(
46 ]。
检测染色体异常在MDS-MSCs BM核型异常的缺失是一个重要的发现。这些异常在RCMD特别观察病人(60%,3/5)。msc的研究,31%(5/16)是细胞遗传学的异常,包括结构和数值异常与染色体的损失。的比例存在结构性染色体畸变MDS派生msc在一些研究发现低(
21 ,
22 ),还有其他报告,要求更高的利率在MDS异常msc (
12 ,
23 ]。2011年蓝色等人研究MDS / AML患者发现基因异常的存在是低至16%的病人研究[
21 ]。根据金等人的染色体畸变检测骨髓基质细胞仅为5% (1/21)MDS患者研究[
22 ]。相比之下歌等人在2012年观察到更高的细胞发生的畸变率(68%(15/22))在MDS派生msc (
23 ]。Flores-Figueroa报道的一项研究,55.5%(5/9)的MDS-MSCs具有细胞遗传学异常(
12 ]。在我们的病人组检测的细胞遗传学是适度的畸变(31%)高于一些先前的研究[
21 ,
22 ),但低于其他一些报告(
12 ,
23 ]。
观察到的结构异常包括46,XX, der(3)和46,XY,德尔(7)(p21p22)两个RCMD患者和46,XY,德尔(6)(q23q26)第二RAEB患者。只有极少数研究描述的结构基因畸变msc与MDS的关系。一项研究描述染色体异常在msc布劳等人于2007年报道msc结构异常,包括衍生7和德尔(3)(p21) [
9 ]。同一组的另一项研究发现了德尔q (7) MDS / AML MSC人群[
21 ]。畸变染色体3和7的HSC舱被发现在MDS [
47 ]。最近的发现表明,MDS患者染色体互换或倒片3已经演变成AML的风险更高(
47 ]。删除6问导致肿瘤抑制基因和淋巴中常见恶性肿瘤(
47 ]。这里我们报告异常染色体的存在3和染色体6和7中删除MDS-MSCs这可能影响这些细胞的功能在MDS造血作用和发病机理(
9 ]。
以前的研究报告说,细胞遗传学异常主要是出现在msc在这些情况下与染色体异常造血同行(
9 ,
12 ]。它也被报道,畸变率较低(33%),msc分析(正常的患者
22 ]。有趣的是,在这项研究中我们观察到染色体畸变的msc MDS患者正常的BM核型形成。同样,三个患者染色体异常在BM分析并没有显示在MSC分析细胞遗传学改变。这包括德尔(5 q)病人的msc展出正常核型鱼被负面删除5 q31.2/5q33。因此我们认为存在染色体畸变的msc可以被视为一个独立的事件,我们的发现可能不支持这个想法,msc在MDS来自相同的“肿瘤克隆”虽然不能排除这种可能性。
我们也注意到,大多数的利差显示随机缺失染色体和染色体物质的损失。尤其在三个样本(RCUD、RCMD RAEB)超过90%的利差被俘失踪的染色体。Flores-Figueroa等人,蓝色等人的研究报道的染色体畸变在MDS派生msc涉及染色体物质的损失
9 ,
12 ]。染色体物质的损失可能的证据MDS派生msc的遗传不稳定,并可能建议MDS的潜在参与发病。
据报道,正常骨髓msc培养显示正常核型形成后,许多段落(
48 ]。然而,我们不排除的可能性发展基因变化在不同文化条件。因此为了避免这种可能性,两个独立的文化是从通道3组细胞含有更均匀的细胞群。